学术投稿

重组人酸性成纤维细胞生长因子改构体在大肠杆菌中

袁辉;刘笑迪;谭毅;林绍强;杨树林;李校堃

关键词:重组人酸性成纤维细胞生长因子改构体, 质粒稳定性, 大肠杆菌, 诱导, 酶切图谱
摘要:目的:提高重组人成纤维细胞生长因子改构体在大肠杆菌工程菌表达体系E.coli BL21(DE3)/pET3c-haFGF中的表达水平.方法:从菌种和培养基筛选做起,选择了全合成的YH培养基做大肠杆菌表达体系E.coli BL21(DE3)/pET3c-haFGF的发酵培养基,并从多角度研究了其质粒的稳定性,设计了生长期不添加抗生素、诱导前离心去除β-内酰胺酶同时添加氨苄青霉素的方法,通过密码子偏爱性和定点PCR突变技术改变β-内酰胺酶的表达强度.结果:经50代传代试验,质粒分配稳定性在90%以上,PstI酶切图谱显示结构稳定性达100%,表达水平维持在25%~28%.LBAmp平板揭示了诱导过程中工程菌丧失表达能力的部分原因,诱导前离心的实验使表达水平提高13.68%,在IPTG浓度0.3 mmol/L、氨苄青霉素添加量50 μg/ml时,表达效率提高了25%.结论:本研究建立的工艺操作较为简便易行,易于放大,具有较大的经济意义.
温州医科大学学报杂志相关文献
  • 产妇焦虑、抑郁与分娩疼痛的相关性分析

    目的:探讨临产妇心理应激状态对分娩疼痛程度的影响.方法:筛选84例初产妇作为调查对象,对所有孕妇均于入院时应用Zung编制的焦虑自评量表(SAS)、抑郁自评量表(SDS)进行心理状态评估,以视觉模拟评分(VAS)作为测量分娩疼痛指标;以有无参加产前教育为界分教育组和非教育组,以SAS、SDS平均分为标准将本组产妇分为高分组和低分组.结果:教育组SAS、SDS均分较非教育组的低;SAS、SDS高分组的VAS值较SAS、SDS低分组的VAS值高;SAS和SDS评分与分娩过程疼痛VAS值呈正相关(P<0.01).结论:产前教育能改善产妇焦虑和抑郁状态,焦虑、抑郁明显影响分娩疼痛程度.

    作者:陈淑娟;周美茜;蒋彩燕;张文淼 刊期: 2007年第04期

  • 红花对兔肺缺血再灌注损伤时细胞凋亡及caspase-3的影响

    目的:探讨细胞凋亡与肺缺血再灌注损伤的关系以及红花注射液的干预作用及其机制.方法:健康日本大耳白兔36只,随机分为对照组(C组)、缺血再灌注组(IR组)和红花干预组(SI组).复制在体肺缺血再灌注损伤模型.对比观察各组肺湿干重比(W/D)、肺泡损伤数定量评价指标(IQA);采用原位缺口末端标记(TUNEL)法观测肺组织细胞凋亡指数,原位杂交技术检测肺组织细胞caspase-3基因的表达.结果:IR组W/D、IQA、肺组织细胞凋亡指数及caspase-3mRNA表达均显著高于C组(P<0.01).SI组上述各指标明显低于IR组(P<0.01或P<0.05).肺组织细胞凋亡指数与W/D、IQA及caspase-3mRNA均呈显著正相关(r分别=0.920,0.925,0.927;P均<0.01).结论:肺组织细胞凋亡参与了肺缺血再灌注损伤的发生,红花注射液可能通过下调caspase-3的表达抑制肺组织细胞凋亡,从而减轻肺缺血再灌注损伤.

    作者:戴雍月;徐正祄;王万铁;邱晓晓;陈锡文 刊期: 2007年第04期

  • 电子胃镜检查致呼吸心跳骤停一例

    患者,女,69岁.一年来反复发作上腹部隐痛不适,饱胀嗳气,治疗不佳.体检:一般情况良好,心肺听诊无殊,腹软肝脾未及,无压痛,无肿块,浅表淋巴结未及肿大,右上肢因脑梗塞后遗症肌力肌张力约Ⅲ级,左上、双下肢正常.

    作者:毛传富 刊期: 2007年第04期

  • 儿童喘息性疾病与衣原体抗原检测分析

    衣原体是一类有独特发育周期,严格细胞内寄生的原核细胞型微生物,其中肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniac,CPn)和沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,CTr)是引起小儿呼吸道感染的常见病原体.

    作者:周晓聪;陈小芳;董琳;罗运春;李昌崇 刊期: 2007年第04期

  • 间歇梯度充气加压装置在预防腹腔镜胆囊切除术下肢静脉血液淤滞中的应用

    目的:探讨腹腔镜胆囊切除术(LC)过程中股静脉血流动力学的变化和使用间歇梯度充气加压装置预防腹腔镜胆囊切除术下肢静脉血液淤滞效果.方法:将腹腔镜胆囊切除术病人随机分成使用间歇梯度充气加压装置组(IPC)和不使用间歇梯度充气加压装置组(NIPC),使用彩色多普勒超声诊断仪分别测定3个不同时期(BL、PP & RT、PO)股静脉流速.结果:NIPC组PP & RT时与BL时比较,股静脉平均血流流速下降69%,差异有显著性(P<0.05).PO时与BL时比较股静脉平均血流流速差异无显著性(P>0.05).IPC组PP & RT时与BL时比较,股静脉平均血流流速无明显下降,差异无显著性(P>0.05).PP & RT时,IPC组与NIPC组比较差异有显著性(P<0.05).结论:腹腔镜胆囊切除术过程中由于气腹和30°头高脚低体位双重作用股静脉血流缓慢、淤滞.使用间歇梯度充气加压装置可有效预防腹腔镜胆囊切除术静脉血液淤滞.

    作者:吴伟军;邓超平;徐鲁白;陈聪 刊期: 2007年第04期

  • KAI1蛋白在子宫内膜癌中的表达及其临床意义

    目的:研究KAI1蛋白在子宫内膜癌组织中的表达及其与临床病理参数的关系.方法:采用免疫组织化学EnVision二步法检测76例子宫内膜癌、15例不典型增生子宫内膜、20例正常增生期子宫内膜组织中KAI1蛋白的表达情况,对检测结果与子宫内膜癌的临床病理参数及预后关系作统计学分析.结果:KAI1蛋白在子宫内膜癌的阳性表达低于不典型增生内膜和正常增生期子宫内膜,差异有统计学意义.KAI1蛋白在子宫内膜癌的表达与组织学分级、肌层浸润程度呈负相关,差异有统计学意义.KAI1表达阴性的患者术后生存期更短.结论:KAI1蛋白在子宫内膜癌的进展过程中表达降低.KAI1蛋白的检测可能成为监测子宫内膜癌进展及临床判断预后有价值的生物学指标.

    作者:黄筱竑;郑飞云;张文淼;张乾 刊期: 2007年第04期

  • CRRT对MODS患者血浆细胞因子的清除作用

    目的:探讨连续性肾脏替代治疗(CRRT)对多脏器功能不全综合征(MODS)患者血浆细胞因子的清除作用.方法:12例MODS患者进行CRRT,采用前稀释连续性静脉-静脉血液滤过(CVVH).于开始前和开始后4、12、24、48 h采血标本和超滤液ELISA法测定细胞因子TNF α、IL1 β、IL6、IL10的浓度;于开始前和开始后4、24、48 h进行血气、血电解质、肾功能、血常规等检查.结果:12例患者CRRT后血浆TNFα、IL1 β、IL6、IL10呈下降趋势,其中TNF α在治疗开始后4 h略有升高,12、24、48 h时下降;IL1 β在治疗后有下降;IL6在治疗开始后4 h有升高,12、24、48 h下降;IL10在治疗开始后4、48 h有升高,12、24 h下降.12例患者治疗后APACHE Ⅱ评分不同时间点均有改善,四种细胞因子在超滤液中未能检出.结论:CRRT能减少MODS患者血浆中的多种细胞因子,可改善患者病情.

    作者:林锡芳;江松福;潘景业;王丹;吴建波;林碎钗;叶进燕;施怡声 刊期: 2007年第04期

  • 创伤弧菌溶细胞素基因重组蛋白复性条件的优化及溶血活性鉴定

    目的:对由大肠杆菌表达系统表达的创伤弧菌溶细胞素蛋白包涵体的复性条件进行优化并对其溶血活性进行评价.方法:表达、提取并纯化重组蛋白,并对其包涵体利用PBS透析复性、16种不同复性液透析复性和柱上复性方法进行复性比较,复性蛋白用溶血试验验证其活性.结果:利用三种蛋白复性方法,重组蛋白均不同程度得到复性,其中复性液中盐酸胍、助溶剂及盐离子作用显著.柱上复性效果明显,其复性率高达98%.利用兔红细胞溶血试验检测表明,重组蛋白具有溶血活性,其活性为0.2 μg/HU.结论:成功对重组蛋白包涵体复性条件进行优化,并对复性后蛋白质的溶血活性进行鉴定,为今后的免疫学活性和变性蛋白质复性研究奠定了基础.

    作者:李桂军;谢旦立;楼永良 刊期: 2007年第04期

  • Tile C型骨P骨折复位质量对前后环内固定下生物力学稳定性的影响

    目的:探讨垂直不稳定骨盆骨折在不同移位下行后环骶髂关节螺钉和前环钢板螺钉固定的稳定性差异.方法:将8具尸体骨盆随机取3具做压力测试设为正常组,然后制成垂直不稳定骨盆骨折模型,骶髂关节和耻骨联合在移位0~4 mm(低度移位组)及移位8~12 mm(高度移位组)行后环骶髂关节螺钉和前环钢板螺钉固定,测量骶髂关节和耻骨联合的垂直和水平移位.结果:在不同移位下的垂直不稳定骨盆骨折行前后环内固定,低度移位组骨盆稳定性显著高于高度移位组.结论:垂直不稳定骨盆骨折尽量取得解剖复位固定,确保骶髂关节移位<4 mm,以提高骨盆环内固定的生物力学稳定性,有利于功能康复.

    作者:金建华;郭晓山;万曲桥;王向阳 刊期: 2007年第04期

  • 弓形虫P30乳酸球菌口服免疫小鼠适当免疫剂量的探讨

    目的:探讨弓形虫P30乳酸球菌口服免疫小鼠的适当免疫剂量,为体内免疫活性的研究提供直接的实验数据.方法:用弓形虫P30乳酸球菌口服免疫BALB/c实验小鼠,设三个免疫剂量组,分别为3×109CFU、3×108CFU、3×107CFU,同时设生理内水对照组.免疫结束2 w后,各实验组分别收集小鼠血清,以ELISA法测定血清中特异性抗体IgG的含量;各实验组取5只小鼠,以100个弓形虫强毒力RH株速殖子做虫体攻击实验,记录死亡时间.结果:三个免疫剂量组,在小鼠体内产生的抗体IgG有一定的差异(P<0.01),但免疫剂量组一(3×109 CFU)与免疫剂量组2(3×108 CFU)几乎没有差别,免疫剂量组二偏差稍大;免疫剂量组一小鼠的平均存活时间有所延长,免疫剂量组二的小鼠先出现死亡现象.结论:确定了3×109 CFU的免疫剂量,在此剂量下,小鼠的保护性效果则比其他剂量组有所提高.

    作者:陈俊;钟晓芝;李文姝 刊期: 2007年第04期

  • 大鼠动脉粥样硬化模型的建立方法

    目的:建立一种大鼠动脉粥样硬化模型的实验方法.方法:30只雌性SD大鼠随机分成正常对照组(C组,n=10)与模型组(M组,n=20只),C组普通饲料喂养,M组采用分次大剂量维生素D.注射+高脂饲料喂养,2个月后处死大鼠,检测血脂学变化,制作动脉切片进行形态学观察.结果:M组中的胆固醇、甘油三脂及低密度脂蛋白较C组显著升高(P<0.01),高密度脂蛋白则较C组下降(P<0.05).光镜下M组中膜严重钙化,明显不规则增厚,有泡沫细胞形成,平滑肌纤维排列显著紊乱等;C组主动脉平滑肌排列整齐规则,管腔内皮光滑,无增生.电镜下M组胶原纤维明显增多,排列紊乱,局灶性纤维溶解变性.局部有脂质样颗粒沉积在细胞间隙中.平滑肌细胞核固缩,核染色变深,部分可见坏死的平滑肌细胞,平滑肌细胞线粒体空泡化.内皮细胞大部分脱落,局灶有血栓形成(大量红细胞),可见有泡沫细胞.C组内皮完整,平滑肌纤维正常,排列紧密,胶原纤维排列规则,无增生.结论:用高脂饲料及大剂量维生素D.可有效诱发大鼠动脉粥样硬化.

    作者:章义利;周秀云;应斌宇;张怀勤 刊期: 2007年第04期

  • 具有浸润性微乳头结构的腺癌四例报告并文献复习

    目的:探讨4例不同部位具有微乳头结构(micropapillary pattern,MPP)腺癌的临床病理、免疫组化和预后情况.方法:对4例具有MPP结构的腺癌分别进行病理组织学观察及免疫组化检测,并对文献进行复习.结果:4例具有MPP结构的腺癌分别发生于乳腺、膀胱、肾及肺.肿瘤的临床特点及大体观察与发生在相同部位的普通腺癌无明显差异.组织学观察肿瘤组织中均可见比例不等的典型MPP结构.肿瘤中央及周边区可见明显的淋巴管癌栓,4例均见淋巴结转移.短期随访:手术后1例复发,1例死亡.结论:伴有MPP结构的腺癌可发生于乳腺、膀胱、卵巢、大涎腺、肺、胰腺及女性生殖道等多个部位,具有高的淋巴管侵犯和淋巴结转移率.在生物学行为上预后极差,需引起临床和病理医师的高度重视.

    作者:卢山珊;董磊;万丽 刊期: 2007年第04期

  • 男性不育患者的细胞遗传学分析及荧光原位杂交分析

    目的:探讨染色体异常与男性不育的关系.方法:采用外周血淋巴细胞培养方法制备染色体,G、C等显带技术进行细胞遗传学分析为主,部分47,XXY标本再行双色荧光原位杂交技术分析.结果:450例男性不育患者的染色体异常率高达20.7%,以性染色体异常为主.对其中细胞遗传学分析染色体核型为47,XXY的20例标本再行双色荧光原位杂交技术分析,结果19例为47,XXY,1例为47,XXY/46,XY嵌合体.结论:性染色体数目异常是男性不育患者的重要病因.双色FISH技术检测性染色体数目异常克氏综合征,快速、准确、识别嵌合体核型有明显优势,是常规细胞遗传学检测的必要补充,两种技术相结合更有利于性染色体异常患者的诊断.

    作者:朱燕英;刘永章;陶志华;戴美洁 刊期: 2007年第04期

  • 新生儿化脓性脑膜炎的临床特点和诊治体会

    目的:探讨新生儿化脓性脑膜炎的临床特点,并总结诊断、治疗经验.方法:回顾性研究50例新生儿化脓性脑膜炎的一般资料、临床表现和脑脊液、血常规、影像学特点以及其治疗和预后规律.结果:新生儿化脓性脑膜炎临床表现常不典型,早期诊断较困难.结论:早期诊断与治疗是提高治愈率、避免严重后遗症、降低病死率和改善预后的关键.

    作者:施旭来;周小坚;叶秀云;李光乾;胡鸿文 刊期: 2007年第04期

  • 锁骨干骨折内固定生物力学研究现状

    锁骨骨折好发于锁骨中1/3[1],引起骨折的因素绝大多数为肩部受到直接暴力,仅6%的锁骨骨折由摔倒时因手部撑地而上传的暴力引起.对于骨折治疗方法的选择,一直存有争议,目前比较一致的意见是,对于高能损伤引起的锁骨中1/3粉碎性且移位大的骨折,采取手术治疗[9].

    作者:阮国模;郑银旺 刊期: 2007年第04期

  • 神经内镜辅助下颅底胆脂瘤切除术的手术配合

    胆脂瘤起源于异位胚胎残余组织的外胚层组织,又称为表皮样囊肿,珍珠瘤,是一种先天性良性肿瘤,占颅内肿瘤的0.5%~1.8%[1],发生于颅底部位的胆脂瘤以后颅底多见,其次为中颅底,前颅底少见.

    作者:徐小群;陈丽莉;林卫红 刊期: 2007年第04期

  • 原位杂交法研究表皮生长因子在胃癌中的表达及临床意义

    目的:研究表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)在胃癌中的表达及临床意义.方法:用原位杂交的方法检测68例胃癌和20例癌旁胃粘膜组织中EGF的表达.结果:胃癌和癌旁胃黏膜组织EGF阳性表达率分别为41.1%(28/68)和5%(1/20),EGF的表达与胃癌的Lauren's分型、分化程度、浸润深度、淋巴结转移、血管内瘤栓、远处转移及病理分期相关.结论:EGF检测可作为判定胃癌生物学行为的一项重要指标.

    作者:周新木;周丽菲;朱忆凌;黎庆荣;徐少杰;方伟建 刊期: 2007年第04期

  • 婴幼儿肺出血23例临床分析

    肺出血是严重威胁小儿生命的危重症,可由各种病因引起.由于肺泡腔和气管、支气管腔内充满血性液,可造成通气和换气功能障碍,并引发急性呼吸衰竭、急性呼吸窘迫综合征(MODS),如不立即采取有效的抢救措施,患儿在短时间内就会死亡.现总结我院在2004-2006年收治肺出血患儿23例的临床资料,报告如下.

    作者:南向珍 刊期: 2007年第04期

  • 姜黄素减轻沙土鼠海马CA1区脑缺血再灌注损伤与热休克蛋白表达变化的关系

    目的:探讨姜黄素对缺血再灌注沙土鼠脑海马CA1区热休克蛋白(Hsp)基因表达的影响及意义.方法:采用沙土鼠双侧颈总动脉阻断缺血再灌注损伤模型.随机分为假手术组(SH)、脑缺血再灌注组(IR)、姜黄素组(CU)、溶剂对照组(SC);每组据再灌注时间点不同又分6 h、1 d、3 d、5 d及7 d 5个亚组,每组6只动物.在预定时间点行开阔法行为学检查,以TUNEL法行海马CA1区凋亡细胞检测,免疫组化ABC法测定Hsp70、Hsp27基因表达产物Hsp70及Hsp27蛋白在海马CA1区的动态变化.结果:姜黄素可显著减少沙土鼠探索活动及海马CA1区凋亡锥体细胞数量(与IR组相比,P<0.01),进一步诱导Hsp70蛋白表达并抑制Hsp27蛋白的表达(与IR组相比,P<0.01).结论:姜黄素对脑缺血再灌注损伤有保护作用,调控热休克基因hsp70和hsp27的表达可能是其作用机制之一.

    作者:李军;曹红;连庆泉;曾因明;曾邦雄 刊期: 2007年第04期

  • 腰丛-坐骨神经联合阻滞用于小儿下肢手术

    目的:观察小儿下肢手术在神经刺激器引导下应用腰丛-坐骨神经联合阻滞的可行性.方法:25例择期行单侧下肢手术的患儿,入室后浅麻醉,患侧在上侧卧,通过髂后上棘作棘突连线的垂线,此线外1/4与内3/4交点做棘突连线的平行线,在平行线上髂骨边缘向头端1 cm处为腰丛穿刺点;分别作股骨大转子与髂后上棘的连线(股髂线)和股骨大转子与骶裂孔的连线(股骶线),通过股髂线的中点作垂线,此线与股骶线的交点为坐骨神经穿刺点,在神经刺激器引导下分别行腰丛和坐骨神经阻滞.结果:25例患儿均成功诱导出相应的肌肉运动,均成功在浅全麻复合神经阻滞下完成手术,术后镇痛平均时间为(4.8±1.6)h,术中血压、心率和血氧饱和度均无显著变化,术后无尿潴留、呼吸抑制、躁动和呕吐等并发症.腰丛穿刺位置与患儿年龄和体重显著相关.结论:小儿腰丛和坐骨神经的穿刺位点在体表有固定的解剖关系,腰丛-坐骨神经联合阻滞麻醉效果好,可应用于小儿下肢手术.

    作者:寿红艳;郭献阳;李挺;余微萍;徐旭仲 刊期: 2007年第04期

温州医科大学学报杂志

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主管:温州医科大学

主办:温州医科大学