肖荣冬；翁国星
目的 探讨在高脂内环境下聚乙醇酸(PGA)可降解血管外支架对自体移植静脉(VG)再狭窄的防治作用.方法 建立高脂血症(HLP)兔颈内静脉-颈动脉移植模型,实验组VG应用PGA外支架保护,而对照组VG无外支架保护;分别于术前和术后4、8、12、20周获取VG,比较两组VG的再狭窄率及其内皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白表达、一氧化氮(NO)生成量和组织形态变化的差异.结果 对照组有4支VG出现再狭窄,而实验组无再狭窄.术后实验组VG与对照组比较:eNOS蛋白表达、NO生成量显著升高(P＜0.05),脂质沉积明显减轻,内皮完整性较好,术后12、20周内、中膜增厚显著减轻(P＜0.05).结论 高脂内环境下PGA外支架可有效预防VG再狭窄,作用可持续至外支架降解后.其机制与外支架保护和改善内皮功能,抑制VG的非适应性重塑有关.
作者：褚红军；于伟勇；纪广玉；邹良建；徐志云；滕忠照 刊期： 2007年第02期
目的 研究一氧化氮(NO)减轻重症急性胰腺炎(SAP)肺损伤的机制.方法 采用逆行胰胆管牛磺胆酸钠注射制造SAP大鼠模型.动物分为假手术组、胰腺炎组、L-精氨酸(L-Arg)治疗组和氯喹(CQ)治疗组.硝酸还原酶法检测肺组织NO的浓度变化,实时定量PCR(RT-PCR)检测肺组织TLR(Toll-like receptor)2/4mRNA表达变化.结果 与假手术组比较,SAP大鼠肺组织NO浓度降低,肺损伤加重;肺组织TLR2/4 mRNA表达增高,肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达升高(P＜0.05).给予不同剂量L-Arg治疗后,肺组织NO浓度明显升高,肺损伤程度减轻;TLR2/4mRNA表达降低,肺组织TNF-α表达降低(P＜0.05).给予CQ抑制肺组织TLR2/4 mRNA表达后,肺组织内NO浓度升高,肺损伤减轻,TNF-α表达降低(P＜0.05).结论 NO可以明显抑制SAP肺组织TLR2/4 mRNA的表达,减少细胞因子的合成及释放,从而减轻肺组织损伤.
作者：王琳芳；张磊；金鑫；荣忠厚；吴河水；王春友 刊期： 2007年第02期
高复发转移发生率是影响肝癌预后的主要因素.Ras同源蛋白C(RhoC)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)被认为是与肿瘤转移有关的两个重要分子[1,2].我们利用免疫组织化学的方法研究RhoC与ICAM-1在HCC组织中的表达与临床病理特征方面的差异,分析在HCC中的相关程度和意义.
作者：李秀金；唐南洪；王晓茜；杨焕星；陈燕凌 刊期： 2007年第02期
目的 探讨不同的样品制备方法对多发性大动脉炎患者血浆蛋白质组的双向凝胶电泳图谱的影响,为鉴定差异表达蛋白提供优化条件.方法 采用加入SDS加热法和离心超滤方法制备方法对血浆进行处理,和未经任何处理直接上样,以90μg等上样量进行电泳,电泳方法和常规的100μg银染和1000μg考马斯亮蓝染色方法的双向凝胶电泳的图谱的图像、蛋白点数等进行对比.结果 SDS加热法和离心超滤能明显改善图谱中白蛋白高丰度蛋白周围的显示.SDS加热法和离心超滤法90μg银染显示的蛋白点数分别为892.17±162.99,869.50±95.62,695.67±84.11.结论 对于多发性大动脉炎血浆采用SDS加热和离心超滤进行血浆样品制备,能明显改善血浆双向凝胶电泳图谱,以90 μg血浆上样量的银染方法较为合适.
作者：罗小云；吴庆华 刊期： 2007年第02期
目的 探讨二尖瓣关闭不全模型动物中心肌间质病变对心功能的影响及转化生长因子(TGF)-β的调节作用.方法 建立二尖瓣关闭不全动物模型并长期饲养,在不同时间点宰杀切取心肌标本,用苏木素-伊红(HE)、Masson染色检测心肌组织病理变化,用免疫组织化学及原位杂交检测Ⅰ,Ⅲ型胶原、TGF-β1蛋白及mRNA表达量.结果 实验犬在术后3个月间质胶原呈减少趋势,可减少正常量的5%(4.96±0.69)与(3.68±0.67),5个月后开始上调(4.98±0.64),7个月后则有明显升高(6.57±1.37),可超过正常量20%,实验组早期TGF-β1表达较正常表达减弱(5.2±1.3)A/μm2,病变后期则明显上调(24.1±6.3)A/μm2,其表达强度与心功能呈反比(r=0.9834,P＜0.01).结论 二尖瓣关闭不全心肌组织中间质纤维化明显增生,TGF-β1促进间质胶原增生,且心肌间质病变是影响心功能的主要因素.
作者：张近宝；王一苇；刘维永；任崇雷 刊期： 2007年第02期
目的 构建靶向过氧化物酶体增殖活化受体-γ(PPAR-γ)基因的siRNA载体.方法 根据siRNA设计原则,在PPAR-γ mRNA(AF013266)序列中设计2个特异性靶序列(677-695和497-515);体外合成对应发卡样DNA片段,退火后加A处理,先将其克隆入T载体,再亚克隆人siRNA载体pRNAT-U6.2,对插入序列进行DNA序列分析.结果 发卡样siRNA单链DNA寡核苷酸,退火后,电泳可见明亮靶条带;T7/SP6作为引物进行PCR扩增,筛选得到阳性克隆pGEM-T-SPPAR-γ1和pGEM-T-SPPAR-γ2.PCR扩增鉴定得到阳性亚克隆pRNAT-U6.2-SPPAR-γ1和pRNAT-U6.2-SPPAR-γ2,测序证实插入序列与设计完全一致.结论 成功构建2个PPAR-γ基因靶向性siRNA载体pRNAT-U6.2-SPPAR-γ;为PPAR-γ基因沉默的研究提供实验工具.
作者：吴学建；李月白；赵国强；王义生 刊期： 2007年第02期
目的 观察单纯疱疹病毒-胸苷激酶/胞嘧啶脱氨酶融合自杀基因(HSV-TK/CD)对裸鼠骨肉瘤生长的影响.方法 人骨肉瘤细胞系MG-63细胞于裸鼠成瘤后将其分为6组:(1)PBS对照组;(2)重组腺病毒(adenovirus,Ad)-Lac-Z/GCV+5-FC组;(3)Ad-TK/GCV组;(4)Ad-CD/5-FC组;(5)Ad-TK/GCV+Ad-CD/5-FC组;(6)Ad-TK-CD/GCV+5-FC组.各组经治疗后观察肿瘤的生长状况及组织病理学改变.结果 (2)组与(1)组比较,肿瘤体积与肿瘤坏死程度差异无统计学意义(P＞0.05);与(1)、(2)组比较,(3)～(6)组肿瘤的生长均受到明显抑制(P＜0.05),且(5)、(6)组与(3)、(4)比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 融合自杀基因HSV-TK/CD对裸鼠骨肉瘤生长有明显的抑制作用.
作者：李伟；董泗芹；马春燕 刊期： 2007年第02期
目的 观测小腿皮神经营养血管链与周围肌肉内血管的吻合情况,为设计远端蒂小腿皮神经营养血管肌皮复合组织瓣转位术提供解剖学资料.方法 对30侧红色乳胶灌注的成人下肢标本进行解剖,系统观测小腿皮神经营养血管链与周围肌肉内血管的吻合情况.结果 腓肠神经营养血管为主的浅筋膜血管网与腓肠肌内、外侧头的肌皮穿支吻合,吻合支均为2～3支,内侧头的肌皮穿支较外侧粗大,位置恒定;隐神经营养血管主要通过胫后动脉肌间隙支的肌皮支与比目鱼肌肌支吻合,肌支2～3个,管径(0.5±0.2)mm,均有1～2支静脉伴行;腓浅神经营养血管分别向内、外侧发出2～3支肌支营养趾长伸肌和腓骨长肌,肌支外径(0.4±0.2)mm,皆有一支静脉伴行,另1～2支筋膜皮支浅出营养皮肤.结论 远端蒂小腿皮神经营养血管肌皮复合组织瓣血供可靠,可以为修复特殊类型踝足部软组织缺损提供良好的供区.
作者：陶圣祥；喻爱喜；郑晓晖；邓凯；张奕；张建华 刊期： 2007年第02期
目的 探讨偶联血管内皮生长因子受体(VEGFR)2单克隆抗体的尿素免疫脂质体对血管瘤血管内皮细胞(HVEC)的增殖影响,对血管瘤是否有更好的靶向治疗作用.方法 通过细胞毒性实验的多种方法,观察尿素免疫脂质体作用后HVEC的形态和生长曲线变化,检测HVEC细胞存活率、细胞杀伤率及细胞群体倍增时间.结果 HVEC细胞存活率与尿素免疫脂质体终质量浓度呈显著负相关.尿素免疫脂质体对HVEC的半效应量(ID50)约26 mg.2.6%尿素免疫脂质体的细胞杀伤率为99.91%.2.6%尿素免疫脂质体作用HYEC后,HVEC的细胞增殖一直处于抑制状态,细胞群体倍增时间无法算出,生长曲线一直呈下降趋势,尿素免疫脂质体对HVEC的增殖抑制作用具有明显的持续效应,尿素免疫脂质体从接种药物开始就对HVEC的增值进行了抑制.结论 尿素免疫脂质体对HVEC呈时间依赖性和剂量依赖性生长抑制作用,尿素免疫脂质体具有靶向治疗血管瘤的作用.
作者：段降龙；李国威 刊期： 2007年第02期
目的 构建短发夹RNA(shRNA)/mdr1的质粒表达载体并验证其体外表达效率.方法 按照pSUPER的设计要求合成mdr1基因RNAi靶序列的64 bp寡核苷酸序列,退火后双酶切法(Bgl Ⅱ和Hind Ⅲ)克隆,得到质粒pSUPER-shRNA/mdr1,转染感受态大肠杆菌,筛选阳性克隆,测序证实后扩增培养并提取,然后转染融合达90%以上的HepG2/mdr1细胞,阴性载体为对照组,实时聚合酶链反应(Real-time PCR)、流式细胞术检测mdr1基因mRNA、P-gp表达、细胞耐药性等功能变化.结果 成功构建质粒载体pSUPER-shRNA/mdr1,基因测序证实靶序列插入正确;HepG2/mdr1-si组mdr1基因的mRNA表达水平是耐药株HepG2/mdr1组的56分之一;HepG2/mdr1-si组细胞和阴性对照组HepG2/mdr1细胞的P-gp表达率分别为11.0%和98.6%,P＜0.05;HepG2/mdr1组细胞耐药倍数从62.5下降到1.4,相对逆转效率99.34%;细胞内DNR累积量也明显增加,与对照组比较(79.32%比37.96%),P＜0.05.结论 多药耐药基因mdr1质粒表达载体pSU-PER-shRNA/mdr1能在HepG2/mdr1内稳定表达,并逆转其耐药性.
作者：潘光栋；严律南；夏冬；杨家印；夏庆杰；闫乃红；陈清英 刊期： 2007年第02期
目的 探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对巨噬细胞免疫功能影响的可能受体机制.方法 分离培养小鼠腹腔巨噬细胞,HMGB1刺激后,采用激光扫描共聚焦显微镜和流式细胞术检测细胞表面晚期糖基化终末产物受体(RAGE)的表达.实验分为正常对照组、HMGB1组、HMGB1+抗RAGE抗体组、HMGB1+rmRAGE/Fc组,分别观察巨噬细胞摄取中性红能力、对L1210细胞的杀伤作用(MTT法)、趋化活性(采用Transwell小室趋化装置)、细胞表面I-Ak抗原表达(流式细胞术)的变化.结果 100 μg/L的HMGB1作用于巨噬细胞48 h后,巨噬细胞表面受体RAGE表达明显上调(P＜0.01);HMGB1组巨噬细胞吞噬功能、杀伤活性、趋化活性及I-Ak抗原表达均显著高于对照组、HMGB1+抗RAGE组与HMGB1+rmRAGE/Fc组(P＜0.01).结论 HMGB1可诱导RAGE表达增强,RAGE是HMGB1作用于巨噬细胞免疫功能的主要受体之一.
作者：刘峰；姚咏明；徐珊；董宁；盛志勇 刊期： 2007年第02期
目的 探讨熊果酸纳米脂质体微粒(UA-PL-NP)对体外培养的黑色素瘤细胞生长的抑制作用及其机制.方法 体外培养小鼠黑色素瘤细胞(B16),采用噻唑蓝(MTT)比色法观察熊果酸纳米脂质体微粒对其增殖活性的影响,Western blot法观察其对基质金属蛋白酶(MMP)-9表达的影响,同时采用流式细胞术检测细胞凋亡情况.实验中采用顺铂作为阳性对照.结果 MTT检测熊果酸纳米脂质体微粒对B16细胞增殖有明显抑制作用,并呈浓度和时间依赖性,UA-PL-NP作用24hIC50值为7.68 mg/L,顺铂作用24 h IC50值为9.33 mg/L;流式检测UA-PL-NP浓度为7.68mg/L,作用24 h后B16鼠黑色素瘤细胞的凋亡率为(53.20±7.13)%;浓度9.33 mg/L顺铂作用24h的凋亡率为(36.10±5.85)%;阴性对照组24 h凋亡率为(7.87±2.31)%;Westerm blot检测对照组MMP-9蛋白含量是UA-PL-NP组3.106倍,是顺铂组的2.022倍;顺铂组MMP-9蛋白含量是UAPL-NP组的1.537倍.结论 熊果酸纳米脂质体微粒能促进瘤细胞的凋亡从而抑制B16鼠黑色素瘤细胞的增殖,并降低MMP-9蛋白的表达,具有抑制肿瘤侵袭和转移的作用.
作者：孙旭芳；姚乃成；易以木；白祥军 刊期： 2007年第02期
目的 探讨局部微环境低糖与肝细胞癌多药耐药性(MDR)产生的关系及影响机制.方法 低糖培养HepG2细胞,应用流式细胞术Annexin V/PI法检测低糖培养的细胞在化疗药物5-氟脲嘧啶(5-Fu)作用后的凋亡情况,分别应用荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术和Western blot技术检测低糖培养后HepG2细胞内多药耐药相关基因mdr1、MRP1、LRP的mRNA和蛋白水平的表达.结果 在低糖环境下生长时间越长的HepG2细胞对5-Fu的抵抗越强,而且随着低糖培养时间的增加,5-Fu诱导的HepG2细胞的凋亡高峰延迟.低糖培养的HepG2细胞内多药耐药相关基因mdr1、MRP1、LRP在mRNA和蛋白水平的表达随低糖培养时间的延长而升高,以LRP的改变为显著.结论 肝癌生长微环境葡萄糖耐量不足也是肝癌产生MDR的原因之一.低糖可通过上调一组多药耐药相关基因的表达而诱导肝癌的多药耐药性.
作者：罗顺峰；陈孝平；朱虹；关剑；张必翔 刊期： 2007年第02期
目的 观察大鼠同种异体心脏移植后心肌细胞凋亡的情况.方法 SD大鼠80只,建立同种腹腔异位心脏移植模型,术后1、3、7、10 d取移植心脏组织,进行苏木素-伊红(HE)染色,光镜下进行Stanford病例诊断分级,原位末端标记(TUNEL)技术检测凋亡细胞,免疫组织化学测定心肌bcl-2、bax蛋白的表达,观察移植后不同时期心肌细胞病理变化与细胞凋亡情况.结果 移植后各期均出现心肌细胞凋亡现象,术后7 d达到高峰,凋亡指数随病变程度的严重而升高,同时bax蛋白表达上调,而bcl-2蛋白表达上调时,凋亡指数较低.结论 心脏移植后心肌细胞凋亡是心肌损伤的主要机制之一,凋亡指数可作为判断移植后损伤程度的指标.
作者：袁彪；赵忠；赵胜；张杨杨 刊期： 2007年第02期
目的 探讨人瘢痕成纤维细胞在体外持续培养时,其胶原合成能力的变化.方法 体外持续培养人瘢痕成纤维细胞,检测不同代次细胞的大体形态、羟脯氨酸含量及超微结构的变化,并对比分析.结果 第1、6、12、18代瘢痕成纤维细胞的羟脯氨酸(HPr)含量分别为(0.1460±0.0066)、(0.1020±0.0095)、(0.0700±0.0061)、(0.0540±0.0035)mg/L.随着体外培养细胞代次的增多,HPr呈下降趋势,并有相应的超微结构的变化.结论 人瘢痕成纤维细胞在体外持续培养时,胶原合成能力逐渐下降,可能与其局部微环境的刺激因子有直接关系.第1～6代为适实验细胞.
作者：卞徽宁；陈华德；郑少逸；赖文；高辉；熊兵 刊期： 2007年第02期
目的 检测和分析Pokemon在肝细胞癌及癌旁组织、癌以远组织、肝硬化组织及正常肝组织中的表达.方法 40例肝癌组织、距癌组织1 cm以上的癌旁组织、距癌组织5 cm以上癌以远组织取自肝细胞癌合并乙型肝炎后肝硬化行肝移植患者切除病肝.20例肝硬化组织取自肝硬化行断流手术患者.20例正常肝组织取自健康供体标本.用real-time PCR(实时定量PCR,RTPCR)法检测Pokemon蛋白mRNA在这些组织中的表达.结果 肝癌组织、癌旁组织的Pokemon蛋白mRNA的表达水平显著高于癌以远组织、肝硬化组织、正常肝组织(P＜0.05).肝癌组织与癌旁组织则差异无统计学意义(P＞0.05).癌以远组织、肝硬化组织及正常肝组织之间差异也无统计学意义(P＞0.05).结论 Pokemon在肝细胞癌中存在异常高表达.癌旁组织可能存在着亦有Pokemon蛋白mRNA高表达的的癌前病变.癌以远组织、肝硬化组织Pokemon蛋白mRNA表达水平与正常肝组织差异无统计学意义.
作者：计勇；何晓顺；马毅；朱晓峰；张韧；欧志英 刊期： 2007年第02期
目的 观察肝部分切除术(PH)后肝再生过程中肝细胞一过性脂肪聚积相关性基因的表达谱.方法 小鼠随机分为70%PH组(按术后时间分为0～72 h时相小组,每小组5只)和假手术组(分组同前).不同时相点获取的肝组织分别实施油红O染色的肝细胞脂聚积分析和RNA制备.用cDNA微阵列法筛查并用实时RT-PCR确认PH组和假手术组各时相点(0～24 h)生脂基因的诱导表达情况.结果 与假手术组和手术组0 h等时相点比较,PH后的12 h和24 h时相点的油红O染色明显增强.经cDNA微阵列筛查并经实时RT-PCR独立确认的、仅在PH后6 h和或12 h时相点诱导表达的生脂基因有:Adipsin、AP2、S3-12和FSP27.结论 术后肝再生过程中,肝细胞在聚积大量脂肪之前启动了一个与脂肪聚积相关的生脂基因表达程序.
作者：廖允军；王成友；夏荣；David Rudnick 刊期： 2007年第02期
目的 实现应用原子力显微镜(AFM)技术对人膀胱癌细胞株T24活细胞的成像,在原子级或纳米级水平上观测T24活细胞的超微结构.方法 在生理条件下,使用AFM直接观测培养中的人膀胱癌T24细胞,对其超微结构动态成像.结果 获得T24活细胞原子级或纳米级分辨率下的实时扫描图像,细胞胞膜和细胞骨架成像清晰.结论 AFM技术可以用于对膀胱癌T24活细胞超微结构的成像研究,所获得的图像可反映其在生活状态下的动态变化.
作者：陈斌；杨景国；高力鸣；孟繁林；韩立；王秀芬 刊期： 2007年第02期
过氧化物酶体增生物激活受体(PPAR)属于核激素受体超家族,目前已鉴别出PPARa、PPARb(又称为PPARδ)和PPARg 3种亚型.本研究旨在观察人胶质瘤细胞系U251在缺氧状态下细胞间黏附分子(ICAM-1)、血管细胞黏附分子(VCAM-1)和E-选择蛋白(E-selectin)表达的变化及PPAR-γ天然激动剂15-脱氧前列腺素J2(15d-PGJ2)、合成激动剂曲格列酮(troglitazone)对其表达的影响.
作者：王鹏；高松源；李文良 刊期： 2007年第02期
目的 通过检测抑癌基因肺癌肿瘤抑制物1(TSLC1)在肝癌组织中的表达来探讨TSLC1与肝癌发生和进展的关系.方法 共取40例新鲜肝癌标本,所有标本均含有肝癌组织及癌旁组织,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测TSLC1的表达情况,对肝癌患者进行临床病理学分期,检测肝癌患者HBV感染情况及血清中AFP水平.结果 40例标本的癌旁组织中TSLC1的表达率为75%,癌组织中TSLC1的表达率为30%,TSLC1基因表达缺失率与肝癌的临床分期、HBV感染及血清中AFP水平呈正相关,与肿瘤直径无关.结论 TSLC1的失表达可能在肝癌发生中发挥作用,TSLC1的失表达还可能与肝癌的恶性进展有关.
作者：张水军；李文涛；周闯；赵龙拴；范正军 刊期： 2007年第02期
中华实验外科杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中华医学会
