张忠信
我们先前用rAAV8-1.3 HBV静脉注射C57BL/6小鼠成功地制备了慢性乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)感染模型.为了探讨不同品系的小鼠对rAAV8-1.3HBV静脉注射是否具有不同反应,本研究比较了C57BL/6和BALB/c小鼠静脉注射重组病毒后外周血中HBV抗原和抗体水平、病毒载量和肝脏组织HBcAg表达情况,以及不同剂量重组病毒注射与这些指标的关系.将低(4×109 Viral genome,vg)、中(4×1010vg)和高(4×1011vg)三种剂量的rAAV8-1.3HBV通过尾静脉注射至C57BL/6和BALB/c小鼠,分别利用ELISA和荧光定量PCR方法检测血清中的HBV抗原、抗体水平以及HBV DNA,利用免疫组化检测肝脏组织HBcAg的表达.结果发现,对于C57BL/6小鼠,三种不同剂量rAAV8-1.3HBV注射均可造成100％小鼠出现HBV持续感染；血清HBsAg、HBeAg和HBV DNA以及肝组织HBcAg稳定表达超过8个月,其表达水平随重组病毒注射剂量的增加而升高,高剂量注射时可造成超过40％的肝细胞感染HBV,血清中HBV DNA可达105 IU/mL以上；未检测到针对HBV的抗体.对于BALB/c小鼠,三种不同剂量rAAV8-1.3HBV注射也可造成100％小鼠出现HBV持续感染；血清HBeAg和HBV DNA以及肝组织HBcAg稳定表达超过8个月,但是血清HBsAg在重组病毒注射2周之后显著下降甚至消失；在中剂量注射组的BALB/c小鼠血清中检测到低水平的Anti-HBs;血清HBeAg和肝组织HBcAg的表达水平随重组病毒注射剂量的增加而增高,并且各剂量组表达水平均高于C57BL/6小鼠,高剂量注射时可造成超过50％的肝细胞感染HBV.本研究表明,低至4×109 vg剂量的rAAV8-1.3HBV注射即可造成C57BL/6和BALB/c两种品系小鼠出现HBV持续感染,并且HBV复制水平随重组病毒注射剂量增加而增高； BALB/c小鼠对HBV的免疫反应强于C57BL/6小鼠,可以产生针对HBsAg的体液免疫反应而使血清HBsAg转阴,但无法清除携带HBV的肝细胞.
作者：王刚；董小岩；田文洪；尉迟捷；郑刚；高杰；王国婧；魏国超；周育森；吴小兵 刊期： 2012年第05期
为了研究黑龙江省大林姬鼠携带汉坦病毒(HV)的分子特征,对黑龙江省大林姬鼠分离株NA33的S基因进行了扩增和序列分析.结果表明,NA33株S基因全长由1693 nt组成,TA含量丰富,编码N蛋白的ORF起始于37nt,终止于1326 nt,编码的蛋白长429 aa,符合HTN型编码.与HV参考毒株进行比较,NA33与Amur类汉坦病毒同源性高,与其它HTN型相对较低,与SEO等同源性更低.N蛋白进化树分析表明,NA33位于Amur类病毒所在支系,并且与俄罗斯远东和吉林大林姬鼠分离株亲缘关系更接近,体现了一定的宿主依赖性和地理簇集性.序列分析发现,NA33的N蛋白具有Amur类汉坦病毒保守的氨基酸位点.黑龙江省大林姬鼠携带Amur类汉坦病毒,是重要的传染源.
作者：陈露菲；陈淑红；王开利；张静；李冀宏 刊期： 2012年第05期
研究目的是克隆猪骨髓基质抗原2 (Bonc marrow stromal antigen 2,BST- 2)基因并进行真核表达,获得具有抗病毒活性的重组BST-2蛋白.研究通过RT-PCR从猪瘟弱毒疫苗和聚肌胞(Poly Ⅰ:C)刺激的猪肾细胞(PK-15)中扩增出猪BST-2 cDNA,克隆至真核表达载体pcDNA3.1/V5-His,构建重组表达质粒pcDNA-BST-2,转染HEK293T细胞,纯化BST-2蛋白并经Bradford法定量,Western blot检测,研究BST-2抗病毒生物学活性.酶切鉴定和核酸序列测定证实pcDNA-BST-2真核表达质粒构建成功,转染HEK293T细胞后,经间接免疫荧光能够检测到绿色荧光.生物学活性测定重组BST-2蛋白具有一定的抗水泡性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus,VSV)、H9禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)及猪繁殖与呼吸综合症病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的活性.结果表明,重组BST-2具有一定抗病毒生物功能,为进一步研究重组BST 2蛋白的活性以及BST-2抗病毒药物研究奠定了基础.
作者：张廷虹；赵协；曹广明；张振杰；常维山 刊期： 2012年第05期
根据Ⅰ类新城疫病毒NDV08-004基因组序列(GenBank登录号FJ794269),设计7对引物,采用RT-PCR将NDV08-004基因组分段扩增(片段A～G)并分别克隆入pGEM-Teasy载体,然后采用单一的酶切位点将7个片段依次亚克隆到转录载体pOLTV5中,构建了含NDV08-004全基因组cDNA的转录载体NDV08-004-pO.采用构建的三个辅助质粒(pCI-NP、pCI-P和pCI-L)与基因组NDV08-004-pO按照2∶1∶1∶2的比例共转染BSR T7/5细胞,结果成功拯救出具有血凝性的NDV08-004,初代分离物血凝价为4.33log2±0.58.Ⅰ类NDV反向遗传操作体系的建立为开展Ⅰ类NDV的致病机制奠定了基础.
作者：陈云霞；刘华雷；管峰；郑东霞；赵云玲；王志亮 刊期： 2012年第05期
流感病毒可引起急性呼吸道传染病,严重危害人们的身体健康.神经氨酸酶抑制剂(NAI)是以神经氨酸酶为靶点的药物,可以有效抑制甲型和乙型流感病毒复制,是目前流感预防和治疗的一线用药.然而由于NA或者HA的突变,导致病毒对该药耐药.不同亚型流感病毒对神经氨酸酶抑制剂的耐药情况也不同,不同的检测方法也对判断病毒是否耐药有影响.
作者：黄兰；周剑芳；韦红；舒跃龙 刊期： 2012年第05期
本研究为了解南京地区儿童腺病毒(ADV)感染的流行特点及型别,收集2010年8月至2011年7月南京医科大学附属南京儿童医院住院及门诊呼吸道感染患儿的鼻咽抽吸物(NPA)及咽拭子(NPS)共644例,采用巢氏聚合酶链反应法(Nested-PCR)检测ADV hexon基因,将阳性PCR扩增产物进行测序、同源性和进化分析.同时对12种其他呼吸道相关病毒进行PCR检测,包括人博卡病毒(HBoV),呼吸道合胞病毒(RSV),人鼻病毒(HRV),副流感病毒1～4型(PIV1-4),流感病毒A和B(IFVA/B),人偏肺病毒(HMPV),冠状病毒NL63和HKU1( HCoV-NL63和HCoV-HKU1).结果显示:644例标本中共检出ADV阳性扩增产物171份,检出率为26.55％,3型120例(70.18％,120/171),7型16例(9.36％,16/171),1型12例(7.02％,12/171),2型10例(5.85％,10/171),5型6例(3.51％,6/171),6型3例(1.75％,3/171),57型3例(1.75％,3/171),41型1例(0.58％,1/171).ADV感染呈全年散发,其发病高峰主要在4～7月.以7岁以下儿童多见(96.49％).171例ADV感染患儿中有99例(57.89％)存在混合感染,其中以呼吸道合胞病毒(RSV)、人鼻病毒(HRV)多见.ADV阳性患儿诊断以下呼吸道感染为主(63.16％),肺炎占30.41％.结论:ADV是2010年8月到2011年7月南京地区儿童呼吸道感染的重要病原之一,其优势流行株为3型,长期监测其流行型别具有重要意义.
作者：高小倩；金玉；谢志萍；高寒春；谢乐云；张健；段招军 刊期： 2012年第05期
在前期研究中,对山东省1989～2011年急性弛缓性麻痹(Acute flaccid paralysis,AFP)和手足口病(Hand,foot and mouth disease,HFMD)患者标本中分离到的部分人类肠道病毒(Human enteroviruses,HEVs)进行分子定型,发现了8个HEV-A血清型.为进一步探究HEV-A组病毒在山东省的基因型分布及分子进化特征,本研究继续对剩余分离株进行核酸提取,以HEV-A组特异性引物对VP1完整编码区进行序列扩增、测序和分子定型,又鉴定出4个血清型,分别为柯萨奇病毒A组(Coxsackievirus A,CVA)2、6、8、12型,共7株病毒.同源性分析显示,7株HEV-A山东分离株与其原型株核苷酸同源性介于80.8％～85.0％之间.系统进化树表明,CVA8、12型山东分离株与国内分离株存在一定亲缘关系,而CVA2、6型山东株同国内外分离株亲缘关系均较远,并且CVA2、6型在山东省内可能存在多个传播链.本研究将我省HEV-A组的血清型别增加至12个,进一步丰富了HEV-A山东地方株的遗传进化特征,并且发现CVA2、6、8、12血清型在山东省甚至全国范围内存在不同基因特征的传播链的共循环.
作者：陈鹏；陶泽新；王海岩；刘尧；宋立志；刘桂芳；纪峰；徐爱强 刊期： 2012年第05期
小菜蛾颗粒体病毒(Plutella xylostella granulovirus,PlxyGV)基因组含有15个杆状病毒晚期表达因子(Late expression factor,lef)基因同源物.PlxyGV的14个lef基因(不包括ie-0)预期编码产物与苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica multicapsid nucleopolyhedrovirus,AcMNPV) LEF蛋白的序列相似度为13％～53％.其中,LEF-8、LEF-9和P47在两种病毒之间的相似度较高,分别为49％、53％和46％.为了研究不同杆状病毒种间lef基因的功能相关性,验证PlxyGV lef基因的功能,本文利用AcMNPV的一个瞬时表达实验系统测试PlxyGV lef基因在Sf9细胞中激活AcMNPV晚期启动子控制的报告基因表达的能力.实验结果显示,在其它AcMNPV lef基因都存在的情况下,PlxyGV lef-2能够部分替代AcMNPV lef-2的活性.序列对比结果显示PlxyGV LEF-2的C端末比其它GV和鳞翅目NPV的LEF-2分别多出约100 aa和70 aa.
作者：樊磊；胡原；黎路林 刊期： 2012年第05期
木脂素类化合物具有多种药理活性,其抗HIV机制是通过影响HIV复制周期的某个环节,从而抑制病毒的复制和感染.按其抗HIV检测方法不同,将木脂素类化合物分成4类,本文对1990～2011年有关抗HIV活性木脂素类化合物研究文献进行综述.
作者：秦浩；高丽；郭军 刊期： 2012年第05期
构建表达狂犬病病毒SRV9株糖蛋白(GP)的重组杆状病毒,评价其表达出的SRV9株糖蛋白对小鼠免疫效果.将狂犬病病毒SRV9株GP基因的完整开放阅读框克隆入穿梭质粒Bacmid中,构建重组穿梭质粒Bacmid-G,以此转染Sf9细胞.对病变细胞培养物进行电镜观察,获得正确重组杆状病毒后,通过Western-blot、IFA及小鼠免疫实验鉴定表达产物的免疫反应性及免疫原性.正确构建重组穿梭质粒Bacmid-G;获得表达SRV9株糖蛋白的重组杆状病毒,其表达产物具有良好免疫原性；表达产物接种小鼠可诱导其产生抗狂犬病病毒中和抗体,中和抗体达到保护水平的比例为100％.本实验所获得的重组杆状病毒表达出的SRV9株糖蛋白具有较好的免疫原性,可诱导小鼠产生保护性中和抗体,该实验为进一步开发狂犬病亚单位疫苗奠定了基础.
作者：陈奇；张守峰；刘晔；付云红；孙程龙；杨洋；宫婷；宋菲菲；扈荣良 刊期： 2012年第05期
TZ060107株新城疫病毒(NDV)在含有对它抗体的鸡胚成纤维细胞(CEF)培养上分3个独立系列连传50代,每10代扩增其HN和F基因并测序.选择变异大的系列A1-50病毒,再在含有抗A1-50抗体的CEF培养上分3个独立系列连续传50代,同时设3个不带抗体的独立传代系列作为对照.对第60、70、80、90、100代病毒的HN和F基因序列比较结果显示,有抗体组HN基因的非同义突变(NS)对同义突变(S)比值NS/S为5.25,明显高于无抗体组NS/S的2.375.前50代在抗体选择压作用下已发生的稳定NS突变在含有抗A1-50抗体的细胞培养中传代仍能稳定保持,且又出现了一个新的稳定的NS突变位点.在有抗体组经传50代后F基因发生的稳定非同义突变,在抗A1-50血清作用下再连传50代后也仍然保持,且又出现3个新的稳定的NS突变.不同传代病毒与原始病毒间的血清交叉血球凝聚抑制试验结果表明,随着在含有抗NDV血清的细胞培养上传代代数的增加,病毒与原始病毒间在抗原性的差异越来越大.
作者：何羽婷；巩艳艳；赵鹏；崔治中 刊期： 2012年第05期
2011年从辽宁省丹东地区蚊虫样品中分离到6株病毒,采用逆转录-聚合酶链式扩增(RT-PCR)检测方法,结果黄病毒属通用引物和库蚊黄病毒特异性引物均为阳性.6株病毒核苷酸序列经基因库(GenBank)比对后,证实6株病毒为库蚊黄病毒,为我国首次报道.将病毒NS5基因和E基因核苷酸序列与GenBank中10株库蚊黄病毒参考毒株核苷酸序列进行比较,并构建遗传进化树,结果显示本次分离的6株病毒与美国和日本的毒株亲缘关系较近.
作者：安淑一；刘家松；任毅；王作虪；韩悦；丁俊；郭军巧 刊期： 2012年第05期
本文综述了动物嵴病毒的发现、流行病学、分子生物学特点以及病原检测的研究进展,探索分析了嵴病毒仍需迸一步研究和解决的问题.
作者：代洪波；李淞；周远成；朱玲；徐志文 刊期： 2012年第05期
水痘-带状疱疹病毒( Varicella-zoster virus,VZV)又称人类疱疹病毒3型,属疱疹病毒科,与单纯疱疹病毒HSV-1、HSV-2一起归入α亚科.人类是其唯一的自然宿主,对其普遍易感.VZV引起的原发感染表现为水痘,并在宿主的感觉神经节内潜伏,再激活时可引起带状疱疹.近年来VZV分子流行病学的研究涉及流行病学、病毒学、生物信息学等相关领域,通过监测、研究VZV的基因变异,区分疫苗株或野生株引起的感染,探讨世界范围内各VZV病毒株的系统发育关系和各遗传支之间的分子进化史.现将近年来有关VZV不同的地理分布和遗传支进化的研究状况综述如下.
作者：江龙凤；甘霖；陈敬贤；王明丽 刊期： 2012年第05期
为了研究慢病毒介导的shRNA(Short hairpin RNA,shRNA)在柯萨奇B组3型病毒(Coxsackievirus B3,CVB3)导致的心肌炎小鼠模型中的抗病毒作用,合成针对CVB3基因组3753～3771区域的慢病毒Lenti-sh3753,感染HeLa细胞后感染CVB3病毒,通过荧光显微镜观测shRNA的表达和病毒致细胞病变效应,并测定培养上清中的病毒滴度,将慢病毒Lenti-sh3753感染BALB/c小鼠后感染CVB3病毒,观察小鼠的存活率,心脏组织中的病毒滴度和病理变化.结果发现Lenti-sh3753能在HeLa细胞中表达shRNA,并能有效抑制细胞中病毒RNA的复制.在小鼠模型上,Lenti-sh3753能提高小鼠的存活率,降低心脏中的病毒含量,从而减轻病理反应.这些结果提示,Lenti-sh3753在细胞和动物模型中能针对性地降解CVB3病毒RNA,明显降低病毒滴度,有效控制病毒感染.
作者：姚海兰；何峰；肖宗慧；刘哲伟 刊期： 2012年第05期
宫颈癌与人乳头瘤病毒感染密切相关,建立宫颈癌实验模型可为宫颈癌的研究提供理想的模拟实验条件.我们通过应用基因重组技术,分别以HPV31型E6和E7基因为目的基因,通过原核表达、蛋白纯化和免疫小鼠等获得其特异性检测抗体.我们还通过构建E6和E7基因真核表达载体、转染C33A细胞、博莱霉素抗性筛选和表达检测等步骤,获得一种稳定的体外宫颈癌细胞系.经酶切鉴定及测序证实细胞基因组已重组插入质粒中的目的基因.我们已成功筛选到稳定的目的mRNA和蛋白表达的阳性细胞系,建立了稳定的人乳头状瘤病毒31型(HPV31)的宫颈癌细胞株,为研究宫颈癌提供了体外实验模型.
作者：易俊波；买制刚；卢海蓉；章刚；周兆平 刊期： 2012年第05期
国际病毒分类委员会(International Committee on Taxonomy of Viruses,ICTV)于2012年发表了新的病毒分类第九次报告[1].在这个长达1327页的报告中,将目前ICTV所承认的2284种病毒和类病毒归入349个属、19个亚科、87个科和6个目,并公布了卫星病毒和朊病毒的种类.第九次报告是在前几个病毒分类报告的基础上,汇集了自2005年以来所有得到批准的病毒分类新建议[2-13]而成,表1列出ICTV 1-9次报告的主要变化.
作者：张忠信 刊期： 2012年第05期
为了建立一种快速准确的检测埃博拉病毒(EBOV)亚型的方法.本研究根据GenBank中公布的EBOV NP基因序列,通过设计引物和优化反应条件,建立了一种SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测方法检测EBOV.以体外转录的EBOV RNA为模板进行试验,该方法检测的灵敏度可以达到1.0×102个拷贝/μL,检测范围达到9个数量级为102～1010,可检测5种亚型EBOV.建立的方法对马尔堡病毒(MARV)、登革病毒(DENV)、新疆出血热病毒(XHFV)、乙型脑炎病毒(JEV)、流感病毒(H1N1和H3N2)和猪繁殖和呼吸综合征病毒(PRRSV)E基因组RNA无非特异性扩增.本文将荧光定量RT-PCR技术用于埃博拉病毒的定量检测中,并且建立了EBOV SYBRGreen Ⅰ荧光定量RT-PCR检测方法.
作者：刘阳；史子学；马玉堃；王皓婷；王宗尧；邵东华；魏建超；王少辉；李蓓蓓；王水明；刘学辉；马志永 刊期： 2012年第05期
本研究用Vero/Slam细胞从辽宁省2008～2011年流行性腮腺炎暴发和散发患者的临床标本中分离到13株流行性腮腺炎野病毒(Mumps virus,MuV),应用逆转录聚合酶链反应(RT- PCR)针对MuV分离株的SH基因的316个核苷酸片段进行扩增,并对该产物进行序列测定.将这13株MuV与从GenBank下载的世界卫生组织(WHO)MuV基因型参考株一起进行分子流行病学研究.结果提示:除2011-015株外,辽宁省2008～2011年12株MuV分离株均属于F基因型,核苷酸和氨基酸同源性为94.9％～100％和83.3％～100％.与F基因型参考株序列相比,核苷酸和氨基酸同源性分别为92.4％～97.2％和96.5％～84.2％.表明2008～2011年辽宁省流行的F基因型MuV发生较大的型内变异.另外还发现F基因型MuV在SH基因上存在着特异性突变(CNt65,C Nt105,G Nt137,C Nt192,C Nt239,GNT262),而其它基因型MuV在这些位点上均未发生改变.F基因型MuV在SH基因编码的氨基酸保守位点也发生变化.如:第2位上由S→P,第6位上由P→L,第23位上由T→N,第48位上由L→P/R.与基因分型有关的氨基酸三联体,2008-01-007毒株也发生了改变,由IML变为TMP.2011-015株病毒与F基因型参考株平均核苷酸和氨基酸同源性分别为87.5％和79.8％,与G型参考株平均核苷酸和氨基酸同源性分别为96.8％和97.4％,属于G基因型.该基因型为中国内地首次发现.
作者：王艳；马艳；韩悦；郭军巧 刊期： 2012年第05期
为了了解广西桂北地区乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus,HBV)感染者基因型分布情况及探讨HBV感染不同免疫状态与基因型的关系.将HBV感染者按免疫耐受、免疫清除(应答)和免疫不全(病毒残留)三种免疫状态分类,各选150例,共450例,运用实时荧光定量PCR法检测HBV感染三种不同免疫状态者的HBV基因型.450例中B型为323例、C型为94例、B+C混合型为23例和非B非C型为10例；HBV感染三种免疫状态均B型占多数,分别为70.0％、78.0％和67.33％,不同免疫状态基因型构成比差异无统计学意义；免疫状态与基因型相关性无统计学意义；B型HBV-DNA载量高于C型,各组中年龄≥30岁者C型显著多于＜30岁者,差异有统计学意义；各基因型间丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBil)阳性率差别无统计学意义；男女基因型分布差异无统计学意义.结果表明,广西桂北地区HBV基因型以B型为主,C型占部分比例,少量B+C混合型,偶有未能分型；HBV感染免疫耐受、免疫清除(应答)和免疫不全(病毒残留)三种免疫状态均B型占多数,慢性HBV感染免疫状态与HBV基因型相关性无统计学意义.
作者：杨丽莎；吴淋玲；蒋冬香；王绩业；黄亚琴 刊期： 2012年第05期
病毒学报杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中国微生物学会
