宋波;张秋博;王孟华;田新慧;孙浩理;张福宝;邹忠梅;丁刚
传统方药瓜蒌薤白半夏汤合血府逐瘀汤组方在冠心病心肌缺血损伤中对抑制凋亡的研究很少,本实验通过瓜蒌薤白半夏汤合血府逐瘀汤组方对小型猪痰瘀互结证冠心病模型进行干预,观察此组方对该模型心肌细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2,Bax,Caspase-3,Caspase-9表达的影响.采用中国实验小型猪15只,随机分成对照组、模型组和痰瘀同治组.模型组和痰瘀同治组以高脂饲料喂养2周后,用介入法行冠状动脉拉伤,然后开始喂药同时继续予高脂饲料喂养8周.对照组以普通饲料喂养10周,不做冠状动脉拉伤.实验结束后处死动物,取梗死交界处心肌,固定,常规制备石蜡切片,采用TUNEL技术检测心肌凋亡,免疫组织化学(immunohistochemical,IHC)技术检测心肌组织的Bcl-2,Bax,Caspase-3,Caspase-9水平.结果显示TUNEL法检测的对照组、模型组及痰瘀同治组的凋亡指数(apoptosis index,AI)分别为0.92%,27.68%,17.28%,痰瘀同治组的细胞凋亡指数明显小于模型组的凋亡指数(P<0.01).痰瘀同治组与模型组比较,Bcl-2蛋白表达显著增强(P<0.01),Bax蛋白表达显著降低(P<0.01);痰瘀同治组Caspase-3,Caspase-9表达均显著低于模型组(P<0.01).以上结果表明瓜蒌薤白半夏汤合血府逐瘀汤组方对小型猪痰瘀互结冠心病模型心肌凋亡细胞有明显的保护作用.
作者:闫爱国;刘建勋;李欣志;董小霞;李宏坤 刊期: 2015年第11期
阿萨伊是南美洲地区一种应用历史悠久的常用草药,由卫生部批准允许在我国使用,广东及中国台湾地区已有少量引种.中医药自古就有吸纳外来医药的传统,不少外来药物已成为中医临床应用必不可少的常用品种.我国历史上对外来医药历来持“开放”态度,但是,这种吸纳和应用必须经过充分的消化与吸收,经历长期反复的实践与认识,使之“本土化”,才能与我国已有的中药融为一体.该文通过总结分析阿萨伊的应用历史及其在我国的应用现状,结合阿萨伊在原产地的传统药用记载,及其化学成分、生物活性、临床应用等现代研究报道以及笔者进行的实验研究结果,运用中医药传统哲学思维归纳总结阿萨伊的中药药性、用法用量,探讨其功能主治,以期为阿萨伊在中医药理论指导下的应用奠定理论基础.
作者:张建军;陈绍红;朱映黎;王淳;王景霞;王林元;高学敏 刊期: 2015年第11期
该文在中试规模下考察微波技术在桂枝茯苓胶囊提取过程中的佳条件,首先,对各因素进行单因素试验考察,确定各因素大致的影响趋势及范围;其次,以L9(34)正交试验进行优化,检测药液中没食子酸、芍药苷、苯甲酸、肉桂酸、苯甲酰芍药苷、苦杏仁苷的含量,分别计算其提取率并进行综合评价,以其作为提取效果的评判依据.微波提取桂枝茯苓胶囊的佳工艺为按液固比6∶1加入饮用水,设定微波功率6 kW,提取20 min,提取3次.该工艺经3批放大试验验证,结果稳定,且相比常规煎煮提取具有节能、省时、高效的优势.以上结果显示该优化工艺提取效率高,且稳定可行.
作者:王正宽;周茆;刘圆;毕宇安;王振中;萧伟 刊期: 2015年第11期
细胞或组织内全部的RNA转录本(RNA transcripts)被称为转录组,其反映了基因在不同生命阶段、不同生理状态、不同组织类型以及不同环境条件下表达的情况.而药用植物转录组作为现今研究药用植物基因组活跃的领域之一,可从整体水平了解细胞中基因表达情况及其调控规律.对转录组的研究将有助于解决基因进化、遗传育种以及生态等诸多方面的问题.该文以转录组的研究目标、发展历程和研究方法为基础,介绍了药用植物中转录组的研究现状及未来发展趋势,为分子生药学的研究提供更多基础数据.
作者:王尧龙;黄璐琦;袁媛;查良平 刊期: 2015年第11期
观察川芎含药血清对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激的大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC) Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)及下游信号因子髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)表达的影响.清洁级SD大鼠给予川芎水煎剂、秋水仙碱、生理盐水连续灌胃7d制备川芎含药血清.体外培养的肝星状细胞,除空白组外,其余各组均予LPS 1 mg·L-刺激24 h,各组含药血清干预后于37℃,5%CO2培养箱中培养.24h后收集细胞,分别采用半定量RT-PCR和Western blot法测定TLR4,MyD88的表达情况.用LPS刺激大鼠HSC后,TLR4与MyD88的mRNA和蛋白的表达均明显增加(与空白对照组比较P<0.01).川芎含药血清干预后,TLR4,MyD88 mRNA和蛋白的表达明显减少(与模型组比较P <0.01或P<0.05),其中川芎含药血清中、高剂量组减少为明显.川芎含药血清可通过抑制LPS诱导的HSCs中TLR4及下游信号因子MyD88的表达,参与TLR4信号通路而发挥其抗纤维化作用.
作者:王海兰;何娟;曹文富;陈文龙 刊期: 2015年第11期
唇形科鼠尾草属包括大约1 000余种植物,广泛分布在全球各地的温带和热带地区.许多鼠尾草属植物是历史悠久的重要药用植物,其中丹参(Salvia miltiorrhiza的干燥根和根茎)是许多亚洲国家常用的传统植物药材之一.该属植物的化学成分主要类型有倍半萜类,二萜类,三萜类,甾体类和多酚类等;这些化合物多具有抗菌,抗寄生虫,抗氧化,抗炎,抗肿瘤以及抗血小板聚集等作用.为了更好的开发利用鼠尾草属植物,该文对近5年来从该属植物中发现的新化合物及其生物活性进行了综述.
作者:彭勍;刘建勋 刊期: 2015年第11期
该文研究川白芷Angelica dahurica var.formosana cv.Chuanbaizhi根脂溶性化学成分.采用硅胶和高效液相等柱色谱方法进行分离纯化,通过化合物的谱学数据鉴定其结构.共分离得到29个化合物,分别鉴定为异欧前胡素(1)、β-谷甾醇(2)、欧前胡素(3)、香柑内酯(4)、欧芹酚(5)、花椒毒素(6)、异茴芹内酯(7)、去氢柳叶白姜花内酯(8)、珊瑚菜内酯(9)、异去甲基呋喃羽叶芸香素(10)、7-脱甲基软木花椒素(11)、别欧前胡素(12)、花椒毒酚(13)、异氧化前胡内酯(14)、别异欧前胡素(15)、去甲基呋喃羽叶芸香素(16)、5-羟基-8-甲氧基补骨脂素(17)、氧化前胡素甲醚(18)、栓翅芹烯醇(19)、比克白芷素(20)、印枳苷元(21)、(+)-前胡醇(22)、独活属醇(23)、水合氧化前胡内酯(24)、印枳苷(25)、尤劳帕替醇(26)、赤式-愈创木基甘油-β-阿魏酸醚(27)、苏式-愈创木基甘油-β-阿魏酸醚(28)和尿嘧啶(29),其中,化合物5,8,11,18,21~23和26~28等10个化合物为首次从川白芷根中分离得到.
作者:邓改改;杨秀伟;张友波;徐嵬;韦玮;陈天丽 刊期: 2015年第11期
该研究从金银花转录组数据库中获得23个组蛋白甲基转移酶基因,分别对其核苷酸特性、蛋白理化性质、亚细胞定位、二级结构及保守域、系统进化和基因表达情况进行分析.其中系统进化分析结果表明,23个金银花组蛋白甲基转移酶可以分为2类:赖氨酸甲基转移酶和精氨酸甲基转移酶.基因表达分析结果表明金银花组蛋白甲基转移酶基因具有明显的种间表达偏好性和器官表达偏好性,即23个组蛋白甲基转移酶基因在金银花花蕾中表达量均高于红金银花,但在金银花叶中表达量均低于红金银花,并获得8个花蕾特异性表达基因,为进一步了解金银花类药用植物中组蛋白甲基转移酶的功能以及活性成分表观调控提供依据.
作者:齐琳洁;袁媛;黄璐琦;龙平;查良平;王尧龙 刊期: 2015年第11期
目的:考察何首乌水提物(AEPM)对大鼠肝脏中胆汁酸合成、代谢、转运相关分子影响,探讨何首乌肝毒性相关机制.方法:SD大鼠分别灌胃AEPM60,30 g·kg-1,每天1次,连续28 d.28 d后解剖取肝脏,分别采用荧光定量PCR和Westernblot检测肝脏MRP3,MRP2,BSEP,FXR,CYP7A1等分子的mRNA和蛋白表达水平.结果:与正常组相比,AEPM高剂量组雄性大鼠肝脏中MRP3和BSEP的mRNA表达均显著升高(P<0.05),而AEPM高、低剂量组肝脏FXR的mRNA表达均显著降低(P<0.05);AEPM高、低剂量组雌性大鼠肝脏MRP3,MRP2,BSEP,CYP7A1的mRNA表达均显著升高(P<0.05).Westernblot检测结果显示,AEPM高、低剂量给药组雄性和雌性大鼠肝脏中MRP3,MRP2,BSEP,FXR,CYP7A1蛋白表达水平与mRNA变化基本一致,但均未达统计学显著差异.结论:AEPM大鼠灌胃给药28 d对肝脏胆汁酸合成、转运、排泄相关蛋白的表达具有一定的影响,在mRNA表达水平既具有胆汁淤积分子特征,同时也可见促进胆汁酸排泄的分子特征.
作者:王涛;王佳颖;周植星;江振洲;李妍妍;张良;张陆勇 刊期: 2015年第11期
研究经典古方开心散类方定志小丸主要化学成分在抑郁模型大鼠体内的代谢产物,并归纳总结其代谢途径.通过慢性不可预知温和刺激(CUMS)建立抑郁大鼠模型,灌胃给予大鼠定志小丸提取液后,收集血液、胆汁、尿液、粪便并进行预处理,采用UPLC-Q-TOF-MSE技术进行检测,利用UPLC C18色谱柱,以乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,在负离子模式下获得MS/MSE质谱信息,通过对比空白与含药样品的液质数据,利用Metabolynx代谢产物分析软件处理,终对定志小丸中9个活性化合物在血浆、胆汁、尿液、粪便中的33个代谢产物进行推测,并总结了其体内代谢途径.其中从大鼠血浆中鉴定了代谢产物3个,胆汁中鉴定3个,尿液和粪便中鉴定代谢产物共27个.为阐明定志小丸在体内发挥疗效的药效物质基础和作用机制提供依据.
作者:许璐;刘婉婉;谭潇;王石;穆丽华;董宪喆;王东晓;刘屏 刊期: 2015年第11期
基于三七转录组测序结果,选择萜类代谢骨架上香叶基香叶基焦磷酸合酶基因(GGPPS),结合RACE技术,克隆得到全长1 203 bp的cDNA序列,长开放阅读框为1 035 bp,命名为PnGGPPS,GeneBank登录号为KM486564,PnGGPPS基因全长2 370 bp,包含1个内含子和2个外显子,该基因编码344个氨基酸,与蓖麻Ricinus communis、丹参Salvia miltiorrhiza等植物GGPPS的同源性达到73%以上,具有富天冬氨酸区等多个结构域,属于类异戊二烯合成酶超家族.实时荧光定量PCR结果显示,PnGGPPS在一至三年生三七的根、茎、叶和三年生的花等不同器官组织中均有表达,但以三年生叶中具有显著水平的高表达量,暗示其既具有调节三七生长发育的基本功能,也与三七叶绿素和类胡萝卜素的合成、叶绿体的发育、阴生适应性,以及品质的形成有关.
作者:闵丹丹;唐美琼;李刚;屈啸声;缪剑华 刊期: 2015年第11期
目的:对《中国药典》中丹参药材含量测定方法进行优化.方法:以丹参酮ⅡA,丹酚酸B为指标,对《中国药典》丹参药材含量测定中供试品制备方法进行优化,采用正交试验法进行丹参提取工艺优选,用高效液相色谱法进行含量测定,丹参酮ⅡA以甲醇-水(85∶ 15)为流动相,检测波长270 nm;丹酚酸B以甲醇-乙腈-甲酸-水(30∶ 10∶ 1∶59)为流动相,检测波长286nm.结果:确定丹参酮ⅡA佳提取工艺方案为:采用90%甲醇提取在75℃下回流2次,每次0.5h;丹酚酸B佳提取工艺方案为:使用70%甲醇提取在75℃下回流2次,每次1.5h.结论:改进的提取工艺与测定方法更全面真实准确地反映丹参药材中丹参酮ⅡA和丹酚酸B的含量.
作者:俞年军;彭代银;陈卫东;彭华胜;于凡;史顺敏 刊期: 2015年第11期
目的:研究川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)对白血病U937细胞增殖与凋亡的影响,并初步探讨其作用机制.方法:应用CCK-8法检测TMP对U937细胞的增殖抑制,流式细胞仪检测细胞凋亡及周期分布,采用Real-time PCR法检测bcl-2,P27 mRNA表达,Western blot检测bcl-2,caspase-3,cyclin E1,CDK2,P27的表达.结果:川芎嗪呈时间剂量依赖的方式抑制U937细胞的增殖,作用48 h的IC50为160 mg·L-1;并且诱导U937细胞凋亡,阻滞细胞周期于G0/G1期;Real-time PCR及Western blot结果显示川芎嗪使U937细胞中凋亡相关分子bcl-2表达下调,caspase-3上调,周期相关蛋白cyclin E1,CDK2表达下调,P27上调.结论:川芎嗪对白血病U937细胞呈抑制增殖及诱导凋亡的作用,其机制可能是通过影响细胞周期分布,下调bcl-2的表达,终激活caspase-3,启动凋亡途径,诱导细胞凋亡.
作者:王小静;杨桂存;陈红霞;张萍;徐酉华 刊期: 2015年第11期
利用网络科学技术刻画中医理论有助于中药配伍研究的现代化和程序化.该文通过药对网络表示药物之间的直接作用关系,然后分析该网络的社团特征与血气功效的映射关系,后以方剂为桥梁研究了血气理论在药对网络上的网络表达.研究发现,药对网络具有强的社团结构特征,每个社团由一系列关联紧密的药对组成.社团在药对功效上具有明显的理血和理气功效的相斥性,即同一个社团基本不会同时出现理血功效的药对和理气功效的药对,或者二者均不出现.由此将药对网络所涉及的386个单味中药划分成3类社团:理血(B)社团、理气(Q)社团和灰色社团.把262首方剂依次映射在这3类社团上的统计结果表明,如果一个方剂包含Q社团单味中药,那么它以99.84%的概率也包含B社团的单味中药;同时包含B和Q社团单味中药的方剂数量为140首.因此,对于一个方剂所包含的单味药物满足“有Q就有B,有B未必有Q”的规律,这个数值规律完全吻合中医的血气理论:理气必理血,理血未必理气(出血若因外伤或血热,那么理气就会加重出血).一方面该文寻找到具有高辨识度的宏观网络数值特征,可以为判断新方剂合理性提供网络数值参考;另一方面论文从数值分析的角度证明了人体血与气的关系.
作者:曹佳;辛娟娟;王耘 刊期: 2015年第11期
甲羟戊酸(MVA)途径是萜类化合物生物合成的重要途径,该研究在厚朴转录组测序基础上,利用生物信息学方法对MVA途径中相关基因MoACOT,MoHMGS,MoHMGR,MoMK进行全面的生物信息学分析.结果表明,MoACOT和MoMK为稳定的亲水蛋白,而MoHMGS,MoHMGR为不稳定的亲水蛋白;二级结构均为混合型结构的蛋白质,α-螺旋是所有基因多肽链中大量的结构元件;利用同源建模法对三级空间结构进行了预测;跨膜域分析显示MoACOT,MoHMGS,MoMK无跨膜区,Mo-HMGR具有2个跨膜区,分别为39~61 aa和82~104 aa;系统进化树分析表明MoACOT,MoHMGS,MoHMGR,MoMK均与被子植物或双子叶植物遗传距离较近,符合遗传进化规律;基因表达水平显示MoACOT,MoHMGS,MoHMGR,MoMK表达水平在厚朴与凹叶厚朴间均无显著差异.研究结果为解析厚朴萜类生物合成MVA途径的分子机制提供理论依据.
作者:查良平;袁媛;黄璐琦;余淑琳 刊期: 2015年第11期
川芎具有广泛的临床应用,是常用中药之一,但其有效物质及作用机制尚不明确.该研究优选川芎治疗脑缺血的有效成分,并探究其作用机制.选取4个与脑缺血相关的靶蛋白,以对应的上市药物为参照,基于分子对接技术对文献报道的川芎所含45种成分进行联合筛选.结果显示川芎中多个成分与靶点的对接结果优于对应的上市药物,如苯酞类物质,提示可能是川芎治疗脑缺血的主要有效成分.该方法可用于研究中药的物质基础和分子作用机制.
作者:宋向岗;周威;陈超;王淑美;梁生旺 刊期: 2015年第11期
利用MISA (MicroSAtelite)软件对藏茵陈川西獐牙菜转录组序列68 787条跨叠群(contigs)进行简单重复序列(SSR)位点的挖掘,发现5 099条序列中含有5 610个SSR位点,发生频率为7.41%,共有220种重复基元,平均每12.60 kb出现1个SSR位点.三核苷酸重复基元SSR出现频率高(45.99%),其次是二核苷酸(41.62%).AT/TA和AAT/TTA是二、三核苷酸中的优势重复基元.藏茵陈川西獐牙菜转录组SSR以5~10次重复为主,基序长度主要集中于12 ~ 30 bp.在藏茵陈川西獐牙菜转录组中注释的30 651个contigs中,有1 447个SSRs位于编码区,主要以三核苷酸重复为主(928,64.13%).藏茵陈川西獐牙菜转录组SSR的出现频率高,重复类型丰富,理论表明这些转录组SSR具有较高的可用性.该文通过对藏茵陈川西獐牙菜转录组资源的SSR信息的研究,为分子水平和生物信息学角度上开发藏茵陈川西獐牙菜的SSR功能性标记提供了丰富的候选序列.
作者:刘越;岳春江;王翊;马加强;孙洪波;罗敏;马鹏举;张琳霞;马徐 刊期: 2015年第11期
为了探讨苦参总碱、美洲大蠊提取物及两者联合用药对孕激素受体(PR)阴性的子宫内膜癌细胞株JEC的作用.笔者通过MTT法、流式细胞仪、Western blot检测苦参总碱、美洲大蠊提取物和两者联合用药后对JEC细胞的生长抑制、细胞周期及P53和c-erbB-2基因蛋白的表达影响.结果发现,①MTT法:苦参总碱和美洲大蠊提取物对JEC的生长均有抑制作用,且联合给药后抑制作用显著提高.②流式细胞仪分析:苦参总碱组细胞在G0/G1期的比例上升,美洲大蠊提取物组细胞在G2/M期比例上升,联合给药组的G0/G1期比例较其他2组显著上升,细胞生长受到抑制(P<0.05).③Western blot法:苦参总碱组、美洲大蠊提取物组和联合给药组作用JEC细胞后,P53蛋白的表达水平上调,c-erbB-2蛋白表达水平下降(P<0.05).以上结果说明苦参总碱、美洲大蠊提取物及联合给药对JEC细胞的生长均有抑制作用,且能通过上调P53和下调c-erbB-2蛋白的表达诱导细胞周期阻滞,抑制细胞增殖.
作者:张晓巍;朱艳 刊期: 2015年第11期
药用植物珠子参的根茎在中国西南区域已有上千年的药用历史,三萜皂苷为珠子参主要的活性成分.为了探索珠子参根茎中皂苷物质生物合成的分子基础,该文采用Illumina HiSeq 2000高通量测序获得珠子参根茎的转录组数据;使用Trinity和TGICL软件实现Unigene的de novo拼接;基于BLAST完成Unigene的蛋白功能注释、KOG功能注释、GO分类和KEGG代谢通路分析.终获得了短读序15.6 Gb,通过de novo拼接注释得到Unigene 62 240个.研究发现,珠子参根茎部表达的19个Unigene与三萜碳环骨架合成相关;69个Unigene与介导三萜碳环骨架的氧化和羟基化等修饰的CYP450相关,18个Unigene与负责三萜碳环骨架的糖基化的糖基化转移酶相关.该研究发现的三萜皂苷合成相关候选基因对于阐明珠子参三萜皂苷合成方式研究提供了重要的基础.
作者:张绍鹏;金健;胡炳雄;吴亚运;闫祺;曾万勇;郑用琏;张西峰;陈平 刊期: 2015年第11期
采用激光诱导击穿光谱(LIBS)技术对4种珍宝藏药仁青芒觉、仁青常觉、二十五味珊瑚丸和二十五味珍珠丸进行元素定性研究,建立4种珍宝藏药的元素特征图谱.实验采用Nd∶YAG和基频1 064nm的脉冲激光器;激光光束聚焦待测样品表面产生等离子体,采用光谱仪探测其光谱信号.基于美国国家原子光谱标准与技术(NIST)数据库,对LIBS谱线进行辨识.4种珍宝藏药主要含有Ca,Na,K,Mg等,同时检测到C-N分子谱带.其中,在仁青常觉和二十五味珍珠丸中检测到Fe;仁青常觉和仁青芒觉中检测到重金属Cu,Hg;仁青常觉中检测到Ag.结果表明,LIBS提供了4种珍宝藏药的可靠、快速多元素分析;LIBS具有实时、快速、近似无损的优势,该技术在民族药物的元素检测,具有广阔的应用前景.
作者:刘晓娜;史新元;贾帅芸;赵娜;吴志生;乔延江 刊期: 2015年第11期