学术投稿

人β-防御素4基因在HEK293细胞中的转染表达

曹玉红;成胜权;张光运;钱新宏;李如英;丁翠玲

关键词:人β-防御素4, 基因克隆, 真核表达载体, 基因转染
摘要:目的 人β-防御素4(human β-defensin 4,HBD 4)对多种病原菌有杀伤作用.HBD4的自然表达水平极低,体外获得难度较大且价格昂贵.利用基因工程技术生产重组的HBD4成为研究的焦点.文中旨在构建HBD4真核表达载体,探讨真核细胞表达HBD4的可行性.方法用PCR法从已构建的重组克隆载体pMD18-T/HBD4中扩增出HBD4全长编码基因,克隆入真核表达载体pEGFP-N2,构建pEGFP-N2/HBD4重组真核表达载体;通过脂质体转染法将pEGFP-N2/HBD4导入HEK293细胞,采用RT-PCR、荧光显微镜、Western blot检测HBD4的mRNA和蛋白表达情况,并对表达的HBD4进行抗菌活性的初步研究.结果构建的重组真核表达载体pEGFP-N2/HBD4,经酶切鉴定、测序,证实插入的序列与Genebank中的HBD4基因序列完全相同.将pEGFP-N2/HBD4转染HEK293细胞,在转染细胞检测到HBD4mRNA表达.荧光显微镜下可在细胞膜及细胞质中观察到绿色荧光.Western blot分析显示:在pEGFP-N2/HBD4 转染的HEK293细胞及细胞培养液中检测到了HBD4蛋白的表达.Kirby-Bauer纸片扩散法证实表达的HBD4蛋白对铜绿假单胞菌具有较强的杀伤作用.结论成功构建了HBD4基因的真核表达载体,并在HEK293细胞中表达出具有抗菌活性的HBD4多肽.
医学研究生学报杂志相关文献
  • 电针不同经穴对束缚应激模型大鼠行为学影响的实验观察

    目的 目前紧张的工作状态和激烈的社会竞争压力等应激源日益泛化,由此导致的身心疾病已严重影响人的生存质量.临床观察电针对应激性精神心理疾病具有明显疗效.文中旨在通过观察电针不同穴位对束缚应激模型大鼠行为改变的影响,进一步探讨免疫失调状态下心理行为的改变及电针的调节作用.方法将50只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、电针百会组、电针关元组、电针足三里组,每组10只.除正常组外,余各组均采用自制布袋束缚大鼠30min,每天1次,共20d制备束缚应激大鼠模型,于造模第2天,各治疗组捆绑固定后给予电针20min,隔天1次,共10 次.于造模前、造模后、治疗5次及10次,分别采用高架十字迷宫(elevated plus-maze,EPM)检测各组大鼠进入开放臂次数(open arm entry,OE)比例及停留开放臂时间(open arm time,OT)比例的变化.结果与造模前比较,造模后电针百会组大鼠OT比例降低明显、电针关元组大鼠OE比例升高明显,电针足三里组大鼠造模后、治疗5次后OT比例均明显降低,治疗10次后大鼠OE比例则明显升高,P<0.01;与造模刚结束比较,治疗5次后电针百会组大鼠OT比例明显升高(P<0.05),电针关元组大鼠OE比例明显降低、电针足三里组治疗10次后模型大鼠OE和OT比例均升高明显(P<0.01);与治疗5次比较,治疗10次后电针关元组大鼠OE比例升高明显(P<0.05),电针足三里组大鼠OE和OT比例均明显升高(P<0.01).电针各组间比较,大鼠在治疗5次、10次后OE和OT比例呈不同程度的升高或降低趋势,差异无统计学意义(P>0.05).结论电针介入具有一定抗抑郁和抗焦虑作用,可改善慢性束缚应激所引起的抑郁、情绪焦虑;百会、关元、足三里穴均具有抗焦虑作用,且不同穴位效应不同,百会在应激早期的抗焦虑作用明显,而关元、足三里穴的作用较为稳定、持久.

    作者:孙洁;曾霈君;魏惠芳;温进;仲大奎;李滢;杨磊;张露芬 刊期: 2012年第10期

  • 电子麻醉记录与手工麻醉记录在神经外科手术中应用的对比研究

    目的 电子信息技术在医院的普遍使用,大大提高了医务人员的工作效率.文中通过麻醉信息系统在手术室的应用,探讨电子麻醉记录与手工麻醉记录在神经外科手术中生成麻醉记录单的书写效率和书写质量的差异.方法对80例神经外科住院患者手术中的麻醉记录单书写分别采用电子麻醉记录与手工麻醉记录2种方式,计算麻醉记录单书写的总时间,对每份记录单中事件数据的总数、麻醉药品数据的总数进行统计,并对记录的生命体征数据曲线图和麻醉单整体质量进行评分.结果电子麻醉记录较手工麻醉记录在麻醉记录单书写的总时间上明显减少(P<0.01),在记录的事件数据总数、麻醉药品数据总数上都明显增多(P<0.01),在生命体征数据曲线图和麻醉单整体质量评分上都明显增高(P<0.05).结论 电子麻醉记录较手工麻醉记录的书写效率和书写质量均显著提高.

    作者:代海滨;程慧娴;张利东;朱四海;周志强;李伟彦 刊期: 2012年第10期

  • 肾小细胞癌2例报道及文献复习

    肾小细胞癌(small cell carcinoma,SCC)极其罕见,对其临床病理特征及治疗尚认识不足.文中通过病例报道及文献复习,探讨SCC的临床病理特征及治疗方法.分析2例SCC患者的临床资料,结合文献复习进行回顾分析.患者均以腰部疼痛为主诉就诊,伴纳差、消瘦,出现肉眼血尿1例,局部淋巴结转移2例,肝转移1例,并发马蹄肾1例.镜下发现小细胞结构,免疫组化见神经内分泌标记阳性表达.2例患者均行肾切除术,病例1术后未行化疗,于术后5个月死于肿瘤全身多发转移.病例2术后化疗,于术后7个月死于肿瘤全身多发转移.SCC发病率极低,恶性程度极高,生长迅速并快速转移.确诊依赖病理检查,一些免疫表型有助于鉴别诊断.采用手术+化疗的综合治疗可缓解病情,但缓解期短,预后差.

    作者:位志峰;许松;徐晓峰;程文;周文泉;葛京平;张征宇;高建平 刊期: 2012年第10期

  • 膜联蛋白A1/A2膜聚集在肝源性肺血管重塑中的研究进展

    膜联蛋白A1/A2 (annexins A1/A2,ANNXⅠ / Ⅱ)的膜聚集调节多种细胞的蛋白运输、细胞增殖和迁移,并与多条信号通路相关联,可能是肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cells,PASMCs)表型转换分子机制的关键变化,在肝源性肺血管重塑中发挥关键性调节作用.

    作者:曾静;易斌;鲁开智 刊期: 2012年第10期

  • 掌指骨骨折3种不同治疗方法比较研究

    目的 掌指骨骨折是手外科常见创伤性疾病,掌指骨参与腕掌、掌指、指间关节的构成,治疗不当将严重影响患者的手的功能.文中探讨微型钢板、穿髓克氏针固定、牵引位石膏托3种不同治疗方法在掌指骨骨折治疗中的临床疗效.方法 选取掌指骨骨折患者60例共95个部位,分别平均进入微型钢板内固定、穿髓克氏针固定及牵引位石膏托3种不同治疗方法组,术后随访6~12个月,平均随访(8.1±1.5)个月,按照总主动屈曲度系统(total active flexion system,TAFS)评分评估3组临床疗效.结果微型钢板组内固定优良率为90.9%,穿髓克氏针内固定组优良率为71.4%,牵引位石膏保守治疗组优良率为55.6%,3组结果差异有显著统计学意义(P<0.05).骨折愈合时间微型钢板组较其他2组短,差异有统计学意义(P<0.05).切开复位感染率微型钢板内固定组为0.0%,穿髓克氏针组为15.4%(P<0.05).结论微型钢板内固定治疗掌指骨骨折在术后关节功能恢复、骨折愈合时间、术后感染预防方面都具有明显优势,是首选的治疗方法.

    作者:徐海栋;陈勇;陆萌;卢俊浩;赵建宁 刊期: 2012年第10期

  • 慢性血栓栓塞性肺动脉高压

    慢性血栓栓塞性肺动脉高压(chronic thromboembolic pulmonary hypertension,CTEPH)是导致严重肺动脉高压 (pulmonary artery hypertension,PAH)的主要原因之一.CTEPH在临床上并不少见,但由于认识不足,常延误诊断和治疗,致使患者死亡.CTEPH是由于肺动脉被未完全及机化的血栓阻塞,继而引起肺动脉阻力增加.该病发病率有逐年上升趋势.在无干预状态下,CTEPH无有效的内科治疗方法,肺动脉内膜剥脱术(pulmonary thromboendarterctomy,PTE)是较好的可选择的外科治疗手段.肺移植术仅是PTE不可行时的替代性治疗.

    作者:唐春香 刊期: 2012年第10期

  • 生酮饮食与核因子相关因子2在颅脑损伤后神经保护作用的相关性研究

    外伤性脑损伤常继发炎症、脑血肿、脑肿胀、脑水肿、颅内压升高等一系列病理生理学变化.脑葡萄糖代谢已被证实在颅脑损伤后会改变.在几种脑外伤模型中,生酮饮食(ketogenic diet,KD)已被证明对创伤性脑损伤具有神经保护作用,这种饮食方式改变对儿童及成人头部受伤后的治疗均有较大潜力.活化的核因子相关因子2(Nuclear factor-related factor 2,Nrf2)在脑外伤后的抗氧化保护神经作用也已在动物实验中得以证实.但KD对神经保护作用的机制及其与Nrf2的相关性均未明确,文中就KD与Nrf2的相关性进行综述.

    作者:钟务招 刊期: 2012年第10期

  • 他克莫司对清蛋白超载的大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响

    目的 蛋白尿不仅是难治性肾病重要的临床表现,其主要成分清蛋白是引起肾小管上皮细胞凋亡的重要原因.文中探讨他克莫司(tacrolimus,FK506)对去脂牛血清清蛋白(denatured bovine serum albumin,d-BSA)超载的大鼠肾小管上皮细胞(normal rat kidney cell line,NRK-52E)凋亡率的影响.方法将不同浓度FK506于不同时间作用于d-BSA超载的NRK-52E细胞,用流式细胞术检测NRK-52E细胞凋亡率的情况.结果①与对照组相比,终质量浓度为1mg/ml的d-BSA对NRK-52E细胞无明显促进凋亡作用,且与d-BSA孵育时间无明显关系(P>0.05);终质量浓度为5、10、20、50mg/ml d-BSA干预NRK-52E细胞24h可上调NRK-52E细胞的凋亡率,凋亡率随着d-BSA浓度的增加呈上升期趋势(P<0.05).②终质量浓度为0.1ng/ml的FK506预处理NRK-52E细胞4h后与不同浓度d-BSA共孵育引起的细胞凋亡率与对照组无异,且与共孵育时间无明显关系(P>0.05).终质量浓度为1、10、20ng/ml的FK506预处理4h后与20mg/ml d-BSA共孵育6h,具有降低细胞凋亡率的作用,并呈现与FK506浓度与孵育时间的依赖关系(P<0.01).结论 d-BSA超载NRK-52E细胞可以促进细胞凋亡;FK506具有抑制d-BSA促凋亡的作用.

    作者:李静;夏正坤;高远赋;樊忠民;刘梦原;高春林;何旭;史卓 刊期: 2012年第10期

  • 非典型甲亢危象合并低血糖及肌肉损伤1例

    甲亢危象是一种严重的、需要紧急处理的甲状腺毒症的恶化状况,如不及时治疗将危及生命[1].典型甲亢危象表现为高热、大汗、谵妄、恶心、呕吐等,常常伴随着糖耐量异常,但严重低血糖罕见[2].低血糖昏迷掩盖潜在的甲亢危象症状,致使临床诊断困难.本文报道1例甲亢危象患者急性发作时症状不典型,体温正常,血压正常,无恶心呕吐,合并低血糖和严重肌损伤.

    作者:张敏娟;叶小珍;王坚 刊期: 2012年第10期

  • 人β-防御素4基因在HEK293细胞中的转染表达

    目的 人β-防御素4(human β-defensin 4,HBD 4)对多种病原菌有杀伤作用.HBD4的自然表达水平极低,体外获得难度较大且价格昂贵.利用基因工程技术生产重组的HBD4成为研究的焦点.文中旨在构建HBD4真核表达载体,探讨真核细胞表达HBD4的可行性.方法用PCR法从已构建的重组克隆载体pMD18-T/HBD4中扩增出HBD4全长编码基因,克隆入真核表达载体pEGFP-N2,构建pEGFP-N2/HBD4重组真核表达载体;通过脂质体转染法将pEGFP-N2/HBD4导入HEK293细胞,采用RT-PCR、荧光显微镜、Western blot检测HBD4的mRNA和蛋白表达情况,并对表达的HBD4进行抗菌活性的初步研究.结果构建的重组真核表达载体pEGFP-N2/HBD4,经酶切鉴定、测序,证实插入的序列与Genebank中的HBD4基因序列完全相同.将pEGFP-N2/HBD4转染HEK293细胞,在转染细胞检测到HBD4mRNA表达.荧光显微镜下可在细胞膜及细胞质中观察到绿色荧光.Western blot分析显示:在pEGFP-N2/HBD4 转染的HEK293细胞及细胞培养液中检测到了HBD4蛋白的表达.Kirby-Bauer纸片扩散法证实表达的HBD4蛋白对铜绿假单胞菌具有较强的杀伤作用.结论成功构建了HBD4基因的真核表达载体,并在HEK293细胞中表达出具有抗菌活性的HBD4多肽.

    作者:曹玉红;成胜权;张光运;钱新宏;李如英;丁翠玲 刊期: 2012年第10期

  • 迷走神经与房室结双径路研究进展

    房室结折返性心动过速(atrioventricular nodal reentry tachycardia,AVNRT)是临床上常见的阵发性室上性心动过速的类型之一,其解剖基础为房室结双径路(dual atrioventricular nodal physiology,DAVNP).近年来研究发现DAVNP的慢径路区域分布有丰富的迷走神经,影响DAVNP的临床表现及电生理性质.深入了解迷走神经与DAVNP的关系对临床诊断和治疗具有重要的意义.

    作者:马晓华;徐海 刊期: 2012年第10期

  • 腹腔镜直肠癌根治术的解剖及操作要点分析

    目的 近年来,腹腔镜结直肠手术已广泛开展,文中探讨腹腔镜结直肠癌根治术的入路选择、镜下解剖及操作要点.方法回顾性分析68例腹腔镜直肠癌根治患者的临床资料及手术录像.结果 64例手术成功,4例中转开腹,64例平均手术时间165min,平均出血量120ml,平均住院11d.术后大出血1例,不全性肠梗阻1例,肠管损伤1例,无吻合口漏及切口感染,无围手术期死亡病例.结论腹腔镜直肠癌根治术效果较好;良好的暴露、恰当的入路、正确的层次和熟练的镜下操作是手术成功的关键.

    作者:孙建军;经巍;李新平;姬舒荣;葛步军;范跃祖;刘文方 刊期: 2012年第10期

  • 免疫吸附洗脱液细菌内毒素检查方法的研究

    目的 血液透析过程中如有热原存在,可直接对长期维持血液透析的患者造成一系列全身性组织器官并发症,影响患者生存质量.文中建立免疫吸附洗脱液细菌内毒素的检查方法.方法依据<中国药典>2010年版二部附录XI E细菌内毒素检查法中凝胶半定量试验方法对免疫吸附洗脱液进行干扰试验.结果用去热原的碳酸钠饱和溶液将免疫吸附洗脱液原液pH值调至6.5,可对其进行凝胶半定量试验.结论所建方法可用于免疫吸附洗脱液细菌内毒素的检查.

    作者:陆崟;汪玥;王银娟;王曙东 刊期: 2012年第10期

  • 持续气道正压通气治疗对并存睡眠呼吸暂停的子痫前期患者白细胞介素-18水平的影响及临床意义

    子痫前期(preeclampsia,PE)是妊娠期特有的疾病,是导致孕产妇和围生儿发病率和死亡率增高的主要原因,其发病机制仍未阐明.近年大量研究证实,阻塞性睡眠呼吸暂停(obstructive sleep apnea, OSA)是妊娠高血压和PE前期的独立危险因素[1],但其在PE中的作用机制尚不清楚.IL-18作为一种具有多向性效应的促炎性因子,能通过多种机制参与高血压致病.国内外学者大量研究显示PE与IL-18关系密切[2].因此,本研究拟观察OSA合并PE患者的血清IL-18水平,并通过治疗前后对比,研究血清IL-18在OSA相关PE发病中的作用.

    作者:李翀;王智刚;袁佩;冯春来;王艳丽;彭久君 刊期: 2012年第10期

  • 七年制医学生科研能力培养经验

    七年制医学研究生科研能力的培养一直是医学教育者所面对的一个问题.现代医学需要具有较高临床综合素质和科研能力的高级医学人才.为促进医疗事业发展,七年制医学研究生科研能力培养不可缺少.明确科研教育意义、充实专业知识、选择合适的课题等是科研能力培养的关键.

    作者:欧云生;杨洪宇;蒋电明;权正学;安洪 刊期: 2012年第10期

  • 夜戴型角膜塑形镜矫正及控制近视发展的临床分析

    目的 由于遗传和用眼习惯等因素影响,青少年近视眼患病率呈逐渐增长趋势.有研究表明,角膜塑形镜可有效降低近视屈光度,提高裸眼视力.文中评估佩戴夜戴型角膜塑形镜(orthokeratology)矫正及控制近视发展的临床效果.方法 观察8~14岁在佩戴角膜塑形镜随诊数据完整者35例(68眼),近视度-1.00~-5.55D,平均-(3.75±0.84)D,佩戴前与佩戴后6个月、1年、2年、3年进行裸眼视力、屈光度、角膜内皮细胞、眼轴的测定与比较,同时比较角膜厚度、角膜曲率以及裂隙灯下角结膜的改变,并与同时期佩戴框架眼镜的同年龄段患者每年的屈光度及眼轴变化进行比较.结果 3年期间近视度降低度平均为-2.65~-2.80D,角膜平均曲率半径增大0.21~0.30mm.与戴镜前比较,戴镜后6个月、1年、2年角膜内皮细胞变异度无统计学意义,P>0.05;自第3年起差异有统计学意义,P<0.05.戴镜后3年,眼轴长度较戴镜前差异有统计学意义,P<0.05.同时期同年龄段、屈光度无统计学差异的佩戴框架眼镜每年的眼轴增长明显大于角膜塑形术的眼轴增长.戴镜3年角膜厚度相对于戴镜前差异无统计学意义,P>0.05.随访期间无严重角结膜并发症.结论角膜塑形镜长期佩戴可有效提高裸眼视力,降低近视度,同时有效控制眼轴的增长,但长期佩戴对角膜内皮细胞形态有轻度影响.故须严密观察和随访,以维持其有效性和安全性.

    作者:兰文;陆燕;杨丽萍;姜涛;陈月芹;胡钦瑞;黄振平 刊期: 2012年第10期

  • 双源CT血管成像在烟雾病合并动脉瘤中的诊断价值初探

    目的 双源CT血管造影(dual-source computed tomography angiography,DSCTA)对颅内动脉瘤的诊断已得到了很好的应用,但目前DSCTA诊断烟雾病合并动脉瘤的报道并不多见,文中主要探讨DSCTA在烟雾病合并动脉瘤中的诊断价值.方法 32例同时经数字减影血管造影(digital subtraction angiography,DSA)及DSCTA检查诊断为烟雾病的患者纳入本研究,以DSA诊断为参照标准,评价DSCTA在烟雾病患者中检测动脉瘤的灵敏度、特异度、阳性预测值及阴性预测值.结果 32例患者DSCTA诊断13例患者合并有动脉瘤,2例多发,共15枚;DSA诊断12例患者合并动脉瘤,共13枚,动脉瘤多位于基底动脉环.以DSA诊断为参照标准,DSCTA诊断烟雾病合并动脉瘤的灵敏度、特异度、阳性预测值及阴性预测值以患者为单位分别为100%、95.0%、92.3%、100%,以动脉瘤枚数为单位分别为100%、90.5%、86.7%、100%.结论 DSCTA在诊断烟雾病合并动脉瘤当中具有较高的准确性,可作为一项筛选检查.

    作者:王茂雪;罗松;周长圣;赵艳娥;张龙江;卢光明 刊期: 2012年第10期

  • 钼靶及超声对不同病理分型乳腺黏液癌诊断的对照研究

    目的 关于乳腺黏液癌的钼靶及超声表现国内文献报道较少.文中探讨乳腺钼靶和超声检查在乳腺黏液癌诊断中的应用价值.方法回顾性分析14例乳腺黏液癌患者的临床特点及病理结果(9例单纯型、5例混合型),对术前行钼靶及超声检查进行对照分析.结果 14例患者中钼靶诊断乳腺黏液癌8例,准确率为57.1%(8/14);超声诊断4例,准确率为28.6%(4/14);钼靶联合超声诊断9例,准确率为64.3%(9/14).钼靶诊断单纯型乳腺黏液癌的准确率为55.6%(5/9),而超声诊断的准确率为22.2%(2/9);钼靶诊断混合型腋下淋巴结肿大的准确率为50%(1/2),超声则为100%(2/2).结论钼靶联合超声检查能提高诊断乳腺黏液癌准确率;钼靶比超声诊断具有优势,尤其对于单纯型乳腺黏液癌;而对于腋下淋巴结和致密型腺体,超声比钼靶诊断有优势.

    作者:郑金霞;顾芸;程晖;王洁;陆小燕 刊期: 2012年第10期

  • Eph受体在卵巢癌中的研究进展

    促红细胞生成素肝细胞(erythropoietin-producing hepatocellular,Eph)受体是酪氨酸受体家族中的一员,广泛表达于人类多种组织或细胞中,具有调节细胞生长、迁移及血管形成的潜在作用.近年来研究发现,EphA2、EphB2、EphB4在卵巢癌中呈现高表达,这种高表达与肿瘤的增殖、转移、血管形成和侵袭性相关,与患者预后负相关,有可能成为卵巢癌患者的预后指标或治疗靶点.

    作者:戴颖青;张秦 刊期: 2012年第10期

  • N-甲基-D-天冬氨酸受体及其亚型受体拮抗剂对抑郁大鼠的影响

    目的 离子型受体类药物能快速有效缓解抑郁症状,但其作用机制尚不明确.文中探讨N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)受体及其亚型受体拮抗剂对强迫游泳大鼠不动时间及海马脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)表达的影响.方法雄性Wistar大鼠40只,采用随机数字表法,分为4组,每组10只.药物干预前1d大鼠强迫游泳15min,药物干预当天,分别腹腔注射1ml容积等渗盐水(S组)、NVP-AAM077(NR2A受体拮抗剂)5mg/kg(NVP组)、氯胺酮(NMDA受体拮抗剂)10mg/kg(Ket组)、Ro25-6981(NR2B受体拮抗剂)10mg/kg(Ro组).30min后,记录强迫游泳大鼠不动时间,取大鼠海马组织检测BDNF.结果与S组相比,NVP组大鼠强迫游泳不动时间及海马BDNF的表达均无显著变化,而Ket组及Ro组大鼠强迫游泳时间均显著减少且海马BDNF的表达均显著增加(P<0.05).结论氯胺酮及Ro25-6981均具有抗抑郁作用,其作用机制可能与海马BDNF的上调有关.

    作者:胡益民;杨春;周志强;王娴;杨建军;徐建国 刊期: 2012年第10期

医学研究生学报杂志

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主管:南京军区联勤部卫生部

主办:南京军区南京总医院