乔晋琳；李金牛；汲广成；马广昊；付本升；向东东；路平；刘灿坤
背景:关节镜下重建前交叉韧带的移植物的选择存在很多争论.目前两个以上移植物之间的比较研究还比较少见.目的:比较分析膝关节镜下自体、异体骨-髌腱-骨与半腱肌腱3种重建前交叉韧带的疗效.设计、时间及地点:回顾分析,对比观察,于1998-06/2005-06在解放军广州军区广州总医院骨科完成.对象:选择同期收治的前交叉韧带损伤患者142例,其中异体髌腱移植87例,自体髌腱移植34例,自体双股半腱肌21例.方法:回顾分析34例膝关节镜下自体骨-髌腱-骨移植、21例自体半腱肌腱移植和87例异体骨-髌腱-骨移植蕈建前交叉韧带的情况,随访31～84个月.采用Lysholm膝关节评分、国际膝关节文献编制委员会分级评估标准(IKDC)和KT2000评价疗效,并检测术后住院期间体温.主要观察指标:①各组患者Lysholm评分、IKDC分级.②不良事件及副反应.结果:3组间患者满意度、关节稳定性及功能差异均无显著性意义.自体骨-髌腱-骨重建组膝前痛发生率较异体骨-髌腱-骨、半腱肌腱组高.异体骨-髌腱-骨术后发热时间平均10.1 d,自体骨-髌腱-骨和自体半腱肌组分别为4.9 d和5.1 d,与异体组相比差异有显著性意义.11例异体骨-髌腱-骨出现排斥反应,表现为胫骨隧道外口持续果酱样液体流出.经换药、激素或消炎痛治疗后痊愈.结论:关节镜下自体、异体骨-髌腱-骨与半腱肌腱移植重建前交叉韧带的疗效相同,但各组间供区并发症、排斥反应等并发症之间的差异将影响人们对移植物的选择.
作者：郑小飞；黄华扬；张余；李凭跃；尹庆水 刊期： 2009年第20期
背景:前交叉韧带切断后可引起膝关节透明软骨的退变,导致骨关节炎的发生,但对外侧半月板的影响目前尚未见文献报道.目的:观察兔前交叉韧带切断后外侧半月板组织学变化.设计、时间及地点:同体对照观察,于2007 09/12在中南大学湘雅医学院动物学部完成.材料:6月龄雄性新西兰大白兔48只,实验初始体质量(2.5±0.3)kg.方法:48只大白兔双后侧膝关节按简单随机法配对分为实验侧和对照侧造模.实验侧行前交叉韧带切断手术.对照侧显露前交叉韧带但不行切断,行止血及体积分数为3%双氧水、生理盐水交替冲洗后缝合切口.选取造模后第1,3,6,8周为观测时间点,每个时间点随机处死12只.主要观察指标:对外侧半月板进行大体观察和组织学检查.结果:前交叉韧带切断组外侧半月板第1周即可见退变,随时间延长退变逐渐加重,对照组未见明显退变.半月板纤维软骨退变组织学评分:实验组(第1,3,6,8周)均高于对照组(P<0.05):实验组第6,8周均高于第1,3周,差异有显著性意义(P<0.05):实验组第1,3周差异无显著性意义(P>0.05).结论:前交义韧带断裂可引起外侧半月板退变.
作者：李国军；李康华；朱勇；李思鸿；张俊 刊期： 2009年第20期
背景:现有的人工瓣膜,无论是机械瓣膜还是物瓣膜,都存在与取材有关、无法从工艺制作方式改进解决的固有缺陷.组织工程心脏瓣膜概念的提出为解决该难题提供了新的方向.目的:通过比较成熟分化血管内皮细胞和骨髓间充质干细胞骨的获取手段、体外增殖能力以及在脱细胞基质上的生长情况,分析何者更适合作为制备组织工程人工心脏瓣膜的种植细胞.设计、时间及地点:单一样本观察,于2008 06/09在上海市胸科医院动物实验基地完成.材事斗:用胰蛋白酶(胰酶)EDTA、Triton X-100、DNase、RNase消化猪主动脉瓣膜获得脱细胞基质.从1只12 kg 2岁雄性杂交犬大隐静脉、股外侧动脉及肋骨骨髓获取种植细胞.方法:用胰酶消化并收集内皮细胞,收集骨髓细胞,分别进行培养.通过贴壁法获得内皮细胞及骨髓间充质干细胞.利用内皮细胞生长因子诱导骨髓间尤质干细胞向内皮细胞分化,并绘制细胞生长曲线.以抗Ⅷ因子抗体以及抗血管内皮生长因子抗体荧光染色,荧光显微镜观察.将细胞种植于脱细胞瓣膜上培养3 d后进行扫捕电镜观察.主要观察指标:①试验犬伤口愈合情况.②细胞培养、增殖情况.③骨髓来源骨髓间充质干细胞表型分析以及形态学观察.结果:成熟血管内皮细胞体外增殖能力低下,骨髓间充质干细胞则增殖旺盛,生长曲线显示骨髓间充质干细胞的倍增时间约30 h,而成熟内皮细胞生长曲线平直.对骨髓间充质干细胞进行抗Ⅷ因子抗体以及抗VEGF抗体荧光染色.可见荧光染色阳性.扫描电镜见种植骨髓间充质干细胞的脱细胞瓣膜上散在星状细胞贴附.结论:骨髓间充质下细胞体外增殖能力强,在内皮细胞生长因子诱导下可向内皮细胞转化,并可以生长贴附于脱细胞瓣膜,是作为组织上程人工心脏瓣膜制备的理想细胞来源.
作者：徐方杰；郑悦；高尚志；沙慧芳；谭强；陈岗；陈佩莉；周睿 刊期： 2009年第20期
背景:由于新鲜标本的缺乏,防腐标本用于实验研究增多.目的:观察新鲜与防腐股骨标本之间的生物力学特性的差异.设计、时间及地点:对比观察试验,于2008-08/09在南方医科大学广东省生物力学重点实验室完成.材料:随机选择地区、种族、性别相同的青壮年新鲜和甲醛浸泡6～12个月的防腐股骨头标本各6个,X射线摄片排除骨折、肿瘤、结核及先天畸形.方法:选择静止站立单腿支撑股骨头受力模型,MTS生物力学测试机测试800 N载荷下的股骨近段的载荷-应变关系、垂直位移和刚度,施加在模型上的总载荷为800 N,以200 N分级增量方式加载;试验机速度控制在1.4 mm,min进行加载.主要观察指标:①新鲜与防腐标本的载荷-应变关系.②股骨头的载荷-位移关系.⑧股骨头的轴向刚度.结果:新鲜和防腐标本在正常生理载荷下的载荷-应变关系都基本呈线性变化:在载荷为800 N时,防腐标本的位移明显大于新鲜标本的位移(P<0.001);新鲜标本的轴向刚度大于防腐标本(P<0.001).结论:由于甲醛对防腐股骨标本骨质的影响,平均应变、垂直位移及刚度均与新鲜标本有明显差异.但仍能有效维持近段股骨的正常力学传递,在新鲜标本的获得日益凼难的情况下,防腐股骨标本在一定程度上可以替代新鲜标本进行生物力学研究.
作者：陈伟义；李奇；林荔军；赵亮；韦葛堇 刊期： 2009年第20期
背景:前期研究表明广西18～22岁少数民族学生体质偏轻.目的:拟进一步了解广西2645名少数民族学生体型及体质健康状况,寻找影响的关联因子.设计、时间及地点:追踪调查,于2004-12/2007-12在广西民族大学完成.对象:广西民族大学200312005三次体质健康测试的全体学生2645人.男1337人,女1308人,年龄为18～20岁,共15个民族.方法:根据2003年教育部、体育总局<学生体质健康标准(试行方案)>和实施方法分为形态指标、技能指标和身体素质指标3大类.对2645名少数民族身体机能与体质量指数变化的跟踪调查.主要观察指标:身高、体质量、肺活量、立定跳远、坐位体前屈、体质量指数.结果:①广西民族大学2003级学生大学3年期间男生身高、体质量增长率比全国同期多2.45%,身体形态发育正处于高峰期,女生成偏瘦型体型,身体形态发育情况总体欠佳.②男女学生在刚入校时肺活量机能较差,远远低于同期全国平均水平.3年后男生肺活量增长率为11.55%、女生肺活量增长率为27.72%,分别高于全国同期肺活量增长率.③坐位体前屈机能高于同期全国平均水平,男生呈逐年上升趋势,同期全国男性呈下降趋势:同期全国乡村女生均呈逐年上升趋势.④立定跳远机能提高较大,3年后增长率为18.15%.明显高于全国同期立定跳远增长率水平的2.61%.女生立定跳远机能总体不如全国同期水平.⑤体质罩指数总体与同期全固乡村男女学生体质量指数比较稍低一些(P<0.01).结论:2645名少数民族学生发育正处于高峰期:肺活耸机能不及全国同期平均水平.男女体质量指数分布有所不同,体质量偏轻者女生多于男生,表明学生营养状况总体欠佳.
作者：覃明路；何江川；杨放 刊期： 2009年第20期
背景:诱导骨髓基质干细胞成骨条件的优化与探讨是再生医学研究的热点.前期实验发现Wnt7b在骨发育中的作用,此次实验是前期工作的延续.目的:构建Wnt7b重组反转录病毒载体,观察其在C3H10T1/2中的表达.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2005-01/2008-08在华盛顿大学医学院和同济大学附属第十人民医院中心实验室完成.材料:pXy-Wnt7b购于ATCC公司,载体pCIG-IRES-EGFP,pLef-Luciferase.pCMV-Rennilla.反转录病毒载体pSFG和包装细胞GP293由华盛顿大学医学院提供.方法:用多步亚克降技术构建目的基因Wnt7b和标记基因加强型绿色荧光蛋白(enhanced greenfluorescentprotein,EGFP)双表达重组反转录病毒载体pSFG-Wnt7b-IRES-EGFP,在条件培养液中经GP293包装,并任常规培养液中释放出假病毒并将其转染C3H10T1/2细胞,检测成骨活性诱导中的作用和荧光素酶报告基因检测信号转导通路.主要观察指标:①Wnt7b重组反转录病毒转染C3H 10T1/2细胞的表达.②wnt7b诱导C3H 10T1/2碱性磷酸酶生成分析.③Wnt7b信号转导分析.结果:构建日的基因的Wnt7b和标记基因EGFP双表达重组反转录病毒载体能够高效地表达,转染C3H10T1/2细胞后能诱导碱性磷酸晦的生成.Wnt7b信号转导分析可见Wnt7b成骨作用通过Noncanonical途径.结论:Wnt7b在C3H10T1/2中能高效表达,能显著诱导骨发育的重要标志--碱性磷酸酶的生成,Noncanonical途径在其中起重要作用.
作者：陈婷婷；徐选福；李晶华；李小艳；曹谊林；胡洪亮 刊期： 2009年第20期
背景:目前研究证实,Rac1蛋白能够调控甘油醛-3-磷酸脱氢酶氧化酶的表达,刺激内源性活性氧产生,引起内皮细胞毒性改变.目的:探讨Rac1蛋白在缺氧诱导的人血管内皮细胞凋亡中的作用及其调控机制.设计、时间及地点:单一样本观察,于2007-01/2008-05在解放军沈阳军区总医院医学实验科完成.材料:自备人脐静脉内皮细胞、Phoenix amphotropic 293包装细胞、持续活化型pLNCX-L61Rac1和主导抑制的pLNCX-N17Rac1反转录病毒真核表达载体.方法:体外培养人脐静脉内皮细胞,将细胞以体积分数为1%O2、5%CO2及94%N2缺氧条件下培养72 h.用持续活化型pLNCX-L61Rac1(L61Rac1感染组)和主导抑制型pLNCX-N17Rac1(N17Rac1感染组)反转录病毒真核表达载体转染人脐静脉内皮细胞,并筛选稳定表达的细胞克隆.主要观察指标:①感染后稳定表达阳性克隆筛选.②采用pull-down和Western blot分析感染前后细胞内Rac1的活化.③采用持续缺氧的方法诱导内皮细胞凋亡,用TUNEL染色和Western blot检测缺氧72 h后各实验组细胞中cleave-caspase3表达.④应用免疫荧光和Western blot分析血清反应因子的表达和定位.结果:筛选出稳定表达持续活化型pLNCX-L61Rac1和主导抑制型的pLNCX-N17Rac1的人脐静脉内皮细胞克隆:应用putl down和Western blot证实各组细胞内Rac1的活化改变:与人脐静脉内皮细胞和N17Rac1感染细胞比较.缺氧72 h后L61Rac1细胞发生明显凋亡.进一步应用Western blot分析证实3组细胞中血清反应因子表达无明显改变,但人脐静脉内皮细胞和N17Rac1-HUVECs中血清反应因子为入核表达,而L61Rac1-HUVECs中血清反应因子蛋白在细胞核周大量表达,血清反应因子发生出核转位.结论:Rac1参与了内皮细胞凋亡的调控,机制可能与其调控血清反应因子蛋白核转位有关.
作者：韩秀敏；孙英慧；朱鲜阳；盛晓棠；张端珍；崔春生 刊期： 2009年第20期
背景:伊班膦酸钠足第3代二膦酸盐的典型代表之一,具有很高的抗骨质吸收作用.目的:验证骨折局部及全身应用伊班膦酸钠对兔骨折愈合的影响.设计、时间及地点:随机对照动物检验,于2008-10在东南大学医学院中心实验室完成.材料:健康6-8月龄新西兰兔36只,体质量2.1-2.6 kg.伊班膦酸钠注射液(1 mL:1 mg)由河北医科大学生物医学工程中心提供.方法:新西兰兔36只,随机分成3组,对照组、全身组和局部组,每组12只,建立兔桡骨骨折标准模型.建模后对照组不予处理,全身组和局部组分别通过静脉和局部途径予以伊班膦酸钠0.1 mg.于建模后2,4,6,8周通过X射线观察骨折愈合情况,进行评分:于骨折模型建立后的第1,2,3,4周通过酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP-5b):于建模后2,4,6,8周分批处死兔,摘取骨痂标本,进行病理学观察和通过免疫组织化学检测Ⅰ型胶原的表达.主要观察指标:①骨折愈合评分.②抗酒石酸酸性磷酸酶变化.③骨痂成分血积百分比.④破骨细胞指数.⑤免疫组织化学积分吸光度.结果:36只兔全部进入分析.第2周,全身组和局部组X射线评分较对照组高(P<0.05),第4,6周,局部组较对照组和全身组评分评分高(P< 0.05).各周局部组抗洒石酸酸性磷酸酶水平较对照组和全身组低(P<0.05).4周,局部组骨小梁面积百分比高于对照组(P<0.05):6周高于对照组和全身组(P<0.05).各周局部组破骨细胞指数均低于对照组和全身组(P<0.05).2,4,6周,局部纽Ⅰ型胶原表达均高于全身组和对照组(P<0.05).结论:局部应用伊班膦酸钠能够促进兔骨折愈合,相同剂量F(0.1 mg)比全身应用效用更显著.
作者：张磊；王宸；张学军 刊期： 2009年第20期
背景:胶原酶消化方法是胰岛细胞分离技术中关键的第1步,其成败关系到胰岛细胞移植的存活与功能.目的:针对不同质量浓度和同一质量浓度条件下不同时间点胶原酶分离纯化所获得胰岛细胞的效果进行对比,以确定理想的胶原酶分离胰岛细胞的标准化方案.设计、时间及地点:单一样本观察,细胞学体外观察,于2006-09/2007-05在解放车总医院第二附属医院全军器官移植实验室完成.材料:胰岛细胞供体为SD大鼠.将32只大鼠按随机数字表法分为4组,即胶原酶0.5 g/L,1.0 g/L,1.5 g/L及2.0 g/L组,每组8只.方法:每组前4只动物.采用0.5,1.0,1.5,2.0 9/L 4种质量浓度的胶原酶对胰腺进行分离,消化过程中每隔10 min为1个时间点,双硫腙染色观察分离情况,分析结果并确定适合获取胰岛量多的时间点.随后每组另外4只动物按照确定时间点停止消化,应用间断密度梯度离心法纯化胰岛,双硫腙和丫啶橙-碘丙啶荧光染色分析移植物形态和存活率,确定分离所需胶原酶的佳浓度.主要观察指标:调整胶原酶的质量浓度与消化时间,荧光显微镜下胰岛细胞计数,评估胶原酶佳质量浓度及消化时间.结果:分忻后确定各组胰岛细胞佳获取时间,胶原酶0.5 g/L组50 min,胶原酶1.0 g/L组40 min,胶原酶1.5 g/L及2.0 g/L组均为30minm.胶原酶0.5 g/L组分离并纯化后胰岛细胞收获量显著低于其他3组(P<0.01),胶原酶1.0 g/L.1.5 g/L及2.0 g/L组两两比较差异无显著性意义(P>0.05).胶原酶2.0g/L组胰岛细胞平均存活率显著低于其他3组(P<0.01),胶原酶0.5 g/L,1.0 g/L及1.5 g/L组两两比较差异无显著性意义(P>0.05).结论:在胰腺灌注良好情况下,胶原酶消化条件控制在质量浓度1.5g/L,时间30min进行水浴振荡可获得很好的分离效果.
作者：范宇；石炳毅；钱叶勇；杜源 刊期： 2009年第20期
背景:众多的研究已证实胰岛素样生长因子1在成骨细胞的增殖、分化、基质合成中发挥重要的调控作用,并参与调节骨改建及修复的系列过程.目的:观察人胰岛祟样生长因子1基因修饰的骨髓基质干细胞对骨损伤修复的促进作用及能否构建出具有良好生物学活性的组织工程人工骨,提高骨缺损修复质量.设计、时间及地点:对比观察,实验于2004-03/2005-05在苏州大学实验动物中心完成.材料:体外将胰岛素样生长因子1基因通过反转录病毒转入骨组织工程种子细胞骨髓基质干细胞,并与具有良好生物学活性的脱钙骨荩质材料复合.方法:BalB/C裸鼠15只制备颅骨8 mm缺损模型,随机数字表法分为3组,每组5只.胰岛素样生长因子1转染细胞组和空载体细胞组将两种不同植入物脱钙骨基质/胰岛素样生长因子1转染细胞和脱钙骨基质/空载体细胞分别植入颅骨缺损部位,空白对照仅造模,不进行任何干预造模后4周处死动物,取出颅骨进行组织学观察.主要观察指标:①反转录-聚合酶链反应检检测转染细胞胰岛素样生长因子 1 mRNA的表达.同时收集转染后细胞上清,用蛋白免疫印迹检测重组胰岛素样生长因子1的表达.②扫描电镜观察细胞/基质材料复合物共培养3,6 d后的生长情况.⑨颅骨缺损模型大体观察.④苏木精-伊红染色观察造模后4周各组颅骨缺损的修复情况.结果:①经反转录-聚合酶链反应及蛋白免疫印迹检测,胰岛素样生长因子 1基因修饰的骨髓基质干细胞中有胰岛素样生长因子1 mRNA及蛋白的表达.②扫描电镜观察转染细胞与脱钙骨基质共培养3d时胰岛素样生长因子1转染细胞组脱钙骨基质材料表面已有大量细胞黏附并向深部空隙长入:6 d时脱钙骨基质表而黏附的细胞处已分泌出大量胶原纤维:而空载体细胞组各时间点黏附细胞数和胶原纤维产生量则均较少.⑨造模后4周各组植入物周围均无明显炎症反应,胰岛素样生长因子1转染细胞组植入物与颅骨缺损结合紧密:而空载体细胞组植入物可推动:空的对照组骨缺损处无新骨形成.④苏木精-伊红染色可见胰岛素样生长因子1转染细胞组植入物与颅骨缺损结合紧密,骨折缺损区有新骨及血管形成:空载体细胞组骨缺损区新骨形成较少:空白对照组缺损末见修复.结论:胰岛素样生长因子1转染的骨髓基质干细胞/脱钙骨基质复合物具有较好的骨缺损修复功能.
作者：周海斌；董启榕；周晓中；郑祖根 刊期： 2009年第20期
人体血液循环系统是一个非常复杂的有机体,仍有许多问题无法解决,但是借助于现代的科学技术将会逐渐揭开心血管循环系统的神秘面纱.心血管循环系统是人体生理系统的核心,建立其数学模型,模拟其血液循环,可为心脏病医疗设备的设计提供辅助工具,对研究心脏疾病的成因和治疗具有指导意义.文章描述了心血管循环系统建模的历史、种类及其各种建模方法,并以Harvard-MIT(哈佛-麻省理工)建立的心血管仿真模型-RCVSIM模型为例,阐述了模型建立的思路.
作者：徐林；吴效明；陈丽琳 刊期： 2009年第20期
背景:研究表明,通过转染反义基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)基因抑制增殖期血管瘤组织中MMP-2的分泌将成为增殖期血管瘤治疗的重要手段.目的:观察反义MMP-2cDNA基因感染对人增殖期血管瘤裸小鼠移植瘤生长的影响.设计、时间及地点:随机分组设计,对比观察.实验于2003-08/2004-09在四川大学华西临床医学院完成.材料:BALB/c-nu/nu裸小鼠(简称为裸鼠)18只,体质量20 g左右;取1名出生52 d女性患儿左胸壁的海绵状血管瘤,病理诊断证实为增殖期血管瘤.方法:将手术切除的人增殖期血管瘤新鲜标本切分为5mm×4mm×3mm小块,于1 h内移植于18只裸小鼠双侧腋部皮下,制备荷瘤裸小鼠血管瘤移植模型.将移植瘤块成活后(46 d)15只操鼠进行分组治疗,Ad-GFP 组,Ad-aMMP-2组分别沿肿瘤长径多方向瘤内注射重组腺病毒液Ad-GFP和Ad-aMMP-2,对照组注射等量的PBS,每组5只.隔日值内注射1次,共注射4次.主要观察指标:①大体观察肿瘤体积的变化及各组裸鼠肿瘤块坏死面积的比较.②绿色荧光蛋白在备组裸鼠体内的表达.③肿瘤组织形态学变化(大体、苏术精-伊红染色及透射电镜观察).④免疫组织化学检测MMP-2eDNA基因及微血管密度的表达.⑤流式细胞仪检测肿瘤细胞的生长周期和凋亡.结果:①Ad-aMMP-2能抑制体内血管瘤的生长,没有观察到明显的毒副作用.3组肿瘤均有不同程度的坏死,其中Ad-aMMP-2组面积坏死率明显高于对照组和Ad-GFP组(P<0.01).②组织学切片可见Ad-GFP组绿色荧光蛋白基因的表达.⑨大体观察对照组和Ad-GFP组瘤组织大:Ad-aMMP-2组瘤组织相对较小.苏木精一伊红染色可见对照组和Ad-GFP组内皮细胞密集,细胞呈条索状或团块状排列: Ad-aMMP-2组肿增有多处出血和凝同性的片状坏死灶.透射电镜观察对组血管内皮细胞形态正常:Ad-GFP组瘤细胞大,核仁明显;Ad-aMMP-2组部分血管内皮细胞核内染色质固缩,聚积成团块状形成凋亡小体.④Ad-aMMP-2组MMP-2和微血管密度较对照组和Ad-GFP组明显下降(P<0.05).⑤Ad-aMMP-2组G0/G1期百分率大于其他两组(p<0.05),增殖指数降低:Ad-aMMP-2组细胞凋亡率大于对照组和Ad-GFP组(P<0.05),凋指数明显增加.结论:通过反义MMP-2基因阻断人增殖期血管瘤的屯长是可行的,其机制主要是通过抑制血管内皮细胞分泌MMP-2导致局部缺血起作用的.
作者：曾凡伟；岑瑛；许学文；于蓉；刘勇；王怀胜；李正勇 刊期： 2009年第20期
营养不良性大疱性表皮松解症是一种由于人体Ⅶ型胶原基因突变或缺失所引起的遗传性疾病,临床特征为创伤诱发的水疱和瘢痕,并发症以恶性鳞状细胞痛多见,是导致患者死亡的主要因素,目前仍无有效的治疗方法.近年来随着对该病分子发病机制及Ⅶ型胶原的结构、功能等方面的深入研究,许多学者提出了组织工程化皮肤替代物治疗、细胞治疗以及基因治疗和重组人类Ⅶ型胶原蛋白治疗等方法,已成为营养不良性大疱性表皮松解症治疗研究的热点.
作者：侯英萍 刊期： 2009年第20期
背景:已有研究发现富血小板血浆可以影响骨髓间充质干细胞和脂肪干细胞的生长和分化.目的:观察富血小板血浆对体外培养的骨骼肌干细胞增殖与诱导成骨的影响,探讨富血小板血浆影响骨骼肌干细胞的机制.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于 2008-06/10在上海交通大学附属第六人民医院中心实验室完成.材料:普通级新西兰大白兔9只,体质量2.5～3 kg.年龄1岁左右,雌雄不限.方法:取兔右后肢比目龟肌体外培养新西兰大白兔骨骼肌干细胞.取兔耳中央动脉血,经离心处理后制备富血小板血浆.将细胞分为实验组与对照组,实验组以含12.5%自体富血小板血浆的条件培养液干预,对照组不进行富血小板血浆干预.主要观察指标:①细胞形态学观察.②以四甲基偶氮唑盐法检测细胞增殖活性.③以碱性磷酸酶钙钴法染色、碱性磷酸酶活性测定、茜索红染色和骨钙素免疫荧光染色检测细胞成骨活件.结果:四甲基偶氮唑盐法显示富血小板血浆诱导实验组较对照组增殖明显(P<0.01);碱性磷酸酶活性较对照组增高明显(P<0.01).富血小板血浆诱导实验组碱性磷酸酶染色阳性,骨钙素免疫荧光染色阳性,茜素红染色可见钙结节形成.结论:富血小板血浆对体外培养的骨骼肌干细胞增殖与成骨分化活性具有显著的促进作用.
作者：单连成；王刚；张长青；曾炳芳 刊期： 2009年第20期
背景:成骨生长肽是新近发现的一种具有促进成骨作用的生长因子,其对骨髓基质细胞增殖分化作用受到越来越多的关注.目的:验证成骨生长肽在体外对骨髓基质细胞增殖和成骨向分化的影响.设计、时间及地点:随机对照实验,于2006-02/06在教育部口腔生物医学工程重点实验室完成.材料:6周龄雄性SD大鼠用于骨髓基质细胞提取:成骨生长肽为Sigma公司产品.方法:体外培养骨髓基质细胞,加入含不同浓度(10-11,10-10,10-910-8,10-7mol/L)成骨生长肽及小牛血清的α-MEM培养基培养,以单纯含小牛血清的α-MEM培养基培养作对照.主要观察指标:①骨髓基质细胞的鉴定.②用四甲基偶氮唑盐法检测细胞增殖情况.③酶联免疫法检测细胞内碱性磷酸酶的表达.④反转录-聚合酶链反应法检测细胞内核心结合因子1mRNA的表达.结果:成骨生长肽对骨髓基质细胞增殖有促进作用(P<0.05),大效应浓度为10-9mol/L;能增加细胞内碱性磷酸酶活性(P<0.05),大效应浓度为10-8mol/L:可诱导核心结合因子1mRNA的表达(P<0.05).结论:成骨生长肽可促进骨髓基质细胞的增殖,并通过诱导其内核心结合因子1mRNA的表达促进其成骨向的分化.
作者：黄姣；徐凌；王璐 刊期： 2009年第20期
背景:在细胞水平,胰岛素样生长因子结合蛋白3竞争性地与胰岛素样生长因子结合阻止了胰岛素样生长因子与其受体结合,从而抑制了胰岛素样生长因子的活性.目的:观察衰老细胞中调节性蛋白质胰岛素样生长因子结合蛋白3的生物学特征.设计、时间及地点:单一样本观察,于2006-09/2007-09在西安交通大学生物医学信息工程教育部重点实验室完成.材料:人胚肿二倍体成纤维细胞(2BS)购于中国生物制品研究所.方法:用Northern的方法显示胰岛素样生长因子结合蛋白3基因的表达在年轻和衰老的2BS细胞中存在差异:聚合酶链反应扩增出人类胰岛素样生长因子结合蛋白3上游包括5'-UTR区的2kb的序列,并用酶切得到4组不同长短的胰岛素样生长因子结合蛋白3启动子片段并确定可调控转录活性的区域;通过重叠寡核苷酸凝胶阻滞实验确定在该活性区域中的增强子元件-IEE(IGFBP-3 enhancerelement)及其与蛋白结合的碱基序列等;用DNase I Footprinting法确定了IEE中与蛋白结合的核心序列.主要观察指标:①胰岛素样生长因子结合蛋白3基因在年轻和衰老细胞中的表达差异.②通过重叠寡核苷酸确定增强子元件.③通过凝胶阻滞试验证实该复合物结合活性与衰老相关的.④通过凝胶阻滞试验确定IEE与蛋白结合的碱基序列.⑤用DNase I Footprinting法确定IEE中与蛋白结合的核心序列.⑥判断与IEE结合蛋白的相对分子质量.结果:与年轻的2BS细胞相比,衰老的2BS细胞中胰岛素样生长因子结合蛋白3基因的表达升高:5'-ccagcctgccaa gca gcg tgcCCCggttgc-3'是胰岛素样生长因子结合蛋白3的增强子元件;该元件与蛋白结合的核心序列是CTG CCA和GCGTGC CCC G,而且这种结合是与衰老相关的:结合蛋白的相对分子质量大约在27 000.结论:在2BS细胞中发现了一个新的转录增强子,它与蛋白结合的核心序列是CTGCCA和GCG TGC CCC G,可与一个大约27 000的蛋白结合:在衰老细胞中可选择性地促进胰岛素样生长因子结合蛋白3的表达.
作者：任文君；王群义；吕小凤；毛泽斌；蒋晓刚 刊期： 2009年第20期
背景:构建大鼠小肠移植模型是研究小肠移植排斥反应的重要基础,实验中对动物无法进行长期持续的静脉输液成为延误实验顺利开展的大障碍.目的:将自制旋转持续静脉输液装置与大鼠异位小肠移植模型相结合,验证输液装置的可靠性和动物模型的稳定性.设计、时间及地点:随机区组,对照观察实验.于2008-03/06在解放军第四军医大学西京医院消化病研究所全军医学重点实验室完成.材料:选用健康雄性近交系F344/NCrl BR大鼠48只为供体.LEW/Cd大鼠48只为受体,建立同种异体节段性异位小肠移植模型.方法:将移植后的大鼠以随机化完全区组设计分为3组(n=16):对照组、输液组和他克莫司治疗组.对照组大鼠仅行小肠移植,移植前后不做持续静脉输液.输液组大鼠给予持续输注肠外营养液.他克其司治疗组持续输注肠外营养液+静脉注射他克莫司0.5 mg/(kg·d).主要观察指标:移植后观察移植大鼠的一般状况和存活时间,并于移植后3,5,7 d分别取各组大鼠移植肠标本(n=3)进行组织病理学检查,每组剩余的大鼠作存活时间观察,观察期限为5周.结果:对照组大鼠甲均存活时间为(5.4±1.7)d,手术成功率56.3%.采用旋转输液装置的输液组和他克莫司治疗组大鼠手术成功率为90.6%,与对照组比较,差异有显著性意义(P<0.01).输液组大鼠平均存活(7.2±2.8)d,终全部死于急性排斥反应.他克莫司治疗组剩余大鼠的输液时间>30 d,存活时间超过5周,与对照组和输液组比较,差异有统计学意义(P<0.05).对照组和输液组大鼠术后3,5.7 d移植肠组织病理学检查分别符合轻、中、重度排斥反应.他克莫司治疗组大鼠术后3,5,7 d朱见明显排斥反应征象.结论:旋转持续静脉输液装置制作简单,固定安全可靠,能成功地为研究大鼠连续输液30 d以上,与异位小肠移植模型联合应用,能建立稳定可靠的排斥反应模型.
作者：杨建军；李孟彬；王为忠；王映梅；张洪伟 刊期： 2009年第20期
背景:白细胞介素13受体α 2与白细胞介素13结合后,不介导白细胞介素13功能,对白细胞介素13起负调控作用.有研究表明,溶血磷脂酸能增加人支气管上皮细胞白细胞介素13受体α 2的表达,从而抑制白细胞介素13的作用.目的:验证溶血磷脂酸对人肺成纤维细胞白细胞介素13受体α 2 mRNA表达的诱导作用.设计、时间及地点:mRNA水平的观察对照实验,于2007-07/2008-11在南昌大学医学院和江西省医学生物高技术重点实验室完成.材料:人肺成纤维细胞HFL-1购于中科院上海生化和细胞生物研究所.方法:培养HFL-1细胞,行时间依赖和剂量依赖实验.时间依赖实验采用1 μ mol/L溶血磷脂酸刺激细胞,分别于0,6,12,24 h收集细胞.剂量依赖实验分别用0,0.1,1,10 μ mol/L的溶血磷脂酸刺激细胞,12 h收集细胞.主要观察指标:显微镜下观察溶血磷脂酸对HFL-1细胞生长的影响,提取HFL-1细胞总RNA,用反转录-聚合酶链反应及图像分析法剑测溶血磷脂酸对HFL-1细胞白细胞介素13受体α 2 mRNA表达的影响.结果:溶血磷脂酸不影响HFL-1细胞生长.1 μ mol/L溶血磷脂酸刺激HFL-1细胞,白细胞介素13受体α 2 mRNA的表达增高,并呈时间依赖性.随着溶血磷脂酸浓度的增加,白细胞介素13受体α 2 mRNA的表达明显增加.1 μ mol/L溶血磷脂酸刺激HFL-1细胞,白细胞介素13受体α 2 mRNA的表达可达高峰.溶血磷脂酸对HFL-1细胞白细胞介素13受体α 1 的表达无影响.结论:溶血磷脂酸能促进人肺成纤维细胞HFL-1白细胞介素13受体α 2 mRNA的表达.
作者：何晓璐；石小玉；赵林；夏小春；李文林 刊期： 2009年第20期
背景:力量练习在体育锻炼过程中一直是老年人回避的问题,但是也有专家认为长期力量练习能有效减少胆固醇,降低血压,减少冠状动脉粥样硬化性心脏病的发病率,使老年人的平衡能力增强,从而保持活力.目的:验证老年人是否适宜进行力量练习,强化力量练习对男性老年人身体功能是否有良性刺激.设计、时间及地点:随机对照试验,于2006-06/2007-01在广州体育学院完成.对象:选择健康老年男性120名,均自愿参加试验.按随机数字表法分成对照组、一般组和力量组,每组40名.方法:对照组原来的生活习惯不发生改变;一般组按照有氧和无氧交替进行的方式运动;力量组在一般组的基础上,加入力量练习.主要观察指标:分别在试验前、试验1,7个月对相关功能指标进行测试.结果:实施运动处方后一般组和力量组安静脉搏适度下降,收缩压、舒张压下降(P<0.05),肺活量差异无显著性意义(P>0.05).力量组试验后时间肺活量明显升高(P< 0.01).试验1个月运动负倚试验指数明显F降(P<0.05),试验7个月对照组基本恢复到原来水平,力量组继续显著F降(P<0.05).结论:男性老年人强化力量练习后心脏收缩能力提高,血管的弹性略为增大,可有效改善呼吸系统的循环状态,降低肺残量,提高呼吸过程中对氧的利用率,运动负荷后恢复能力增强.
作者：李志敢 刊期： 2009年第20期
背景:目前对8岁以下儿童电除颤的有效剂量及安全范围尚无统一的规定.目的:使用自动体外除颤器及人工除颤器与儿童用电极对幼猪室颤模型除颤,进行有效性及安全性评价.设计、时间及地点:实验猪电除颤体外实验,于2006-10/2007-05在苏州大学实验动物中心动物手术室完成.材料:2月龄太湖猪30只,体质量7.0～25.0 kg,由常熟畜禽良种有限公司提供.方法:30只幼年太湖猪,按体质量随机分为自动体外除颤器组和人工除颤组,每组15只.诱发审颤2 min后分别以自动体外除颤器及人工除颤器50 J除颤,一次电击后立即进行心肺复苏,不复律的动物以70 J电击后联用心肺复苏.除颤后不同时间做血气分析、电解质及心肌晦谱检查、超声波心功能测定和神经学打分,72 h后处死作大体解剖.主要观察指标:动态监测整个实验过程动物心电图、血压、呼吸、体温等,检查除颤前后动物的超声心动图、血气、电解质、神经行为学打分以及大体解剖.结果:两组动物50 J一次电击后立即给与心肺复苏,复苏成功率达86.7%:部分猪放电除颤后心电图ST段压低或抬高,并在几分钟内回到基线;两组动物除颤成功后心脏射血分数、左心审面积变化分数3.0～4.0 h内均显著降低(P<0.05),72 h恢复正常;血液分析各项指标与试验前差别无统计学意义(P>0.05);复苏后神经行为和大体解剖未见片常.结论:应用成人双相波自动体外除颤器联用具备能量衰减配件的儿童专用电极,对7～25 kg的幼猪室颤模型取得了较满意的复苏效果.
作者：周正宇；王禹斌；周慧英；黄猛；谢承泰；薛智谋 刊期： 2009年第20期
中国组织工程研究杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
