学术投稿

RNA干扰血管平滑肌细胞高血压相关基因FXYD5表达及其功能研究

施翔翔;高瞻;伍新雷;黄周青;杨德业

关键词:RNA干扰, FXYD5, 高血压, 血管平滑肌细胞, Na+-K+-ATPase, 大鼠
摘要:目的:通过RNA干扰(RNAi)技术特异性沉默大鼠胸主动脉平滑肌细胞(CRL-1444)高血压相关基因FXYD5的表达,探索该基因在高血压发病机制中的作用.方法:设计并合成4个针对大鼠FXYD5基因的特异性siRNA片段(siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3、siRNA-4),以含非特异性编码序列的siRNA-con为对照.将上述4个片段及阴性对照通过阳离子脂质体法转染进大鼠胸主动脉平滑肌细胞株(CRL-1444)内,采用CCK-8法检测FXYD5基因特异性沉默后对平滑肌细胞增殖的影响,采用划痕法(Woundhealing法)检测FXYD5基因特异性沉默后对细胞迁移力的影响,采用超微量Na+-K+-ATPase测试盒检测FXYD5基因特异性沉默后对细胞膜Na+-K+-ATPase活性的影响.结果:荧光实时定量PCR结果显示siRNA-1使FXYD5的mRNA表达与空白对照组相比下降86.71%(P< 0.01);siRNA-2使FXYD5的mRNA表达与空白对照组相比下降90.17%(P< 0.01);siRNA-con对照组与空白对照组FXYD5的mRNA表达差异无统计学意义(P> 0.05).CCK-8法检测结果显示siRNA-1、siRNA-2两组与对照组间细胞增殖能力差异无统计学意义(P>0.05).划痕法检测细胞迁移力结果显示siRNA-1和siRNA-2两组平滑肌细胞迁移力低于siRNA-con对照组和空白对照组,差异有统计学意义(P< 0.01).Na+-K+-ATPas活性检测结果显示siRNA-1和siRNA-2两组平滑肌细胞Na+-K+-ATPas活性低于siRNA-con对照组(P< 0.05)和空白对照组(P<0.01).结论:RNAi技术能特异性沉默大鼠胸主动脉平滑肌细胞的FXYD5基因的表达水平;特异性沉默FXYD5基因表达后血管平滑肌细胞的增殖能力无明显变化,而细胞迁移力和细胞膜的Na+-K+-ATPase活性明显降低.
温州医科大学学报杂志相关文献
  • 胃癌组织中TRβ1和β-catenin的表达及其临床意义

    目的:探讨甲状腺激素受体β1 (thyroid hormone receptor β1,TRβ1)和β连环蛋白(β-catenin)在胃癌组织中的表达及其临床意义.方法:应用免疫组化SP法和RT-PCR技术检测80例胃癌组织及40例无癌胃黏膜组织中TRβ1和β-catenin蛋白、mRNA的表达,分析两者mRNA表达量与临床病理指标的关系.结果:胃癌组织和无癌胃黏膜组织中TRβ1蛋白的阳性表达率分别为16.25% (13/80)、80.00%(32/40);β-catenin蛋白的异常表达率分别为62.50% (50/80)、0(0/40).TRβ1 mRNA在无癌黏膜组织中的表达量高于癌组织(P<0.01),β-catenin mRNA则相反(P<0.01),且两者的表达量与肿瘤分化、淋巴结转移、浸润深度、TNM分期有关(P<0.05).结论:胃癌组织中TRβ1蛋白和mRNA的表达均减少,β-catenin则增加;两者mRNA表达量与胃癌的生物学行为有关.TRβ1和β-catenin有可能参与胃癌的发生、发展和侵袭转移.

    作者:杨小敏;徐晓武;郭群;袁吟迅;陈艳梅;潘丹 刊期: 2013年第10期

  • 糖预处理对重型创伤性脑损伤大鼠胰岛素敏感性的影响及其机制

    目的:研究糖预处理对重型创伤性脑损伤大鼠模型外周组织胰岛素敏感性的影响并探讨其机制.方法:健康成年雄性Wistar大鼠36只,随机分为创伤性脑损伤组、糖预处理组和对照组,每组各12只.采用Feeney自由落体法制备重型颅脑创伤模型.测定各组伤前伤后各时段血糖和血清胰岛素,以IAI公式法计算胰岛素敏感性变化.同期在各采血点时刻取骨骼肌和皮下脂肪组织样本,以RT-PCR法测定其葡萄糖转运蛋白4 (GLUT4) mRNA的表达量.结果:与对照组比,伴随胰岛素敏感性的下降,创伤性脑损伤组出现相应时刻脂肪组织GLUT4 mRNA表达量降低(分别在伤后24 h和72 h,P<0.01),而骨骼肌组织则无类似变化.与创伤性脑损伤组比较,糖预处理组脂肪组织GLUT4 mRNA表达下降较少(P< 0.05).结论:在重型创伤性脑损伤大鼠模型上存在胰岛素敏感性的暂时性下降即胰岛素抵抗的现象,骨骼肌和脂肪组织在GLUT4转录水平上存在生物学行为的差异,但难以用该变化来解释胰岛素抵抗的发生.糖预处理具有减轻胰岛素抵抗的作用,但其作用位点不在GLUT4 mRNA水平.

    作者:朱烈烈;戴慧芳;李永领;陈大庆 刊期: 2013年第10期

  • RNA干扰血管平滑肌细胞高血压相关基因FXYD5表达及其功能研究

    目的:通过RNA干扰(RNAi)技术特异性沉默大鼠胸主动脉平滑肌细胞(CRL-1444)高血压相关基因FXYD5的表达,探索该基因在高血压发病机制中的作用.方法:设计并合成4个针对大鼠FXYD5基因的特异性siRNA片段(siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3、siRNA-4),以含非特异性编码序列的siRNA-con为对照.将上述4个片段及阴性对照通过阳离子脂质体法转染进大鼠胸主动脉平滑肌细胞株(CRL-1444)内,采用CCK-8法检测FXYD5基因特异性沉默后对平滑肌细胞增殖的影响,采用划痕法(Woundhealing法)检测FXYD5基因特异性沉默后对细胞迁移力的影响,采用超微量Na+-K+-ATPase测试盒检测FXYD5基因特异性沉默后对细胞膜Na+-K+-ATPase活性的影响.结果:荧光实时定量PCR结果显示siRNA-1使FXYD5的mRNA表达与空白对照组相比下降86.71%(P< 0.01);siRNA-2使FXYD5的mRNA表达与空白对照组相比下降90.17%(P< 0.01);siRNA-con对照组与空白对照组FXYD5的mRNA表达差异无统计学意义(P> 0.05).CCK-8法检测结果显示siRNA-1、siRNA-2两组与对照组间细胞增殖能力差异无统计学意义(P>0.05).划痕法检测细胞迁移力结果显示siRNA-1和siRNA-2两组平滑肌细胞迁移力低于siRNA-con对照组和空白对照组,差异有统计学意义(P< 0.01).Na+-K+-ATPas活性检测结果显示siRNA-1和siRNA-2两组平滑肌细胞Na+-K+-ATPas活性低于siRNA-con对照组(P< 0.05)和空白对照组(P<0.01).结论:RNAi技术能特异性沉默大鼠胸主动脉平滑肌细胞的FXYD5基因的表达水平;特异性沉默FXYD5基因表达后血管平滑肌细胞的增殖能力无明显变化,而细胞迁移力和细胞膜的Na+-K+-ATPase活性明显降低.

    作者:施翔翔;高瞻;伍新雷;黄周青;杨德业 刊期: 2013年第10期

  • 磺胺类药物电喷雾质谱高能裂解规律

    目的:获取15种磺胺类药物(SAs)的ESI正离子模式下高分辨质谱碎片信息,并研究其裂解规律,探讨高能诱导裂解(HCD)技术的应用价值.方法:利用LTQ-Orbitrap XL线性离子阱-轨道离子阱高分辨组合式质谱仪的HCD技术对常见的15种SAs在高能裂解池中的裂解规律进行研究,并对比HCD和碰撞诱导解离(CID)技术两种裂解模式的差异.结果:15种SAs均产生共有碎片离子峰:[C6H6NSO2]+m/z156.01138、[C6H6NO]+m/z 108.04439、[C6H6N]+m/z 92.04948和[C5H5]+m/z 65.03858;与CID相比,HCD技术能提供更为丰富的裂解碎片信息,改善CID裂解中产生的低质量碎片丢失(cut-off)效应.结论:HCD技术能够提供丰富的裂解碎片信息,为磺胺类化合物的结构解析和确证提供更详实的依据.

    作者:王敏;张海燕;杨金良;刘鑫;严华;李建辉;张朝晖;崔凤云;何悦 刊期: 2013年第10期

  • 前列地尔注射液联合吡格列酮治疗早期糖尿病肾病的临床观察

    目的:探讨前列地尔注射液联用吡格列酮对糖尿病肾病(DN)早期的临床治疗效果.方法:纳入180例DN早期患者,按随机单盲法分为三组.在糖尿病的基础治疗的前提下,前列地尔组60例患者静脉注射前列地尔,吡格列酮组60例患者口服吡格列酮,联合组60例患者二者联用.三组均治疗1个疗程,4周为1个疗程,观察其肾功能及尿蛋白指标,包括血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、24 h尿蛋白量(Upr)、尿微量清蛋白(UAER)、血清同型半胱氨酸(Hcy)和β2-微球蛋白(β2-MG);血脂指标包括血清总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C).结果:三组患者治疗后BUN、Scr、Upr、UAER、Hcy和尿β2-MG均下降(P<0.05),且联合组治疗后BUN、Scr、Upr、UAER、Hcy和尿β2-MG水平均低于前列地尔组及吡格列酮组(P<0.05).三组患者治疗后TC、TG、HDL-C和LDL-C均显著下降(P< 0.01),且联合组低于前列地尔组及吡格列酮组(P<0.05).结论:前列地尔注射液联合吡格列酮治疗早期DN的疗效显著,优于单用前列地尔注射液和吡格列酮.

    作者:康俏玲 刊期: 2013年第10期

  • 术前联合希罗达同步放化疗治疗中低位直肠癌近期疗效观察

    目的:探讨术前三维适形放疗联合希罗达同步化疗治疗中低位直肠癌的临床疗效.方法:24例中低位直肠癌患者,采用Pinnacle 6.2适形治疗计划系统,据国际辐射单位及测量委员会(ICRU)第50号文件定义肿瘤区(GTV)、临床靶区(CTV)及计划靶区(PTV),PTV处方剂量为50.4 Gy/28 F/5.6 W.放疗第1天开始希罗达口服化疗,剂量为1 650 mg/ (m2·d),每日2次口服,连续口服14 d,休息1周,共2个周期.疗效评价包括病理降期率(T、N)、病理完全缓解率(pCR)、保肛率.治疗不良反应按照CTC 3.0毒性标准进行评价.结果:放化疗后4~6周接受手术,手术按全系膜切除原则,术后病理pCR为16.7% (4/24),总降期率为79.2% (19/24),低位直肠癌保肛率为55.6% (5/9),无观察到3级以上不良反应.结论:中低位直肠癌新辅助放化疗中应用希罗达化疗是安全有效的,可以取得较好的病理缓解率和降期率,并且不良反应临床可接受.

    作者:刘艳梅;应申鹏;于进;梁勇 刊期: 2013年第10期

  • 医学生英语自主学习能力培养教学实践

    本文从医学院校及医学生实际出发,基于培养医学院校大学生自主学习能力这一目的,对合作小组在医学院校大学英语教学中的运用进行了实践探讨.经过一学期的教学实践,此种教学方法取得了良好的效果.

    作者:章艳乐;王丹 刊期: 2013年第10期

  • 三氧化二砷联合5-氟尿嘧啶对小鼠肝癌H22细胞株的抑制作用

    目的:探讨三氧化二砷(As2O3)联合5-氟尿嘧啶(5-FU)对小鼠肝癌H22细胞株的抑制作用,为提高治疗肝癌的临床效果、降低毒性和克服耐药提供实验依据.方法:采用MTT法检测不同浓度(终浓度为0.5、1.0、2.0 μg/mL)的As203、5-FU(终浓度为20 mg/L)和以上各浓度As203联合5-FU体外作用于小鼠肝癌H22细胞24、48、72 h后对细胞增殖的影响,并计算细胞生长抑制率和两药物相互作用系数(CDI);采用TUNEL荧光染色法检测细胞凋亡,观察各组细胞凋亡情况并计算凋亡率.结果:体外As2O3或5-FU单药对小鼠肝癌H22细胞有显著抑制增殖及诱导凋亡的作用,并呈一定的时间、浓度依赖性.As203联合5-FU对小鼠肝癌H22细胞的抑制增殖及诱导凋亡作用较同时间内相应单药组效果明显提高.计算两药CDI值,各浓度As2O3与5-Fu联合作用H22细胞24和48 h时,均为CDI<1,作用72 h时,均为CDI=1,说明两者在48 h内具有协同作用,72 h时为相加作用.结论:体外As203和5-FU对小鼠肝癌H22细胞有明显地抑制增殖和诱导凋亡作用,并且呈时间和剂量依赖性;联合应用较单药效果明显增强,在48 h内两药具有协同作用,72 h时两药作用相加.

    作者:金洲祥;王向昱 刊期: 2013年第10期

  • 利用血清miRNAs表达谱分析荔枝核提取物降低db/db小鼠血糖的可能机制

    目的:利用血清miRNAs表达谱初步分析荔枝核提取物降低db/db小鼠血糖的可能机制.方法:荔枝核提取物连续灌胃治疗12周,追踪观察其对db/db小鼠体质量、空腹血糖、糖耐量和胰岛素耐量等的影响,并利用血清miRNAs芯片初步分析血清中miRNAs的改变,然后通过Rea1-time PCR确定组织中相关基因的表达改变.结果:db/db小鼠荔枝核处理组与未处理组相比,体质量、摄食量均无明显改变(P>0.05);但饮水量在灌胃6周时明显减少(P< 0.05);空腹血糖值明显下降(P<0.05).血清miRNAs芯片结果显示db/db小鼠荔枝核处理组miRNAs表达谱出现明显改变,其中均来自于Sfmbt2第10内含子的mmu-miR-297a-3p、mmu-miR-669f-5p、mmu-miR-467d-3p、mmu-miR-466c-5p表达一致性下降;并且Sfmbt2在肝脏组织中表达出现明显下降,为未处理组的64.4%,Sfmbt2在肌肉组织中表达无明显改变.结论:荔枝核灌胃治疗可明显降低db/db小鼠的空腹血糖水平;可改变血清中miRNAs的表达量及肝脏中Sfmb t2的表达量;考虑荔枝核提取物对db/db小鼠的降糖作用可能与miRNAs及Sfmbt2参与的机制有关.

    作者:张婷;郭景阳;乔敏敏;杨宇;陈琳;李春梅;吕建新 刊期: 2013年第10期

  • 甲状旁腺素、降钙素和阿仑膦酸钠治疗绝经后妇女骨质疏松症的疗效比较

    目的:比较甲状旁腺素、鲑降钙素、阿仑膦酸钠对绝经后妇女骨质疏松症的疗效.方法:对110位确诊患有骨质疏松症的绝经后妇女进行随机分组,分别接受甲状旁腺素20 μg/d皮下注射(36例)或鲑降钙素200 IU/d鼻内给药(36例)或阿仑膦酸钠70 mg/周口服(38例),共24周.测定主要指标为从基线到终点腰椎骨密度(BMD)变化量;次要指标为从基线到终点全髋BMD变化量及血清骨钙素含量的变化.对结果进行分析比较.结果:共100例患者完成治疗,10例患者中途退出研究.甲状旁腺素组(n=36)在增加患有骨质疏松症的绝经后中国妇女腰椎BMD及血清骨钙素含量方面明显优于降钙素组(n=31)及阿仑膦酸钠组(n=33),在改变全髋BMD方面与降钙素组及阿仑膦酸钠组无明显差别.结论:与降钙素及阿仑膦酸钠相比,甲状旁腺素在促进患有骨质疏松症的绝经后妇女的骨形成方面的效果更佳.

    作者:陈成旺;潘孝云;薛恩兴;温宏 刊期: 2013年第10期

  • 出院后护理干预对断指再植患者功能锻炼的影响

    目的:探讨出院后护理干预对断指再植患者功能锻炼的影响.方法:选取2010年9月至2012年10月在我院经过手术治疗,断指指体存活的出院患者112例(178指),按照出院顺序,随机分成实验组和对照组,对照组患者给予常规护理,实验组患者在给予常规护理的基础上,采取多种形式的出院后护理干预.结果:实验组患者功能锻炼的完全依从率高于对照组患者(P<0.05)而不依从率低于对照组;实验组患者患指运动、感觉功能恢复情况优于对照组患者(P< 0.05).结论:对断指再植出院患者,给予多方面的护理干预,可提高患者功能锻炼的依从性,促进患指运动、感觉功能的恢复.

    作者:徐小;许雅;吴蓓茸;辛松建 刊期: 2013年第10期

  • Ⅲ期青年胃癌生存分析

    目的:探讨与治疗相关的影响青年胃癌生存的独立预后因素.方法:对78例年龄≤ 40岁,手术分期Ⅲ期的青年胃癌患者进行生存分析.结果:1、3、5年生存率分别为80.8%、34.6%、9.6%,中位生存时间为28个月,中位无疾病进展时间为14个月;多因素分析表明阴性淋巴结数、化疗次数、中草药治疗是影响预后的独立因素.结论:阴性淋巴结个数>15、化疗次数≥6、中草药治疗能使Ⅲ期青年胃癌患者延长生存期,多学科合作、规范化和个体化的治疗,是提高胃癌患者生存率的关键.

    作者:徐丽华;陈素秀;蒋亦燕;王红 刊期: 2013年第10期

  • 新生儿听力筛查依从性的临床干预

    目的:探讨新生儿听力筛查依从性的临床干预,为提高新生儿听力筛查覆盖率、降低未通过听力筛查的婴幼儿的失访率,提供科学有效的方法.方法:回顾性调查统计本院2006年10月-2009年9月新生儿听力筛查覆盖率、未通过听力筛查的婴幼儿失访率,分析讨论筛查率低、失访率高原因,并提出干预控制措施;前瞻性监测2010年10月-2012年9月新生儿听力筛查覆盖率、未通过听力筛查的婴幼儿失访率,比较干预前后新生儿听力筛查率、失访率变化.结果:干预前本院新生儿听力筛查初筛率为75.27%,复筛率为52.13%,失访率为82.01%,而干预后初筛率为97.14%,复筛率为91.77%,失访率为40.19%,干预前后比较差异均有统计学意义(P< 0.01).结论:新生儿听力筛查依从性的临床干预,可提高家属对新生儿听力筛查重要性的认识,有效提高筛查覆盖率,降低未通过听力筛查婴幼儿的失访率,有助于早诊断、早干预.

    作者:倪惠兰;赵丹丹;赵徐静;蔡艳芷;张微;朱艳乐;杨健美 刊期: 2013年第10期

  • SavR在体检人群中诊断左心室肥大的临床意义

    目的:探讨心电图SavR在体检人群中诊断左心室肥大的临床意义.方法:入选对象分成两组,观察组为体检时超声心动描记术诊断为左心室肥大者;无左心室肥大的健康人员为对照组,各100例.分别测量常规12导联SavR、RV5+SV1波群电压值,分析SavR、RV5+SV1诊断左心室肥大的敏感性和准确性.结果:观察组检出SavR≥ 1.4 mV 42例,Rv5+SV1 53例,两者联用检出83例,对照组检出SavR≥1.4 mV 3例,RV5+SV118例,两者联用检出21例.SavR>1.4 mV、RV5+SV1检出率观察组分别为42%、53%,对照组为3%、18%,两组差异有统计学意义(P< 0.01).结论:单项SavR判断左心室肥大敏感性低,但特异性高,在健康保健体检中常规心电图描记到SavR≥ 1.4 mV高度提示左心室肥大可能,联合RV5+SV1测量更能提高诊断左心室肥大的准确性.

    作者:林丽萍;王荷特;廖帆;钱成环;潘炳林 刊期: 2013年第10期

  • p16和ProEx C在宫颈活检低度鳞状上皮内病变中的表达及意义

    目的:探讨p16和ProEx C在宫颈活检低度鳞状上皮内病变(LSIL)中的表达及预后意义.方法:141例宫颈活检诊断LSIL的病例,包括术后诊断高度鳞状上皮内病变(HSIL) 83例及LSIL 58例,用免疫组织化学EnVison法检测其p16和ProEx C的表达情况.结果:①p16在LSIL组和HSIL组中阳性率分别为25.9% (15/58)和78.3% (65/83),ProEx C在LSIL组和HSIL中阳性率分别为36.2% (21/58)和63.9% (53/83),差异均有统计学意义(P<0.01).②当p16和ProEx C同时阳性时其特异度达87.9%,当p16和ProEx C其中之一阳性时其灵敏度达89.2%.结论:p16和ProEx C是预测HSIL的有用指标,对p16和ProEx C阳性患者应尽早手术治疗.

    作者:潘升华;安慧敏;吴文珍;孙利敏;张亮;陈国荣;夏康;池晓萍 刊期: 2013年第10期

  • 支气管哮喘相关苹果iOS系统手机应用的分析

    目的:对苹果官方应用商店手机支气管哮喘相关应用的有用性、科学性等进行分析,为应用开发者与使用者提供参考.方法:用“Asthma”作为关键词在苹果官方应用商店搜索相关应用,每个应用均让呼吸内科专业医师进行详细评估,评估基于应用内容、相关医学指南、医学专业知识与进展等.结果:免费应用比付费应用更有用(P< 0.05);医疗机构发布的应用比非医疗机构发布的应用更有用(P<o.05),科学性更强(P<0.05);针对医师的应用在科学性方面高于针对患者的应用(P<0.05).结论:医疗机构开发、目标用户为医师、免费的应用在有用性、科学性方面,高于非医疗机构开发的、目标用户为患者的、付费的应用.

    作者:卢瑶;薛必成;高志宏;王华晓;李玉苹;陈彦凡;谢于鹏;Stephen Osei Ampong 刊期: 2013年第10期

  • 医学院校本科招生生源综合质量评价模型的实证研究

    利用统计学的因子分析法,根据浙江某医学院校各地区的招生统计数据,探索建立医学院校本科招生生源综合质量分析模型,开展分省招生生源综合质量评价实践,为高等医学院校编制招生计划及提高招生生源综合质量提供有效的参考信息.

    作者:陈峰;曹建明;许冬武;王世泽;钱君 刊期: 2013年第10期

  • 精神科和神经科医师对躯体形式障碍诊断的比较

    目的:探讨精神科和神经科医师对躯体形式障碍的诊断差异及疾病发展变化.方法:收集98例躯体形式障碍的门诊病例,由精神科和神经科组分别诊断或联合诊断,然后进行比较,并对其进行5年随访.结果:64例躯体形式障碍5年随访结果2例诊断为恶劣心境,3例诊断为精神分裂症,2例诊断为强迫症,1例诊断焦虑症,56例继续诊断躯体形式障碍.结论:神经科和精神科专家对躯体形式障碍的诊断无明显差异,诊断为躯体形式障碍的患者随着时间的延长、症状的变化导致了其他诊断.

    作者:土文珍;石华孟;王小同;黄汉津;胡立荣;林崇光;郭晗峰;杨闯;韩丽雅 刊期: 2013年第10期

  • 有晶状体眼后房型人工晶状体植入联合角膜松解术的手术护理

    目的:探讨有晶状体眼后房型人工晶状体(PCPIOL)植入联合角膜松解术(AK)治疗高度近视及散光的护理配合.方法:对38例(66眼)高度近视合并散光患者行PCPIOL植入联合AK,观察术前及术后佳矫正视力、屈光度、散光、眼压等结果,并对患者的护理配合进行回顾性分析与总结.结果:术中医护配合密切,所有手术均顺利完成.患者术后等效球镜度、散光度数明显下降,佳矫正视力显著提高,佳矫正视力≥4.7者占84.8%,佳矫正视力≥5.0者占36.4%.眼压均在正常范围内,无一例发生感染或出现手术意外,手术及护理效果满意.结论:充分的术前准备,熟练的手术配合,术后完善的护理是保证手术成功的重要因素.

    作者:张佩华;姜红晓;陈芳 刊期: 2013年第10期

温州医科大学学报杂志

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主管:温州医科大学

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