牛红星；卜艳珍；余燕；王艳酶；姬生栋；徐存拴
目的体外培养人胚胎生殖细胞(EG细胞),通过检测培养的细胞中SSEA-1、Oct-4的表达,鉴定人胚胎生殖细胞.方法取5～9周人胚胎的生殖腺嵴和肠背系膜,进行组织块体外培养,采用流式细胞术及免疫细胞化学检测培养细胞的SSEA-1、Oct-4表达;取5～9周人胚胎的生殖腺嵴,制备石蜡切片,利用免疫组织化学方法,检测原始生殖细胞的SSEA-1表达.结果组织块体外培养得到的细胞,经免疫细胞化学及流式细胞仪显示的单个细胞或细胞集落,均阳性表达SSEA-1、Oct-4.石蜡切片免疫组织化学显示,人胚胎生殖腺嵴中有许多SSEA-1阳性表达的原始生殖细胞.结论组织块体外培养所获得细胞来源于原始生殖细胞,为未分化的人胚胎生殖细胞.
作者：陈永珍；陈谦；李芳；朱旻；张苏 刊期： 2006年第02期
目的观察转化生长因子β(TGFβs)及其受体(TGFβ-R)在小鼠睾丸中的表达,证实TGFβs及其受体在小鼠精子发生过程中的定位和作用机理.方法免疫组织化学染色结合显微图像定量分析和免疫荧光双重染色.结果免疫组织化学显示:TGFβ1和TGFβ2主要表达于生精小管内Ⅵ-Ⅷ期圆形精子细胞以及长形精子细胞和变态精子细胞的胞质,位于睾丸间质中的Leydig细胞胞质呈弱表达;TGFβ3仅表达于Leydig细胞,各级生精细胞未见表达.晚期精母细胞(Ⅷ期)至第Ⅹ期长形精子细胞均表达TGFβ-RⅠ;TGFβ-RⅡ仅表达于第Ⅺ期后的变态精子细胞期;而TGFβ-RⅢ则主要表达于Ⅶ-Ⅷ期圆形精子细胞和变态精子细胞胞质.免疫荧光双重染色显示:TGFβ1和TGFβ2与TGFβ-RⅢ在生精上皮早共表达于晚期圆形精子细胞顶体极.结论 TGFβs及其受体在小鼠精子发生过程中的表达具有细胞和周期特异性,提示其在精子发生中具有重要意义.
作者：侯武刚；张远强；赵洁；赵勇 刊期： 2006年第02期
目的构建携带天花粉蛋白基因的高效表达载体,对比原核表达的重组天花粉蛋白和天然蛋白的免疫原性.方法通过RT-PCR技术扩增无N端和C端序列的TCS基因,测序鉴定后克隆入表达载体pET-29b中,IPTG诱导表达.用金属螯合层析法纯化重组蛋白.薄层扫描及Bradford法检测纯化后重组蛋白的纯度和含量.间接ELISA法检测重组蛋白和天然蛋白产生的多克隆抗体效价.Western blotting检测重组蛋白与抗天然蛋白抗体之间的免疫反应性.结果 1.双酶切鉴定结果表明,pET-29b-TCS成功构建;2.30℃,1 mmol/L的IPTG诱导4 h,重组蛋白的表达量高(占细菌总蛋白量的36%),主要以可溶性非包涵体形式存在于胞浆中;3.His-tag特异性结合树脂纯化后,获得了纯度达95%的重组蛋白,纯化后的蛋白含量为1.2 g/L;4.间接ELISA法检测天然蛋白和重组蛋白产生的抗体效价分别为1:4 960和1:5 120;5.Western blotting测纯化的重组蛋白与抗天然蛋白的多克隆抗体之间有特异反应性.结论本实验成功构建了高效表达载体pET-29b-TCS,携带的天花粉蛋白基因无N端和C端编码序列.重组蛋白的抗体效价显著低于天然蛋白,表明天然蛋白的糖基化与其免疫原性之间有一定的关系.
作者：王萍；丁世萍；李继承 刊期： 2006年第02期
目的检测对STAT3信号通路有调节作用的新基因SIPAR(STAT3 interacting protein as a represor)在小鼠胚胎发育过程中不同阶段的表达.方法采用地高辛标记探针的整体胚胎原位杂交方法.结果 SIPAR在dpc9.5的小鼠胚胎眼泡和听泡中有明显的表达,在dpc9.5～12.5的小鼠胚胎脊柱神经和脑部中枢神经都有表达,在dpc12.5小鼠胚胎脑、眼泡和脊柱中表达增强.结论 SIPAR主要集中表达在小鼠胚胎的神经系统,SIPAR可能与神经系统发育相关.
作者：戎煜；任芳丽；宁红秀；任永明；常智杰 刊期： 2006年第02期
目的研究雏鸡投射向圆核的视顶盖中央灰质层(SGC)细胞的形态学特征.方法通过灌流固定后向雏鸡圆核内注射或植入微量羰花青荧光染料DiI,逆向标记投射向圆核的视顶盖SGC细胞.结果标记到的SGC细胞分为4种类型.1型和2型细胞的胞体位于SGC的浅层,其树突的末端分别分布到视顶盖的F层和D层;3型和4型细胞的胞体位于SGC的深层,其树突的分支分别分布到视顶盖的H～J层和SGC内.1型和2型细胞的标记树突末端分别水平伸延形成丛状或二分歧和垂直伸延形成瓶刷状;3型和4型细胞的树突末端主要形成棒状,伸向视顶盖的H～J层和SGC层.结论鸡视顶盖SGC浅层细胞(1型和2型细胞)的树突分布到视顶盖的视网膜接受区,1型细胞以丛状或二分歧末端分布到视顶盖的F层,2型细胞以瓶刷状末端分布到视顶盖的D层,与终止于这些层的视神经终末部的形态一致.SGC深层细胞(3型和4型细胞)的树突分布到视顶盖的非视网膜接受区,树突末端主要形成棒状伸向视顶盖的H～J层和SGC层.
作者：胡满；陈耀星；王子旭；郑世学；任旭兵 刊期： 2006年第02期
目的研究SH2-Bβ在哮喘小鼠肺及内脏感觉传入系统(C7～T5脊神经节及对应的脊髓后角)的表达,探讨SH2-Bβ在哮喘发病中的作用.方法 BALB/c小鼠30只,按随机数字表法分为正常对照组、哮喘组,每组15只.利用免疫组织化学方法测定两组小鼠肺、C7～T5脊神经节及对应的脊髓后角SH2-Bβ的免疫反应变化;用免疫印迹法(Western blotting)检测肺及C7～T5节段脊髓SH2-Bβ及神经生长因子(NGF)的免疫反应变化;Metamoph图像分析系统对结果进行分析.结果免疫组织化学结果显示哮喘小鼠肺、C7～T5节段脊神经节及对应的脊髓后角SH2-Bβ免疫阳性产物平均光密度值分别为0.806±0.023、0.766±0.018、0.547±0.014,明显高于对照组(0.243±0.018、0.131±0.011、0.215±0.029)(P＜0.01).Western blotting显示SH2-Bβ及NGF在哮喘小鼠的C7～T5节段脊髓及肺内表达明显强于对照组;正常对照组脊髓及肺内的平均相对光密度值分别为0.346±0.017和0.512±0.018,哮喘组为0.738±0.021和1.526±0.022.NGF在正常对照组脊髓及肺内的平均相对光密度值分别为0.357±0.021和0.734±0.013,哮喘组为1.445±0.015和1.265±0.018;且SH2-Bβ与NGF光密度值呈正相关(r=0.651,P＜0.01).结论结果提示,SH2-Bβ在哮喘小鼠肺、C7～T5节段脊神经节及对应的脊髓后角过表达,可能是NGF参与哮喘发病的重要信号分子.
作者：齐金萍；曹德寿；刘晓湘；张国斌；方秀斌 刊期： 2006年第02期
利用牛卵母细胞和山羊耳皮肤成纤维细胞制作异种克隆胚,分别于激活后1、36、44、60、144 h,观察发育情况,并收集原核期胚,2-细胞胚,4-细胞胚,8-细胞胚和桑甚胚.光镜检查各时期胚,分别选取形态良好的5枚,用2.5%的戊二醛固定24 h后,用1.5%锇酸后固定40 min,再用乙醇逐级脱水并用丙酮置换,Epon-812包埋,后包埋块放入烤箱内聚合(37℃,24 h,45℃,24 h;60℃,24 h).
作者：敬晓棋；雷安民；窦忠英；巩胜勇；周勇 刊期： 2006年第02期
目的检测Wnt-l在大鼠气管上皮损伤修复中的表达及其变化,探讨影响气管干细胞早期增殖分化的分子调控机制.方法氟脲嘧啶(5-FU)作用大鼠离体气管,去除5-FU后分别于0、6、12、24及48 h用Westernblotting及免疫组织化学方法检测气管上皮中Wnt-1的表达.结果 5-FU损伤后12 h,气管上皮脱落,仅残留少量G0期细胞表达Wnt-1;去除5-FU后6 h,上皮细胞数目增多,呈扁平状间断分布,Wnt-1表达强;12 h后,上皮细胞呈立方状,并连接成片,Wnt-1表达逐渐减少;恢复48 h,气管上皮内出现假复层结构,仅见极少量Wnt-1阳性细胞.正常气管上皮Wnt-1表达极少. 结论 Wnt-1时间依赖性表达与气管上皮损伤修复进程相吻合,说明其在气管干细胞早期增殖分化中起重要调控作用.
作者：吕威力；贾心善 刊期： 2006年第02期
目的研究小鼠肾小体发育过程中细胞增殖与凋亡的变化规律.方法采用PCNA免疫组织化学方法、末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL染色法)和光、电镜技术,对发育不同阶段肾小体的细胞增殖和凋亡进行观察.结果 PCNA免疫组织化学染色显示:在Ⅰ和Ⅱ期肾小体内几乎所有细胞PCNA呈强阳性反应,Ⅲ、Ⅳ期肾小体PCNA阳性细胞数逐渐减少,Ⅴ期肾小体PCNA阳性细胞少见.TUNEL阳性细胞多出现在出生前,主要在Ⅲ、Ⅳ期肾小体表达.电镜观察:早期肾小体所有细胞核分裂象机率均高,Ⅲ期肾小体中的内皮细胞、足细胞核分裂象机率高,Ⅳ期肾小体中只见到内皮细胞核分裂象,Ⅴ期细胞核分裂象少见.电镜下所见的细胞凋亡多在Ⅲ、Ⅳ期肾小体,其中以内皮细胞、肾小囊壁层细胞凋亡居多.结论细胞增殖与凋亡行为在小鼠肾小体发育的整个过程中普遍存在,协同参与了调控肾小体正常发育过程.
作者：郭敏；王旭；席焕久 刊期： 2006年第02期
目的观察离体大鼠气管上皮损伤修复过程中气管干细胞的动态变化.方法用氟脲嘧啶(5-FU)造成离体大鼠气管上皮损伤,应用间接免疫荧光法和Western blotting动态观测了修复过程中各时间点气管上皮ABCG2的表达.结果 1.5-FU作用12 h后大部分气管上皮脱落,残留的G0期细胞中部分可见ABCG2表达阳性.去除5-FU后3 h细胞数目增多,为扁平状,ABCG2阳性细胞数也随之增多;6～9 h上皮细胞由扁平变为立方,ABCG2阳性细胞数继续增多;24 h上皮细胞呈立方状,并连接成片,ABCG2阳性细胞较前明显减少;48 h气管上皮接近恢复假复层结构,此时仅见极少量ABCG2阳性细胞.正常气管上皮未检测到ABCG2表达.2.Western blotting分析表明,ABCG2表达量的变化趋势与免疫荧光结果一致.结论 ABCG2的表达与干细胞的数量呈正相关,可作为气管干细胞的标志物.
作者：王琳琳；贾兰玲；贾心善 刊期： 2006年第02期
目的研究甲基强的松龙(MP)上调热休克蛋白(Hsp27)蛋白对受损中枢神经元自我保护及修复机制的激发和增强作用,为进一步促进受损中枢神经元存活和纤维再生创造有利的条件.方法建立中枢神经损伤模型(视神经眼眶内切断术),经或未经MP治疗的术后动物分别存活4、7 14、21、28 d,取视网膜,切片,Nissl染色观察视网膜节细胞(RGCs)形态和存活数量的变化,用免疫组织化学染色的方法观察节细胞层中Hsp27的表达(检测A值).用SAS软件对数据进行统计学处理.结果 MP治疗组可见受损RGCs在7、14 d的存活数量增多,有统计学意义(P＜0.01),在受损RGCs表达增多的Hsp27表达更加强烈(检测A值).RGCs存活率与A值在各个时间点的变化趋势相似.结论 MP可使具有保护作用的Hsp27表达上调,从形态学角度提示了MP可能激发并增强受损中枢神经的自我保护及修复机制.
作者：裴群羽；杨磊；王珂；杨立元；周长满；雷季良 刊期： 2006年第02期
目的观察Meyaert核(NBM)与大脑皮质神经元内脑源性神经营养因子(BDNF)的老龄性改变,探讨人参皂甙对BDNF蛋白含量表达的影响.方法雌性Wistar大鼠随机分为青年组、老龄组及老龄给药组.老龄给药组大鼠自18个月开始饲以人参皂甙至27月龄.对各组NBM及大脑皮层神经元进行免疫组织化学法染色、图像分析及统计学处理.结果老龄组大鼠NBM及大脑皮质内BDNF含量均显著低于青年组(P＜0.01).给药组大脑皮质内BDNF含量较老龄组显著增加(P＜0.01),但NBM内BDNF含量变化无统计学意义.结论老龄大鼠NBM及大脑皮质内BDNF含量显著降低,给予人参皂甙可显著提高大脑皮质神经元BDNF的表达.
作者：赵海花；赖红；曾亮；吕永利 刊期： 2006年第02期
目的构建胰岛素样生长因子-1(IGF-1)基因重组逆转录病毒,为将IGF-1基因应用于神经系统疾病的治疗打下基础.方法质粒pcDNA3.1-IGF-1经EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切后亚克隆至逆转录病毒载体pLXSN,构建成重组逆转录病毒表达载体pLXSN-IGF-1,采用酶切及测序对重组体进行鉴定.而后脂质体转染pLXSN-IGF-1至包装细胞pA317,检测培养上清病毒滴度.结果重组真核基因表达载体pLXSN-IGF-1经EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切后,得到了400 bp和6.0 kb两条带;以重组体为模板进行PCR检测,400 bp的目的基因片段呈阳性;重组体测序结果与预期结果完全一致;建立了细胞系PA317-IGF-1,其培养上清平均病毒滴度为6.5×105 CFU/ml.结论成功构建了IGF-1基因重组逆转录病毒.
作者：王进；崔景彬；张亚卓；董子明 刊期： 2006年第02期
目的体内定位生后7d大鼠的伸展细胞(TAs),并将其分离进行原代培养,为进一步移植提供指导.方法免疫组织化学的方法,利用波形蛋白(VIM)和胶质细胞纤维酸性蛋白(GFAP)两种标志物,体内定位生后7 dWistar大鼠的TAs;NADPH-d组织化学方法,定性检验其一氧化氮合酶(NOS)的表达;细胞培养技术,建立TAs体外培养的细胞模型并对其进行鉴定.结果原代培养的TAs表达VIM、GFAP和NOS与体内相同. 结论建立了体外研究TAs的细胞模型,为其进一步作为移植细胞提供了可能性.
作者：周馨；高秀来；马育平；陈亚亮；李莉；刘霞；景朋；陆涛 刊期： 2006年第02期
目的利用Cx43基因剔除(KO)小鼠模型,观察TGFβ2在心脏流出道隔的表达,探讨Cx43基因剔除小鼠心脏流出道隔心肌化异常与TGFβ2的关系;采用胚心脏体外培养技术,研究外源性TGFβ2是否促进流出道隔心肌化过程.方法选用胚E12.5～E15.5 d的Cx43基因剔除纯合型(Cx43-/-)、杂合型(Cx43+/-)及野生型(Cx43+/+)C57/BL6小鼠作为研究对象,采用PCR方法鉴定基因型,免疫组织化学法测定TGFβ2;选用野生型E12.5进行胚心脏体外培养至E15.5,同时加用TGβ2不同剂量干预处理,免疫组织化学法测定肌节肌动蛋白α-SCA的表达.结果 Cx43 KO小鼠胚期心脏近端流出道隔心肌细胞明显减少,尤其以E13.5和E14.5的Cx43-/-小鼠为著.与Cx43+/+小鼠对照,Cx43-/-小鼠心脏近端流出道隔TGFβ2的表达明显降低,以E14.5较为显著;E14.5的Cx43+/-小鼠表达也有降低.然而TGFβ2不同剂量干预组均没有见到明显的促进离体心脏心肌化的作用.结论 Cx43 KO小鼠心脏近端流出道隔存在明显的心肌化延迟.TGFβ2表达减少可能参与了Cx43-/-小鼠心肌化异常的发病机制.体外应用TGFβ2可能难以模拟在体的时空表达模式,或者心肌化的进行需要精确的TGFβ2的剂量和严格的培养条件.
作者：赵晓晴；黄国英；谢利剑；彭涛；周国民 刊期： 2006年第02期
目的研究六亚甲基双乙酰胺(HMBA)、烟酰胺(HMBPA)单独及两者联合使用对MELDS19细胞生长及分化的影响.方法绘制HMBA和HMBPA单独及两者联合使用后的MELDS19细胞生长曲线,成集落实验检测细胞增殖,联苯胺染色法检测其分化百分率. 结果 MELDS19细胞在HMBA与HMBPA联合作用下增殖能力下降,并且比单独作用强,联苯胺染色阳性率增高.结论 HMBA与HMBPA联合作用能增强抑制MELDS19细胞的生长繁殖并促使其分化.
作者：王艾琳；李坚；顾颜春；章静波 刊期： 2006年第02期
目的观察P19细胞经二甲基亚砜(DMSO)诱导及不同培养方法,培养形成细胞聚集体并向心肌分化的过程.方法将P19细胞接种于Petri塑料培养皿或铺有0.5%软琼脂的培养皿中,DMSO诱导悬浮培养7 d形成细胞聚集体,将聚集体用生长培养基黏附培养至19 d.观察细胞跳动情况,用α-sarcomeric actin、cardiac Troponin T(cTnT)抗体进行免疫组织化学染色,鉴定细胞分化.结果经DMSO诱导7d,将形成的细胞聚集体用生长培养基黏附培养至15 d,在聚集体周围的生长晕中出现自发性节律跳动的细胞团片,α-sarcomeric actin及cTnT染色阳性,至19d,阳性率分别可达26%和15%.结论 DMSO诱导结合聚集体形成培养方法可诱导P19细胞向心肌细胞分化,并出现自发性有节律跳动.
作者：尹青；张雷；赵昱；李莉；赵春芳 刊期： 2006年第02期
目的寻找一种快速简便的分离毛囊干细胞的方法,探讨β-连环蛋白(β-catenin)信号分子在毛囊干细胞增殖分化中的调节作用.方法利用毛囊干细胞黏附性强的特点,通过将毛囊细胞悬液黏附于包被有人胶原的平板而使富集毛囊干细胞分离.利用毛囊干细胞标志物Keratin 19(K19)及体外集落形成能力进行鉴定.采用免疫细胞化学及原位杂交技术检测分选后的毛囊干细胞β-catenin的表达情况.结果毛囊干细胞悬液黏附于人胶原20 min后,K19的表达增加1.6倍,集落形成能力增加3.5倍.β-catenin在细胞核中的蛋白表达增加. 结论快速黏附法可以使富集毛囊干细胞分离,β-eatenin参与了毛囊干细胞的增殖及分化调控.
作者：仇文颖；许增禄；徐园园 刊期： 2006年第02期
目的研究普通鵟(Buteo buteo)消化系统各器官蛋白水解酶的种类和性质,为探讨野生鸟类的分类地位、系统演化提供资料.方法采用蛋白水解酶复性电泳(G-PAGE)技术.结果 1.普通鵟消化系统蛋白水解酶种类多,达26种;2.普通鵟消化系统蛋白水解酶的活性受pH值的影响和制约,在碱性条件下酶活性强,酸性条件下弱,酶活性表现为碱性＞中性＞酸性;3.不同pH条件下,十二指肠和胰蛋白水解酶种类多且活性强,舌、食道和嗉囊蛋白水解酶种类少且活性弱;4.不同pH条件下,75、70 kD酶带普遍存在于肝脏和胰脏以外的各消化器官中.结论消化系统中结构相似、功能相近的各器官之间,蛋白水解酶的种类和性质相似.75、70 kD蛋白水解酶的pH依赖性不强且分布广.198 kD蛋白水解酶在pH8.5时广泛存在于消化系统各器官.
作者：牛红星；卜艳珍；余燕；王艳酶；姬生栋；徐存拴 刊期： 2006年第02期
目的研究体外培养的大鼠纹状体神经干细胞在植入同种视网膜后,向少突胶质细胞分化并产生髓鞘的过程,观察髓鞘形成对视网膜结构的可能影响,建立一种中枢神经髓鞘体内发育的新模型.方法将体外传代培养的胚胎纹状体神经干细胞植入新生大鼠的玻璃体腔内,在移植后不同时期观察视网膜内髓鞘的出现部位以及扩展趋势,利用不同染色方法对标本进行检验分析,利用透射电镜进行超微结构观察.结果移植细胞4周后部分视网膜内开始出现成束髓鞘,只分布于神经纤维层.髓鞘束出现的比例、分布面积和形态变化与移植后动物的存活时间相关.电镜观察可见节细胞轴突外包绕有结构正常的中枢神经样髓鞘.较厚的髓鞘束对视网膜节细胞的分布产生一定影响.结论大鼠纹状体神经干细胞可在同种视网膜内向成熟少突胶质细胞分化,视网膜神经纤维层具有促使髓鞘形成的作用;本实验可能为研究少突胶质细胞分化及髓鞘生成机制提供新的在体模型.
作者：郑华；万瑾；刘坤；佘振珏；肖虹蕾；俞彰；周国民 刊期： 2006年第02期
解剖学报杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中国解剖学会
