张滗；王伯初；迟少萍；曹阳
为了建立标记探针检测基因重组RMBAYL多肽DNA残留量的方法,以基因重组技术和固相柱纯化技术制备重组PACAP衍生多肽RMBAYL,以工程菌总DNA为模板,用地高辛标记探针,以此探针杂交并进行显色反应.实验结果表明,3批重组RMBAYL半成品中每人份剂量的外源性DNA残留量均小于100 pg.研究的实验方案可实现重组PACAP衍生多肽RMBAYL的高效表达和纯化,地高辛标记探针技术检测外源性DNA灵敏度高、稳定性强,可用于RMBAYL等重组PACAP衍生多肽制备过程中的质量监控及半成品的快速、高效检定.
作者：马义；洪岸；谢秋玲 刊期： 2009年第06期
作者： 刊期： 2009年第06期
为了建立温郁金脱毒组培苗的快繁体系,以温郁金主根茎为材料,采用高温预处理催芽结合茎尖培养技术获得脱毒苗.结果表明:茎尖培养的适培养基为MS+BA(6-苄基嘌呤)2.0 mg/L+NAA(萘乙酸)0.5 mg/L+蔗糖3%+琼脂5.0 g/L;不定芽增殖培养基为MS+6-BA 3.0 mg/L+蔗糖3%+琼脂5.0 mg/L;脱毒苗生根诱导适培养基为MS+6-BA(6-苄基嘌呤)1.5 mg/L+NAA(萘乙酸)2.0 mg/L+蔗糖3%+琼脂5.0 g/L,用超薄电镜切片法和RT-PCR法检测病毒率,该茎尖再生苗脱毒率达78.6%.试管苗移栽后植株的成活率达90%以上,植物生长健壮,抗性增强,为温郁金种苗进一步工厂化快速繁殖提供了重要参考价值.
作者：汪洪；蔡小军；于晓敏；李校堃 刊期： 2009年第06期
本文以丝素/壳聚糖为囊材,5-氟尿嘧啶(Fluorouracil,5-FU)为模型药物,采用复凝聚法制备5-FU-丝素蛋白-壳聚糖微囊.以包封率为指标,采用L_9(3~4)正交设计及方差分析对微囊的制备工艺进行优化.利用扫描电镜和动态透析法分别研究不同因素对微囊的成囊,形貌及体外释药的影响.结果表明,所优化的制备工艺简单,制备的微囊形态规整,成囊性及分散性良好.不同因素对微囊的性能影响各不相同.5-FU-丝素蛋白-壳聚糖微囊在72 h左右药物释放速度达到平衡,累计释药率约为56.41%,释药速度较药粉和壳聚糖微囊缓慢,具有较好的缓释效果.
作者：张滗；王伯初；迟少萍；曹阳 刊期： 2009年第06期
蛋白质的柔性区间是蛋白质与其它分子结合所必需的结构,是蛋白质发挥正常功能的关键因素.不同的预测方法对柔性区间的定义有所不同.文章试图对几种较为重要的预测方法进行简要的介绍.
作者：刘佳；张可辉；罗巧；顾宵；唐玮娟；殷敏敏；方慧生 刊期： 2009年第06期
鼻腔给药系统已成为药物新剂型开发热点.原代鼻粘膜上皮细胞模型可在体外模拟机体鼻粘膜上皮的生理状态,保留了细胞的分化能力和牛化特性,具有表达药物代谢酶和药物转运体的功能.因此,原代鼻粘膜上皮细胞模型已被广泛应用于鼻腔给药系统药代动力学领域的研究,包括药物渗透性的评价、药物转运特点和代谢特点的研究等;同时原代鼻粘膜上皮细胞模型也广泛应用于毒理学领域,如药物和辅料纤毛毒性的评价、鼻粘膜的损伤特点及机制研究等.到目前为止,鼻粘膜卜皮细胞模型已在鼻腔制剂的药物基础性研究和新药的早期筛选过程中发挥着重要作用.
作者：谢悦良；张毕奎 刊期： 2009年第06期
目的:筛选临床耐药菌株,测定中药提取物的体外抗耐药菌活性,为控制临床耐药菌感染提供参考.方法:采用K-B纸片法、稀释法对产β-内酰胺酶菌株、耐甲氧西林球菌进行表型筛选,对耐药基因进行确证.采用水煎煮法制备黄连、五倍子等20种中药水提物,平板稀释法测定其体外低抑菌浓度(MIC),测定黄连、五倍子,黄芩及五味子等水提物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的杀菌曲线.结果:20种中药水提物对临床耐药菌均有不同程度的抑制作用.且抑菌活性对于敏感菌株与耐药菌株无差异,其中黄连、五倍子,黄芩及五味了对MRSA具较强的抑菌活性.结论:中药提取物对临床耐药菌有抗菌活性,为控制临床耐药菌感染提供广阔的应用前景.
作者：蔡启娟；汪辉；陈向东 刊期： 2009年第06期
建立基于c-myc启动子,以β-半乳精苷酶报告基因(β-galactosidase reporter gene)的新型抗肿瘤药物筛选系统.构建含有c-myc启动子和β-半乳糖苷酶报告基因的重组质粒,转染U2OS细胞,获取稳定表达β-半乳糖苷酶的细胞株并使用常用抗肿瘤药物对其筛选特异性与筛选机制进行鉴定.细胞水平常用化疗药物的筛选验证实验表明,部分临床化疗药物如阿霉素在这一系统中能显著下调c-myc启动子的活性和c-myc mRNA的量,同时证实阿霉素对c-myc启动子的作用位点在+66位以前的P2启动子.因而通过建立基于c-myc启动子的抗肿瘤药物筛选系统,不但可以有效筛选能够抑制c-myc表达的抗肿瘤药物,也可以研究这类药物的作用机理.
作者：朱琳；王晓燕；徐维果；李大伟 刊期： 2009年第06期
人类干细胞(human stem cell)虽然早在1998年已被分离出,但与胚胎干细胞功能相同的诱导多能干细胞(ips)的研究从21世纪2006年才开始发展.文章论述类似于胚胎干细胞的诱导多能干细胞研究应用进展.参阅近3年来文献,对用实验小鼠成纤维细胞、成人体细胞及普通人皮肤以及病人的特异性细胞以4个基因诱导产生诱导多能干细胞研究应用的新进展进行了综述.诱导多能十细胞的应用将为各类严重疾病的治疗开拓广阔的应用前景.
作者：陈执中 刊期： 2009年第06期
(Capsicum annuum L.)品种的子叶和下胚轴,分别离体培养在附加不同激素的MS培养基上,对诱导外植体不定芽分化和芽伸长的影响因素如苗龄、基因型、外植体、激素组合等进行研究.结果表明,苗龄对外植体不定芽分化有直接影响;子叶的不定芽分化率高于下胚轴;不定芽的分化率对基因型有很大的依赖性,赤霉素(GA_3)、AgNO_3的添加能使芽伸长率提高.通过结果比较,筛选出了辣椒叶和下胚轴离体再生的较好芽分化培养基为Ms+1.0 mg/L玉米素(ZT)+0.2 mg/L吲哚乙酸(IAA);芽伸长培养基为MS+1.0 mg/L ZT+0.2 mg/LIAA+2.0 mg/L CA_3+5.0 mg/LAgNO_3;生根培养基为MS+0.1 mg/L IAA+0.2MG/L萘乙酸(NAA).
作者：王炳琴；陈国平；胡宗利；王翊；侯晓姝；代法国 刊期： 2009年第06期
s-thanatin(Ts)具有21个氨基酸,是昆虫来源抗菌肽 thanatin 的突变体,将thanatin的15位苏氨酸替换为丝氨酸得到抗菌活性更好和对盐离子更加耐受的Ts.通过PCR合成Ts的基因,装入pET32a载体在大肠肝菌BL21(DE3)中进行表达.可溶性表达的融合蛋白使用中空纤维超滤浓缩后经凝血酶酶切,然后通过DEAE-Sephrose Fast Flow阴离子交换树脂去除内毒素和色素,后使用制备反相高效液相对Ts进行精制,并在体外验证了其对大肠杆菌ATCC25922和临床耐药肺炎克雷伯氏菌的活性.实验证明中空纤维超滤和阴离子交换树脂的组合为大规模表达纯化抗菌肽提供了经济有效的策略.
作者：赵锐；丁佳萱；吴国球；沈子龙；奚涛 刊期： 2009年第06期
制备氨基末端定点PEG 修饰的尿酸酶,并比较尿酸酶修饰前后的免疫原性差异.采用M_r20k的mPEG-丙醛选择性修饰尿酸酶的氨基未端;利用source 30Q离子交换层析和sephacryl S-200分子排阻层析分离纯化修饰后尿酸酶;测定修饰前后尿酸酶的酶动力学参数和免疫原性.尿酸酶和N端PFG修饰尿酸酶的SDSPAGE检测显示单一条带,SE-HPLC测定尿酸酶修饰前后的保留时间分别为26.578 min和23.818 min;PDG修饰后尿酸酶的大反应速度为尿酸酶的80%;PEG修饰后尿酸酶与抗体的结合能力和体内的免疫原性均明显降低.这种方法可用来制备N端PEG定点修饰尿酸酶,修饰后町明显降低尿酸酶的免疫原性.
作者：李盈淳；朱姝；高向东；才蕾；姚文兵 刊期： 2009年第06期
分离纯化出两种M_r较小的蚯蚓纤溶酶组分,并进行了部分氨基酸序列测定及初步的药理活性研究.以新鲜赤子爱胜蚓为原料,通过超滤、DEAE-Sepharose fast flow离子交换层析及Sephadex G75凝胶层析,得到两电泳纯组分,M_r分别为20 k与9 k,纤维平板法测得其比活分别为96 IU/mg与10 IU/mg,部分氨基酸序列测定结果显示20 k组分与已知蚯蚓纤溶酶gi| 157931564有很强的同源性,9 k组分与水蛭的神经血蓝蛋白具同源性.药理实验表明,两组分均能促进人脐静脉内皮细胞(huVEC)分泌t-PA.抑菌实验表明,两组分及蚯蚓水提液中M_r 4～10 k部分均具有广泛抗菌谱且抑菌效果4～10 k部分>F2>F1.
作者：张汶婕；何晓冬；蒋企洲；何执中；尚广东；张玉彬；王旻 刊期： 2009年第06期
目前实验室及临床上使用的抗体多数来源于动物血清,不仅产量低成本高,而且在一定程度上有背于动物权益的保护.随着抗体需求量的不断增加,廉价大规模的抗体制备成了新的研究热点.通过免疫禽类(尤其是鸡)将特异性抗体富集于卵黄中来制备具有独特优点的抗体,有望成为能够替代哺乳动物抗体的大规模制备治疗性抗体的有效手段.
作者：丁建坤；赵文锋；吴梧桐；刘景晶 刊期： 2009年第06期
眼镜蛇神经毒素与心脏毒素分别具有显著的镇痛活性和抗肿瘤活性.这两种毒素同源性高,等电点,分子质量以及蛋白结构都很相似,给分离纯化造成一定难度.获得单一成分的神经毒素和心脏毒素是理化性质分析、药理活性研究和临床应用的前提,文章综述了多年来舟山眼镜蛇蛇毒中神经毒素与心脏毒素的分离纯化研究进展.
作者：常梅艳；韩丽萍；蒋琳兰 刊期： 2009年第06期
为了探讨apo-B100介导的t-PA融合蛋白在鸡胚肝细胞中分泌表达的可行性和生物学活性,将编码人组织型纤溶酶原激活剂功能区的基因片段△t-PA与鸡VLDLy组装前体apo-B100进行融合,定向克隆到pCDNAa表达载体CMV启动子下游,构建pCDNA_3-apo-△tPA表达载体.将pCDNA_3-apo-△tPA用脂质体包裹后转染体外培养的鸡胚肝细胞,ELISA检测融合蛋白表达水平,发色底物法检测表达产物的生物学活性.结果显示,融合基因在鸡胚肝细胞中能够表达并分泌到细胞外,48 h表达水平高达575.3 ng/10~6(cells·24 h),表达产物活性为135.8 IU/10~6(cells·24 h).apo-B100介导的t-PA在鸡胚肝细胞中成功表达,为外源基因在鸡体内表达并实现在卵黄中沉积奠定了坚实的基础.
作者：冯运巩；李银聚；程相朝；张春杰；吴庭才；郁川；王学强；张旭 刊期： 2009年第06期
为了观察壳聚糖溶液在有无诱导剂二磷酸腺苷(ADP)存在的条件下对人血小板聚集的影响,通过体外聚集实验,用比浊法检测富含血小板的血浆(PRP)及洗涤后血小板的聚集率,用ELISA的方法对人血小板聚集后释放的产物P-选择素(P-selectin)、血栓素B_2(Thromboxane B_2,TXB_2)进行含量测定;加入低剂量的ADP进行诱导并用抗体SZ-21对ADP途径进行封闭,从而确定壳聚糖是否通过ADP途径引起轿小板的聚集.结果显示,在无诱导剂的情况下,壳聚糖能够引起血小板的聚集(P<0.01),聚集后的产物能释放出大量的活性物质P-selectin、TXB_2(P<0.01);加入低剂量诱导剂ADP后,聚集效果更加明显(P<0.01),封闭ADP途径后,加入壳聚糖溶液不能够引起血小板聚集.以上实验结果提示壳聚糖能够促进血小板的聚集,并释放出活性物质,且与ADP起协同作用.说明壳聚糖引起血小板聚集足通过ADP途径起作用的,这也可能是其止血的机理之一.
作者：高娟；张家骊；夏文水；程沁园 刊期： 2009年第06期
以番茄红素的静态吸附量和解吸率为指标,对14种大孔树脂:X-5、D1400、YPR-Ⅱ(DA100×3)、ZGDM11、SD300、ZGDM130、HPD300、XAD1180、XAD7HP、H103、D3520、D4020、D280、D152进行筛选,其中HPD300对番茄红素的吸附量大,为14.4 mg/g;以二氯甲烷为解析剂,HPD300吸附的番茄红素的解吸率为74.0%,解吸速率快;饱和吸附容量为35.0 mg/g,优于其它树脂.由此得HPD300是较为理想的用于分离番茄红素的树脂.
作者：杨雪；王海琴；强晓妍；郑皎洁；崔冉；苗振华；郑珩 刊期： 2009年第06期
探讨硫代乙酰胺(TAA)剂量个体化诱导大鼠肝纤维化模型的稳定性,观察肝纤维化过程中出现的病理特点,统计分析血清学指标与肝纤维化分级的相关关系,并构建数学模型预测样本肝纤维化等级.实验动物分为模型组与正常对照组,设染毒8周和12周2个观察点.造模以腹腔注射6%200 mg/kg TAA作为初始剂量,每周3次,连续8周.在8周时形成典型的肝纤维化,具有成纤维细胞自中央静脉或门管区向周围延伸,形成明显的纤维隔,无假小叶形成的病理特征,死亡率为16.0%,成模率90.0%.血清指标中层粘连蛋白(LN)、Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)、白蛋折(Alb)和白蛋白与总蛋白比值(A/T)水平与SD大鼠肝纤维化发展程度有很好的相关性,数学模型预测肝纤维化的总正确率、灵敏度和特异度分别为90.5%,84.6%、100%,表明其对预测肝纤维化分级有一定的敏感性.
作者：刘煜；吕若芸；万博；卢传文；沈溢；郑佳敏；言方荣；吴梧桐 刊期： 2009年第06期
为探讨鲨鱼肝再生因子促进部分切除肝脏的再生作用,按Higgins和Anderson方法对大鼠行肝切除术,分别尾静脉注射鲨鱼肝再生因子(sHRF 9,3,1 mg/kg),促肝细胞生长素(HGF 6 mg/kg),生理盐水(0.3 ml/100 g).分别存0,6,12,24,36,48,72 h.1周八个时相点进行大鼠取血和肝细胞培养.比较各组大鼠血清表皮生长因子(EGF)和细胞周期素等(Cyclin)含量的变化.实验表明大鼠在肝切除术后,sHRF给药组对各时相点细胞分泌的EGF含量均有不同程度的增加,术后24～48h之间逐步增长,48 h EGF含量达到峰值;肝部分切除术后cyclinD_1 mRNA表达逐渐增加,表达高峰为术后12～24 h,sHRF9 mg/kg组和sHRF3 mg/kg组与模型组相比,有明显差异.由此可知鲨鱼肝再生因子对部分切除术后的肝脏再生有较好的促进作用.
作者：李谦；袁述；吕正兵；戎晶晶；马迅；庞太宇；吴梧桐 刊期： 2009年第06期
药物生物技术杂志
主管:中华人民共和国教育部
主办：中国药科大学;中国医药科技出版社;中国药学会
