王俊波；凌树才；沈岚；孙百强；朱晞
目的 探讨树突状细胞(DC)电转染的方法、优化条件以及影响DC电转染率和存活率的主要因素.方法 提取人肝癌细胞(Bel 7402) RNA,利用淋巴细胞分离液密度梯度法分离人外周血单个核细胞(PBMC),并通过贴壁法获取单核细胞作为树突状细胞前体(pDC).将pDC置含rhGM-CSF和rIL-4的RPMI-1640培养液内联合培养诱导7d,使之充分分化为未成熟的DC (imDC).应用电穿孔仪(electroporation apparatus)分别将人肝癌细胞总RNA和绿色荧光蛋白(GFP)电转染至imDC,并设定不同的电压、脉冲时间、细胞浓度、温度和电转染缓冲液等条件.荧光镜下和光镜下分别计算绿色荧光阳性细胞数和总细胞数.电转染1d后,用0.4%锥虫蓝染色分别计算其电转染率和存活率.结果 当imDC浓度为5×106/ml与40μg的人肝癌细胞总RNA混合,设定电转染仪电压为300V、脉冲时间为500μs时,其电转染率达到高值,imDC存活率约49.07%.结论 电转染提供了一种使人肝癌细胞RNA电转染至imDC的可行技术.影响imDC电转染率的主要因素是受体细胞imDC的生长状况、电转染的电压及脉冲时间.
作者：唐岩；唐军民；战军；刘影；常昕莹；王国涛；单铁英；苏安英 刊期： 2007年第02期
作者： 刊期： 2007年第02期
目的 研究大豆异黄酮(SI)对去卵巢大鼠抗氧化及骨形态学的影响.方法 70只雌性SD大鼠按血清总胆固醇水平随机分为7组:高脂、雌激素,低、中、高剂量SI干预、假手术及正常对照组.对前5组摘除双侧卵巢后恢复1周开始干预,实验周期为12周,灌胃给药,每周称重1次,分别在去卵巢及处死时(12周)抽取尾静脉血,实验结束后取内脏及骨骼标本,分别测定血清碱性磷酸酶(AKP)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶活性(GSH-Px)及骨密度等指标,共63只大鼠完成实验.结果 SI干预组股骨重量高于高脂与正常对照组,干预可提高AKP、GSH-Px酶活性.高剂量干预对维持大鼠股骨密度的作用与雌激素相似.SI干预可缓解因去卵巢造成的骨丢失.结论 大豆异黄酮对去卵巢大鼠的抗氧化、骨代谢酶活性及骨转化存在一定影响,适量干预能逆转因去势造成的骨密度下降.考虑到植物雌激素与哺乳动物的雌激素受体(ER)结合能力低下,采用SI在临床开展干预的剂量与远期效果尚待进一步研究.
作者：余清；王文蔚；李安乐；刘存丽；王一龙；胡万里 刊期： 2007年第02期
目的 探讨灵芝孢子能否促进受维甲酸诱导,而停滞在G0/G1期的胚胎神经管神经上皮细胞重新进入细胞周期循环,继续增殖和分化,减少神经管畸形的发生.方法 于实验对照组和灵芝孢子组小鼠孕期胚胎E17.75d时一次性胃饲全反式维甲酸,造成这两组孕鼠的胚胎出现神经管畸形.然后,给予灵芝孢子组孕鼠胃饲灵芝孢子溶液.在孕期E10.5d时取出两组孕鼠的胚胎,分别计数胚胎的神经管畸形发生率.应用免疫荧光组织化学染色和流式细胞仪检测胚胎神经管神经上皮的巢蛋白(nestin)表达情况.应用DNA定量荧光染色和RT-PCR技术检测胚胎神经管依赖细胞周期蛋白激酶2(Cdk2) mRNA和Cdk4 mRNA的转录.结果 灵芝孢子组孕鼠胚胎的神经管畸形发生率显著低于实验对照组.神经管神经上皮细胞表达nestin的百分率也明显大于实验对照组.实验对照组孕鼠胚胎的神经管细胞在G0/G1期的比例则显著高于灵芝孢子组,但是实验对照组神经管细胞S期的比例低,低于灵芝孢子组形态正常的胚胎神经管细胞.RT-PCR检测发现,灵芝孢子组孕鼠胚胎神经管细胞能够正常转录Cdk4 mRNA,而实验对照组则低转录Cdk4 mRNA.结论 灵芝孢子能够减少维甲酸诱导的妊娠小鼠孕期E10.5d胚胎神经管畸形的发生.
作者：熊轶；曾园山；张伟；陈穗君；钟志强 刊期： 2007年第02期
目的 观察大鼠下丘脑中食欲素(Orexin)及其受体(OX1R、OX2R)在妊娠、分娩以及泌乳期表达的变化,以探讨Orexin与生殖功能之间的关系.方法 通过竞争性逆转录多聚酶链式反应(Competitive RT-PCR)和免疫组织化学方法测定大鼠下丘脑中Orexin前体(Prepro-OX)、Orexin-A、OX1R和OX2R在妊娠、分娩以及泌乳期的表达.结果 Orexin-A和OX1R阳性神经元主要分别存在于大鼠下丘脑外侧区(LHA)以及妊娠和泌乳期大鼠的下丘脑室旁核 (PVN)和视上核(SON).泌乳第1d的Prepro-Orexin mRNA和OX1R的表达水平明显高于妊娠后期和泌乳期.OX2R的表达在生殖各时期之间没有明显改变.结论 Orexin可能参与大鼠泌乳早期的生殖功能调节,下丘脑的PVN及SON可能是其重要的作用部位.
作者：王俊波；凌树才；沈岚；孙百强；朱晞 刊期： 2007年第02期
淋巴管在维持体内微环境衡定、免疫反应和肿瘤淋巴转移等方面起着重要作用,淋巴管新生与胚胎发育、外伤修复、炎症转归和肿瘤转移密切相关.在趋化因子和生长因子的作用下,淋巴管内皮细胞迁移、增殖和构成管腔,形成新的淋巴管.近年来发现淋巴管内皮祖细胞参与淋巴管新生.淋巴管内皮特异表达Prox-1、podoplanin、VEGFR-3和 LYVE-1等,这些因子和受体调控淋巴管新生.VEGF-C/VEGFR-3或VEGF-D/VEGFR-3信号途径在淋巴管新生过程中起着重要作用.VEGF-C、VEGF-D和VEGFR-3可作为基因治疗的靶点,有望治疗淋巴管新生障碍性疾病以及抗移植后免疫排斥和抗肿瘤淋巴管转移.本文主要综述了胚胎发育、先天性淋巴水肿、炎性病变和肿瘤等状态下淋巴管新生的变化及其机制、淋巴管内皮祖细胞参与淋巴管新生的过程、淋巴管内皮细胞特异性转录因子和受体对于淋巴管新生的调控作用.
作者：王海杰；谭玉珍 刊期： 2007年第02期
目的 应用体视学方法探讨衰老对大鼠视网膜总厚度及各层厚度的影响.方法 选择健康青年(3月龄)和老年(24月龄)Long-Evans大鼠各6只,每只大鼠行右侧眼球矢状位连续切片,在视网膜全部组织切片中进行系统随机抽样,HE染色,采用显微成像系统进行视网膜总厚度及各层厚度测量.结果 与青年组大鼠比较,系统随机抽样法测量结果显示,老年组大鼠视网膜总厚度及多层厚度均明显变薄,视网膜各层厚度占视网膜总厚度的构成比基本不变.外丛状层厚度减少幅度显著,达46.2%.结论 衰老引起大鼠视网膜总厚度及各层厚度不同程度的变薄,尤以外丛状层变薄明显,系统随机抽样法更能准确地反映衰老对视网膜各层厚度的影响情况.
作者：孙兆霞；封利霞；张铭；黄大可；韩卉 刊期： 2007年第02期
目的 探讨通过RNA干扰(RNAi)技术下调上皮性钙黏附分子(E-cad)表达后,对人卵巢浆液性囊腺癌HO-8910细胞的侵袭、迁移能力的影响.方法 将针对E-cad的双链小干扰RNA(siRNA)转染入HO-8910细胞中,抑制E-cad基因表达;采用免疫荧光法及Western blotting检测RNAi效果;用Transwell小室法检测RNAi后细胞侵袭、迁移能力的改变.结果 RNAi后HO-8910细胞E-cad表达显著下降,由63.7%降低为11.9%(P＜0.01),RNAi有效;细胞对细胞外基质的侵袭能力明显提高,穿过滤膜的细胞数由13.4±3.93增至42.0±4.15(P＜0.01);细胞迁移能力也明显提高,穿过滤膜的细胞数由23.24±3.71增至82.0±5.51(P＜0.01).结论 人卵巢浆液性囊腺癌的侵袭、转移等恶性行为可能与E-cad基因表达下降有关.
作者：胡军；邵淑娟；赵瑾瑶；杨进；杨佩满 刊期： 2007年第02期
目的 探索CD20阳性细胞在人早期胚中的分布及意义.方法 用免疫组织化学SP法对10例6～7周人早期胚内CD20阳性细胞进行定位观察.结果 1.CD20阳性细胞局限于人早期胚肝内;2.在人胚肝内,CD20阳性颗粒主要局限于B细胞的细胞核内,呈不均质的颗粒状分布,细胞质和细胞膜呈阴性反应.结论 在人早期胚内,CD20定位于肝内的B细胞,并分布在细胞核内;该研究结果为深入探讨CD20阳性细胞的功能和作用机制提供了重要线索.
作者：刘影；唐军民；唐岩；常昕莹；李枫 刊期： 2007年第02期
目的 观察大鼠三叉神经节(TG)内的内吗啡肽2(EM2)阳性神经元向延髓背角(MDH)的投射情况.方法 荧光金(FG)追踪与EM2免疫荧光组织化学染色相结合的双标方法.结果 将FG注入MDH后,TG内可见大量FG标记的大、中、小型神经元;TG内也可见各种直径的EM2阳性神经元;TG内的许多FG标记神经元呈EM2阳性,FG/EM2双标神经元多为中、小型神经元.结论 TG内的EM2阳性神经元向MDH投射.
作者：廖衡；陈涛；李云庆 刊期： 2007年第02期
目的 观察App17肽对脑室注射链脲佐菌素的大鼠海马神经元凋亡相关蛋白表达的影响,探讨胰岛素信号转导通路障碍对神经元存活的作用.方法脑室注射链脲佐菌素(STZ)制作大鼠痴呆模型.3周后,皮下注射App17肽.4周后取脑组织做Bcl-2、Bax、CytoC免疫组织化学染色及Western blotting半定量分析.结果 模型组大鼠海马内Bax、CytoC阳性反应神经元细胞数目多,胞质深染,细胞计数与正常组及治疗组有显著性差异(P＜0.01);模型组大鼠海马内Bcl-2阳性细胞数目少,胞质染色淡,细胞计数与正常组及治疗组有显著性差异(P＜0.01).Western blotting半定量分析可见、Bcl-2、Bax、CytoC出现清晰的条带,组间可见较明显的差异(P＜0.01).结论 脑室注射STZ的大鼠海马内促进凋亡的Bax、CytoC表达增加;抑制凋亡的Bcl-2表达降低.App17肽可影响上述蛋白的表达,使之接近正常.胰岛素信号转导通路对神经元存活有一定作用.
作者：崔艳君；陆珊；雷亚平；王蓬文；王容；盛树力 刊期： 2007年第02期
目的 研究高血糖对排卵前小鼠卵母细胞发育及颗粒细胞凋亡的影响.方法 出生后20d ICR雌鼠,建立急性高血糖模型;取高血糖模型雌鼠和正常雌鼠超排卵,分别于hCG注射后的0、2、6和10h取卵巢组织,石蜡切片,TUNEL检测凋亡,免疫组织化学ABC法检测连接蛋白connexin-43的表达,相同时间点取生发泡期(GV期)卵母细胞统计生发泡破裂(GVBD)和第一极体(FB1)的发生率.结果 1.高血糖组卵巢湿重与小鼠体重的比值与排卵数目均低于正常组(P＜0.01);2.免疫组织化学显示,hCG注射后6h、10h颗粒细胞表达connexin-43在高血糖组明显低于正常组(P＜0.05);3.高血糖组卵泡颗粒细胞的凋亡率明显高于正常组,hCG注射后6h、10h差异显著(P＜0.05);4.高血糖组卵母细胞GVBD发生率低于正常组,于注射后2h差异显著(P＜0.01).结论 高血糖环境下卵母细胞发育延迟,颗粒细胞的凋亡率增高.这种发育延迟与颗粒细胞间connexin-43低表达呈正相关.
作者：陈睿；吕丹瑜；李英；乔杰；陈瓞延 刊期： 2007年第02期
目的 观察大鼠发情周期各期下丘脑中食欲素及其受体(OX1R、OX2R)表达的变化,探讨食欲素对发情周期的可能调节作用.方法 通过竞争性逆转录多聚酶链式反应 (competitive RT-PCR)方法检测大鼠下丘脑中食欲素前体(Prepro-Orexin)、食欲素-A、OXIR和OX2R在发情周期各期的表达.结果 发情前期的OX1R mRNA表达水平明显高于发情后期,而prepro-OX和OX2R mRNA的表达各期间没有明显的不同.结论 食欲素可能通过结合OX1R调节促性腺激素释放激素和/或黄体生成素的分泌而参与排卵的发生.
作者：王俊波；王培军；凌树才；沈岚；孙百强；朱晞 刊期： 2007年第02期
目的 研究shRNAs对胃癌细胞系BGC-823胃泌素表达的抑制效应.方法 设计4条针对胃泌素基因不同位点的寡核苷酸序列,通过体外转录法合成相应的shRNAs.以10nmol/L、20nmol/L、40nmol/L和80nmol/L的终浓度,将4条shRNAs分别转染胃癌细胞BGC-823.应用原位杂交及免疫细胞化学方法检测胃泌素表达的抑制效果,筛选有效的shRNA.应用RT-PCR进一步验证其对胃泌素mRNA的抑制效应.应用MTT法检测4条shRNAs在不同浓度下对BGC-823细胞的增殖抑制效应.结果 转染后24h、48h及72h,胃泌素表达均被明显地抑制,并呈现浓度及时间依赖的趋势.shRNA3转染后72h,mRNA及蛋白水平表现出佳的抑制效率,分别为(54.27±0.042)%和(41.69±0.038)%.RT-PCR结果显示,shRNA3对BGC-823细胞胃泌素mRNA的抑制率为48.1%.MTT结果显示,除shRNA4处理组外,其余3组处理细胞均表现出浓度依赖性的增殖抑制趋势.结论 4条shRNAs在mRNA及蛋白水平均明显地抑制了胃癌细胞BGC-823胃泌素的表达,shRNA3可能为有效的胃泌素-shRNA.shRNA对胃泌素表达的抑制,显著降低了BGC-823细胞增殖能力.
作者：丁一；李军扩；邢文英；乐晓萍；张钦宪 刊期： 2007年第02期
目的 探讨大鼠丘脑前核-海马下托复合体神经元环路的突触结构及谷氨酸分布特征.方法 应用HRP束路追踪结合包埋后胶体金免疫电镜技术.结果 在丘脑前核内,可见HRP顺行标记的海马下托复合体传入轴突终末,终末多为卵圆形,内含圆形透亮突触小泡和数个线粒体.其做为突触前成分与HRP标记的树突或非HRP标记的树突形成非对称性突触.在谷氨酸胶体金免疫反应切片上,胶体金颗粒标记胞体、树突、轴突终末等.HRP标记的轴突终末和一些非HRP标记的与突触后成分形成非对称性突触的轴突终末(Gray Ⅰ型)内,胶体金颗粒密度明显大于背景(胞体、树突、Gray Ⅱ型轴突终末等)的胶体金颗粒密度.其平均胶体金颗粒密度为突触后树突的3倍多,为对称性轴突终末(Gray Ⅱ型)的6倍多.在两张邻近的连续切片,γ-氨基丁酸(GABA)胶体金免疫反应切片上,GABA胶体金颗粒浓重标记Gray Ⅱ型轴突终末,背景标记极少;而非对称性轴突终末(Gray Ⅰ型)胶体金颗粒标记极弱.谷氨酸胶体金免疫反应切片上,Gray Ⅱ型轴突终末胶体金颗粒标记极弱.GABA阳性轴突终末与HRP标记的树突形成对称性突触,在同一树突上可见GABA能轴突终末形成的对称性突触和其他轴突终末形成的非对称性突触.结论 丘脑前核内来自海马下托复合体投射神经元的轴突终末是谷氨酸能的;来自海马下托复合体皮质投射神经元轴突终末,在丘脑前核与投射至海马下托皮质的神经元树突形成非对称性轴-树突触.
作者：马晓凯；王滨；范凯；付元山 刊期： 2007年第02期
目的 探讨人脐血干细胞定向分化为多巴胺(DA)能神经元的佳诱导条件.方法 体外分离、原代培养人脐血干细胞,流式细胞仪检测其表面标志,分别以EGF+bFGF、ATRA、ATRA+EGF+bFGF、纹状体条件培养液、纹状体星形胶质细胞条件培养液对其进行诱导,倒置相差显微镜观察细胞形态的变化.应用免疫荧光染色技术检测DA能神经元标志物酪氨酸羟化酶(TH)的表达.结果 比较各组对人脐血干细胞定向分化为DA能神经元的诱导作用,纹状体星形胶质细胞条件培养液＞纹状体条件培养液＞ATRA+EGF+bFGF组＞ATRA组＞EGF+bFGF组＞对照组.结论 纹状体组织对人脐血干细胞定向分化为DA能神经元的诱导作用优于其他各组,并且此作用可能主要源于纹状体的星形胶质细胞.
作者：李荣平；季凤清；孙海梅；王屹；曾晓蓓；赵春礼；杨慧；李雪梅；贾晓芳 刊期： 2007年第02期
目的 探讨在体外培养条件下用尼克酰胺、β-细胞调节素(betacellulin)、bFGF、HGF诱导人脐血CD34+细胞向胰岛细胞的分化.方法 用磁性细胞分选试剂盒(MACS)分离出CD34+细胞后在含5%FBS,1×ITS,4.7mg/L亚油酸,10-4mol/L 2-磷酸抗坏血酸的低糖型DMEM中培养,扩增后于培养第5d加入尼克酰胺、betacellulin、bFGF、HGF进行诱导,并于诱导14d、24d留取细胞.应用RT-PCR、免疫细胞化学染色方法检测分化细胞中胰岛细胞标志物,并用ELISA方法检测培养液中胰岛素水平.结果 流式细胞仪检测结果显示,CD34+细胞的平均分离纯度＞90%,达到分离要求.RT-PCR检测到诱导后的CD34+细胞表达nestin、ngn3、IPF-1 mRNA.免疫细胞化学染色可见诱导的CD34+细胞中出现nestin和insulin阳性表达细胞.胰岛素分泌细胞的分化率平均为(9.8±2.7)%.ELISA检测发现诱导组和未诱导组培养液中的insulin含量有显著性差异(P＜0.01).结论 体外联合应用上述因子能诱发脐血CD34+造血干细胞向胰岛素分泌细胞的分化.
作者：张芳婷；万汇娟；区文超；龙霞；叶静；于洁；鲁树坤；房家智 刊期： 2007年第02期
目的 探讨大鼠胰岛素基因增强结合蛋白1(Islet-1)基因是否有诱导神经干细胞(NSCs)向胆碱能运动神经元分化的能力.方法 用Islet-1基因重组逆转录病毒载体转导NSCs后,用免疫荧光组织化学染色方法检测Islet-1在NSCs内的表达;体内、体外实验观察导入Islet-1基因的NSCs向乙酰胆碱转移酶(ChAT)阳性细胞分化的情况.结果 在体外分化实验中观察到,转导Islet-1基因的NSCs向胆碱能运动神经元分化的细胞数明显多于对照组;体内移植实验发现,导入Islet-1基因的NSCs在体内可以向ChAT阳性细胞分化.结论 Islet-1基因有诱导NSCs向胆碱能运动神经元分化的能力.
作者：刘佳梅；陈东；孟晓婷 刊期： 2007年第02期
目的 观察大鼠孤束核吻侧段(rNTS)内脑啡肽阳性(ENK-ir)终末与γ-氨基丁酸(GABA-ir)阳性神经元之间的联系.方法 免疫荧光双重标记技术,包埋前免疫组织化学方法染色结合免疫金颗粒标记的电镜双标技术.结果 激光扫描共焦显微镜下可见rNTS内有大量的ENK-ir纤维和终末及散在的GABA-ir神经元.ENK-ir终末与GABA-ir神经元之间形成密切接触.在电镜下可见ENK-ir阳性产物主要定位于圆形清亮突触小泡及大颗粒囊泡表面.ENK-ir轴突终末与GABA-ir及阴性神经元胞体及树突之间形成对称性和非对称性的突触联系,以对称性突触为主.结论 rNTS内的ENK-ir终末可能通过抑制或增强GABA能神经元活性,或直接抑制味觉感受神经元活性的方式,参与NTS内味觉信息的感受和调节.
作者：刘玲；闫蕴力；赵金平 刊期： 2007年第02期
目的 研究Smad2/Smad3蛋白在大鼠卵巢颗粒细胞中的表达及FSH对其活化的影响.方法 21d SD雌性大鼠,注射PMSG 20IU,48h后对卵巢颗粒细胞进行原代培养,用TGFβRⅡ抗体及不同浓度的FSH对细胞进行不同时间的处理,通过免疫细胞化学方法观察TGFβ信号通路中Smad2/Smad3和P-Smad2/P-Smad3(磷酸化Smad2/3)表达的变化.结果 1.Smad2/Smad3主要定位于卵巢颗粒细胞胞质,其活化形式P-Smad2/P-Smad3有少量表达;2.经FSH处理后, Smad2/Smad3向核内转移增多,P-Smad2/P-Smad3的表达增强,并与FSH的作用时间及剂量呈正相关性;3.TGFβRⅡ被抗体完全中和后再用FSH处理,Smad2/Smad3的核阳性率无显著增多, P-Smad2/P-Smad3的表达未见明显增强.结论 1.FSH促进Smad2/Smad3的磷酸化;2.FSH对 Smad2/Smad3的激活作用与TGFβ受体密切相关.
作者：卫晓红；祁丽花；迟晓春；董静霞；杨京京；徐健 刊期： 2007年第02期
解剖学报杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中国解剖学会
