学术投稿

TIMP-2逆转录病毒载体的构建及表达

李振江;陈子兴;岑建农;何军;邱桥成

关键词:组织型基质金属蛋白酶抑制剂2, 聚合酶链反应, 逆转录病毒载体, 载体构建, 基因转染, 基因表达
摘要:目的构建人组织型基质金属蛋白酶抑制剂2(TIMP-2)编码序列基因逆转录病毒表达载体,转染人单核细胞白血病细胞株,为探讨TIMP-2的生物学功能奠定基础.方法根据基因库中已公布的序列设计引物,用PCR方法扩增出人TIMP-2编码序列基因片段,用限制性内切酶及T4连接酶将目的片段插入MSCV逆转录病毒载体中.采用酶切和PCR鉴定及测序后经脂质体介导转染至PT67包装细胞中,以病毒上清感染单核细胞白血病细胞株SHI-1,G418筛选,极限稀释法挑选单克隆细胞株,定量PCR和Western Blotting检测TIMP-2的表达.结果 TIMP-2基因克隆进逆转录病毒载体MSCV中,经酶切、PCR和DNA测序证实重组逆转录病毒载体构建正确,病毒上清感染SHI-1细胞,经G418筛选并挑选出单克隆细胞,经实时定量PCR和Western Blotting检测发现SHI-1细胞中TIMP-2 mRNA及蛋白表达明显上调.结论成功构建了高表达TIMP-2的SHI-1细胞,可对其生物学行为作进一步研究.
苏州大学学报(医学版)杂志相关文献
  • 慢性髓系白血病急变期与急性白血病免疫表型的比较研究

    目的比较慢性髓系白血病急变期(CML-BC)与急性白血病(AL)的免疫表型特征.方法采用一组单克隆抗体和四色流式细胞术对58例成人CML-BC及同期420例AL患者骨髓标本进行免疫表型分析.结果 58例CML-BC中,CML-AML占77.6%,CML-ALL占13.8%,CML-MAL(混合性白血病)占5.2%;AL中,AML占66.2%,ALL占32.9%,MAL占1.0%.CML-AML中,CD7及CD34表达高于AML;CML-BC和CML-AML中CD7与CD34共阳性表达分别高于AL和AML(P<0.05).276例AML中,纯型占62.3%,变异型占37.7%;130例ALL中,纯型占44.6%,变异型占55.4%;42例CML-AML中,纯型占59.5%,变异型占40.5%;8例CML-ALL中,纯型与变异型各占50.0%.结论 CML-BC中干祖细胞阶段的抗原较AL高表达,变异型CML-BC与AL比例相当.

    作者:朱雨;李建勇;吴雨洁;宋君红;郑文娟;杨慧;张建富 刊期: 2006年第02期

  • Ki67在卵巢癌中的表达及临床意义

    采用免疫组织化学SP法检测Ki67在20例卵巢良性肿瘤、10例交界性肿瘤、42例卵巢癌中的表达,并分析它们与卵巢临床病理指标的关系.结果:卵巢良性肿瘤KI指数为2.00±1.22,交界肿瘤为10.20±5.03,卵巢癌为35.20±15.20,三组比较,差异显著(P<0.01);Ⅲ~Ⅳ期卵巢癌KI指数为35.75±12.30,显著高于Ⅰ~Ⅱ期卵巢癌的22.00±11.20(P<0.01);中低分化癌KI指数为34.17±9.08,显著高于高分化癌的22.88±10.02(P<0.01);卵巢癌Ki指数与组织类型、淋巴转移无关(P>0.05).结果表明,卵巢癌中Ki67表达显著高于卵巢良性交界肿瘤,可作为鉴别良恶性肿瘤的指标;其表达与卵巢癌的临床分期、病理分级有关.

    作者:任琼珍;钱志红;胡建铭 刊期: 2006年第02期

  • 米非司酮联合MTX单次肌肉注射治疗非破裂型输卵管妊娠的疗效分析

    对48例非破裂型输卵管妊娠者采用米非司酮+MTX联合治疗.结果:米非司酮+MTX联合治疗的治愈率为90%,一个疗程成功率为84.4%,治疗中无明显副反应.认为米非司酮联合MTX单次肌肉注射治疗非破裂型输卵管妊娠安全有效,方法简单,副作用小,可作为临床治疗方案之一.

    作者:朱敏 刊期: 2006年第02期

  • 糖尿病患者生活质量与情绪因素的调查分析

    目的了解糖尿病患者的生活质量情况及与情绪因素的相关性.方法采用糖尿病患者特异性生活质量量表(DSQL)、汉密顿抑郁量表(HRSD)、汉密顿焦虑量表(HAMA)对58例糖尿病住院患者进行调查.结果①病程影响患者的生活质量,病程大于1年和病程小于1年的患者的生活质量之间差别有统计学意义(P<0.05),病程大于1年的患者其生活质量评分较高,生活质量较差;②情绪障碍是生活质量下降的危险因素之一,患有情绪障碍的患者与无情绪障碍之间的差异显著(P<0.05或P<0.01),患有情绪障碍的患者生活质量评分较高,具有较差的生活质量.③DSQL生理纬度与发病数目之间呈正相关(P<0.05).结论病程和情绪障碍均可导致糖尿病患者的生活质量下降,主要是受心理因素的影响较大,临床医生应对患者心理问题进行干预和治疗,以提高患者的生活质量.

    作者:靳彦琴;兰光华;成兴波 刊期: 2006年第02期

  • 埃索美拉唑为基础的三联一周疗法对Hp相关性十二指肠球部溃疡的疗效观察

    采用随机双盲方法,将30例Hp相关性十二指肠球部溃疡(DU)患者分为EAC及EFA组,疗程7 d.结果:EAC组、EFA组DU愈合率分别为100%、93.3%;EAC组、EFA组Hp根除率分别为100%、93.3%;EAC组、EFA组消化道症状消除率均为93.3%,缓解率均为6.7%.EFA组见不良反应2例.结果表明,以埃索美拉唑为基础的三联一周疗法是治疗Hp相关性DU的有效治疗方法.

    作者:徐晓;徐小明;陈卫昌 刊期: 2006年第02期

  • 喜普妙与百优解治疗抑郁症的对照研究

    口服喜普妙或百优解治疗抑郁症各50例,疗程6周,采用汉密尔顿抑郁量表(HAMD)和副反应量表(TESS)在治疗前和治疗后1、2、4、6周末评定药物疗效和副反应.结果:两组的疗效无显著性差异(P>0.05);HAMD总分及各因子分从疗后2周至6周均较治疗前显著降低,两组间则无显著性差异(P>0.05).治疗结束时TESS评分百优解组一些因子分显著高于喜普妙组(P<0.05).认为喜普妙治疗抑郁症疗效好,副反应小,服用方便、安全,可首选使用.

    作者:唐英 刊期: 2006年第02期

  • 母乳性黄疸患儿体液免疫变化的临床研究

    目的探讨母乳性黄疸患儿体液免疫的变化特点,并分析血清胆红素水平与体液免疫各指标的相互关系.方法观察组选择母乳性黄疸患儿38例,按血清胆红素水平分为A组(血清胆红素<205 μmol/L)和B组(血清胆红素≥205 μmol/L);对照组选择健康儿40例为C组,采用流式细胞术检测CD23,免疫比浊法检测免疫球蛋白.结果 B组CD23、IgA、IgG、IgM明显低于A组及C组(P<0.01),A组CD23、IgA、IgG、IgM明显低于C组(P<0.01).结论母乳性黄疸患儿血清胆红素浓度稍增高即可降低患儿的体液免疫功能.

    作者:朱国际;陆小平 刊期: 2006年第02期

  • 内支架置入结合动脉内化疗治疗胃十二指肠恶性梗阻11例

    通过对11例有反复恶心呕吐症状且不能手术治疗的胃十二指肠恶性梗阻患者在透视监视下置入12个自膨胀式金属内支架后,定期行肿瘤供血动脉插管灌注化疗.结果:所有病例梗阻症状均获得缓解,患者生活质量明显提高.提示内支架置入结合动脉内化疗对胃十二指肠恶性梗阻可作为标本兼治的有效治疗方法.

    作者:范觉昕;王宏;丰川;许建铭 刊期: 2006年第02期

  • 翼状胬肉的组织学及超微结构分析(附10例报告)

    对10例翼状胬肉进行组织学及超微结构分析.将标本分成两份,一份制成石蜡切片作常规病理检查,另一份采用H-600透射电镜进行超微病理观察.结果表明:翼状胬肉中存在正常及异常弹力纤维胶原纤维,角膜上皮细胞下由于增生纤维的侵入,使Bowman膜破坏;翼状胬肉中还可见不同程度的血管增生和退变及各种炎性细胞浸润.认为弹力纤维及胶原纤维的增生与变性是翼状胬肉突出的病理改变,同时还存在血管、细胞因素.

    作者:姚静艳;冯一中;王响英 刊期: 2006年第02期

  • 吻合器痔环切除术与传统的痔切除术的疗效对比观察

    对比观察吻合器痔环切除术52例和传统痔核切除术30例的术后不适及并发症.结果:两组间术后烦躁、切口渗血、止痛剂的应用、镇痛泵的应用、术后第一次大便时便中带血、尿潴留、尿管留置时间、手术时间、术后住院时间均有显著性差异(P<0.05);肛周肿胀发生率无显著性差异(P>0.05).术后随访9~12个月,两组均无复发,无肛门狭窄及大便失禁等并发症.认为吻合器痔环切除术是治疗内痔及混合痔的一种新技术,具有手术简单、术后恢复快、痛苦少、并发症少、住院时间短等优点.

    作者:陶桂珍;吴浩荣 刊期: 2006年第02期

  • 凋亡抑制蛋白livin在膀胱移行细胞癌中的表达及其临床意义

    目的研究一种新的凋亡抑制蛋白(Inhibitor of Apoptosis Proten,IAP)livin两种异构体livin-α和livin-β mRNA在膀胱移行细胞癌(Transitional Cell Carcinoma of Bladder,TCC)组织中的表达,及其与TCC的病理分级、临床分期的相关性.方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测30例TCC患者的肿瘤组织、3例良性前列腺增生症(Benign Prostatic Hyperplasia,BPH)和2例外伤所致的膀胱破裂患者的膀胱组织中livin-α和livin-β mRNA的表达.结果 30例TCC组织中livin mRNA表达阳性率为16.7%,其表达阳性的病例病理分级均为Ⅲ级,肿瘤均侵及深肌层.而3例BPH患者和2例膀胱破裂患者的膀胱组织livin mRNA表达均呈阴性.结论 livin可作为 TCC的分子标记物,可成为对TCC恶性程度和预后判断的参考指标.

    作者:曾剑;温端改;侯建全;何军 刊期: 2006年第02期

  • 人骨髓间充质干细胞体外优化条件的研究

    目的通过比较5种不同体外培养人骨髓间充质干细胞(hMSCs)条件,找到一种能在质和量上均能满足需要的体外培养条件.方法使用Percoll-Paque液(1.073 g/ml)分离人骨髓血,采用DMEM+15%的小牛血清、人体白蛋白、人血清、脐带血清及MesenCult培养基,在相同培养条件下,动态观察hMSCs的生长状况、细胞数量变化,通过流式细胞仪检测细胞的纯化状况.结果 5种培养条件在一定时相内均能获得较为纯化的hMSCs,但在生长速度和纯化率上存在一定的差异.结论 Mesen Cult是一种较为优秀的hMSCs培养基,胎儿脐带血清培养也能在短期内获得足量纯化的hMSCs,人血清的使用还需要做进一步的研究.

    作者:金钧;黄坚;吴思荣;惠国桢 刊期: 2006年第02期

  • 不稳定颈动脉斑块脑梗死患者的血hs-CRP水平研究

    目的探讨颈动脉粥样硬化病变特性与脑梗死的关系,寻找不稳定性颈动脉粥样斑块可能的血清学标志.方法对88例颈内动脉系统的急性脑梗死患者进行颈动脉彩超检查,根据结果分成不稳定斑块组、稳定斑块组、无斑块组.同时行血高敏C-反应蛋白(hs_CRP)水平检测.结果①检出颈动脉粥样硬化斑块70例(79.55%),其中36例(40.91%)伴不稳定斑块且多位于梗死侧,梗死侧不稳斑块构成比显著高于非梗死侧(P<0.001).②不稳定斑块组hs_CRP水平高于稳定斑块组、无斑块组及对照组;危险度分析显示血hs_CRP水平升高易发生不稳定斑块(OR=2.05,95%CI 1.419~7.302);Logistic回归分析显示hs_CRP与不稳斑定块有关(P<0.05).结论①不稳定颈动脉粥样硬化斑块与脑梗死之间关系密切.②hs_CRP可能是一项独立的反映颈动脉硬化斑块稳定性的血清标志物.

    作者:张文跃;赵合庆;李文;包仕尧;余荣水 刊期: 2006年第02期

  • 血管性血友病因子裂解酶及凝血酶敏感蛋白1在狼疮性肾炎中的意义

    目的检测狼疮性肾炎(LN)患者血浆凝血酶敏感蛋白1(TSP1)含量及血管性血友病因子裂解酶(ADAMTS13)的活性水平,以探讨TSP1及ADAMTS13在LN中的意义.方法用TSP1检测试剂盒和残余胶原结合试验(R-CBA)对31例LN患者血浆血管性血友病因子、TSP1及ADAMTS13的活性水平进行检测,并与20例血栓性血小板减少性紫癜(TTP)患者及健康人进行比较.结果 LN及TTP患者血浆vWF:Ag显著高于对照组(P<0.05),血浆ADAMTS13活性水平均显著低于正常组(P<0.01),TTP患者TSP1含量显著低于对照组,而LN患者低于对照组,但无统计学差别(P>0.05).18例肾活检的LN患者中,Ⅳ型患者的ADAMTS13活性低,其余三型间无显著性差别,TSP1各型间无显著性差别(P>0.05).结论 ADAMTS13活性低下参与LN的发生发展,在一定程度上反映了LN病理类型的轻重,而ADAMTS13活性低下及TSP1水平下降共同参与TTP的发病机制.

    作者:卢国元;刘芳;郭小芳;王兆钺;苏健;白霞;阮长耿 刊期: 2006年第02期

  • TGF-β1和CD105在胰腺癌中的表达及其临床意义

    目的探讨TGF-β1和CD105在胰腺癌生长、浸润、转移过程中的作用,为对患者进行预后判断及生物治疗提供理论依据.方法应用免疫组织化学S-P法检测TGF-β1、CD105在52例胰腺癌和10例非肿瘤性胰腺组织中的表达,分析它们与胰腺癌临床病理参数及患者生存率的关系.结果 TGF-β1在非肿瘤性胰腺组织、胰腺癌中的阳性表达率分别为30%和80.77%,两者间的差异具有统计学意义(P<0.01).TGF-β1的表达强度与胰腺癌临床分期及淋巴结有无转移呈正相关(P<0.01).在52例胰腺癌中,CD105标记的微血管密度(Micro Vessel Density,MVD)明显高于非肿瘤性胰腺组织(P<0.01).胰腺癌分化程度越低,CD105标记的MVD值越高,并且TNM分期Ⅲ、Ⅳ期MVD值显著高于Ⅰ、Ⅱ期(P<0.01),淋巴结转移组的MVD值显著高于无淋巴结转移组(P<0.01).此外,生存单因素分析TGF-β1、CD105与胰腺癌的预后有关(P<0.01).结论 TGF-β1和CD105在胰腺癌生长、浸润和转移过程中发挥了一定的作用.

    作者:黄文亭;冯一中;顾永平;柴玉海;李峰 刊期: 2006年第02期

  • Ferguson手术治疗发育性髋关节脱位32例

    对32例(41髋)发育性髋关节脱位运用Ferguson手术进行治疗.结果:24例复位成功,8例后期行二次手术治疗,7髋发生股骨头无菌性坏死.认为Ferguson手术是治疗6~24个月发育性髋关节脱位患儿的一种简单而行之有效的方法,但必须掌握其适应证并进行长期随访观察,才能达到良好的治疗效果.

    作者:冯林;王晓东;张锡庆;王科文;朱振洪;尹航 刊期: 2006年第02期

  • 原发性甲状旁腺功能亢进11例分析

    原发性甲状旁腺功能亢进(以下简称原发性甲旁亢)是由甲状旁腺激素(PTH)分泌增加而引起的一种较少见的内分泌疾病,常因钙磷代谢紊乱导致骨髂、肾脏、消化系统病变.其临床表现复杂,常易延误诊治.2001年1月至2005年4月我院经手术和病理检查证实原发性甲旁亢11例,现报道如下.

    作者:周健;李德春 刊期: 2006年第02期

  • 脑性瘫痪儿童社会适应行为的观察及干预研究

    目的为了让脑性瘫痪患儿在得到躯体康复的基础上更好地适应社会、回归社会.方法对304例不同类型脑瘫患儿进行为期2~3年的社会适应行为调查,且进行干预组与非干预组的近远期研究.同时观察合并有癫痫的脑性瘫痪患儿在不同药物控制前后的变化.结果不同类型脑性瘫痪患儿的社会适应行为有显著性差异,而干预组与非干预组之间的差异也有统计学意义(P<0.05).对合并癫痫者需尽早控制,而且对抗癫痫药需进行选择.结论大部分脑性瘫痪患儿存在社会适应能力问题;对脑性瘫痪患儿进行社会适应行为观察和干预治疗已成为康复训练不可缺少的一部分.

    作者:顾琴;王浙东;李岩;汤继宏;金建华;胡斯明 刊期: 2006年第02期

  • WORT对血清饥饿及辐射诱导血清饥饿的SHG44增殖抑制作用的影响

    目的研究磷脂酰肌醇-3-激酶的相对特异性抑制剂WORT(Wortmannin,渥漫青霉素)对血清饥饿的SHG44细胞及辐射诱导血清饥饿的SHG44增殖抑制作用的影响.方法用甲基噻唑基四氮唑盐(Methyl thiazolyl tetrazolium ,MTT)比色法测定不同浓度的WORT处理的血清饥饿及血清饥饿后5 Gy照射的SHG44细胞的存活率.结果血清饥饿后,1.00×10-8 mol/L~5.00×10-7 mol/L的WORT使细胞存活率随WORT浓度的升高而降低(P<0.05),5.00×10-7 mol/L~5.00×10-6 mol/L的WORT使细胞存活率的降低出现平台期,1.50×10-5~3.00×10-5 mol/L范围内细胞存活率再一次出现下降(P<0.05).实验结果表明WORT可使血清饥饿后再接受5 Gy照射的细胞存活率进一步降低(P<0.05).结论血清饥饿后,渥漫青霉素可抑制SHG44细胞的增殖,并提高辐射诱导血清饥饿细胞的增殖抑制作用,其机制可能与抑制PI3K通路以及PI3K家族其他成员相关.

    作者:薛景;刘芬菊;宁萍;黄辉 刊期: 2006年第02期

  • 输尿管镜在急性肾绞痛中的应用

    应用输尿管镜对84例急性肾绞痛患者施行检查及治疗.结果:84例中,71例检查时发现为输尿管结石,同时可以治疗,7例为血块,3例为组织团块,3例进镜未成功,改开放手术.认为输尿管镜为急性肾绞痛的检查与治疗提供了安全、有效的手段.

    作者:高鹏;单玉喜;薛波新;阳东荣 刊期: 2006年第02期

苏州大学学报(医学版)杂志

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主管:江苏省教育厅

主办:苏州大学