刘磊；薛毅珑；蒲琳
背景:脱蛋白骨具有与宿主骨相似的生物组织,有利于骨细胞附着的三维支架,有助于新生毛细血管的长入和间质细胞的迁入,钙磷骨水泥是一种新型的可降解的、非陶瓷型骨水泥,其理化特性具有可塑性,反应不产热且具有一定的力学强度和孔隙率.目的:观察钙磷骨水泥复合重组人血管内皮细胞生长因子(rhVEGF)与重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)异体对脱蛋白骨关节移植修复骨关节缺损的促进作用.设计:随机对照观察.单位:重庆医科大学附属第一医院骨科.材料:选用36只成年杂交犬,雌雄不限,体质量(10±0.5)kg,实验动物由重庆医科大学动物中心提供.rhVEGF由北京博奥森生物技术有限公司提供.rhBMP-2由广州市达晖生物技术有限公司提供.钙磷骨水泥由上海瑞邦生物科技有限公司提供.方法:实验于2006-03/09在重庆医科大学临床学院骨科实验室(市级)完成,取36只实验犬,随机数字表法将杂交犬分成3组,每组12只.A组:钙磷骨水泥/rhVEGF/rhBMP-2/脱蛋白骨关节移植组;B组:rhVEGF/rhBMP-2/脱蛋白骨关节移植组;C组:单纯脱蛋白骨关节移植组.麻醉实验犬,距关节面30 mm处用线锯切断股骨,用交叉克氏针和钢丝将各组相应移植物固定于股骨断端,逐层缝合切口.以上4项检查均在术后4,8,12,16周进行.术后4,8,12,16周进行移植物X射线、组织形成学、股动脉新生血管分布及膝关节血流量检测,并对术后16周各组实验犬骨关节变曲应力进行分析.主要观察指标:①移植物X射线、组织形态学、股动脉新生血管分布及膝关节血流量检测结果.②各组实验犬骨关节弯曲应力分析结果.结果:纳入实验犬42只均进入结果分析.①术后4～6周,从X射线检查发现A组骨痂形成明显好于B、C组.②苏木精-伊红染色显示A组在各时间点再血管化均优于B、C两组.免疫组织化学图像分析显示术后4、8、12及16周A组血管内皮细胞生长因子和BMP-2的面积积分吸光度值明显高于B、C组,差异有统计学意义(P＜0.01).③墨汁灌注微血管分析结果显示A组术后各期移植物内新生血管较多,部分趋向成熟,与B、C组比较均有统计学意义(P＜0.01).④术后4周时各组手术侧膝关节较对侧血流量均增高,但A组显著增高,8周时进一步增高,12周时达到顶峰,16周时略有下降,但仍较B、C组高,差异有显著性意义(P＜0.01).⑤A组三点抗弯曲应力,强于B、C组(P＜0.01).结论:重组脱蛋白骨关节材料具有较强的再血管化和成骨能力,可早期与受体达到骨愈合修复骨关节缺损并终成为自身组织.
作者：瞿向阳；蒋电明；安洪 刊期： 2007年第27期
目的:利用RNA干扰技术抑制大鼠成骨细胞核激活因子受体配体(Ligand of receptor activator of NF-κB,RANKL)的表达,观察成骨细胞RANKL/骨保护素(osteoprotegerin,OPG)比值变化,探讨成骨细胞与破骨细胞生成的相关性.方法:实验于2006-05/10在四川大学华西医院移植免疫实验室(国家重点实验室)完成.①实验材料:体外化学合成4条RANKL序列特异性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),用Lipofectin2000TM转染成骨细胞.②实验方法:采用荧光实时定量聚合酶链反应检测RANKL mRNA的表达,筛选出有效的干扰序列.③实验分组:分为有效的siRNA转染组、阴性对照组和空白对照组,每组设5个平行样本.采用免疫组织化学染色检测成骨细胞中RANKL、OPG蛋白的表达,观察FANKL/OPG比值变化.④实验评估:采用成骨细胞、破骨细胞共培养技术观察以上3组转染后的成骨细胞对破骨细胞生成的影响.结果:①4种siRNA敲除RANKL基因后mRNA的表达:4种siRNA转染成骨细胞后,相对空白对照组,siRNA4分子对RANKL mRNA的抑制作用为明显,达到89%.siRNA1,siRNA3对RANKL mRNA的抑制作用大于50%,而siRNA2对RANKL mRNA的也有相当的抑制作用.②各组成骨细胞中RANKL和OPG蛋白水平:RANKL和OPG的阳性表达均显示为棕黄色颗粒,RANKL主要分布于成骨细胞的胞浆和胞膜,OPG主要分布于成骨细胞的胞浆.siRNA4转染组RANKL表达(平均积分光密度值)低于空白对照组(分别为3.05±2.17,11.31±1.26),差异有显著性意义(P＜0.01);阴性对照组与空白对照相比,差异无显著性意义(P＞0.05).siRNA4转染组、阴性对照组OPG表达与空白对照组比较,差异均无显著性意义(P＞0.05).siRNA4转染组RANKL/OPG比值低于空白对照组(分别为0.12±0.03,0.45±0.04),差异有显著性意义(P＜0.01).③转染的成骨细胞对破骨细胞生成的影响:各组共培养形成的破骨细胞形态与分离的成熟破骨细胞相似,为不规则形,胞浆红染,并有伪足形成.siRNA4转染组破骨细胞形成低于空白对照组、阴性对照组[分别为(12±2),(31±7),(28±5)个/孔],差异有显著性意义(P＜0.01);阴性对照组与空白对照相比,差异无显著性意义(P＞0.05).结论:RNA干扰沉默RANKL表达可下调成骨细胞RANKL/OPG比值,抑制破骨细胞的生成.
作者：高坤；镐英杰；张晖；裴福兴 刊期： 2007年第27期
目的:探讨肝细胞生长因子诱导前软骨干细胞向软骨细胞分化的机制.方法:实验于2005-12/2006-03在河南省正骨研究院完成.①实验材料:普通级新生兔10只,平均体质量3 kg.②实验干预:采用免疫磁珠分离技术分离新生兔长骨干骺端前软骨干细胞.利用肝细胞生长因子(浓度分别为0.5,1,2,4 μg/L)作用前软骨干细胞;另以2μg/L肝细胞生长因子作用前软骨干细胞,对照用相同剂量的培养基,检测前软骨干细胞Ⅱ型胶原及Ⅱ型胶原mRNA的表达.③实验评估:采用光学显微镜观察前软骨干细胞形态及生长情况;四甲基偶氮唑盐比色法检测前软骨干细胞的增殖;免疫荧光检测Ⅱ型胶原表达;反转录-聚合酶链反应检测Ⅱ型胶原mRNA的表达.结果:①前软骨干细胞形态及生长情况:分离纯化的前软骨干细胞贴壁稳定,在光学显微镜下呈多角和梭形,生长旺盛,曲光度好.②前软骨干细胞增殖情况:细胞增殖率上升,在24,48,72 h内呈时间浓度依赖.③Ⅱ型胶原表达:肝细胞生长因子作用第5天前软骨干细胞出现Ⅱ型胶原蛋白的表达.④Ⅱ型胶原mRNA的表达:在肝细胞生长因子刺激3 d开始出现表达,并且5 d,7 d逐渐增加.结论:肝细胞生长因子作用前软骨干细胞后,出现软骨特征标志抗原Ⅱ型胶原的表达,细胞增殖活性上升,表明肝细胞生长因子能诱导前软骨干细胞向软骨细胞方向分化.其机制可能是前软骨干细胞也存在肝细胞生长因子受体.
作者：饶耀剑；曹向阳；刘慧娟 刊期： 2007年第27期
目的:观察血管内皮生长因子对佐剂性关节炎滑膜细胞质金属蛋白酶3及质金属蛋白酶9表达的影响,并探讨其意义.方法:实验于2006-02/12在桂林医学院实验中心完成.①实验材料:清洁级8周龄雄性Wistar大鼠6只,血管内皮生长因子为Peprotech EC LTD公司产品,基质金属蛋白酶3(扩增369 bp)上游引物、下游引物,基质金属蛋白酶9(扩增405 bp)上游引物、下游引物均购自晶美公司.②实验干预:先用弗氏完全佐剂造Wistar大鼠模型;造模20 d后取Wistar大鼠右后足滑膜细胞进行原代培养.③实验分组:实验分为血管内皮生长因子组:取P2代细胞接种于6孔培养板,分别加入终浓度为5,25,50μg/L血管内皮生长因子;对照组:不加血管内皮生长因子.④实验评估:取病理切片观察滑膜细胞形态学改变;采用半定量反转录聚合酶链反应检测Wistar大鼠佐剂性关节炎滑膜细胞基质金属蛋白酶3及基质金属蛋白酶9的m-RNA表达.结果:①培养细胞的形态学观察:原代培养14 d滑膜细胞从组织块边缘逸出,21 d密集生长开始传代;传代细胞48 h可明显分辨出树突样细胞、巨噬细胞样细胞和成纤维细胞样细胞;传至21代,细胞生长及特性稳定.②病理切片:滑膜组织有中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞浸润,滑膜细胞增生、排列紊乱,纤维素渗出,胶原纤维沉着,纤维素样坏死,呈滑膜炎表现.③基质金属蛋白酶3、基质金属蛋白酶9的mRNA表达:对照组基质金属蛋白酶3 mRNA表达相对灰度值与血管内皮生长因子终浓度5,25,50 μg/L组比较,差异有显著性意义(0.32±0.03,0.77±0.06,1.12±0.12,1.59±0.02,P＜0.05);对照组基质金属蛋白酶9 mRNA表达相对灰度值与血管内皮生长因子终浓度5,25,50μg/L组比较,差异有显著性意义(0.47±0.07,0.50±0.10,0.91±0.10,1.31±0.06,P＜0.05);基质金属蛋白酶3和基质金属蛋白酶9mRNA表达随血管内皮生长因子浓度的加大表达增加.结论:血管内皮生长因子以剂量递增的方式对体外培养的佐剂性关节炎滑膜细胞基质金属蛋白酶3及基质金属蛋白酶9的表达有促进作用.
作者：莫汉有；周润华；王晓桃；杨敏；覃央；陈蓓莉；黄巍；莫东华 刊期： 2007年第27期
背景:有研究证实白色念珠菌细胞壁外发现有一层分泌的蛋白质,而近实验发现其具有荚膜结构.目的:通过改良荚膜肿胀试验观察白色念珠菌的荚膜结构.设计:观察对比实验.单位:赣南医学院病原生物学教研室.材料:菌株:中央标准株(菌号:CCCMC1a)由中科院真菌菌种保藏中心提供;国际标准株(菌号:ATCC 14053)由北京大学医院真菌菌种保藏中心提供.2株临床分离菌株(C1、C2),经中科院真菌菌种保藏中心鉴定为白假丝酵母菌.免疫血清用上述实验菌株全细胞抗原分别免疫家兔(由中山大学动物实验中心提供),常规制备免疫血清,备作荚膜肿胀试验用.方法:实验于2005-12在赣南医学院病原生物学教研室完成.①荚膜肿胀实验:将白色念珠菌培养物(C1,C2,CCCMC1a,ATCC)分别涂片,实验组1玻片加入相应的兔抗血清,对照组1加入正常兔血清,两组都加入1%美蓝置湿盒,37℃,20 min;取出玻片,盖上盖玻片,在油镜下用测微计测定40个菌细胞的荚膜厚度,计算平均值.②改良荚膜肿胀实验:将白色念珠菌培养物(C1,C2,CCCMC1a,ATCC)分别涂片,实验组2玻片加入相应的兔抗血清,对照组2加入正常兔血清,不加美蓝直接置湿盒内,37℃,20 min;取出玻片,不盖盖玻片,待其自然干燥,然后用HISS荚膜染色法进行染色,同样在油镜下用测微计测定40个菌细胞的荚膜厚度,计算平均值.主要观察指标:荚膜肿胀实验及改良荚膜肿胀实验各组荚膜厚度平均值.结果:①传统荚膜肿胀实验表现为阳性,实验组1白色念珠菌培养物C1,C2,CCCMC1a,ATCC荚膜厚度分别为(0.558+0.081),(0.530+0.081),(0.475+0.081),(0.600+0.068)μm,均大于对照组1[(0.225+0.061),(0.252+0.038),(0.200+0.072),(0.225+0.046)μm,P＜0.01].②改良荚膜肿胀实验组2白色念珠菌培养物C1,C2,CCCMC1a,ATCC荚膜厚度分别为(0.541±0.038),(0.510±0.060),(0.487±0.041),(0.595±0.027)μm,大于对照组2[(0.215±0.022),(0.247±0.018),(0.213±0.033),(0.220±0.016)μm,P＜0.01].③对照组2荚膜厚度小于对照组1(P＜0.01),实验组2荚膜厚度小于实验组1(P＜0.01).结论:作为一种定量试验,改良荚膜肿胀试验比传统荚膜肿胀试验更为稳定与准确.
作者：谢水祥；马廉兰；刘志春 刊期： 2007年第27期
背景:哺乳动物脊髓损伤后胶质瘢痕形成是神经再生的物理和化学屏障,减轻或延缓胶质瘢痕形成给损伤脊髓再生创造了有利条件.目的:设计筛选并构建大鼠胶质原纤维酸性蛋白短发夹样RNA真核表达载体.设计:观察性动物实验.单位:南方医科大学附属深圳医院脊柱外科.材料:选用Wistar大鼠25只,雌雄不拘,清洁级,体质量20～25 g.DMEM/F12、lipofectamine2000、Trizol RNA分离试剂盒;胎牛血清(Hyclone);BamH Ⅰ、HindⅢ、PstⅠ、SaⅡ、T4连接酶;质粒小提试剂盒、DNA凝胶回收试剂盒;第一链cDNA合成试剂盒;兔抗鼠GFAP一抗.方法:实验于2005-10/2006-06在南方医科大学附属深圳医院完成.针对GFAP基因全编码序列设计并合成3对9 bp茎环结构19 bp干扰序列特异性shRNA模板,体外定向克隆构建特异性重组质粒真核表达载体;通过体外大鼠脊髓源星形胶质细胞GFAP表达抑制模型,脂质体介导RNA干扰分子转染,由实时荧光定量RT-PCR及western blot技术,观察RNA干扰后原代星形胶质细胞GFAP表达抑制效果,筛选佳GFAP表达干扰抑制真核表达载体.主要观察指标:①序列特异性干扰shRNA模板合成;②构建特异性重组质粒真核表达载体;③体外大鼠脊髓源星形胶质细胞培养;④实时荧光定量RT-PCR;⑤RNA干扰后原代星形胶质细胞GFAP表达抑制效果.结果:序列测定证实GFAP-shRNA重组质粒真核表达载体构建成功,通过实时荧光定量RT-PCR、western blot技术筛选出佳GFAP-shRNA效应表达载体,在mRNA及蛋白表达水平抑制靶基因表达效率分别为81%、63%、56%.结论:构建并筛选成功的GFAP-shRNA效应真核表达载体,在大鼠原代星形胶质细胞GFAP表达抑制模型中能高效抑制GFAP-基因表达,为后续多靶点RNA干扰技术在脊髓损伤胶质瘢痕抑制基因治疗研究策略的应用奠定前期基础.
作者：高明勇；李振宇；闫洪印 刊期： 2007年第27期
目的:观察谷氨酸钠不同给药时程对幼年豚鼠视网膜神经节细胞损伤的程度,以建立简便而稳定可靠的视网膜兴奋毒性损伤模型.方法:实验于2005-03/2006-06在泰山医学院动物实验中心和形态学实验室完成.①实验材料:45～50 d(幼年)豚鼠35只,体质量280～320 g,雌雄不拘;谷氨酸钠(上海伯奥生物科技有限公司生产),纯度99%,pH 6.9～7.2,用生理盐水配成300 g/L溶液.②实验分组:采用随机数字法将豚鼠分成2组,即正常对照组5只、谷氨酸钠组30只(谷氨酸钠组根据用药时间又分为4个亚组,即1 d组5只、3 d组6只、7 d组9只,14 d组10只).③实验干预:谷氨酸钠组按3 g/kg体质量腹腔注射谷氨酸钠,分别连续1,3,7和14 d.④实验评估:给药后,再饲养10 d后取材,观察视网膜神经节细胞数目和形态学的变化.结果:①各组豚鼠视网膜光镜观察结果:谷氨酸钠1 d组视网膜神经节细胞未见明显形态学改变;3d组少数细胞发生皱缩;7 d组视网膜神经节细胞损伤较为明显,多数神经节细胞发生核固缩;14 d组动物半数死亡(5/10),视网膜神经节细胞损伤严重,明显脱失,残留细胞体积变小.②各组豚鼠视网膜神经节细胞密度:谷氨酸钠14 d组、7 d组视网膜神经节细胞密度与正常对照组比较差异均显著(P＜0.01),谷氨酸钠3 d组与正常对照组比较差别有统计学意义(P＜0.05),谷氨酸钠1 d组与正常对照组比较差异无显著性(P＞0.05).结论:谷氨酸钠对幼年豚鼠视网膜的毒性损伤与用药时程有关,按3 g/kg体质量腹腔注射,1次/d,连续7 d,能成功建立谷氨酸视网膜兴奋毒性豚鼠动物模型,且无一例死亡,损伤适中.
作者：杜长青；魏丽华；苏衍萍；刘立伟；石运芝；杜辉 刊期： 2007年第27期
目的:采用闭合复位带锁髓内针置入固定治疗股骨干骨折,术中常出现远端旋转畸形,利用C形臂X射线机并以健侧NH角(股骨头-颈轴线与水平台面的夹角)作为参照物,判断骨折端旋转移位程度是组织构建修复过程中必须解决的应用技术.方法:实验于2003-11/2006-05在河北北方学院附属第一医院骨科完成.①实验对象:20例保存完好的人尸体股骨标本由河北北方学院解剖学教研室提供.选取2003-11/2006-05河北北方学院附属第一医院骨科收治的56例股骨干骨折行闭合复位带锁髓内针固定患者,其中男38例,女18例.年龄21～65岁.②实验分组:将56例患者采用随机数字法分为2组,第1组26例,第2组30例.③实验过程:将20例股骨标本分别水平置于检查台上,观察股骨髁及股骨近端的C形臂X射线机侧位图像.股骨髁部X轴方向与股骨干长轴垂直,近端则与股骨干长轴呈30°、45°及60°的夹角.第1组患者,将骨折固定在股骨前倾角为15°的位置上;第2组患者,术中根据健侧股骨前倾角调整伤侧股骨干骨折的旋转对位并固定骨折.④实验评估:C形臂X射线机测量的股骨头-颈轴线与水平台面的夹角(NH)与裸骨测量所得的真实前倾角(AV)比较评估其准确性.术后3 d～2周CT扫描测量患者的双侧股骨前倾角,判断骨折远端旋转畸形的程度.结果:①股骨标本NH角与AV角数值测量结果:C形臂X射线机测量的NH角与裸骨测量所得的真实前倾角高度一致(0°～5°,平均2°).②两组患者术后前倾角和旋转移位:第1组旋转移位＜10°者占42%(11/26),＞20°者占15%(4/26);第2组所有病例的旋转移位＜10°.结论:股骨干骨折闭合复位内固定术中使用X射线透视设备可以客观地明确骨折远端的旋转角度,而以健侧股骨前倾角为标准来调整伤侧股骨的旋转对位更为准确.
作者：王军；李华；宁凤琴；杨新明；张军威 刊期： 2007年第27期
目的:观察大鼠肠缺血再灌注时肺及血液白细胞介素6、白细胞介素8和肿瘤坏死因子α的变化以及辅酶Q10的影响.方法:实验于2006-12/2007-02在滨州医学院药理学实验室和免疫学实验室(山东省重点学科三级实验室)完成.①实验分组:清洁级健康Wistar大鼠30只,体质量290～390 g,随机数字表法分为假手术组、肠缺血再灌注组,辅酶Q10处理组(缺血再灌注+辅酶Q10),每组10只.②实验方法:建立肠缺血再灌注模型,钝性分离肠系膜上动脉的根部,假手术组不作其他处理;肠缺血再灌注组再灌前30 min时经股静脉注入生理盐水10 mL/kg;辅酶Q10处理组再灌前30 min时经股静脉注入辅酶Q1010 mg/kg.③实验评估:酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组动物血液、肺组织匀浆及肺泡灌洗液中的白细胞介素6、白细胞介素8和肿瘤坏死因子α含量;光镜下观察肺组织形态学变化.肺泡灌洗液沉渣进行白细胞计数和分类.结果:纳入大鼠30只,均进入结果分析.①肺组织形态学变化:假手术组肺组织无病理改变;肠缺血再灌注组肺间质明显水肿,中性粒细胞浸润,有少量的出血和纤维蛋白渗出;辅酶Q10处理组肺间质轻度水肿,少量的中性粒细胞.②肺泡灌洗液白细胞计数组间无显著性差异,多形核细胞分类肠缺血再灌注组明显高于假手术组(P＜0.05),而辅酶Q10处理组与其他两组间差异无显著性意义(P＞0.05).③各组动物血液、肺组织匀浆及肺泡灌洗液中的白细胞介素6、白细胞介素8和肿瘤坏死因子α含量:与假手术组比较,肠缺血再灌注组血液、肺组织匀浆及肺泡灌洗液中白细胞介素6、白细胞介素8和肿瘤坏死因子α显著升高(P＜0.05或P＜0.01).与肠缺血再灌注组比较,辅酶Q10处理组血液、肺组织匀浆和肺泡灌洗液中白细胞介素6含量显著降低(P＜0.05);白细胞介素8和肿瘤坏死因子α含量在血液中显著降低(P＜0.05);而在肺组织匀浆中含量未见显著降低(P＞0.05);在肺泡灌洗液中含量亦未见显著降低(P＞0.05).结论:辅酶Q10可能通过抑制白细胞介素6、白细胞介素8和肿瘤坏死因子α炎性因子的释放,对大鼠肠缺血再灌后肺损伤有一定的保护作用.
作者：张树平；胡涛；栾海云；李庆忠；李淑翠；刘金苹 刊期： 2007年第27期
选择2005-01/2006-06在汕头大学医学院第一附属医院骨科行髋关节置换的患者80例,患者均知情同意.按入院顺序随机分为2组,每组40例.①系统机械性疗法组术前、术中、术后均未预防性应用抗凝药,只在术后进行作者自行设计的系统机械性疗法.②化学性疗法组术前、术中、术后均预防性应用抗凝药,并应用一般的功能锻炼.观察手术出血量及术后引流量情况.术后12 d行双下肢彩色超声多普勒检查,观测血栓形成情况.系统机械性疗法组、化学性疗法组患者术中、后的平均出血量分别为69～244 mL,74～332 mL;深静脉血栓形成发生率分别为2.38%,8.33%.系统机械性疗法预防深静脉血栓形成的效果优于化学性疗法,且无抗凝药增加出血量等并发症.
作者：陈丽珊；施楚君；张志坚；陈跃雄 刊期： 2007年第27期
目的:观察在去势大鼠股骨颈植入牛骨形成蛋白后其骨形态、骨密度及骨强度的变化.方法:实验于2006-06/12在解放军兰州军区兰州总医院骨科研究所完成.①实验材料:普通级3个月龄wistar雌性大鼠60只.骨形态发生蛋白冻干粉剂(从幼龄牦牛新鲜长骨皮质中提取).②实验分组:以同一只大鼠左右肢体为对照,右侧为实验侧,左侧为对照侧.③大鼠摘除卵巢制作绝经后骨质疏松模型经双能X射线骨密度仪检测筛选出造模成功的44只大鼠,实验侧距大转子0.5 cm处股骨颈植入牛骨形成蛋白冻干粉剂,对照侧植入牛血清白蛋白.④实验评估:术后4周、8周时麻醉下处死大鼠取材,应用苏木精-伊红染色,组织切片后光镜下观察、CT扫描、双能X射线骨密度仪及万能生物力学机观察大鼠股骨颈骨形态学、骨皮质厚度、骨密度及骨强度的变化.结果:纳入造模成功后的44只大鼠均进入结果分析.①股骨颈骨组织形态学观察:4周时实验侧股骨颈局部骨小梁完整、连续性尚好;对照侧股骨颈局部骨小梁稀少、连续性中断,不完整.8周时实验侧股骨颈骨小梁致密,数量增多、完整,连接成网状结构、分布均匀;对照侧股骨颈骨小梁稀疏、变细、间距变大,呈髓腔扩大.②骨皮质厚度、骨密度及生物力学测定:4周时实验侧和对照侧股骨颈皮质厚度无明显差异,骨密度及大载荷有明显差异(P＜0.05);8周实验侧较对照侧骨皮质厚度明显增加、骨密度、大载荷均增高[皮质厚度:(2.632±0.042),(1.728±0.034)mm,骨密度:(0.210±0.026),(0.182±0.029)g/mm2,大载荷:(97.2±8.1),(85.6±7.g)N,P均＜0.05].结论:植入牛骨形成蛋白可以提高去势大鼠股骨颈局部骨皮质厚度、骨密度及生物力学强度,这将可能为绝经后骨质疏松性股骨颈骨折的防治提供一种新的途径.
作者：汪玉海；刘兴炎；白孟海；葛宝丰；陈克明；吕明波 刊期： 2007年第27期
目的:观察太极拳运动对老年人血管内皮舒张功能的影响.方法:试验于2005-04/2005-10在邵阳学院完成.①试验分组:选择32名健康男性老年人,年龄(58±5)岁.纳入标准:受试对象身体健康,运动能力较好,同质性高,纳入者知情同意.排除标准:患有高血压、心力衰竭、心律失常、糖尿病、肝肾功能不全者.将试验对象非随机分为太极拳组和对照组,每组16人,两组对象试验前在年龄、血糖代谢控制、营养状况、肝肾功能、血压等差异性均无显著意义.②试验方法:太极拳组由专业教练员指导习练二十四式简化太极拳和四十八式太极拳,学习阶段1个月,45 min/次,5次/周;练习期5个月,60 min/d,5 d/周.对照组进行一般正常活动.③试验评估;运动前和运动后6个月对两组参与者血脂、血浆一氧化氮和血管内皮依赖性舒张功能测定.结果:纳入32名,均进入结果分析.①血脂和血浆一氧化氮的变化:与运动前比较,太极拳组总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇显著降低(P＜0.05);高密度脂蛋白胆固醇、血浆一氧化氮则显著升高(P＜0.05,P＜0.01).对照组锻炼前、后无明显变化.②肱动脉内皮舒张功能指标变化:与运动前比较,太极拳组静息状态肱动脉内径无明显变化;但反应性舒张程度较运动前显著提高(P＜0.05).对照组锻炼前后亦无明显变化.结论:太极拳运动能提高老年人内皮舒张功能,此作用可能与血脂改善和一氧化氮增加有关.
作者：李传武；曾瑶；彭峰林 刊期： 2007年第27期
目的:建立上颈椎三维有限元模型,以期应用于临床相关的生物力学实验研究中.方法:实验于2005-05/2006-01在南方医科大学解剖及生物力学实验室完成.选取2例自愿参与实验的健康青年男性,均经医院伦理委员会批准,且受试者知情同意.复习病史并行X射线平片检查排除枕颈部疾患.通过对正常人的CT薄层扫描获得原始DICOM图像数据,采用CAD数据处理技术进行计算机三维重建,改良建立的模型导入ANSYS 9.0软件进行计算机模拟仿真生物力学研究.结果:所建模型外观清晰逼真,几何相似性好.所建的上颈椎有限元模型能够通过验证,与体外生物力学实验结果基本吻合,可进一步行各种上颈椎有限元力学分析.结论:为临床对枕颈交界区有限元三维模型的建立提供了一种便捷而精确的方法,对计算机分析及研究该模型局部结构在各种受力情况下的生物力学表现创造条件.
作者：廖穗祥；夏虹；昌耘冰；张美超；蔡超；王建华；艾福志；尹庆水 刊期： 2007年第27期
背景:同型半胱氨酸已被证实是动脉粥样硬化发生的一个独立危险因素.目的:观察同型半胱氨酸对血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶1及金属蛋白酶组织抑制剂1的分泌量和活性的影响.设计:自身对照观察.单位:吉林大学再生医学科学研究所病理室.材料:体外培养的鼠龄4～6周,体质量150 g左右雄性Wistar大鼠的血管平滑肌细胞.大鼠由吉林大学白求恩医学部实验动物室提供.方法:实验于2001-05/2003-05在吉林大学再生医学科学研究所病理室完成.采用体外培养大鼠血管平滑肌细胞,分成5组,分别加入浓度为0(对照组),0.10,0.25,0.50和1.00 mmol/L同型半胱氨酸作用48 h,通过酶谱分析同型半胱氨酸对血管平滑肌细胞细胞基质金属蛋白酶1活性的影响,Western blot技术和半定量RT-PCR方法观察细胞基质金属蛋白酶1和金属蛋白酶组织抑制剂1分泌量及其mRNA的表达.主要观察指标:细胞基质金属蛋白酶1的活性,金属蛋白酶1和金属蛋白酶组织抑制剂1分泌量及其mRNA的表达.结果:①金属蛋白酶1和金属蛋白酶组织抑制剂1分泌量:半胱氨酸0.25,0.50和1.00 mmol/L组金属蛋白酶1显著低于对照组(P＜0.05～0.01);半胱氨酸0.10,0.25,0.50和1.00 mmol/L组金属蛋白酶组织抑制剂1均高于对照组(P＜0.05～0.01);②基质金属蛋白酶1活性随着半胱氨酸剂量增加而降低,0.50和1.00 mmol/L组降低显著(P＜0.01);③加入同型半胱氨酸4组金属蛋白酶1 mRNA表达显著低于对照组(P＜0.01)],半胱氨酸0.25 mmol/L组金属蛋白酶组织抑制剂1mRNA高于对照组(P＜0.05),0.50和1.00 mmol/L组显著高于对照组(P＜0.01)).结论:同型半胱氨酸通过抑制细胞基质金属蛋白酶1的分泌,抑制其酶活性,减少胶原降解而使胶原蓄积.提示同型半胱氨酸减少胶原降解可能是动脉粥样硬化的发病机制之一.
作者：任立群；王金凤；李永梅；张秀云；李广生 刊期： 2007年第27期
目的:观察正常人近端肾小管上皮细胞(HK2)是否表达黏附分子CD146,初步探讨CD146与肾小管上皮细胞的关系及其生理意义.方法:实验于2005-05/2006-02在上海交通大学医学院临床检验系实验室完成.①实验材料:人近端肾小管上皮细胞株(HK2,由中国科学院上海生物化学与细胞生物学研究所惠赠).②实验干预:体外培养的HK2连续观察72 h.③实验评估:采用倒置显微镜、光学显微镜下观察肾小管上皮细胞的形态;用反转录-聚合酶链反应方法检测CD146 mRNA的表达;流式细胞仪和免疫荧光法测定CD146蛋白质的表达及其定位;进一步在培养细胞的上清液中检测CD146的可溶性形式(sCD146).结果:①肾小管上皮细胞的形态学观察和鉴定:传代培养的HK2三四天融合后呈铺底,相关抗原检测抗人keratin阳性,抗Ⅷ因子相关抗原阴性.②CD146 mRNA水平的表达:HK2在培养早期(24 h)即表达CD146 mRNA(0.092±0.012),但延长细胞的培养时间似乎并没有进一步改变CD146 mRNA的表达水平(0.097±0.005,0.113±0.015,P＞0.05).③CD146蛋白质水平的表达和定位:CD146不仅位于肾小管上皮细胞膜上,而且在细胞核和胞浆中也有表达.体外培养的HK2相互融合时,位于细胞膜上的CD146表达增强,呈线性、持续性地表达于细胞-细胞间的连接部位,同时胞内的CD146标记也相应增强.④细胞上清液中sCD146的检测:HK2上清液中存在CD146的可溶性形式(sCD146).培养细胞观察24～72 h,sCD146水平在48 h升高[(18.00±0.80)μg/L],到72 h达到高峰[(29.33±1.22)μg/L],与24 h[(13.87±0.46)μg/L]比较,差异均有显著性意义(P＜0.05).结论:人近端肾小管上皮细胞组成性地表达CD146,是肾小管上皮细胞新的生物学标志;CD146在细胞内外的表达强度有赖于细胞间联系的建立和细胞增殖的程度,CD146在促进细胞生长和维持组织完整性等方面发挥重要作用.肾小管上皮细胞上清液中存在CD146的可溶性形式,sCD146在一定程度上也反映了细胞的生长和增殖状况.
作者：范瑛；汪年松；倪培华；王锋 刊期： 2007年第27期
目的:病理性瘢痕包括增生性瘢痕和瘢痕疙瘩,比较细胞外基质蛋白1基因在增生性瘢痕和瘢痕疙瘩中的表达差异并分析其意义.方法:实验于2003-05/2005-01在南方医科大学分子生物学研究所完成.病理性瘢痕标本来源于南方医院整形外科手术患者,正常皮肤组织来源于无瘢痕体质趋势及无免疫性疾病的包皮手术标本.术前均征求患者同意后方留取标本.抽提增生性瘢痕和瘢痕疙瘩与正常皮肤组织的总RNA,反转录并双色荧光标记,与含有细胞外基质蛋白1基因的人类基因表达谱芯片杂交,经荧光扫描、数据处理和统计学分析,比较细胞外基质蛋白1基因在3种组织中的表达差异.结果:①芯片杂交图像显示荧光信号强度较高,背景均一,符合重复性和可靠性的要求和分析标准.②细胞外基质蛋白1基因在瘢痕疙瘩组织中的表达为正常皮肤组织的3.32倍,而在增生性瘢痕中的表达仅为正常皮肤组织的1.09倍.结论:细胞外基质蛋白1基因在瘢痕疙瘩中高表达而在增生性瘢痕中无差异表达,提示细胞外基质蛋白1基因在瘢痕疙瘩中呈特异性表达.
作者：胡振富；李晓平；宋艳斌 刊期： 2007年第27期
目的:以往的心脏型脂肪酸结合蛋白多来自牛、鼠等动物心肌组织,本实验构建了人左心室心肌组织纯化心脏型脂肪酸结合蛋白的新方法.方法:实验于2005-01/03在南京医科大学第一附属医院心血管病研究所完成.①实验材料:人心室肌由南京医科大学第一附属医院心血管病研究所提供.②实验过程:取20 g人左心室肌在缓冲液中匀浆,多步骤离心后以(NH4)2SO4进行盐析→再次离心→沉淀缓冲液重悬透析得蛋白粗提液→Sephadex G-75凝胶过滤→电泳确定主要蛋白条带的收集管号合并收集→QSepharose Fast Flow阴离子交换层析→聚乙二醇浓缩→缓冲液透析得人心脏型脂肪酸结合蛋白.③实验评估:以SIGMA公司人心脏型脂肪酸结合蛋白为对照标准品;以Tricine-SDS-PAGE电泳鉴定相对分子质量;以鼠抗人脂肪酸结合蛋白单克隆抗体及羊抗鼠IgG对其进行Western印迹检测鉴定其特异性.结果:①Sephadex G-75凝胶过滤柱层析结果:各组分经Tricine-SDS-PAGE电泳检测证实,部分收集管中存在相对分子质量约14 400的人心脏型脂肪酸结合蛋白.②阴离子交换柱层析结果:在洗脱液NaCl浓度达6 mmol/L时,出现蛋白峰,人心脏型脂肪酸结合蛋白被洗脱;NaCl浓度达20 mmol/L时,蛋白峰降至基线,蛋白洗脱结束.③纯化的人心脏型脂肪酸结合蛋白鉴定结果:经电泳显示其相对分子质量约为14 000,纯度约为90%;Westem印迹证实其可被抗人脂肪酸结合蛋白单克隆抗体特异识别,与对照标准品SIGMA公司人心脏型脂肪酸结合蛋白结果一致.实验从20 g湿重心室肌中共纯化得到15.4 mg心脏型脂肪酸结合蛋白,得率为0.77 mg/g.结论:Sephadex G-75凝胶过滤柱层析及阴离子交换柱层析相结合,可用于人心脏型脂肪酸结合蛋白的纯化.
作者：季鹏；顾春荣；卞智萍；陈相健；张寄南；杨笛 刊期： 2007年第27期
目的:与全髋关节置换手术对比,观察髋关节表面置换术后生物力学参数的变化特点.方法:选择2004-04/2006-08于北京积水潭医院矫形骨科完成手术的金属对金属髋关节表面置换患者13例作为表面置换组,全髋置换组为15例人工全髋置换手术病例.入选病例均知情同意.比较两组间术后髋关节旋转中心位置、重力臂、股骨偏心距和颈干角,以及Shenton's线是否连续等5个生物力学参数.结果:28例患者全部进入结果分析,无脱落.①两组患者髋关节旋转中心高度和重力臂的改变差异无显著性意义(P=0.194,0.125);股骨偏心距的改变两组差异具有显著性意义(表面置换组:-1.08 mm,全髋置换组:5.6 mm,P=0.042).②表面置换组患者手术前后的颈干角间存在明显相关性(r=0.87,P＜0.01).③表面置换组中7例术前Shenton's线不连续,4例术后Shenton's线仍然不连续,全髋置换组有3例出现肢体延长.结论:髋关节表面置换手术可以较好的恢复髋关节旋转中心位置,但对股骨偏心距的恢复和颈干角的纠正及Shenton's的恢复不理想,其临床意义尚需观察.
作者：刘庆；张洪；周乙雄；殷建华 刊期： 2007年第27期
目的:比较补肾活血复方中药与激素替代疗法对绝经后骨质疏松患者血清细胞因子水平的影响.方法:选择深圳市龙岗区南岭医院中医骨伤科收治的绝经1年以上的骨质疏松症女性65例.①实验分组:采用随机数字表法分为补肾活血复方中药组35例和激素替代治疗组30例.实验经医院伦理委员会审批,患者均知情同意.②实验方法:补肾活血复方中药组给予补肾活血方(成分为淫羊霍、鹿角胶、山萸肉、补骨脂、当归、白芍、熟地黄、牛膝、木瓜、何首乌、寄生、续断、水蛭、甘草等)煎服,2次/d;激素替代治疗组给予替勃龙片(利维爱),每天睡前服1次,有子宫者每个周期加服安宫黄体酮6 mg/d,服用30 d.③实验评估:测定细胞因子水平:取两组患者全血加入2 mmol/L谷氨酰胺,100 U青霉素,100 mg/L链霉素,分布至2 mL的孔中,一半孔不作处理为空白对照组;一半孔加人多克隆刺激剂5 mg/L植物血凝素和25 mg/L脂多糖为刺激组.采用ELISA法测定白细胞介素1β、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α.结果:①两组白细胞介素6水平:补肾活血复方中药组低于激素替代治疗组,经多克隆刺激后也低于激素替代治疗组,差异均有显著性意义(P＜0.05).②两组白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α水平:空白对照和经多克隆刺激后差异均无显著性意义(P＞0.05).③两组细胞因子相关分析:白细胞介素1β、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α水平空白对照和经多克隆刺激后呈正相关,差异有显著性意义(r=0.712 5,0.658 7,0.842 1,P＜0.001).结论:补肾活血复方中药治疗及激素替代治疗对血清白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α的作用相近,补肾活血复方中药治疗对白细胞介素6的作用更强.
作者：曾武雄；盛璞义；舒友元；廖威明 刊期： 2007年第27期
目的:观察瘢痕疙瘩家系样本中Fas基因有无突变,探讨Fas基因突变在瘢痕疙瘩形成中的意义.方法:实验于2005-01/05在上海基康公司完成.①标本来自南方医科大学南方医院整形外科2005年收集的A和B两个瘢痕疙瘩家系,所有参与观察的家系成员均签署知情同意书.②采用聚合酶链反应及基因测序技术,分别以A家系两例患者的瘢痕疙瘩组织为观察对象,以其周围正常皮肤及外周静脉血作为自身对照;其配偶的外周静脉血作为正常对照.并以B家系中两例患者的外周静脉血作为不同家系间的对照.共取10份样本,4份组织样本,6份静脉血标本.检测10份样本中Fas基因外显子1～9的基因序列.结果:①基因测序发现所检测的10个瘢痕疙瘩家系标本Fas基因的1～8外显子均未发现突变.②2份瘢痕疙瘩组织标本在第9外显子编码区的11 bp,53 bp两个位点上存在单个碱基的基因突变或多态性改变.结论:瘢痕疙瘩Fas基因外显子9区段的基因结构异常极有可能造成Fas蛋白的功能改变,从而导致身体局部瘢痕疙瘩的形成.
作者：刘晓军；高建华；冯传波 刊期： 2007年第27期
中国组织工程研究杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
