吕成方；赵远；王永忠
目的:检测中国乙型肝炎病毒(HBV)B型和C型4个基因(区)(S、C、X和RT)的正选择位点,推断近年来中国HBV的变异趋势和原因.方法:从基因库下载中国所有B型和C型全长序列共864条,参照标准序列分别截取S、C、X和RT 4个基因(区),使用HyPhy方法筛选各基因序列集的正选择位点并进行统计和分析.结果:共检测到226个正选择位点(B型101个,C型125个),其中85个位点(B型37个,C型48个)分别位于75个(B型32个,C型43个)抗原表位上,表明正选择的发生与病毒的免疫逃逸相关.值得注意的是,B型RT区的3个耐药位点180、181和223,和C型RT区的4个耐药位点173、180、181和223,也被检测到受到正选择压力,表明正选择发生与耐药发生相关.结论:中国地区HBV B型和C型的RT区受到的选择压力与耐药突变存在潜在联系,其他区域的正选择与病毒的逃逸机制密切相关.
作者：黄艳；张朝；刘俊；徐庆刚 刊期： 2012年第04期
目的:观察miR let-7b对乳腺癌MCF-7细胞迁移能力的影响并探讨其作用机制.方法:合成miR let-7b并转染乳腺癌MCF-7细胞,以miR-control作参照.通过划痕实验观察转染前后细胞迁移能力的变化,运用 PCR和蛋白质印迹法检测转染miR let-7b前后MCF-7细胞内IL-6表达水平的变化.后通过信息生物学软件及双荧光酶素报告基因方法验证miR let-7b与IL-6结合.结果:与对照组比较,转染miR let-7b的MCF-7细胞迁移能力明显降低,而anti-miR let-7b明显促进细胞迁移.转染miR let-7b的乳腺癌MCF-7细胞中IL-6的表达水平较对照组明显降低,而转染anti-miR let-7b的细胞内IL-6的表达水平明显提高.信息生物学软件和双荧光酶素报告基因证实miR let-7b与IL-6结合.结论:miR let-7b在转录水平抑制乳腺癌MCF-7细胞IL-6的表达从而抑制MCF-7细胞的迁移.
作者：曲杰；王胜林；吕喜英；李青山；杨宗伟 刊期： 2012年第04期
目的:探讨β-连环蛋白(β-catenin)、基质金属蛋白酶-7(MMP-7)在胃癌组织中的表达及相互关系.方法:应用免疫组织化学ABC法检测胃癌组织、胃黏膜组织中β-连环蛋白表达;应用蛋白质印迹法检测β-连环蛋白阳性组胃癌组织中MMP-7蛋白表达.结果:75例胃癌组织中有35例β-连环蛋白呈阳性表达,阳性率为46.67%;30例胃黏膜组织中仅有3例β-连环蛋白呈阳性表达,阳性率为10.00%,差异有统计学意义(P<0.05).低分化胃癌组织中β-连环蛋白阳性率73.91%、MMP-7阳性率65.22%,明显高于中分化胃癌组织中β-连环蛋白的阳性率47.36%、MMP-7的阳性率42.10%以及高分化胃癌组织中β-连环蛋白的阳性率50.00%、MMP7的阳性率40.00%,差异有统计学意义(P<0.05).62例有淋巴结转移的胃癌组织中有44例β-连环蛋白呈阳性表达,阳性率为70.97%;13例无淋巴结转移胃癌组织中有6例β-连环蛋白呈阳性表达,阳性率为46.15%,差异有统计学意义(P<0.05).35例β-连环蛋白阳性胃癌组织中有21例MMP-7呈阳性表达,阳性率为60.00%,相关性分析显示胃癌组织中β-连环蛋白、MMP-7表达呈正相关(r＝0.617,P<0.01).结论:胃癌组织中β-连环蛋白以及MMP-7表达与胃癌的侵袭和转移密切相关.
作者：吕成方；赵远；王永忠 刊期： 2012年第04期
目的:研究伤寒沙门菌OsmY在高渗应激早期对其他基因表达的调节.方法:通过同源重组的方法利用自杀质粒制备伤寒沙门菌osmY基因缺陷变异株;采用伤寒沙门菌全基因组芯片比较野生株和osmY基因缺陷变异株在高渗应激早期的基因表达差异,并对其中部分表达差异基因进行实时定量PCR验证.结果:成功制备伤寒沙门菌osmY基因缺陷变异株;基因芯片结果显示,在高渗应激早期,与野生株相比,伤寒沙门菌osmY基因缺陷变异株有128个基因表达下调,有27个基因表达上调.实时定量PCR与芯片结果一致.结论:OsmY可作为一调节因子在伤寒沙门菌高渗应激早期对基因表达起重要调节作用.
作者：孟彦辰；王菲；杜鸿；翁晓琴；张海方；生秀梅；徐顺高；黄新祥 刊期： 2012年第04期
目的:研究甲氨蝶呤关节周围注射后对小鼠胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)的治疗作用及其机制.方法:从初次免疫后第22天开始至50天止,每周3次关节周围注射甲氨蝶呤,PBS作阴性对照,对CIA小鼠关节炎严重程度进行评分并比较各组关节炎发生率,石蜡切片观察组织病理学变化,流式细胞术检测腹股沟淋巴结细胞中Th17细胞与Treg细胞的比例变化情况.结果:甲氨蝶呤可以有效降低小鼠关节炎的发病率及平均关节炎指数(P＜0.001);石蜡切片显示甲氨蝶呤对炎症细胞浸润、血管翳的形成、软骨以及骨的破坏具有较好的抑制作用;流式细胞术检测显示甲氨蝶呤组Th17细胞比例降低,Treg细胞比例增加(P＜0.05).结论:甲氨蝶呤关节周围注射可以有效抑制类风湿关节炎的发展,其机制可能与下调Th17/Treg细胞的比率有关.
作者：孙梦怡；吴卫疆；许惠玲；刘霞；夏圣；邵启祥 刊期： 2012年第04期
目的:评价右美托咪定用于合并高血压的胃癌根治术患者的安全性及有效性.方法:原发性高血压Ⅰ～Ⅱ期、行气管插管全身麻醉的择期胃癌根治手术患者40例,ASAⅡ～Ⅲ级,随机分为对照组及右美托咪定组(观察组),分别于入室后开始注入生理盐水及右美托咪定,手术结束前停药.观察记录麻醉诱导量及维持量、术中血流动力学的变化及术后不良反应的发生情况.结果:观察组术中血流动力学较对照组稳定(P＜0.05),丙泊酚诱导量下降(P＜0.05),瑞芬太尼维持量减少(P＜0.05).观察组躁动、寒战发生率较对照组显著下降(P均<0.05),但嗜睡病例明显高于对照组(P＜0.05).结论:右美托咪定应用于高血压患者胃癌根治术中更易于维持血流动力学的稳定.
作者：王向兵；唐桂萍；刘炜；吴春峰；蒋平 刊期： 2012年第04期
目的:探讨核转录因子-κB(NF-κB)在结肠癌中的表达及临床意义.方法:采用RT-PCR和蛋白质印迹法对108例结肠癌组织进行NF-κB 亚单位p65 mRNA及其蛋白检测,分析该转录因子与结肠癌患者人口统计学资料(性别、年龄、高纤维素饮食、嗜酒)和临床病理因素(肿瘤部位、大小、组织学分型、浸润深度、分化程度、淋巴结转移、Dukes分期)的关系.结果:在结肠癌患者中,NF-κB 亚单位p65 mRNA及其蛋白表达水平随着肿瘤组织学分型的不同、浸润深度的不同、是否发生淋巴结转移及Dukes分期的不同而变化,其中,在黏液癌(印戒细胞癌、黏液腺癌),浸及浆膜层,有淋巴结转移及处于Dukes C+D期的结肠癌中,NF-κB亚单位 p65 mRNA及其蛋白表达明显增高(P＜0.01或＜0.05);而NF-κB亚单位 p65 mRNA及其蛋白表达水平与性别、年龄、高纤维素饮食、嗜酒及肿瘤部位、大小和分化程度无关(P＞0.05).结论:NF-κB的表达与结肠癌侵袭、转移密切相关;检测NF-κB亚单位 p65 mRNA及其蛋白对结肠癌的诊疗有一定的价值.
作者：濮勇；陈锁成 刊期： 2012年第04期
目的:检测临床分离金黄色葡萄球菌(金葡菌)的生物膜形成能力及其相关基因.方法:用半定量微量平板法检测临床分离的92株金葡菌生物膜形成能力,并通过扫描电镜观察生物膜形态,用PCR法来检测生物膜形成的相关基因ica和sarA.结果:92株临床分离金葡菌菌株均可形成生物膜,PCR结果显示100%的分离株均含有sarA基因,78株(84.78%)含有ica基因.结论:临床分离的金葡菌都具有形成生物膜的能力,生物膜形成的相关基因ica和sarA的携带率较高.
作者：潘红；罗欲承；赵建忠；段秀杰；邵世和 刊期： 2012年第04期
目的:比较伤寒沙门菌virK和mig-14基因在拮抗多黏菌素B杀伤作用中的差异,探讨两者在拮抗多黏菌素B杀伤作用中的关系.方法:用自杀质粒介导的同源重组方法制备伤寒沙门菌virK缺陷变异株和virK /mig-14双缺陷变异株,在弱酸性环境下对缺陷菌株做多黏菌素B杀伤试验,比较mig-14缺陷株、virK缺陷株和virK/mig-14双缺陷株对多黏菌素B的耐受情况.结果:成功制备伤寒沙门菌virK缺陷变异株和virK /mig-14双缺陷变异株,在弱酸性环境下mig-14缺陷株、virK缺陷株和virK/mig-14双缺陷株对多黏菌素B的耐受情况基本一致.结论:virK在伤寒沙门菌GIFU10007中也发挥对多黏菌素B的拮抗作用,与mig-14对多黏菌素B的拮抗作用有相似效果.
作者：夏秋风；生秀梅；徐顺高；黄新祥 刊期： 2012年第04期
目的:研究细胞因子信号抑制蛋白-3(suppressors of cytokine signaling-3,SOCS3)基因3′端非翻译区(3′-untranslated region,3′-UTR)微小RNA(microRNA,miRNA)的调控作用,构建重组SOCS3基因3′-UTR荧光素酶报告载体,并通过荧光素酶活性测定,初步分析可能调控SOCS3基因表达的miRNAs.方法:采用PCR方法从原代培养的小鼠星形胶质细胞基因组DNA中扩增SOCS3基因3′-UTR序列,插入荧光素酶报告载体pGL3-Promoter,获得重组载体pGL3-Promoter/SOCS3;通过Target Scan5.2、RNAhybrid 和FINDTAR3软件预测可能与SOCS3基因3′-UTR结合的miRNAs;将pGL3-Promoter/SOCS3重组质粒和miRNAs共转染HEK 293T细胞,测定SOCS3 3′-UTR荧光素酶的活性.结果:酶切及核酸测序证实,成功构建了SOCS3基因3′-UTR序列的荧光素酶报告重组子;miRNA靶位点预测显示,SOCS3基因可能是miR-203、miR-291a-5p、miR-9、miR-140和miR-130b的作用靶标;与对照组相比,miR-203、miR-291a-5p、miR-140能使SOCS3 3′-UTR荧光素酶的活性显著降低.结论:成功构建了SOCS3 基因3′-UTR荧光素酶报告载体,且miR-203、miR-291a-5p、miR-140可显著降低其荧光素酶的活性.
作者：刘晓梅；庞蓉蓉；赵聃；李妍；单锴；王迎伟 刊期： 2012年第04期
目的:比较微型角膜刀准分子激光角膜上皮瓣下磨镶术(Epi-LASIK)与准分子激光原位角膜磨镶术(LASIK)矫治高度近视的疗效.评估两种术式的安全性和有效性.方法:采用美国VISX StarS4激光机,Epi-LASIK组采用Moria平推型微型角膜上皮刀制作角膜上皮瓣,用浸有0.02%丝裂霉素C的海绵片,LASIK组采用Moria旋转型角膜板层刀制作110 μm厚度角膜瓣.随访6月以上,对两组术后症状、视力、屈光等进行比较.结果:术后1周Epi-LASIK组裸眼视力(uncorrected visual acuity,UCVA)≥0.8眼数比例(47.8%)明显少于LASIK组(95.8%),差异有统计学意义(χ2=27.056,P=0.000);术后1、3、6个月Epi-LASIK组UCVA≥0.8眼数比例(分别为95.7%、97.8%、97.8%)与LASIK组(分别为97.9%、97.9%、97.9%)差异无统计学意义.术后1周两组屈光度差异有统计学意义(t=-7.123,P=0.000);术后1、3、6个月两组屈光度差异无统计学意义.结论:LASIK手术仍是目前治疗近视的主流,Epi-LASIK治疗高度近视安全、有效,虽然视力恢复较LASIK慢,但手术矫治范围广,长期疗效尚待观察.
作者：吴登雷；张芹；潘晓英 刊期： 2012年第04期
目的:观察RNA干扰沉默MTA1基因对膀胱癌细胞株BIU-87增殖和失巢凋亡的影响.方法:构建针对MTA1基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),应用MTA1 siRNA转染处理人膀胱癌细胞株BIU-87后,分别采用实时定量PCR和蛋白质印迹法检测MTA1基因mRNA和蛋白的表达,采用软琼脂集落培养试验检测锚着不依赖性增殖,琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术检测BIU-87细胞失巢凋亡.结果:与对照组比较,MTA1 siRNA转染组MTA1 mRNA和蛋白水平明显下降,且呈浓度依赖性(P<0.01).MTA1 siRNA转染组软琼脂集落形成数明显减少,且与浓度相关(P<0.01).琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术结果显示,MTA1 siRNA转染可诱导BIU-87细胞失巢凋亡,且与浓度相关(P<0.01).结论:MTA1 siRNA可抑制膀胱癌细胞株BIU-87增殖,诱导失巢凋亡可能是其机制之一.
作者：崔飞伦；邱镇；胡建鹏；范钰 刊期： 2012年第04期
目的:比较关节镜下复位钢丝固定治疗新鲜和陈旧性(伴有不同程度的膝关节疼痛,不稳,伸直受限)胫骨髁间棘骨折的疗效.方法:21例胫骨髁间棘骨折患者,新鲜骨折组13例(Ⅱ型5例,Ⅲ型5例,Ⅳ型3例),陈旧骨折组8例(Ⅱ型5例,Ⅲ型2例,Ⅳ 型1例),采用关节镜下复位钢丝固定治疗.随访12～59个月(平均32.8个月).观察比较骨折愈合情况、膝关节活动度、稳定性、膝关节Lysholm和Tegner活动等级功能评分.结果:骨折均于术后7～15周(平均10.7周)愈合,术后后一次随访Lysholm和Tegner活动等级评分:新鲜骨折组为(98.1±1.7)分和(7.1±1.0)分;陈旧骨折组为(96.9±2.2)和(6.6±1.1)分,两组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论:陈旧性胫骨髁间棘骨折多由新鲜骨折治疗不及时或治疗不当演变而来,同新鲜性骨折一样,经关节镜下复位钢丝固定可以取得较好的临床效果,可作为新鲜骨折治疗不及时或治疗不当后的一种补救治疗方法.
作者：赵建忠；陈新军 刊期： 2012年第04期
目的:构建百草枯致肺间质纤维化动物模型.方法:25只家兔随机分为实验组(20只)和对照组(5只).实验组家兔以40 mg/kg体质量百草枯一次性灌胃,并于染毒后第3、7、14、28天处死,对照组生理盐水灌胃并于第28天处死.观察两组家兔的一般情况、肺组织大体结构和肺组织病理学改变.结果:实验组家兔在染毒后1 h即出现中毒性改变,肺组织在第28天出现明显的纤维化改变.结论:百草枯灌胃法能可靠地构建出肺纤维化动物模型.
作者：郭书华；尹江宁；任国庆；蔡华忠 刊期： 2012年第04期
目的:研究脂联素及其受体基因多态性与结直肠癌易感性之间的关系.方法:370例结直肠癌患者为实验组,370例健康体检者设为对照组.每例取全血3 ml,裂解红细胞后提取DNA.用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)位点检测技术,检测脂联素基因多态性位点(rs266729、rs822395、rs822396、rs2241766、rs1501299)及其受体基因多态性位点(rs12733285、rs1342387)的基因型,比较两组各位点的基因型分布频率.结果:① 实验组脂联素受体基因rs12733285位点CC、CT、TT基因型频率分别为91.89%、8.11%、0.0%,对照组分别为86.49%、13.51%、0.0%,两组基因型比较差异有统计学意义(χ2=5.61,P=0.018).② 实验组脂联素受体基因rs1342387位点GG、AG、AA基因型频率分别为48.65%、38.92%、12.43%,对照组分别为37.84%、46.49%、15.68%,两组基因型分布频率差异有统计学意义(χ2=8.87,P=0.012).③与CC基因型相比,脂联素受体基因rs1277285位点的CT基因型与结直肠癌的发生风险呈负相关(校正后OR＝0.56,95% CI＝0.35～0.91).与GG基因型相比,脂联素受体基因rs1342387位点的AG和AA基因型的个体可降低结直肠癌的发病风险(AG vs GG:校正后OR＝0.66,95% CI＝0.48～0.90;AA vs GG:校正后OR＝0.62,95% CI＝0.39～0.98;AG/AA vs GG:校正后OR＝0.65,95% CI＝0.48～0.87);④.脂联素基因5个多态性位点的基因型频率在两组间差异无统计学意义(P均>0.05).结论:脂联素受体基因(rs12733285、rs1342387)的多态性可能与结直肠癌发病有关,脂联素受体基因多态性的检测为大肠癌的诊断及治疗提供了新的方法.
作者：张颖；冯全林；刘长明；狄荣科 刊期： 2012年第04期
目的:研究肿瘤微环境、肝X受体( liver X receptors,LXRs)与肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophage,TAM)的形成及其功能之间的关系.方法:提取肿瘤组织中的肿瘤相关巨噬细胞,同时提取腹腔巨噬细胞作为对照.在体外实验中巨噬细胞与肿瘤细胞共培养或者使用肿瘤上清处理巨噬细胞,实时PCR检测巨噬细胞LXRs、IL-10、IL-12的mRNA水平;分别激活LXR和阻断LXR信号通路,观察其对TAM形成的影响.结果:肿瘤微环境可诱导巨噬细胞LXRs受体高表达,并表现为M2型巨噬细胞的表型,激活LXRs可以促进巨噬细胞向TAM转变,而阻断LXR信号通路则抑制TAM的形成.结论:肿瘤微环境能激活LXRs,从而诱导TAM的形成,并促进肿瘤生长、转移和免疫逃逸.
作者：钟晓敬；王秀珍；盛宏光 刊期： 2012年第04期
目的:观察原发性高血压(EH)、2型糖尿病(DM)、原发性高血压合并糖尿病(EH+DM)患者和健康对照组的肱-踝脉搏波传导速度(baPWV)差异.方法:测定115例EH、78例DM、98例EH+DM患者及136例健康人的血压、脉压差、血糖、血脂、体质量指数、糖化血红蛋白及baPWV,并进行比较分析.结果:单纯EH组、单纯DM组baPWV值明显低于EH+DM组,差异有统计学意义(P＜0.05);单纯EH组和单纯DM组间baPWV值无明显差异(P＞0.05),但两组明显高于健康对照组.结论:原发性高血压合并糖尿病患者的肱-踝脉搏波传导速度明显升高,该值的升高与血压、脉压差、血糖、低密度脂蛋白、糖化血红蛋白有关.
作者：陈芳；谭秋波；洪小苏 刊期： 2012年第04期
目的:分别克隆小鼠白介素17受体A胞外段(mIL-17RAaa32-322)及小鼠IgG2AFc(mIgG2AFc)基因,构建mIL-17RAaa32-322-mIgG2AFc融合蛋白原核表达载体,并在体外表达、纯化及鉴定.方法:利用基因重组技术构建pET32a(+)-mIL-17RAaa32-322-mIgG2AFc原核表达载体,并在E.coli Rosetta中表达mIL-17RAaa32-322-mIgG2AFc融合蛋白,经镍离子螯合层析分离纯化后,用SDS-PAGE电泳和蛋白质印迹法进行鉴定.结果:成功构建pET32a(+)-mIL-17RA aa32-322-mIgG2AFc原核表达载体,获得高效表达的融合蛋白,且蛋白质印迹证实为目的蛋白.结论:获得mIL-17RA aa32-322-mIgG2AFc融合蛋白,为进一步研究其生物学功能奠定基础.
作者：魏衍财；朱晨露；陈艳红；秦伟；田洁；袁靖；陈娟；吴晶晶；汤新逸；Samuel Essien Baidoo；许化溪；王胜军 刊期： 2012年第04期
目的:建立检测小鼠脂肪组织中趋化因子CCL20(CC chemokine ligand 20)mRNA的实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)的方法.方法:分离小鼠脂肪组织细胞,经PMA和离子霉素刺激4 h后收集细胞提取总RNA并逆转录为cDNA.采用qRT-PCR方法检测趋化因子CCL20 mRNA的表达水平.评价该方法的特异性,同时应用该方法检测小鼠脂肪组织中趋化因子CCL20mRNA相对表达水平.结果:建立了小鼠脂肪组织中趋化因子CCL20的SYBR Green 实时荧光定量PCR检测方法,结果显示该方法的熔解曲线为单峰,同时核酸电泳显示一条特异性条带.检测结果表明高脂饮食诱导的肥胖小鼠脂肪组织中趋化因子CCL20的相对表达水平明显高于正常饮食对照组(t=3.02,P＜0.05).结论:建立了检测小鼠脂肪组织中趋化因子CCL20 mRNA的实时荧光定量PCR方法,特异性好、灵敏性强,为进一步研究小鼠CCL20的生物学功能提供了实验基础.
作者：陈艳红；朱晨露；魏衍财；秦伟；田洁；袁靖；陈娟；吴晶晶；汤新逸；许化溪；王胜军 刊期： 2012年第04期
目的:研究人脐带间质干细胞来源的外切体(hucMSC-exosome)对大鼠缺血/再灌注(I/R)损伤心肌细胞的修复作用.方法:在体内,建立大鼠I/R模型:经冠状动脉左前降支(LAD)结扎缺血30 min后取消结扎恢复灌注,与此同时,尾静脉注射hucMSC-exosome.在体外,建立大鼠H9C2(2-1)心肌细胞缺氧/复氧(H/R)模型:细胞于无血清低糖培养基中缺氧(5% CO2/93% N2)24 h后,用含hucMSC-exosome的高糖10% FBS培养液复氧24 h.采用MTT法、TUNEL法、心肌酶谱以及线粒体膜电位等方法检测大鼠心肌细胞的增殖和凋亡状况.结果:在体内,心肌细胞经I/R损伤后,hucMSC-exosome与hucMSC处理组较PBS处理组血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)值均下降;TUNEL结果显示,前两组较PBS处理组心肌细胞凋亡明显减少;在体外,心肌细胞经H/R损伤后,MTT实验表明细胞增殖显著减弱,hucMSC-exosome作用后,TUNEL及线粒体膜电位(ΔΨm)结果分别显示受损心肌细胞凋亡以及膜电位下降明显减少.结论:hucMSC-exosome能有效抵抗心肌细胞因缺血/再灌注损伤而引起的细胞凋亡.
作者：史云燕；沈俐；高硕；周颖；纪润璧；李伟；钱晖；朱伟；许文荣 刊期： 2012年第04期
江苏大学学报（医学版）杂志
主管:江苏省教育厅
主办：江苏大学
