张瑞萍；云琳；陆斌；彭玲；周倩；王浩；郭亚军
目的探讨反义生存素(Survivin)脂质体复合物对脑胶质瘤细胞增殖和凋亡效应的影响及机制,为脑胶质瘤Survivin基因靶向治疗提供理论依据.方法用脂质体介导Survivin反义寡核苷酸转染脑胶质瘤细胞系U251细胞;Western印迹试验检测Survivin表达水平变化;噻唑蓝(MTT)法测量细胞生长情况;流式细胞仪检测细胞凋亡率及线粒体膜电位变化;电镜倒置显微镜观察细胞形态学变化;应用激光共聚焦显微镜免疫荧光分析法评价脂质体反义复合物对Survivin蛋白的影响.结果反义Survivin脂质体复合物能有效下调Survivin表达水平,肿瘤细胞凋亡率随转染时间延长而逐渐递增,并出现凋亡形态学变化.免疫荧光分析中标记有绿色荧光染色的Survivin蛋白分子在未转染的细胞浆中清晰可见,并呈斑点状分布;而在转染细胞中几乎没有发现.结论靶向抑制Survivin基因在脑胶质瘤未来治疗中有良好的应用前景.
作者：王诚；鲍圣德；刘胜；陈谦学；吴涛；齐辉 刊期： 2006年第05期
目的以人神经胶质瘤细胞系U251为实验对象,研究中华眼镜蛇毒C组分诱导细胞凋亡的的机制.方法将中华眼镜蛇毒C组分分为1.5mg/L(A组),3.0mg/L(B组),4.5mg/L(C组),15.0mg/L(D组)和30.0mg/L(E组)5个浓度组,以顺铂(DDP)40.0mg/L为阳性对照组,另设一阴性对照组,采用DNA凝胶电泳检测法,观察FC诱导细胞凋亡的情况;采用免疫组织化学法(SP)和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检查bcl-2/bax基因的表达.结果中华眼镜蛇毒C组分对U251细胞具有诱导凋亡的作用,FC诱导U251细胞凋亡率与药物浓度密切相关(P＜0.01),使用FC前后,bcl-2/bax表达无显著变化.结论FC有诱导U251细胞凋亡的作用,但其诱导凋亡不依赖于bcl-2/bax基因的改变.
作者：伍健明；李维平；丁建军；梁世杰；高永中；陈盛强 刊期： 2006年第05期
目的探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对膀胱癌细胞的抑制作用.方法构建TRAIL融合增强绿色荧光蛋白(EGFP)真核表达载体,脂质体法转染膀胱癌细胞株EJ细胞,荧光显微镜下计算转染率.分别采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot检测TRAIL的表达.采用流式细胞仪检测细胞凋亡,噻唑蓝(M订)法、细胞倍增时间和集落形成率观察TRAIL的抑制作用.结果48 h观察重组载体转染率为38.4%,空载体转染率为35.3%(P＞0.05),RT-PCR和Western blot证实转染后EJ细胞中TRAIL的表达明显增加;凋亡率明显高于转染空白载体和未转染组(P＜0.01);EJ细胞增殖受到明显抑制(P＜0.01).结论TRAIL具有诱导膀胱癌细胞凋亡、抑制增殖的作用,有望成为治疗膀胱癌的新方法.
作者：田俊强；王志平；付生军；卢建中；马宝良；史庭凯 刊期： 2006年第05期
目的探讨新型生物降解材料输尿管支架己内酯丙交酯乙交酯三元共聚物(PCLGA20:60:20)的生物相容性.方法通过肌肉埋植实验,初步评价材料生物相容性;通过PCLGA支架输尿管植入实验,观察支架管在输尿管局部组织相容性情况.结果测试材料肌肉埋植引发的局部组织反应为非细菌性炎症反应,材料周围纤维包裹层厚度小于30μm;输尿管植入实验中,PCLGA支架在12周内完全降解,输尿管腔内无材料碎片残留,支架植入术后的输尿管炎症反应随材料降解而逐渐消退.结论PCLGA材料具有良好的生物相容性,是加工生物降解输尿管支架的理想材料.
作者：侯宇川；王春喜；陈学思；张宝刚 刊期： 2006年第05期
目的探讨含胞嘧啶脱氨酶(CD)/5-氟胞嘧啶(5-Fc)单纯疱疹病毒1型胸腺嘧啶激酶基因融合自杀基因(CD/TK)的重组腺病毒治疗肝癌的疗效.方法重组腺病毒Ad.CD/TK感染人肝癌细胞Bel7402,用噻唑蓝(MTT)方法观察不同浓度5-Fc和无环鸟苷(GCV)对其杀伤效应;建立Bel7402裸鼠皮下移植瘤模型,瘤内注射Ad.CD/TK,腹腔注射GCV(50 mg/kg体重)和/或5-Fc(500mg/kg体重)10 d,观察肿瘤生长抑制效应.结果在对感染Ad.CD/TK的Bel7402细胞的体外杀伤实验中,GCV的IC50为(12.1±2.3)μmol/L,5-Fc的IC50为(223±15)μmol/L,并且两者有协同效应.在Bel7402裸鼠移植瘤模型中,联合Ad.CD/TK和GCV、5-Fc能够显著抑制肿瘤的生长.结论腺病毒为载体的双自杀基因转染和前药的应用对人肝癌细胞的体内、体外治疗疗效明显.
作者：马毅；陈祖兵；华赟鹏 刊期： 2006年第05期
目的了解钙敏感受体(CaSR)基因单核苷酸多态性与特发性高钙尿(IH)症的关系,探讨特发性高钙尿发病的分子机制.方法提取76例湖北地区汉族特发性高钙尿患者及126例健康对照者外周血标本中基因组DNA,应用聚合酶链反应(PCR)结合DNA测序方法检测并分析了CaSR基因的第7外显子3个簇集的多态性位点单核苷酸多态性分布.结果特发性高钙尿病例和对照组CaSR基因的第7外显子第986、990多态性位点等位基因频率分布均符合Hardy-Weinberg定律,其基因型分布频率在特发性高钙尿患者和正常对照者中差异无统计学意义(P＞0.05),第1011位未见有多态改变.但特发性高钙尿组组内CaSR 990位GG纯合子和RG杂合子个体的24 h尿钙排泄量较RR纯合子明显增高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论CaSR基因不是特发性高钙尿的易感主基因,但第7外显子990位A/G单核苷酸多态性能影响尿钙排泄,可能是特发性高钙尿中调节钙排泄的遗传成分之一.
作者：杨奕；王少刚；叶章群；杨为民 刊期： 2006年第05期
目的本研究拟观察辛伐他汀对蛛网膜下腔出血后迟发性脑血管痉挛的影响,并探讨其机制.方法随机将新西兰白兔36只均分为假手术组、自发性蛛网膜下腔出血(SAH)组和SAH+辛伐他汀组(n=12).假注血组动物行枕大池假穿刺假注血,其他2组受试动物行枕大池穿刺2次注血的方法,制作迟发性脑血管痉挛模型.于0～6 d,经口给予SAH+辛伐他汀组家兔辛伐他汀5 mg/kg体重,其他动物给予等量的淀粉.所有受试动物在第1次穿刺后的第7天被处死,比较不同组间基底动脉内径、内径与血管壁厚度之比(D/T)的变化;并应用免疫组织化学、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法对家兔基底动脉的肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β和IL-6表达进行评价.结果与SAH组比较,SAH+辛伐他汀组动物血管痉挛明显缓解(P＜0.05)、其血管壁促炎细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6表达显著减少(P＜0.05).结论经口给予一定量的辛伐他汀(5 mg/kg体重)能明显缓解蛛网膜下腔出血后迟发性脑血管痉挛,其作用机制可能与辛伐他汀的抗炎作用有关.
作者：张更申；林成；孙国柱；田剑光；张庆俊 刊期： 2006年第05期
目的探讨卡铂碳包铁纳米笼壳聚糖微球(C-Fe@CN-CN)对人肝癌细胞株HepG2增殖和细胞周期的影响.方法应用反相微乳法制备C-Fe@CN-CN,采用噻唑蓝(MTT)法检测不同药物浓度(20、40、80、160 mg/L)的C-Fe@CN-CN对HepG2细胞作用24、48、72 h的生长抑制效应;流式细胞仪分析药物浓度为8、16 mg/L,作用48 h时细胞周期的改变.结果C-Fe@CN-CN对人肝癌细胞增殖有明显抑制作用,并呈剂量和时间依赖性.随剂量增加,24 h抑制率由18.8%增至53.2%,随时间延长,抑制率由53.2%增至98.7%.微球作用24h时抑制效应低于原药,作用48 h和72 h时抑制效应等同于原药.C-Fe@CN-CN或原药作用48 h后,肝癌细胞周期阻滞于S期(47.2%),随药物浓度增加,S期阻滞(59.3%)更加明显.空白微球对肝癌细胞增殖和细胞周期分布无影响.结论C-Fe@CN-CN在体外能有效地抑制肝癌细胞增殖,机制与原药相同,均为诱导S期阻滞.
作者：鲍世韵；李富荣；郭跃华；桂玲；周汉新 刊期： 2006年第05期
学科的发展与进步,依赖于不断的科学研究.近20余年来,受益于改革开放政策和国民经济的快速发展,学术交流日益频繁,新观念、新设备、新技术不断引进,极大地推动了学科的发展.从外科角度,由于影像学(CT、MR等)、内镜等技术提高了外科疾病的术前诊断正确率.麻醉设备的更新及各种手术器械(腔镜、超声刀等)的添置,又使手术过程更为安全和快捷.设备先进的ICU内执行了各种监测和治疗任务,使高龄、危重患者的救治成功率大为提高.这方面的事例不胜枚举,大家的感受是很深的.但应该清醒的认识到,上述技术的发展大部分是建筑在欧美国家的研究成果之上.我国具原创性的研究成果仅局限在少数领域,例如大面积烧伤的救治、肝癌的外科治疗,以及手外科等方面,而在其他大多数领域则显得很少.尽管目前国内外科类科技期刊数量和论文产出量均有大幅度增加,但论文的质量还有待提高.其中至少存在两个问题,一是真正针对临床具体问题的研究比较少,二是由于方法学的问题,不少研究资料缺乏科学性,研究结果的可信度不高.为提高我国外科的学术水平,我们应该用更多的精力,提高临床科研工作的水平.
作者：吴肇汉 刊期： 2006年第05期
目的探讨小鼠肝内、肾包膜下等不同部位胰岛移植物生存时间及免疫学功能的差异.方法采用滤网法分离纯化胰岛,供体胰岛植入受体肝内及肾包膜下.用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定INF-γ的含量.3H-胸腺嘧啶脱氧核苷(3H-TdR)掺入法测定单向混合淋巴细胞反应.结果肾包膜下移植组胰岛生存时间(12.18±1.25)d明显长于肝内移植组[(7.09±0.70)d,P＜0.01].单项混合淋巴细胞反应显示,肝内移植组淋巴细胞较肾包膜下移植组增殖明显(P＜0.01).上清液测IFN-γ含量,肝内移植组明显升高,差别有统计学意义(P＜0.05).结论不同移植部位,胰岛的生存时间及免疫功能差异存在统计学意义,肾包膜下是胰岛移植的理想部位.
作者：郝振华；张群华；石伟；孙兵 刊期： 2006年第05期
目的探讨肠道屏障功能损害时应用重组人生长激素(rhGH)对肠道免疫屏障中肠黏膜及固有层内T淋巴细胞亚群和浆细胞凋亡的影响.方法将60只Wistar大鼠雌雄各半随机分为实验组和对照组,按实验天数又各分为3组,每组10只,以肠缺血再灌注模型造成肠道屏障功能损害的病理现象,实验组给予rhGH每日(1.33 U/kg体重),采用免疫组织化学双染法观察回肠末端黏膜固有层内CD8+、CD4+、CD3+T淋巴细胞数及IgA浆细胞的凋亡数量变化.结果(1)对照组CD3+T淋巴细胞及IgA浆细胞的凋亡数量第6天明显高于第2、4天,差异有统计学意义(P＜0.01).(2)实验组CD8+、CD4+T淋巴细胞的凋亡数量第6天明显低于第4天,差异有统计学意义(P＜0.01).(3)实验组与对照组相比第2、4、6天IgA浆细胞的凋亡数量均明显减少,差异有统计学意义(P＜0.01).实验组与对照组相比大鼠第2天CD8+、CD4+、CD3+T淋巴细胞的凋亡数量均减少,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论肠道屏障功能损害时应用重组人生长激素能够减少肠道免疫细胞的凋亡数量,对IgA浆细胞作用明显,可能的作用时间在第6天.
作者：孙少川；郑春宁；刘国勤；谭伟；姜永胜 刊期： 2006年第05期
三氧化二砷(Ad2O3)是中国传统中药砒霜的主要有效成分,为一种有毒物质.中国古代曾用此来治疗牛皮癣、梅毒、风湿病及一些恶性肿瘤,但由于其毒性较大限制了它的广泛应用.然而,在20世纪70年代,我国学者将As2O3用于白血病的治疗[1,2],并取得了令人瞩目的成就,开创了恶性肿瘤治疗的新纪元.近年来,肿瘤学者将其用于实体肿瘤化学治疗的实验研究,相继在肝癌、胃癌等腹腔实体肿瘤中取得的较大的研究进展[3,4].但目前国内外学者关于As2O3对乳腺癌的作用研究还处于初始阶段,有关报道尚少.现将其对乳腺癌作用的研究进展作一综述.
作者：曲志博；陈炜；郭化鑫；刘连新 刊期： 2006年第05期
目的探讨海绵体肌电图诊断脊髓性勃起功能障碍的价值.方法将24只成年雄性SD大鼠(300～400 g)分成:对照组、T9和L6损伤组(每组8只).损伤脊髓1周后,用肌电图仪采集注射阿朴吗啡前后阴茎肌电数据,采集频率20～3000 Hz、扫描速度5 ms/d、灵敏度10μV/d.用t检验方法分析统计数据.结果对照组使用阿朴吗啡10 min均方根振幅为(5.60±0.89)μV,大于T9损伤组(3.60±1.14)μV(P＜0.05);使用阿朴吗啡前、使用后5 min和10 min高/低功率比均为0.05±0.03,小于L6损伤组0.13±0.04、0.15±0.07、0.13±0.07(P＜0.05).T9损伤组使用阿朴吗啡后5 min和10 min平均频率分别为(122.40±47.99)、(151.80±76.42)Hz,较L6损伤组(278.83±118.66)、(265.00±81.35)Hz低(P＜0.05).结论海绵体肌电图对脊髓性勃起功能障碍有诊断价值.
作者：马绣林；胡礼泉；周春华；何世铭；汪燕；罗仪 刊期： 2006年第05期
目的测定端粒酶在胃癌患者的肿瘤组织、外周血中的活性,以探讨端粒酶活性的表达及其在临床应用上的意义.方法应用TRAP-PCR-ELISA方法检测36例胃癌患者的癌组织及其相应癌旁组织、正常组织、外周血单核细胞中端粒酶活性以及20例正常对照者外周血单核细胞端粒酶的活性.结果癌组织、癌旁组织、正常组织中端粒酶阳性率分别为80.6%(29/36)、16.7%(6/36)和5.6%(2/36).6例胃癌患者外周血有18例测到端粒酶阳性,阳性率为50%,正常人外周血未测到端粒酶阳性.癌组织与癌旁组织及正常组织之间、胃癌患者外周血与与正常人外周血之间的端粒酶阳性率差异有统计学意义(P＜0.01).端粒酶活性与患者的性别、年龄、肿瘤大小、浸润深度、分化程度、淋巴转移和TNM分期等临床病理参数差异无统计学意义(P＜0.05).结论检测患者胃癌组织、外周血中端粒酶活性有助于胃癌的早期诊断,对预后监控及治疗也有重要意义.
作者：葛莲英；李艳；刘剑仑；谢裕安；覃宇周 刊期： 2006年第05期
乳腺病是影响女性健康常见的疾病之一,而乳腺癌更是因其日益增长的发病率而成为女性罹患的主要恶性肿瘤,根据统计,全世界每年约有120万妇女发生乳腺癌,50万妇女因乳腺癌死亡.因此,这就决定了乳腺病研究的焦点及主要方向,在于针对乳腺癌的研究.围绕乳腺外科进行的实验研究主要有以下几个方向.
作者：王深明 刊期： 2006年第05期
目的探讨电刀和钬激光腔内切开小猪肾盂输尿管连接部(UPJ)后形态学的变化.方法采取大体、光学及电镜观察比较二种方式内切开后的愈合效果.结果大体观可见所有小猪UPJ处均未见尿性囊肿形成,与周围组织粘连轻微.电镜下均可见肌丝排列,大部分肌层已恢复连续性.光镜下见黏膜已恢复连续性,肌层的连续性的恢复主要限于内1/2～2/3区域.左右两侧评分分别为4.23±1.18和3.78±0.46,差异无统计学意义(P＞0.05).结论采用电刀和钬激光切割小猪UPJ后其形态学改变大致相同,在组织学愈合上差异无统计学意义(P＞0.05).
作者：何朝辉；李逊；曾国华；袁坚；单炽昌 刊期： 2006年第05期
目的探讨组织因子(TF)表达对大肠癌细胞血行转移能力的影响.方法利用构建有正义/反义组织因子cDNA(TFcDNA)的真核表达载体pcDNA3.1/Zeo,以脂质体法转染LoVo细胞,经验证转染成功的LoVo细胞采用Western blot检测组织因子的蛋白表达水平,再将24只裸鼠(BALB/C nu/nu)随机分成3组,分别将转染了正义/反义TFcDNA的LoVo细胞及未转染的Lo-Vo细胞通过脾接种至裸鼠体内.6周后观察裸鼠发生肝表面转移灶的数目,以肝表面转移灶的数目反映LoVo细胞的转移能力.结果与LoVo细胞相比,转染了正义TFcDNA的LoVo细胞的TF表达水平升高,而转染了反义TFcDNA的LoVo细胞的TF表达水平则降低(F=33.9,P＜0.01),转染了正义TFcDNA的LoVo细胞组比LoVo组的肝转移灶的数目多,而转染了反义TFcD-NA的LoVo细胞组则比LoVo组的肝转移灶的数目少(F=52.1,P＜0.01).结论组织因子可以增加人类大肠癌细胞的体内血行转移能力.
作者：戎龙；万远廉；刘玉村；姚宏伟；汪欣；吴涛；潘义生；朱静 刊期： 2006年第05期
目的探讨吻合肝动脉在大鼠部分肝移植早期损伤中的作用.方法选取雄性SD大鼠180只,随机分成3组:全肝移植组(A组);部分肝移植组(B组);部分肝移植肝动脉化组(C组).在恢复血供后30min,2、3、6、12、24 h等6个时间点分别取材,检测:血清肝功能指标;血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;原位末端标记法(TUNEL)检测肝组织细胞凋亡;荧光半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测TNF-α和TNF-α受体在肝组织中的表达.结果各组总胆红素(TB)、谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)峰值均出现在术后6、12 h后逐渐下降,TB、ALT和AST峰值依次为B组＞C组＞A组(P值均＜0.05);移植术后各组血清TNF-α表达水平在3 h时达到峰值,随后逐渐下降,峰值B组＞C组＞A组,其中B组峰值显著高于A和C组,而A、C组峰值差异无统计学意义(P＞0.05);B组各时间点细胞凋亡数均显著多于A组和C组;B组肝组织TNF-α表达峰值位于术后2 h,A、C组峰值位于术后3 h,B组12 h表达显著减少,A、C组术后12 h为阴性表达.B组TNF-α受体2基因表达水平显著高于A、C组.结论吻合肝动脉可显著减轻部分移植肝早期损伤.TNF-α及其受体的表达强度与肝脏损伤程度有密切关系,可能是参与大鼠部分肝移植早期损伤过程的重要细胞因子.
作者：孔连宝；吴晓峰；邵立军；张必翔；陈实 刊期： 2006年第05期
且的建立稳定自发绿色荧光的高、低转移人肝癌细胞株并明确鉴定.方法脂质体转染法将绿色荧光蛋白(GFP)基因分别转染至高、低转移人肝癌细胞株MHCC97-H/L内,经G418反复筛选并单克隆化,得到两株新细胞株MHCC97-HG/LG,对新细胞株GFP表达稳定性、生物学特性、体内外侵袭转移能力及肿瘤血管生成等进行鉴定.结果MHCC97-HG/LG在体外培养或裸鼠体内接种36 d后均能稳定表达绿色荧光.MHCC97-HG肝、肺转移率均为100%,较MHCC97-LG及其父系体内外侵袭转移能力显著增强(P＜0.01),其原位肿瘤微血管密度较MHCC97-LG显著增加[(121.0±15.9)/HP vs(87.0±14.2)/HP,P＜0.01].体视荧光显微镜可实时观察裸鼠体内MHCC97-HG/LG种植瘤生长、转移及血管形成情况.结论MHCC97-HG/LG及其动物模型在肝癌转移机制、肿瘤血管生成等诸多研究领域可能有较广阔的应用前景.
作者：徐泱；孙惠川；钦伦秀；刘银坤；樊嘉；汤钊猷 刊期： 2006年第05期
目的利用基因工程技术构建表达嵌合T细胞受体(ch-TCR)分子的逆转录病毒载体(由抗erbB2的单链抗体和信号传导链CD3ξ组成),感染预先刺激的小鼠T细胞,使得T细胞能以MHC非限制性的方式在体外识别并杀伤肿瘤细胞,为肿瘤的过继性免疫治疗提供新思路.方法将抗erbB2的单链抗体、CD8分子绞链区、CD3ξ链的跨膜区和胞内段依次克隆入逆转录病毒载体pCMMP中,与另外两个辅助载体pHDM.G和pMD.MLVgag.pol共同转染293T细胞,包装获得病毒颗粒,感染NIH3T3细胞检测病毒滴度.取适量病毒液感染预先刺激的小鼠CD3+T细胞,流式细胞仪检测嵌合受体在细胞表面的表达,非放射性的细胞杀伤试剂盒和ELISA检测试剂盒分别检测T细胞的抗原特异性杀伤和细胞因子分泌的功能.结果成功构建抗erbB2嵌合T细胞受体基因的逆转录病毒载体,检测病毒滴度为(2.1±1.1)×108 IP/ml.体外感染T淋巴细胞的效率为(45±5)%.体外能杀伤erbB2+的肿瘤细胞SK-BR-3、D2F2/E2,而对erbB2-的肿瘤细胞MCF-7、D2F2无杀伤功能,并能分泌Th1型细胞因子GM-CSF和IFN-γ.结论表达抗erbB2嵌合T细胞受体的T淋巴细胞体外具有MHC非限制性的、erbB2抗原特异性的杀伤肿瘤细胞和分泌Th1型细胞因子的功能,为下一步的体内实验打下基础.
作者：张瑞萍；云琳；陆斌；彭玲；周倩；王浩；郭亚军 刊期： 2006年第05期
中华实验外科杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中华医学会
