学术投稿

单细胞扩增前引物延伸多基因位点检测研究

袁淑慧;金帆;黄荷凤

关键词:淋巴细胞, 卵裂球, 基因诊断
摘要:目的:考察单细胞扩增前引物延伸(PEP)全基因组扩增,后续巢式PCR同步检测β地中海贫血突变基因CD17、nt-28及连锁基因(ATTTT)、18和21号染色体短串联重复序列D18S51、D21S11和D21S1411、囊性纤维病CFΔF508及连锁基因(GATT)、杜氏肌营养不良症DMD基因外显子17和48以及Y染色体性别决定基因SRY的可行性.方法:显微操作获取单个淋巴细胞和胚胎细胞,PEP全基因组扩增,后续特异性巢式PCR,检测上述10个基因位点的单细胞扩增成功率、假阳性率、假阴性率.结果:上述10个位点的单个淋巴细胞扩增成功率、假阳性率和假阴性率分别为89.5%、0.48%和2.50%,单个胚胎细胞扩增成功率和假阳性率分别为85.56%和3.0%.结论:单细胞PEP后续巢式PCR同步检测上述10个基因位点有较高的扩增成功率和很低的假阳性率和假阴性率,具有应用于植入前遗传学诊断的实际可行性.
浙江大学学报(医学版)杂志相关文献
  • 超排卵时卵巢对促性腺激素的反应与颗粒细胞促卵泡激素受体的表达

    目的:探讨促排卵周期卵巢对促性腺激素反应性与颗粒细胞促卵泡激素受体(FSHR)表达的关系.方法:根据取卵时卵泡发育数不同,将卵巢对促排卵药物的反应分为低反应型(卵泡数≤3个)、中反应型(卵泡数4~13个)和高反应型(卵泡数≥14个),分别为11例、15例和13例.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定3种反应类型的卵泡颗粒细胞FSHR mRNA的表达量.结果:低反应型FSHR mRNA表达量显著低于中、高反应型(相对积分值分别为0.54±0.07、0.90±0.17和1.20±0.45,P<0.05).结论:卵巢对促性腺激素的反应与颗粒细胞FSHR mRNA的表达量高低有关.

    作者:楼航英;黄荷凤;金帆 刊期: 2002年第03期

  • 杭州市少年儿童错(牙合)畸形调查

    目的:调查杭州市区少年儿童错(牙合)畸形的患病率、错(牙合)类型构成比、治疗情况及患者与其家长对此的意识水平.方法:对杭州市1818名7~16岁中小学生进行临床检查及问卷调查.结果:错(牙合)患病率为35.75%,安氏分类:Ⅰ类593例(32.62%),Ⅱ类48例(2.64%),Ⅲ类9例(0.49%).其中牙列拥挤、深覆(牙合)、深覆盖、前牙反(牙合)在错(牙合)畸形中的构成比,替牙期分别为70.66%、67.82%、60.57%、12.30%;恒牙期分别为85.89%、31.23%、51.05%、9.91%.错(牙合)患者中家长认为需矫治者占30.62%, 已接受矫治者仅占10.15%.结论:杭州市区少年儿童错(牙合)畸形中安氏Ⅰ类占绝对多数,已接受矫治者比例低.

    作者:黄吉娜;徐钢梅;张君超;顾红晖 刊期: 2002年第03期

  • 植入前遗传学诊断妊娠成功

    目的:探索建立植入前遗传学诊断技术.方法:对2例高龄输卵管性不孕患者,单精子卵细胞浆内注射,卵裂球活检,染色体21、X、Y三色荧光原位杂交,胚胎遗传学分析后,选择染色体正常胚胎移植.结果:20 d后血HCG>1 000 IU/L,孕50 d B超见子宫腔内单胎妊娠并见心搏,孕16周B超检查显示胎儿生长、结构正常.结论:植入前遗传学诊断移植2例,临床妊娠成功.

    作者:金帆;徐晨明;高惠娟;朱依敏;钱羽力;叶英辉;周馥贞;黄荷凤 刊期: 2002年第03期

  • 单细胞扩增前引物延伸多基因位点检测研究

    目的:考察单细胞扩增前引物延伸(PEP)全基因组扩增,后续巢式PCR同步检测β地中海贫血突变基因CD17、nt-28及连锁基因(ATTTT)、18和21号染色体短串联重复序列D18S51、D21S11和D21S1411、囊性纤维病CFΔF508及连锁基因(GATT)、杜氏肌营养不良症DMD基因外显子17和48以及Y染色体性别决定基因SRY的可行性.方法:显微操作获取单个淋巴细胞和胚胎细胞,PEP全基因组扩增,后续特异性巢式PCR,检测上述10个基因位点的单细胞扩增成功率、假阳性率、假阴性率.结果:上述10个位点的单个淋巴细胞扩增成功率、假阳性率和假阴性率分别为89.5%、0.48%和2.50%,单个胚胎细胞扩增成功率和假阳性率分别为85.56%和3.0%.结论:单细胞PEP后续巢式PCR同步检测上述10个基因位点有较高的扩增成功率和很低的假阳性率和假阴性率,具有应用于植入前遗传学诊断的实际可行性.

    作者:袁淑慧;金帆;黄荷凤 刊期: 2002年第03期

  • 人胚胎发育中期结肠神经系统的研究

    目的:观察人胚胎发育中期(4个月~6个月)结肠神经系统的发育.方法:人胚胎结肠切片和铺片,用抗PGP9.5和抗S-100蛋白的PAP免疫组织化学以及NADPHd酶组织化学.结果:①中期结肠肌间神经明显增多,PGP9.5阳性反应神经弥散分布,S-100蛋白反应阳性神经呈竹篓样分布.粘膜下层中阳性神经逐渐分化,形成粘膜下深丛和浅丛.②氮能神经弥散分布于整个结肠壁肌间,环行肌层中阳性神经纤维与平滑肌纤维相平行.在粘膜下深层中偶见氮能核周体.③铺片可见,反应阳性神经纤维形成复杂的肌间神经网络.结论:中期是结肠神经系统发育的重要时期.

    作者:宓开鸿;李继承 刊期: 2002年第03期

  • 血清游离αhCG作为妊娠高血压综合征标志物的研究

    目的:评价血清游离绒毛膜促性腺激素α亚单位(FαhCG)作为预测妊娠高血压综合征(妊高征)的价值.方法:用单克隆放射免疫试剂测定74例孕21~43周妊高征患者血清,并与37例孕周匹配的非妊高征者血清作对照,采用受试者工作曲线大Youden指数确定佳阈值.结果:妊高征组FαhCG水平显著高于对照组[(556±428)IU/L vs 232±131)IU/L],(t=5.66,P<0.001); FαhCG取值260 IU/L作为预测妊高征的阈值,其敏感性为81.1%,特异性为75.7%,Youden指数为0.57.结论:FαhCG可作为预测妊高征的血清标志物,取值260 IU/L可作为佳阈值.

    作者:褚红女;周馥贞;谢幸 刊期: 2002年第03期

  • 瘦素在超排卵周期的变化及对体外受精-胚胎移植结局的影响

    目的:探讨超排卵对瘦素水平的影响以及瘦素水平对体外受精-胚胎移植(IVF-ET)结局的影响.方法:应用酶联免疫吸附法和放射免疫法分别测定39例IVF-ET患者在注FSH、HCG前和取卵前的血清瘦素及排卵前卵泡的卵泡液瘦素、E2水平.结果:血清瘦素水平在注HCG前(26.1±2.3)μg/L明显高于注FSH前(9.3±1.0)μg/L和取卵前(15.8±2.3)μg/L,P均<0.001;卵泡液(18.5±2.2)μg/L和同期血清(15.8±2.3)μg/L的瘦素水平比较,经t检验无显著性差异;妊娠组的卵泡液和同期血清瘦素水平(11.7±1.8)μg/L和(8.7±1.5)μg/L明显低于非妊娠组的卵泡液和同期血清瘦素水平(20.8±2.7)μg/L和(18.3±2.9)μg/L,P<0.05.结论:超排卵后瘦素浓度过高可能不利于卵泡的生长和发育.

    作者:杨小福;黄荷凤 刊期: 2002年第03期

  • 计算机辅助精液分析与常规精液分析的比较研究

    目的:比较计算机辅助精液分析与常规精液分析的各项参数结果,用于临床精子质量的评估.方法:对27例生育男性及317例不育男性患者采用计算机辅助精液分析(CASA)与常规精液分析(RSA).结果:与RSA比较CASA存在精子畸形率降低(CASA生育组25.10±8.57、不育组31.48±12.81,RSA生育组35.56±9.58、不育组54.56±13.47)P<0.01;生育组活率CASA 61.35±7.62、RSA 83.96±6.67,活力A、B级精子降低(CASA 9.10±5.50、31.16±12.35,RSA 30.33±8.85、49.93±8.56)P<0.01;活力C、D级精子上升(CASA 21.06±14.19、38.66±7.62,RSA 3.70±2.12、16.04±6.67)P<0.01;不育组活率无差异时(CASA 42.53±14.95、RSA 43.09±13.96),活力B级精子降低(CASA 22.67±14.96、RSA 33.32±13.47),C级精子上升(CASA 17.08±13.47、RSA 7.68±5.82),两者分析均有非常显著性差异P<0.01;非前向性运动组有B级精子CASA 2.77±6.01、RSA 0.另外CASA还增设了直线速度、曲线速度、平均路径速度、精子侧摆幅度、精子轨迹、静态图等.结论:计算机辅助精液分析对精子形态、活力辨别能力较常规精液分析低,但计算机辅助精液分析增设的量化指标及动静态图像能客观、真实地反映精子的质量,是常规精液分析所不能的.

    作者:张华;蔡松良;俞建军 刊期: 2002年第03期

  • 蓝光发光二极管光疗效应探讨

    目的:探讨蓝光发光二极管(LEDs)光疗效应.方法:在光强度仪检测下,调节LEDs与普通蓝光灯的光强度使两者相同,然后,将两组光源照射胆红素标准品蛋白溶液.应用高效液相色谱仪测定溶液中胆红素光异构体的变化,来评价LEDs的效应.结果:在两组光源照射后,胆红素标准品蛋白溶液ZZ的下降量和ZE、LR的生成量无差异(P>0.05).结论:LEDs能起到普通单面蓝光同样的光疗效果.

    作者:张晨美;王珏;杜立中 刊期: 2002年第03期

  • 骨质疏松大鼠胫骨元素含量变化及相关性研究

    目的:观察骨质疏松症骨骼中元素含量变化及其相互的关系.方法:10月龄雌性SD大鼠切除双侧卵巢(去卵巢模型组),并设假手术组,7个月后取胫骨,原子吸收分光光度法测定Ca、P、Mg、Zn、Mn、Fe、Cu、Co、Mo和Cr含量,并对各元素的含量之间进行一元回归分析.结果:骨质疏松症模型大鼠胫骨除Ca、P和Mg等常量元素分别下降6.6%(P<0.05)、6.3%(P<0.05)和14.9%(P<0.01)以外,微量元素Zn和Fe分别下降15.2%(P<0.01)和35.1%(P<0.01),Mo和Cr分别下降12.2%(P>0.05)和14.0%(P>0.05),而Mn、Cu和Co则无明显改变;Mg、Mn和Zn等元素含量与Ca、P经一元回归分析具有显著的相关性.结论:去卵巢骨质疏松症模型大鼠骨骼Ca、P、Mg、Zn和Fe等含量明显下降.

    作者:郑高利;郑筱祥;张信岳;金锋;陈凯;龚维桂 刊期: 2002年第03期

  • 不明原因不孕妇女子宫内膜种植窗期MMP-9和TIMP-1的表达

    目的:探讨不明原因不孕妇女子宫内膜种植窗期基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-1)的表达对胚胎着床的影响.方法:实验组29例,正常对照组14例,采用链菌生物素蛋白-过氧化酶连接法,免疫组化测定两组子宫内膜种植窗期MMP-9及TIMP-1.结果:在全部子宫内膜标本中,MMP-9均呈阳性表达,腺上皮细胞、腔上皮细胞和基质细胞胞浆内均可见棕黄色颗粒沉着,上皮细胞染色强度大于基质;TIMP-1表达特点和MMP-9相似,但MMP-9和TIMP-1实验组的表达均较对照组弱(MMP-9:230.79±43.92 vs 307.78±44.25;TIMP-1:233.05±48.51 vs 297.86±35.56,P<0.05).血雌激素、孕激素和MMP-9、TIMP-1实验组与对照组均无相关性,但对照组MMP-9、TIMP-1与孕激素呈现负相关趋势(r=-0.330,r=-0.401,但P>0.05).结论:不明原因不孕妇女子宫内膜种植窗期MMP-9及TIMP-1的低表达,可能是影响胚胎着床导致不孕的重要因素之一.

    作者:洪丽华;周馥贞;黄荷凤 刊期: 2002年第03期

  • 不同粘固剂粘固的IPS-Empress 2后牙全瓷冠边缘微渗漏比较研究

    目的:评价3种不同粘固剂粘固的IPS-Empress 2后牙全瓷冠的边缘微渗漏.方法:制作24个IPS-Empress 2全瓷冠,分3组用3种不同粘固剂粘固于上颌第三磨牙,经温度循环试验后,将样本浸入2%品红溶液24 h,用体视显微镜观测牙-粘固剂界面、全瓷冠-粘固剂界面边缘微渗漏状况.结果:Panavia F树脂粘结系统组微渗漏小(0.90±0.75,0.46±0.37),Dyract compomer树脂粘结剂组次之(4.71±1.68,5.28±1.48),而Harvard磷酸锌粘固剂组大(6.99±0.04,6.99±0.04),经F检验P<0.01.结论:Panavia F树脂粘结系统抗边缘微渗漏性能优越,适于粘固IPS-Empress 2后牙全瓷冠.

    作者:顾新华;Matthias Kern 刊期: 2002年第03期

  • 射频消融对心脏自主神经损伤及部分相关因素研究

    目的:研究射频消融(RFCA)对心脏自主神经损伤与消融部位、累积能量、心肌损伤生化指标改变间的相关性.方法:测定41例因阵发性室上性心动过速接受RFCA者,手术前后心率变异性和心肌损伤生化指标.将房室结折返性心动过速15例与间隔部旁道5例归为间隔组,左侧游离壁旁道19例与右侧游离壁旁道2例归为游离壁组.结果:间隔组RFCA术后HF、LF较术前显著下降(P<0.05),游离壁组术后HF较术前显著下降(P<0.05);术后即刻cTnI阳性率为58.3%,AST为41.7%,显著高于其它指标CK:4.2%,CK-MB:10.4%,LDH:20.8%);术后1 h、12 h、24 h cTnI阳性率,分别为58.3%、54.2%、56.3%、52.1%;游离壁组ΔHF、ΔLF与累积能量显著相关(ΔHF:r=0.688,P<0.01;ΔLF:r=0.462,P<0.05);未发现心率变异性改变与生化指标改变间有相关性.结论:间隔部RFCA可损伤迷走与交感神经,游离壁RFCA可损伤迷走神经,RFCA对心脏自主神经损伤与消融部位、累积能量有关,而与心肌损伤间无相关性.

    作者:蒋峻;王建安;陈肖燕;鲁端 刊期: 2002年第03期

  • 任意尿香草扁桃酸和高香草酸的肌酐比值测定诊断神经母细胞瘤

    目的:探讨任意尿香草扁桃酸/肌肝(VMA/Cr)和高香草酸/肌肝(HVA/Cr)测定对神经母细胞瘤的诊断价值.方法:50例1~5岁正常儿童和11例2~5岁神经母细胞瘤患儿的任意尿标本,用高效液相色谱法测定VMA、HVA浓度,Beckmann自动生化分析仪测定肌酐(Cr)浓度,计算VMA/Cr、HVA/Cr.结果:1~5岁儿童的99%正常值范围为VMA/Cr<14.9 mmol/mol,HVA/Cr<23.8 mmol/mol.11例神经母细胞瘤患儿中有10例VMA/Cr和HVA/Cr均超过正常值范围,诊断符合率90.9%.结论:任意尿VMA/Cr和HVA/Cr测定采样方便,诊断符合率高,可取代24 h尿VMA、HVA总量测定法用于神经母细胞瘤术前诊断和术后随访.

    作者:李民驹;黄勇;鱼达 刊期: 2002年第03期

  • 冠心病患者血sICAM-1和CD11a/CD18的表达

    目的:探讨冠心病患者血sICAM-1及CD11a/CD18的变化.方法:对76例冠心病患者及65例正常对照者用ELISA法进行血sICAM-1浓度测定,用流式细胞仪进行白细胞CD11a/CD18表达阳性率检测.结果:冠心病患者血sICAM-1浓度及CD11a/CD18阳性细胞率高于正常对照组(P<0.01),心肌梗塞及不稳定性心绞痛组血sICAM-1浓度与CD11a/CD18阳性细胞率高于稳定性心绞痛组,血sICAM-1浓度及CD11a/CD18阳性细胞率具有正相关性(r=0.436 ,P<0.01).结论:冠心病患者血sICAM-1浓度及CD11a/CD18阳性细胞率升高可能与冠心病的形成与发展有关.

    作者:章藜苹;黄元伟;朱建华 刊期: 2002年第03期

  • 全程胎心监护

    目的:探讨全程胎心率监护的价值.方法:对150例产妇进行全程胎心率监护,分析胎心率图形与羊水性状,新生儿出生后1 min Apgar评分及分娩方式的关系.结果:胎心率图形:异常组42例中羊水污染27例,正常组108例中羊水污染17例,有明显升高(χ2=8.47,P<0.005);新生儿出生后1 min Apgar评分≤7分:异常组10例,正常组2例,有明显升高(χ2=19.80, P<0.005);分娩方式:异常组顺产15例,正常组81例,两者比较有显著差异(χ2=20.26,P<0.005).结论:全程监护有利于筛选胎儿宫内窘迫,便于临床掌握分娩时机与选择分娩方式.

    作者:郑和鸣;潘永观;黄东 刊期: 2002年第03期

  • 人类辅助生育及其衍生技术的现状和进展

    人类辅助生育技术不仅将不孕症的治疗引入高科技领域,还引发了生命科学的大飞跃.但辅助生育技术还存在许多技术和理论问题,诸如受精过程、胚胎发育、着床机制和胚胎细胞分化等,需要作更进一步的研究.

    作者:黄荷凤 刊期: 2002年第03期

  • 先天性肾上腺皮质增生症的治疗与随访

    目的:提高对21-羟化酶缺陷型先天性肾上腺皮质增(CAH)的认识.方法:对26例CAH患儿的临床资料进行回顾性分析.结果:26例中单纯男性化型4例,男性化伴失盐型22例.随访10例,4例坚持氢化考的松治疗,其中3例定期随访疗效较好,1例激素剂量未作调整,出现副作用;1例间断治疗,男性化症状控制不佳;5例中断治疗,3例不久死亡,2例男性化症状显著.结论:对外生殖器异常或伴失盐酸中毒表现的患儿应考虑本病.CAH需早期治疗,并坚持随访.

    作者:祝国红;陈秀琴;傅君芬 刊期: 2002年第03期

  • 人白细胞介素7基因克隆及其真核表达载体的构建

    目的:构建人白细胞介素7(hIL-7)的真核表达载体.方法:从人脾脏组织的总RNA中,用RT-PCR方法扩增出编码成熟hIL-7的cDNA,将其克隆于pMD18-T质粒中,并进行序列测定.再将hIL-7cDNA以正义及反义插入真核、原核双重表达载体pBK-CMV质粒,转化至大肠杆菌DH5α.后将表达的lacz-hIL-7重组蛋白行SDS-PAGE电泳,并作考马斯亮蓝染色分析,western blot鉴定.结果:hIL-7序列测定结果与预期一致.pBK-CMV-hIL-7(正义插入)的克隆表达重组蛋白,western blot证实此蛋白为IL-7.结论:成功构建了hIL-7的真核表达载体,为进一步研究hIL-7的抗肿瘤作用创造了条件.

    作者:程蓓;叶大风;谢幸;陈怀增;吕卫国 刊期: 2002年第03期

  • 促性腺激素释放激素激动剂刺激试验对排卵障碍妇女卵巢反应的预测

    目的:研究促性腺激素释放激素激动剂(GnRH-a)刺激试验对排卵障碍妇女促诱导排卵治疗时卵巢反应的预测价值.方法:以35例排卵障碍妇女为研究对象,观察早卵泡期对GnRH-a的刺激血E2的变化类型与卵巢反应及妊娠率的关系.结果:早卵泡期E2的变化类型分为A、B、C 3型.A型患者卵巢敏感,发育的卵泡数显著多于B、C型患者(P<0.05),发生严重卵巢过度刺激综合症(OHSS)的危险性高(81.8%),周期取消率高(72.7%),妊娠率下降.B型患者卵巢反应适中,妊娠率(62.5%)、持续妊娠率(50%)高于其余两型.C型患者卵巢反应性差.结论:GnRH-a刺激试验可预测排卵障碍妇女的卵巢反应,指导促排卵方案的调整,减少OHSS的发生,提高妊娠率.

    作者:朱依敏;周馥贞 刊期: 2002年第03期

浙江大学学报(医学版)杂志

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主管:中华人民共和国教育部

主办:浙江大学