学术投稿

携带hIGF-Ⅰ基因的腺病毒载体构建

高共鸣;范卫民;刘瑞平;卫积书;马益民

关键词:hIGF-Ⅰ, 腺病毒载体, 转染
摘要:目的 探讨构建携带hIG-Ⅰ基因腺病毒载体的可行性.方法 从pcDNA 3.1-hIGF-Ⅰ质粒中克隆出hIGF-Ⅰ基因的编码序列,酶切、连接后,插入腺病毒系统中的穿梭载体pAdshuttle-CMV,获得重组质粒pAdshuttle-CMV-hIGF-Ⅰ,将其转化含有腺病毒骨架载体pAdeasy-1的大肠杆菌BJ5183,进行同源重组,获得重组子pAdeasy-1-IGF-Ⅰ.鉴定后,将pAdeasy-1-IGF-Ⅰ转染人胚肾细胞(Ad293细胞),获得含hIGF-Ⅰ基因的重组腺病毒(rAd-hIGF-Ⅰ).再鉴定后,Ad293细胞反复感染冻融扩增腺病毒,50%组织培养感染量法(TCID50)检测病毒滴度.将病毒颗粒感染绿猴肾成纤维细胞(COS-7细胞),荧光显微镜观测绿色荧光蛋白(GFP)的表达,RT-PCR分析hIGF-Ⅰ基因在mRNA水平的表达,Western blot分析hIGF-Ⅰ在蛋白水平的表达.结果 成功构建出含有hIGF-Ⅰ基因的腺病毒载体rAd-hIGF-Ⅰ,转染COS-7细胞后发现绿色荧光蛋白表达,同时RT-PCR扩增出318 bp的目的 条带,Western blot得到7.6kDa大小的同的蛋白,证明了腺病毒载体rAd-hIGF-Ⅰ能成功转染COS-7细胞,hIGF-Ⅰ基因能在其中成功表达.结论 成功构建出含有hIGF-Ⅰ基因的腺病毒载体rAd-hIGF-Ⅰ,并且证实其能对COS-7细胞进行有效转染,为组织工程软骨的进一步改良提供了高效的基因载体.
江苏医药杂志相关文献
  • 来氟米特对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠足细胞Nephrin表达的影响

    目的 观察来氟米特对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠足细胞相关蛋白nephrin表达的影响及机制.方法 体外培养大鼠足细胞,间接免疫荧光法鉴定nephrin、WT-1表达阳性的细胞为足细胞,建立AngⅡ足细胞损伤,RT-PCR法检测来氟米特治疗后nephrin mRNA表达变化.结果 Nephrin沿胞膜、细胞骨架、胞核分布,WT-1位于细胞核,ANGⅡ刺激足细胞后nephrin表达呈剂量及时间依赖性降低,来氟米特纠正这一下调作用,呈剂量依赖性.结论 AngⅡ下调大鼠足细胞nephrin表达导致足细胞损害,来氟米特阻断这一损害.

    作者:高雪艳;邢昌赢;孙彬;赵秀芬;钱军 刊期: 2009年第02期

  • 呼吸道合胞病毒、肺炎链球菌肺炎患儿免疫功能分析

    目的 分析呼吸道合胞病毒(RSV)肺炎、肺炎链球菌(SP)肺炎患儿外周血T淋巴细胞亚群、B淋巴细胞以及NK细胞的变化.方法 对入院儿童行多病原联合检测,包括直接免疫荧光法检测7种病毒抗原、痰细菌培养、PCR检测痰肺炎支原体和肺炎衣原体,明确RSV、SP感染,并用流式细胞仪检测部分患儿外周血T淋巴细胞亚群、B淋巴细胞以及NK细胞.结果 RSV肺炎患儿外周血CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞以及CD19+B细胞百分比与对照组相仿;但CD4+/CD8+比值和NK细胞比对照组低.SP肺炎患儿外周血T细胞亚群以及CD4+/CD8+比值与对照组相仿;但CD19+B细胞较正常组为高,而NK细胞比对照组为低.两感染组比较,PSV组CD4+Tlymphocyte升高;而SP组B lymphocyte升高.结论 RSV感染后刺激机体产生细胞免疫为主的反应,而SP感染后则产生体液免疫为主的反应.

    作者:陈正荣;季伟;王宇清;张爱丽;季正华 刊期: 2009年第02期

  • 专业运动员前交叉韧带损伤的治疗

    目的 探讨运动员前交叉韧带(ACL)损伤的治疗以及康复方案.方法 专业运动员前交叉韧带损伤手术治疗18例,其中自体髌腱中三分之一重建桥交叉韧带6例,自体股薄肌腱半腱肌腱重建前交叉韧带7例,同种异体髌腱重建前交叉韧带4例,人工韧带重建前交叉韧带1例.术后经过严格的康复训练.结果 分析受伤原因,训练时受伤者均与训练时损伤和技术失误有关,而比赛受伤者则主要是对手粗暴动作造成.术后均得到1年以上的随访,膝关节松弛度测试仪(KT2000)30磅检杳移位平均2.0,主观感觉良好,术后再断1例,余均恢复正常训练,并基本达到或者超过伤前水平.结论 严格训练纪律和适度劳逸结合可能有助于减少外伤,关节镜下重建前交叉韧带并结合严格的康复训练,有助于前交叉韧带损伤的专业运动员恢复竞技能力.

    作者:陈东阳;蒋青;徐志宏 刊期: 2009年第02期

  • 功能性胰岛素瘤21例诊治体会

    目的 总结功能性胰岛素瘤诊治体会.方法 回顾性分析胰岛素瘤21例:14例有典型的Whipple三联症;病程中曾误诊为癔病5例,癫痫3例,精神分裂症及脑血栓各2例,脑出血及散发性脑炎各1例,误诊率达66.4%(14/21).空腹血糖或发作期血糖平均为2.1 mmol/L,空腹血胰岛素平均为31.6mU/L.B超及CT检查阳性率分别为38.1%(8/21)和40.0%(8/20).结果 术中探查扪诊正确率为100%.17例行单纯胰岛素瘤摘除术,2例行胰体尾切除术,2例胰颈部肿瘤摘除及胰体尾空肠Roux-en-Y吻合术.肿瘤切除后血糖即显著升高,5、15、30、60、120 min和24、48、72 h 血糖均值分别为5.8、7.6、8.3、9.6、13.3和13.4、11.7、9.2 mmol/L.结论 功能性胰岛素瘤临床少见,容易被误诊.定位诊断以术中的细致触诊为重要;术中活检和动态血糖监测可避免手术失误.

    作者:施巍巍;张挺;沈波;施超 刊期: 2009年第02期

  • 植物人气管套管护理不当导致断离一例

    患者,男,64岁.7年前因车祸致脑外伤后一直处于昏迷状态,气管切开,佩带金属气管套管通气.

    作者:王幸;顾伟文 刊期: 2009年第02期

  • 胃癌组织中GC-C和CDX2 mRNA的表达及临床意义

    目的 通过检测鸟苷酸环化酶C信使核糖核酸(GC-C mRNA)和尾型同源盒转录因子mRNA(CDX2 mRNA)在胃癌组织中的表达及其临床意义.方法 应用RT-PCR检测GC-C和CDX2 mRNA在30例胃癌及相应远癌胃组织中的表达.结果 GC-C和CDX2 mRNA在胃癌组织中表达率分别为66.7%(20/30)和63.3%(19/30),而在远癌胃组织中均为阴性.两者在肠型胃癌中的表达高于弥漫型;但与年龄、性别、病灶大小、临床病理分期、分化程度、淋巴结转移等因素无关.两者在胃癌中的表达呈正相关(γ=0.4277,P<0.01).结论 GC-C和CDX2 mRNA的异常表达与胃黏膜癌变有关,可能在肠型胃癌的发生上起着重要作用.

    作者:毛振彪;许钟;张健锋;朱慧君;章建国 刊期: 2009年第02期

  • 绿激光光汽化术治疗晚期前列腺癌伴膀胱出口梗阻

    目的 比较前列腺绿激光光汽化术与经尿道前列腺电切术治疗晚期前列腺癌伴膀胱出口梗阻的安全性及有效性.方法 40例晚期前列腺癌伴有膀胱出几梗阻的患者随机分成激光组和电切组,分别采用绿激光光汽化术和电切术进行姑息性治疗,并同时联合药物去势加雄激素受体阻断的间歇性治疗方案,随访6~96个月.结果 激光组术中术后出血、导尿管留置时间、住院天数、手术并发症均明显低于电切组(P<0.05);两组术后1个月国际前列腺症状评分(IPSS)、大尿流率(Qmax)和残余尿量(PVR)与术前相比均有明显改善(P<0.01).结论 与电切术相比,绿激光光汽化术治疗晚期前列腺癌具有创伤小、出血少、恢复快,并能够有效减少手术并发症.

    作者:许立军;单玉喜;高洁;薛波新;阳东荣;崔勇;孙传洋;王文炯;陶伟;陈岽 刊期: 2009年第02期

  • 远端蒂皮神经营养血管皮瓣血管危象及对策

    目的 分析远端蒂皮神经营养血管皮瓣血管危象原因及治疗对策.方法 探查蒂部清除血肿、开放通道解除卡压、抬高肢体.结合高压混合氧治疗和放血疗法.结果 远端蒂皮神经营养血管皮瓣48例,其中出现血管危象13例(静脉回流障碍9例,动脉血流障碍2例,创面感染2例),原因:蒂部卡压、静脉反流、炎性反应等.成活8例,完全坏死3例,部分坏死2例.结论 保证皮神经、相应静脉及血管网的完整性,血管带宽约3~4 cm,明道转移并携带宽度为1~3 cm三角皮桥并架于受区与旋转轴点之间,避免对筋膜蒂的压迫以保证皮瓣血供.高压混合氧治疗、肝素化下放血疗法能改善静脉回流障碍皮瓣血运.

    作者:祁强;林伟;杨明忠;杨青;李永林 刊期: 2009年第02期

  • 葛根提取物诱导K562细胞凋亡

    目的 探讨葛根提取物(PL)对慢性粒细胞自血病(CML)细胞株K562的凋亡诱导作用及其可能的分子机制.方法 以不同浓度(0、2.5、5、10和20 mg/ml)PL处理K562细胞,24 h后光镜下观察形态学改变,MTT法测定细胞增殖抑制,Hoechest 33258荧光染色及FITC-Annexin V/PI双染法检测凋亡率变化,半定量RT-PCR及Western blot方法检测Bcr/abl、Bcl-2、p53、Fas/FasL蛋白表达.结果 PL对K562细胞有明显的增殖抑制作用,并观察到典型的细胞凋亡形态变化,细胞凋亡率与浓度呈正相关;不同浓度PL干预后Bcr/abl基因在mRNA和蛋白水平呈浓度依赖性下调,而 Bcl-2基因则无明显变化;p53表达呈浓度依赖性上调;Fas/FasL表达无明显变化.结论 不同浓度PL能有效诱导K562细胞凋亡;其机制可能通过在mRNA和蛋白水平下调Bcr/abl基因,上调p53基因表达而实现.

    作者:刘佳;沈群;朱光荣;季建敏;章亚成;姜鹏君 刊期: 2009年第02期

  • 光棒引导插管在高位颈椎伤气道处理中的应用

    目的 探讨光棒引导插管在高位颈椎伤患者气道建立中的应用价值.方法 选择高位颈椎伤患者30例应用光棒引导插管(LW)组,另选非颈椎伤患者30例应用纤维支气管镜(BF)组,比较两组插管时间、成功率与导管通过声门顺利率.结果 LW组在3 min内插管成功率高于BF组(96.7%vs.73.3%)(P<0.05),LW组插管时间短于BF组[(24.8±17.0)s vs.(148.6±64.2)s](P<0.01);LW组导管通过声门顺利率高于BF组(89.7%vs.45.5%)(P<0.01).结论 光棒引导气管内插管是高位颈椎伤患者采用全麻快诱导气管插管的有效方法之一.

    作者:郑友芝;周脉涛;顾成永;仲玉霜;华君;洪卫民 刊期: 2009年第02期

  • 球扩支架置入治疗症状性椎动脉起始段狭窄

    目的 分析支架成形术治疗67例症状性椎动脉起始段狭窄的效果.方法 所有病例均具有药物难治性症状,共完成74枚球扩支架的血管内置入.结果 血管的狭窄率从74.5%(50%~99%)下降到4.8%(0~20%),未发生与操作相关的并发症.27例的血管管径恢复正常,术后症状消失,无神经功能缺损.对18例术后6个月造影复查,有2例山现再狭窄.结论 血管内支架置入治疗症状性椎动脉起始段狭窄的近期疗效令人满意,但长期的临床观察及造影复查是必要的.

    作者:孙剑涛;黄玉杰;那世杰;杨咏波;王斌 刊期: 2009年第02期

  • 输尿管气囊导管在输尿管镜下钬激光治疗输尿管上段结石中的应用

    目的 探讨输尿管气囊导管辅助输尿管镜下钬激光治疗输尿管上段结石的疗效.方法 总结输尿管气囊导管辅助输尿管镜下钬激光治疗50例输尿管上段结石的临床资料.其中左侧28例,右侧19例,双侧3例.结石总数53枚,结石大小0.6 cm×0.8 cm~1.5 cm×2.0 cm.合并患侧肾积水48例,输尿管狭窄4例,结石伴息肉12例.结果 单次手术成功率为100%(50/50),单次结石粉碎率100%(53/53).手术时间25~50 min,平均手术时间35.4 min,术后住院3~5 d,平均住院4.1 d.术中无一例结石移位于肾盂,碎石颗粒≤2 mm.术后随访3~4个月,结石清除率为100%(50/50).结论 输尿管气囊导管显著提高了输尿管镜治疗输尿管上段结石的手术成功率和结石清除率,缩短了手术时间,值得临床应用推广.

    作者:赵清松;温端改;侯建全;浦金贤;严春寅;平季根;陈卫国 刊期: 2009年第02期

  • 癫痫发作过程中细胞内钙、一氧化氮合酶与细胞凋亡的关系

    目的 探讨癫痫发作过程中神经细胞内钙、一氧化氮合酶(NOS)与细胞凋亡的关系.方法 采用戊四氮(PTZ)致痫大鼠模型,分为对照组,致痫后30 min、1、3、6、12、24、48 h组,每组8只.流式细胞术检测细胞内钙和细胞凋亡,紫外分光光度计检测NOS.结果 对照组钙水平较低,癫痫发作后钙迅速升高,1 h达高峰,之后下降;NOS在癫痫发作后1、24 h有2个分泌高峰,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);细胞凋亡在癫痫发作后6 h开始升高,24 h达高峰,与对照组比较有显著性差异(P<0.05).结论 钙超载和NOS过度表达可能与癫痫后的细胞凋亡有关.

    作者:刘月影;邓星强;李瑞;袁宝强 刊期: 2009年第02期

  • 人结肠癌VEGF-C表达及其与微淋巴管密度的相关性

    目的 研究血管内皮生长因子C(VFGF-C)在人结肠癌组织中的表达与微淋巴管密度(LVD)的相关性.方法 采用免疫组化Envision二步法检测VEGF-C、人淋巴管内皮透明质酸酶受体-1(LYVE-1)在60例结肠癌、10例结肠腺瘤以及10例正常结肠组织中的表达情况,分析VEGF-C表达与LND的关系.结果 在结肠癌组织中,VEGF-C阳性表达率为53.33%;在正常结肠组织、结肠腺瘤组织中均未见明显VEGF-C阳性表达.VEGF-C表达主要位于肿瘤细胞浆中,呈棕黄色颗粒表现.结肠癌组织中LYVE-1标记的淋巴管阳性率为76.67%,LVD平均值为5.761±1.676,明显高于结肠腺瘤组织中的1.722±0.390(P<0.01).VEGF-C与LVD呈明显的正相关(P<0.05).结论 结肠癌组织中VEGF-C阳性表达率明显增高;VEGF-C表达与LVD呈明显正相关.

    作者:邢春根;魏锋;陈正荣;吕孝东;吴永友;危少华;赵奎 刊期: 2009年第02期

  • 辛伐他汀对炎症损伤后血管内皮祖细胞的保护作用

    目的 探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)对血管内皮祖细胞(EPCs)产生E-选择素和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)活力的影响及不同浓度辛伐他汀的干预作用.方法 体外培养与鉴定兔骨髓源EPCs,用不同浓度TNF-α(1、10、25、50 ng/ml)刺激24 h;50 ng/ml TNF-α刺激细胞0.5 h后用不同浓度辛伐他汀(0、0.1、1.0、10μmol/L)干预24 h,收集上清;用ELISA法检测可溶性E-选择素的浓度,用化学比色法测定eNOS活力.结果 在TNF-α刺激下EPCs产生E-选择素增加,同时eNOS活力降低(P<0.05),变化的量和TNF-α的浓度呈相关性;加入辛伐他汀后E-选择素明显下降.eNOS活力与辛伐他汀呈明显的浓度依赖性增大(P<0.05).结论 辛伐他汀对于炎症损伤后的EPCs具有保护作用.

    作者:程铖;杨向军 刊期: 2009年第02期

  • 106例儿童难治性哮喘的病因分析及治疗策略

    目的 探讨儿童难治性哮喘的病因、治疗与转归.方法 回顾性分析106例难治性哮喘患儿的临床资料.结果 91例确诊为支气管哮喘(85.8%),15例为其他因素引起的反复咳喘(14.2%).难治性哮喘的病因分别是依从性差(16.5%)、吸入技术不正确(17.6%)、并存的疾病未得到重视和治疗(41.8%),不良环境刺激和过敏原因素(13.2%)、反复呼吸道感染(7.7%),与运动、服用阿斯匹林、情绪低落有关各1例.根据病因采取针对性治疗后85例(93.4%)患儿得到控制.结论 哮喘并存过敏性鼻炎、鼻窦炎、腺样体炎以及依从性差、吸入技术不正确是导致儿童难治性哮喘的主要原因,装修房屋致窜内环境污染、饲养宠物已成为新的元凶.

    作者:严永东;盛锦云 刊期: 2009年第02期

  • 有限渐次法切开硬脑膜结合帽状腱膜松解在脑肿胀手术中的应用

    目的 探讨有限渐次法切开硬脑膜结合帽状腱膜松解在外伤后急性脑肿胀(PABS)手术中的效果.方法 手术治疗24例脑肿胀患者:22例半球形脑肿胀(PACHS);2例弥漫性脑肿胀(PADB8).结果 术后6个月评估结果:良好8例(33.3%),中残6例(25.0%),重残3例(12.5%),植物生存2例(8.3%),死亡5例(20.8%).结论 有限渐次法切开硬脑膜结合帽状腱膜松解在脑肿胀的手术中能明显降低手术风险和改善预后.

    作者:唐志放;蒋云召;陆华;周建宏;陈革;陆爻忠;房文峰;王小林 刊期: 2009年第02期

  • 雄激素受体在胃癌组织中的表达及其临床意义

    目的 研究雄激素受体(AR)在胃癌组织中的表达及临床意义.方法 选取经手术切除并经病理汪实的早、进展期胃癌73例,免疫组化SP法染色检测AR在胃痛组织中的表达,分析与临床病理指标、预后的关系.结果 胃癌组织AR阳性率为39.73%,且与胃癌的组织学分级及淋巴结转移呈负相关.Kaplan-Meier(卡普兰-迈耶曲线)生存分析显示,AR阳性表达者的累计生存率明显高于阴性表达者.AR表达、肿瘤大小、病期、淋巴结转移及浸润深度均影响胃癌预后;其中的淋巴结转移和浸润深度足评估预后的独立指标.结论 AR在一定程度上较早地提示胃癌的预后,它的过度表达提示胃癌预后良好.胃癌AR阳性表达可为其内分泌治疗提供参考.

    作者:汪泳;钱海鑫;宇汝胜;周晓俊;曹先东;高登辉;刘弋 刊期: 2009年第02期

  • 血管生成素与肿瘤血管生成

    血管生成素家族(Ang)是近年来新发现的血管生成因子.Ang家族编码四种结构相似的蛋白质,包括Ang-1、Ang-2、Ang-3和Ang-4,均能与受体Tie-2结合,参与肿瘤血管生成的起始及延续过程,影响肿瘤的生长、侵袭和转移.应用以Ang家族或其受体为靶标可抑制肿瘤血管生成,对肿瘤的治疗有潜在的应用前景.

    作者:何荣荣;周怀君 刊期: 2009年第02期

  • 膝关节镜手术中局部镇痛

    目的 研究膝关节镜手术中向关节内注射混合镇痛液的疗效.方法 将60例行膝关节镜手术的患者随机分成两组,每组30例,分别于术毕向关节腔内及伤口注射混合镇痛液(A组)或等量生理盐水(B组).术后采用模拟疼痛量表(VAS)评估患者疼痛程度并记录24 h内镇痛药的用量.结果 术后3、6、12hA组VAS疼痛评分明显低于B组(P<0.01).B组术后有23例需口服塞来昔布200mg镇痛,明显多于A组的5例(P<0.01).A组患者未观察到任何与混合镇痛液相关的副反应.结论 膝关节镜术中向关节内注射混合镇痛液能有效减轻术后疼痛并显著减少术后镇痛药的使用.

    作者:翁文杰;王锋;陈东阳;蒋青 刊期: 2009年第02期

江苏医药杂志

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主管:江苏省卫生厅

主办:江苏省人民医院(南京医科大学第一附属医院)