学术投稿

创伤弧菌溶细胞素基因重组蛋白复性条件的优化及溶血活性鉴定

李桂军;谢旦立;楼永良

关键词:创伤弧菌溶细胞素, 复性条件, 溶血活性
摘要:目的:对由大肠杆菌表达系统表达的创伤弧菌溶细胞素蛋白包涵体的复性条件进行优化并对其溶血活性进行评价.方法:表达、提取并纯化重组蛋白,并对其包涵体利用PBS透析复性、16种不同复性液透析复性和柱上复性方法进行复性比较,复性蛋白用溶血试验验证其活性.结果:利用三种蛋白复性方法,重组蛋白均不同程度得到复性,其中复性液中盐酸胍、助溶剂及盐离子作用显著.柱上复性效果明显,其复性率高达98%.利用兔红细胞溶血试验检测表明,重组蛋白具有溶血活性,其活性为0.2 μg/HU.结论:成功对重组蛋白包涵体复性条件进行优化,并对复性后蛋白质的溶血活性进行鉴定,为今后的免疫学活性和变性蛋白质复性研究奠定了基础.
温州医科大学学报杂志相关文献
  • 普伐他汀对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞增殖和氧化应激的影响

    目的:探讨普伐他汀对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞增殖和氧化应激的影响.方法:体外培养大鼠肾小球系膜细胞株,分对照组、高糖组和普伐他汀组,采用CCK-8细胞计数法测定系膜细胞增殖,比色法检测细胞培养液中的超氧化物歧化酶(SOD)活性和谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量的变化.结果:与对照组比较,高糖组出现系膜细胞增殖增加,上清液中SOD活性、GSH含量下降,MDA含量增加;与高糖组相比,普伐他汀组系膜细胞增殖减少,GSH含量、SOD活性上调,MDA含量下降.结论:普伐他汀能抑制高糖环境下的系膜细胞增殖,并显著减少高糖诱导的氧化应激水平.

    作者:金洁娜;郑景晨;倪连松;尹丽慧;沈飞霞 刊期: 2007年第04期

  • 弓形虫P30乳酸球菌口服免疫小鼠适当免疫剂量的探讨

    目的:探讨弓形虫P30乳酸球菌口服免疫小鼠的适当免疫剂量,为体内免疫活性的研究提供直接的实验数据.方法:用弓形虫P30乳酸球菌口服免疫BALB/c实验小鼠,设三个免疫剂量组,分别为3×109CFU、3×108CFU、3×107CFU,同时设生理内水对照组.免疫结束2 w后,各实验组分别收集小鼠血清,以ELISA法测定血清中特异性抗体IgG的含量;各实验组取5只小鼠,以100个弓形虫强毒力RH株速殖子做虫体攻击实验,记录死亡时间.结果:三个免疫剂量组,在小鼠体内产生的抗体IgG有一定的差异(P<0.01),但免疫剂量组一(3×109 CFU)与免疫剂量组2(3×108 CFU)几乎没有差别,免疫剂量组二偏差稍大;免疫剂量组一小鼠的平均存活时间有所延长,免疫剂量组二的小鼠先出现死亡现象.结论:确定了3×109 CFU的免疫剂量,在此剂量下,小鼠的保护性效果则比其他剂量组有所提高.

    作者:陈俊;钟晓芝;李文姝 刊期: 2007年第04期

  • 电子胃镜检查致呼吸心跳骤停一例

    患者,女,69岁.一年来反复发作上腹部隐痛不适,饱胀嗳气,治疗不佳.体检:一般情况良好,心肺听诊无殊,腹软肝脾未及,无压痛,无肿块,浅表淋巴结未及肿大,右上肢因脑梗塞后遗症肌力肌张力约Ⅲ级,左上、双下肢正常.

    作者:毛传富 刊期: 2007年第04期

  • KAI1蛋白在子宫内膜癌中的表达及其临床意义

    目的:研究KAI1蛋白在子宫内膜癌组织中的表达及其与临床病理参数的关系.方法:采用免疫组织化学EnVision二步法检测76例子宫内膜癌、15例不典型增生子宫内膜、20例正常增生期子宫内膜组织中KAI1蛋白的表达情况,对检测结果与子宫内膜癌的临床病理参数及预后关系作统计学分析.结果:KAI1蛋白在子宫内膜癌的阳性表达低于不典型增生内膜和正常增生期子宫内膜,差异有统计学意义.KAI1蛋白在子宫内膜癌的表达与组织学分级、肌层浸润程度呈负相关,差异有统计学意义.KAI1表达阴性的患者术后生存期更短.结论:KAI1蛋白在子宫内膜癌的进展过程中表达降低.KAI1蛋白的检测可能成为监测子宫内膜癌进展及临床判断预后有价值的生物学指标.

    作者:黄筱竑;郑飞云;张文淼;张乾 刊期: 2007年第04期

  • 检测Herceptin诱导乳腺癌细胞凋亡的多种显微技术比较

    目的:比较多种显微技术在检测细胞凋亡中的应用.方法:以Herceptin诱导乳腺癌SKBR-3细胞凋亡,应用Gieamsa染色光镜,EB和Hoechst染色荧光显微镜,Annexin V/PI染色激光共聚焦显微镜以及扫描和透射电镜分别检测细胞凋亡的发生.结果:在Herceptin作用下,Hoechst染色荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、扫描和透射电镜分别观察到乳腺癌SKBR-3细胞出现不同方面的明显凋亡特征.结论:不同显微技术各有优缺点,要客观地证实凋亡的发生,应联合运用多种检测方法.

    作者:郑易;林鹏;李红智;方周溪;胡昕;楼哲丰 刊期: 2007年第04期

  • 姜黄素减轻沙土鼠海马CA1区脑缺血再灌注损伤与热休克蛋白表达变化的关系

    目的:探讨姜黄素对缺血再灌注沙土鼠脑海马CA1区热休克蛋白(Hsp)基因表达的影响及意义.方法:采用沙土鼠双侧颈总动脉阻断缺血再灌注损伤模型.随机分为假手术组(SH)、脑缺血再灌注组(IR)、姜黄素组(CU)、溶剂对照组(SC);每组据再灌注时间点不同又分6 h、1 d、3 d、5 d及7 d 5个亚组,每组6只动物.在预定时间点行开阔法行为学检查,以TUNEL法行海马CA1区凋亡细胞检测,免疫组化ABC法测定Hsp70、Hsp27基因表达产物Hsp70及Hsp27蛋白在海马CA1区的动态变化.结果:姜黄素可显著减少沙土鼠探索活动及海马CA1区凋亡锥体细胞数量(与IR组相比,P<0.01),进一步诱导Hsp70蛋白表达并抑制Hsp27蛋白的表达(与IR组相比,P<0.01).结论:姜黄素对脑缺血再灌注损伤有保护作用,调控热休克基因hsp70和hsp27的表达可能是其作用机制之一.

    作者:李军;曹红;连庆泉;曾因明;曾邦雄 刊期: 2007年第04期

  • 锁骨干骨折内固定生物力学研究现状

    锁骨骨折好发于锁骨中1/3[1],引起骨折的因素绝大多数为肩部受到直接暴力,仅6%的锁骨骨折由摔倒时因手部撑地而上传的暴力引起.对于骨折治疗方法的选择,一直存有争议,目前比较一致的意见是,对于高能损伤引起的锁骨中1/3粉碎性且移位大的骨折,采取手术治疗[9].

    作者:阮国模;郑银旺 刊期: 2007年第04期

  • E血清型沙眼衣原体抗体的制备及检测

    目的:制备高效价E血清型沙眼衣原体(CT)的多克隆抗体.方法:用hep-2细胞培养制备并用超速离心方法纯化E血清型CT作为抗原,采用弗氏佐剂乳化抗原,背部皮下多点免疫4只家兔,收获免疫后血清制备多克隆抗体,用Western blot方法进行鉴定,ELISA法检测抗体水平.结果:所有家兔在全程免疫后都产生了高效价的血清抗体,高滴度达1∶1600.Western blot实验结果显示,本研究制备的CT血清抗体能与CT全菌体抗原发生b异结合.结论:CT菌体抗原免疫家兔可成功制备高效价的血清抗体,为建立沙眼衣原体免疫检测方法打下了基础.

    作者:侯晓红;朱珊丽;王乐丹;张丽芳 刊期: 2007年第04期

  • 兔血浆中氟虫腈及其砜化物的高效液相色谱分析法

    目的:建立兔血浆中氟虫腈(Fipronil)及其代谢物砜化物(Fipronil sulfone)的高效液相色谱检测法.方法:高效液相色谱仪为Agilent 1100系列;血浆经乙醚萃取浓缩,以Hypersil ODS-C18(4.6 mm×250 mm,5 μ m)为色谱分析柱;以乙腈-甲醇-水(26∶24∶50,V/V/V)为流动相,流速为1.0ml·min-1;检测波长为276 nm;内标为地西泮.对兔血浆中的氟虫腈及其砜化物进行检测.结果:氟虫腈及其砜化物浓度在0.05~5.00 mg·L-1范围内均具有良好的线性关系(r=0.999);低检测限均为为0.05mg·L-1;相对回收率分别为(101.08±6.13)%和(100.68±4.78)%,绝对回收率分别为(80.24%±2.58)%和(81.77±2.64)%;日内精密度变异系数分别为(5.55±1.24)%和(5.59±1.25)%;日间精密度变异系数分别为(5.91±1.44)%和(7.27±1.20)%.结论:本研究采用的反相-高效液相色谱法快速、简便、灵敏、准确,可用于兔血浆氟虫腈及其砜化物的检测和毒物代谢动力学研究.

    作者:陈晓宇;邱相军;卢中秋;陈冰冰 刊期: 2007年第04期

  • 红花对兔肺缺血再灌注损伤时细胞凋亡及caspase-3的影响

    目的:探讨细胞凋亡与肺缺血再灌注损伤的关系以及红花注射液的干预作用及其机制.方法:健康日本大耳白兔36只,随机分为对照组(C组)、缺血再灌注组(IR组)和红花干预组(SI组).复制在体肺缺血再灌注损伤模型.对比观察各组肺湿干重比(W/D)、肺泡损伤数定量评价指标(IQA);采用原位缺口末端标记(TUNEL)法观测肺组织细胞凋亡指数,原位杂交技术检测肺组织细胞caspase-3基因的表达.结果:IR组W/D、IQA、肺组织细胞凋亡指数及caspase-3mRNA表达均显著高于C组(P<0.01).SI组上述各指标明显低于IR组(P<0.01或P<0.05).肺组织细胞凋亡指数与W/D、IQA及caspase-3mRNA均呈显著正相关(r分别=0.920,0.925,0.927;P均<0.01).结论:肺组织细胞凋亡参与了肺缺血再灌注损伤的发生,红花注射液可能通过下调caspase-3的表达抑制肺组织细胞凋亡,从而减轻肺缺血再灌注损伤.

    作者:戴雍月;徐正祄;王万铁;邱晓晓;陈锡文 刊期: 2007年第04期

  • 外用ALA导致尖锐湿疣组织内原卟啉形成的研究

    目的:测定经外用5氨基酮戊酸(5-ALA)后尖锐湿疣组织内不同时间原卟啉(PP)的含量,以此为依据提供光动力学治疗(PDT)中佳光源照射时间.方法:10例经病理组织学证实的男性尖锐湿疣(CA)患者选为研究对象.尖锐湿疣皮损及周边正常皮肤外用20%ALA霜,在6 h内每小时1次测定组织内PP的含量,并在外用后12 h、24 h各测定1次.结果:外用ALA前,尖锐湿疣与正常皮肤组织内仅有少量PP.原卟啉高峰时间为外用ALA后4 h,6 h后开始明显下降,外用后12 hPP量接近正常.结论:这一资料对ALA光动力学疗法治疗尖锐湿疣提供了实验依据,有理论指导意义.外用ALA后3~6 h是PDT治疗尖锐湿疣的佳光源照射时间.

    作者:林孝华;李智铭;邵笑红;蔡剑峰 刊期: 2007年第04期

  • 蛋白酶体抑制剂对小鼠黑质多巴胺神经元的毒性作用

    目的:观察蛋白酶体抑制剂对小鼠黑质多巴胺神经元的毒性作用.方法:8周龄C57BL/6小鼠随机分组:磷酸盐缓冲液(PBS组)和lactacystin组,二种制剂分别单侧立体定向注射于中脑前脑束(Middle forebrain bundle);12周龄时灌注取脑分离纹状体,采用HPLC法测多巴胺、5-HT及代谢产物,取中脑观察黑质区多巴胺能神经元变性及包涵体样物质形成情况.结果:Lactacystin组同侧黑质区多巴胺细胞数减少51%,并可见泛素染色阳性的类包涵体样物质形成,同侧纹状体多巴胺(DA)及其代谢产物二羟苯乙酸(DOPAC)、高香草酸(HVA)浓度分别减少52%、46%和51%,而5-羟色胺(5-HT)及5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)浓度无改变.结论:蛋白酶体抑制剂可引起选择性黑质区多巴胺能神经元变性,并可能导致细胞内异常蛋白质聚集.

    作者:张雄;王小同;黄汉津 刊期: 2007年第04期

  • 儿童喘息性疾病与衣原体抗原检测分析

    衣原体是一类有独特发育周期,严格细胞内寄生的原核细胞型微生物,其中肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniac,CPn)和沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,CTr)是引起小儿呼吸道感染的常见病原体.

    作者:周晓聪;陈小芳;董琳;罗运春;李昌崇 刊期: 2007年第04期

  • 婴幼儿肺出血23例临床分析

    肺出血是严重威胁小儿生命的危重症,可由各种病因引起.由于肺泡腔和气管、支气管腔内充满血性液,可造成通气和换气功能障碍,并引发急性呼吸衰竭、急性呼吸窘迫综合征(MODS),如不立即采取有效的抢救措施,患儿在短时间内就会死亡.现总结我院在2004-2006年收治肺出血患儿23例的临床资料,报告如下.

    作者:南向珍 刊期: 2007年第04期

  • 老年患者微创直肠癌切除术的护理配合

    随着微创手术技术在肿瘤外科领域的不断发展,我院自2004年4月以来开展的微创直肠癌切除术,成为治疗直肠癌极具应用前景的新技术,在临床老年患者中备受重视与关注,对老年患者顺利康复十分重要[1].而充分的术前准备和熟练的术中配合是手术顺利进行的重要保证.为了完善老年患者微创直肠癌切除术的配合,防止各种并发症及手术意外,现将护理配合体会介绍如下.

    作者:李红;孙乐英;叶媛媛 刊期: 2007年第04期

  • 男性不育患者的细胞遗传学分析及荧光原位杂交分析

    目的:探讨染色体异常与男性不育的关系.方法:采用外周血淋巴细胞培养方法制备染色体,G、C等显带技术进行细胞遗传学分析为主,部分47,XXY标本再行双色荧光原位杂交技术分析.结果:450例男性不育患者的染色体异常率高达20.7%,以性染色体异常为主.对其中细胞遗传学分析染色体核型为47,XXY的20例标本再行双色荧光原位杂交技术分析,结果19例为47,XXY,1例为47,XXY/46,XY嵌合体.结论:性染色体数目异常是男性不育患者的重要病因.双色FISH技术检测性染色体数目异常克氏综合征,快速、准确、识别嵌合体核型有明显优势,是常规细胞遗传学检测的必要补充,两种技术相结合更有利于性染色体异常患者的诊断.

    作者:朱燕英;刘永章;陶志华;戴美洁 刊期: 2007年第04期

  • 亲子鉴定中STR基因座突变二例

    目的:观察亲子鉴定中STR基因座的突变方式.方法:从120个确定亲子关系的案例中收集到2个突变的等位基因,用银染法复核,并作序列测定证实.结果:2个家系中子代新产生的等位基因变异表现为一个重复单位的增加或减少.结论:STR基因座的长的、多态性高的串联重复区是等位基因突变的敏感点.

    作者:吴淑珍;张洪勤;庞玲霞 刊期: 2007年第04期

  • 顺产分娩预防性应用抗生素

    对于顺产分娩会阴侧切术后是否常规应用抗生素的问题临床一直有争议.现对2004年6月-2005年6月期间在我科顺产分娩的产妇1800例进行分组研究,以探讨抗生素在产科临床的应用价值.

    作者:林胜兰 刊期: 2007年第04期

  • 大鼠动脉粥样硬化模型的建立方法

    目的:建立一种大鼠动脉粥样硬化模型的实验方法.方法:30只雌性SD大鼠随机分成正常对照组(C组,n=10)与模型组(M组,n=20只),C组普通饲料喂养,M组采用分次大剂量维生素D.注射+高脂饲料喂养,2个月后处死大鼠,检测血脂学变化,制作动脉切片进行形态学观察.结果:M组中的胆固醇、甘油三脂及低密度脂蛋白较C组显著升高(P<0.01),高密度脂蛋白则较C组下降(P<0.05).光镜下M组中膜严重钙化,明显不规则增厚,有泡沫细胞形成,平滑肌纤维排列显著紊乱等;C组主动脉平滑肌排列整齐规则,管腔内皮光滑,无增生.电镜下M组胶原纤维明显增多,排列紊乱,局灶性纤维溶解变性.局部有脂质样颗粒沉积在细胞间隙中.平滑肌细胞核固缩,核染色变深,部分可见坏死的平滑肌细胞,平滑肌细胞线粒体空泡化.内皮细胞大部分脱落,局灶有血栓形成(大量红细胞),可见有泡沫细胞.C组内皮完整,平滑肌纤维正常,排列紧密,胶原纤维排列规则,无增生.结论:用高脂饲料及大剂量维生素D.可有效诱发大鼠动脉粥样硬化.

    作者:章义利;周秀云;应斌宇;张怀勤 刊期: 2007年第04期

  • 儿童感染性腹泻患者中志贺菌属的耐药性分析

    细菌性痢疾是我国发病率较高的传染病之一,也是我国重点防治的疾病,在儿童肠道传染病中发病率高,占15%,严重威胁儿童的健康[1].

    作者:严春;刘彩霞;李向阳;葛小红 刊期: 2007年第04期

温州医科大学学报杂志

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主管:温州医科大学

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