睾丸支持细胞促进体外培养神经元生长的研究

CPT-环磷酸腺苷对视网膜节细胞再生的影响

目的探讨玻璃体内插入外周神经和玻璃体内注射CPT-环磷酸腺苷对轴突损伤的视网膜节细胞再生的影响. 方法 20只成年金黄地鼠随机分4组,每组5只.切断视神经(ON)并缝接坐骨神经为再生对照组(attached graft,AG);ON切断并缝接坐骨神经后再于玻璃体内注射CPT-cAMP和/或插入一小段自体坐骨神经(SN)为实验组.采用逆行示踪标记术,观察视网膜平铺片节细胞数. 结果 1.对照组(AG),视网膜再生的节细胞数为:1428±284个;2.外周神经组(AG+SN):每个视网膜再生的节细胞平均数为2220±415个;3.CPT-cAMP组(AG+cAMP):每个视网膜再生的节细胞平均数为2175±364个;4.外周神经和CPT-cAMP联合组(AG+cAMP+SN):每个视网膜再生的节细胞平均数为4255±820个;其中,AG+SN、AG+CPT组同AG组相比存在差异显著性(P<0.01);AG+CPT+SN组同AG、AG+CPT和AG+SN组相比均有差异显著性(P<0.01). 结论研究结果提示玻璃体内注射CPT+cAMP或联合应用外周神经和CPT-cAMP可大幅提高受损视网膜节细胞的再生.

作者：朱永红；李海标 刊期： 2003年第05期

绝经后骨质疏松症病人Ⅰ型胶原的变化

目的研究Ⅰ型胶原合成及代谢在绝经后骨质疏松症发病中的作用. 方法以绝经后骨质疏松性骨折病人股骨头置换术弃去的股骨头为样本;采用苦味酸天狼星红-偏振光及Ⅰ型胶原和基质金属蛋白酶-1(MMP-1)抗体免疫组织化学染色,从蛋白水平观察骨中Ⅰ型胶原的分布和量的变化;地高辛标记的Ⅰ型胶原和MMP-1 cDNA基因探针进行原位杂交,从mRNA水平观察Ⅰ型胶原和MMP-1的分布和量的变化;从骨中提取Ⅰ型胶原测定肽链的羟基化水平,观察Ⅰ型胶原羟基化程度的改变. 结果绝经后骨质疏松性骨折病人胶原含量降低,Ⅰ型胶原蛋白纤维变细、断裂,结构紊乱.而细胞内Ⅰ型胶原和MMP-1 mRNA以及MMP-1蛋白水平均升高.Ⅰ型胶原蛋白赖氨酸羟基化程度升高而脯氨酸羟基化程度不变. 结论Ⅰ型胶原合成及代谢在质和量上的改变在绝经后骨质疏松症发病中起重要作用.

作者：刘敬；许增禄；徐雁英；仇文颖；王计奎；徐园园；钱晓菁 刊期： 2003年第05期

吗啡对大鼠脊髓Ⅱ板层中受损伤坐骨神经的传入纤维终末的影响--抗氟化物酸性磷酸酶组织化学研究

目的探讨吗啡对钳夹损伤坐骨神经后其传入纤维终末在脊髓Ⅱ板层分布的影响. 方法用显示抗氟化物酸性磷酸酶(FRAP)组织化学方法,借助图像分析仪测量损伤坐骨神经后15d和30d吗啡组和对照组大鼠脊髓Ⅱ板层FRAP阳性反应物面积. 结果损伤坐骨神经后吗啡组和对照组大鼠脊髓Ⅱ板层FRAP阳性反应区均有不同程度的缺失;对照组损伤坐骨神经后30d的FRAP阳性反应物面积比15d的FRAP阳性反应物面积增大40%.吗啡组损伤坐骨神经后30d的FRAP阳性反应物面积比15d的FRAP阳性反应物面积增大22%;同时也比对照组损伤坐骨神经后30d的FRAP阳性反应物面积增大19%. 结论随着损伤坐骨神经后大鼠存活时间延长,其脊髓Ⅱ板层FRAP阳性反应物面积呈恢复性增大;吗啡能使坐骨神经损伤大鼠脊髓Ⅱ板层的FRAP阳性反应物面积明显增大.

作者：张惠君；曾园山；聂俊辉；张伟 刊期： 2003年第05期

镉对长江华溪蟹肝胰腺细胞超微结构的影响

目的观察低浓度镉(39μmol/L)处理长江华溪蟹(Sinopotamon yangtsekiense)后,其肝胰腺细胞超微结构的变化. 方法实验组30只雄蟹培养在浓度为39μmol/L的氯化镉(CdCl2)溶液中;对照组30只雄蟹培养在已放置2d的自来水中,分别在镉处理后5d、15d、30d三个不同时间段活体解剖雄蟹,电镜下观察肝胰腺细胞超微结构. 结果镉对肝胰腺细胞内的主要细胞器影响表现为:核膜从弥散状到后解体;线粒体膜通透性改变,肿胀变形,嵴减少或消失,后完全空泡化;粗面内质网先裂解为大小不同的小泡,尔后小泡上的核糖体开始脱落,直至变成同心圆状板层结构;出现大量滑面内质网;溶酶体数量随镉处理时间的延长而增多,形成空泡、自噬体或髓样体;微绒毛出现脱落和部分空泡化. 结论镉使长江华溪蟹肝胰腺细胞的解毒功能丧失,破坏了肝胰腺细胞的细胞核、线粒体、粗面内质网等主要细胞器的结构与功能的完整性,影响了肝胰腺细胞的正常生理机能.

作者：王兰；王定星；王茜；杨秀清 刊期： 2003年第05期

干细胞因子在体外培养大鼠骨骼肌卫星细胞表达和发育的免疫组织化学研究

目的观察干细胞因子(SCF)在发育中的体外培养大鼠骨骼肌卫星细胞中的分布,探讨SCF在大鼠骨骼肌卫星细胞中的作用. 方法原代培养骨骼肌卫星细胞,经两次传代后,取培养2、4、8、16、24、48、72h的细胞行SCF单克隆抗体的免疫组织化学染色. 结果 SCF免疫阳性反应物存在于发育中的骨骼肌卫星细胞中,形成肌管后,细胞核呈强阳性反应. 结论 SCF在发育的骨骼肌卫星细胞中有表达,它可能在骨骼肌的生理发育中起某种调节作用.

作者：徐忠涛；周长满；鄂玲玲 刊期： 2003年第05期

人参皂甙Rg1对帕金森病小鼠黑质JNK细胞凋亡通路的影响

目的探讨人参皂甙Rg1(ginsenoside Rg1)抗帕金森病(PD)小鼠黑质神经元凋亡的可能机制. 方法采用MPTP制备帕金森病(PD)小鼠模型,经人参皂甙Rg1预处理后,用尼氏染色、TH和活化型caspase-3组织化学染色及TUNEL染色法观察黑质神经元的损害情况,并计算神经元的凋亡率,同时应用蛋白免疫印迹法检测黑质神经元磷酸化JNK(c-Jun氨基末端激酶)及磷酸化c-Jun蛋白表达水平. 结果人参皂甙Rg1预处理可减轻PD小鼠黑质致密带Nissl阳性神经元和TH阳性神经元的丢失现象,同时减少磷酸化JNK及磷酸化c-Jun蛋白表达水平,活化型caspase-3表达减少,降低黑质神经元的凋亡率. 结论人参皂甙Rg1能减少MPTP诱导的小鼠黑质神经元凋亡,其机制与阻断JNK细胞凋亡通路激活有关.

作者：周宜灿；陈晓春；朱元贵；方芳；陈丽敏 刊期： 2003年第05期

5种肽激素在黄鳝消化道内分泌细胞中的分布特点

目的探索黄鳝消化道黏膜中5种内分泌细胞的定位及分布. 方法采用免疫细胞化学技术中的链霉亲合素-生物素过氧化物酶复合物(SABC)法. 结果在黄鳝消化道黏膜中至少分布着5种免疫活性内分泌细胞,它们是:胃泌素(Gastrin,Gas)、生长抑素(Somatostatin,Som),五羟色胺(5-Hydroxytryptamine,5-HT)、胰岛素(Insulin,Ins)和神经丝蛋白-免疫活性内分泌细胞(Neurofilament-immunoreactive cell,NF).其中Gas和Som细胞分布在食道复层扁平上皮与杯状细胞之间:贲门处有少量Gas细胞分布,胃底上皮和胃腺中有大量的Som细胞分布,而Ins、NF和5-HT细胞则分别分布在幽门上皮和幽门腺管上.黄鳝的肠中则未见到上述任何一种免疫活性阳性反应.另外,胰高血糖素在黄鳝消化道任何部位均未见到免疫活性阳性反应.以上各免疫活性内分泌细胞均为深褐色,形状不规则,胞突较短而粗,胞核呈空泡状,常夹于食道和胃上皮之间或分布于腺上皮之间,将胞突伸向胃腔或腺腔. 结论作为低等脊椎动物,黄鳝的消化道具有复杂的内分泌功能.

作者：方之平；潘黔生；赵雅心；潘玉善；王翔凌 刊期： 2003年第05期

距骨临床X线测量

目的研究距骨生长发育规律并建立出生后幼儿至成人正常距骨X线测量值. 方法对1765例正常儿童、青少年右足距骨X线照片进行测量. 结果两岁以前,距骨的生长速度快,与体格发育(如体重、身高等)相一致.以后不出现明显的增长高峰.到青春发育期,距骨也不出现增长高峰. 结论 X线测量值不但用于某些先天性或后天性疾病所致距骨形态改变的正常对照,而且也用于其他方面(如人类学、法医学)的研究.

作者：马钦华；陈琦；芦爱萍；郭琪；陈志刚；钱致中 刊期： 2003年第05期

鸡胚尿囊绒毛膜法研究细胞间黏附分子-1在血管生成中的作用

目的探讨细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)在血管生成中的作用. 方法采用鸡胚尿囊绒毛膜(chorioallantoic membrane,CAM)法进行在体血管生成实验. 结果 1. 10d鸡胚的尿囊绒毛膜经ICAM-1作用3d后,明胶海绵周围放射状走行的微血管非常明显,似车辐,显微镜下明胶海绵内有垂直长入的微血管,明胶海绵周边CAM间充质内微血管数目显著多于对照组(P<0.01).2. 6d鸡胚的尿囊绒毛膜经Anti-ICAM-1作用3d后,明胶海绵周围放射状走行的微血管极不明显,显微镜下明胶海绵内几乎没有新生的微血管,明胶海绵周边CAM间充质内微血管数目显著少于对照组(P<0.01). 结论结果提示1. ICAM-1有诱导微血管生成的作用;2. ICAM-1参与胚胎的血管生成.

作者：伍静文；张端莲；王瑞绵；杨勇；刘昱 刊期： 2003年第05期

芳香化酶在胶质母细胞瘤细胞系SHG-44细胞中的表达及调控

目的研究芳香化酶细胞色素P450(AROM)及雌激素受体(ER-α)在胶质母细胞瘤细胞系SHG-44细胞中的基因表达. 方法细胞培养、免疫细胞化学染色、原位杂交染色及RT-PCR技术. 结果在SHG-44细胞中分别检测到AROM及ER-α的表达,进一步发现SHG-44细胞中AROM的表达是由多个组织特异性启动子驱动基因的转录. 结论可能为中枢神经系统肿瘤发生的激素调节提供新的资料.

作者：肖岚；蔡文琴 刊期： 2003年第05期

干细胞常用词汇(续四)

作者： 刊期： 2003年第05期

人外周血树突状细胞与人肺鳞癌细胞的融合研究

目的探讨用杂交瘤技术制备树突状细胞疫苗的方法.研究树突状细胞/肿瘤细胞之融合细胞的形态及表型特征. 方法用PEG法将免疫磁珠法分离获得的人外周血树突状细胞与人肺鳞癌细胞株LTEP78融合,瑞氏-姬姆萨染色观察树突状细胞、LTEP78细胞及其融合细胞的形态结构,SP免疫细胞化学染色法检测融合细胞的分子表达. 结果分离的树突状细胞能高表达HLA-DR分子,而LTEP78细胞则不表达;将树突状细胞与LTEP78细胞按10∶1比例融合后,两者的细胞膜、细胞质依次融合,获得的融合细胞仍能表达HLA-DR分子. 结论人树突状细胞与人肺鳞癌细胞的融合是一个动态过程,通过将两者融合,人肺癌细胞获得了人树突状细胞表达的HLA-DR分子,从而增强了其免疫原性,为人树突状细胞疫苗的研制奠定了基础.

作者：伊焕发；唐军民；唐岩；甄昱；孙红亚；戴燕；秦屹 刊期： 2003年第05期

人参皂甙诱导骨髓巨噬细胞表达造血生长因子的研究

目的探讨人参皂甙对巨噬细胞表达造血生长因子的影响. 方法采用造血祖细胞体外培养、造血生长因子生物学活性检测、免疫细胞化学与核酸原位杂交等技术,研究人参总皂甙(TSPG)对大鼠骨髓巨噬细胞(rBMMφ)和人单核细胞株(THP-1)表达造血生长因子的影响. 结果经TSPG(10～50mg/L)诱导制备的rBMMφ和THP-1的培养上清液可显著提高大鼠和人的CFU-Mix、CFU-GM和CFU-E的集落产率;经TSPG诱导后rBMMφ和THP-1表达EPO、GM-CSF、IL-3、IL-6的蛋白水平有不同程度提高;经TSPG诱导后rBMMφ和THP-1表达EPO、GM-CSF和IL-3的mRNA水平和强度显著提高. 结论 TSPG可通过直接和/或间接途径刺激造血诱导微环境的巨噬细胞,从蛋白水平和基因转录水平两级层次上促进造血调控因子(如EPO、GM-CSF、IL-3和IL-6等)的合成和分泌,进而促进造血干/祖细胞的增殖分化,这或许是人参调节血细胞生成的可能途径之一.

作者：王莎莉；李静；王亚平；陈笛；王璐；姜蓉 刊期： 2003年第05期

体外培养大鼠骨髓基质细胞分化为成骨细胞新方法的建立和鉴定

目的改进成骨细胞骨髓培养法并进行鉴定. 方法建立分离和培养大鼠骨髓基质细胞(MSC)的新方法,并用活细胞形态学观察、HE染色、组织化学和放射免疫测定等技术进行观察和鉴定. 结果 MSC呈典型的成纤维样细胞,细胞生长旺盛,增殖能力强.体外培养第40d后碱性磷酸酶、骨钙素量达到高峰,维持至第60d左右开始下降. 结论改进后的成骨细胞骨髓培养法具有分离时间缩短、污染机会减少、工作效率提高等优点,并且有助于MSC分化和增殖为具有良好功能特性的成骨细胞.

作者：毛曦；毛钊；王建军 刊期： 2003年第05期

促性腺激素释放激素类似物对大鼠胃肠道5-羟色胺分泌的影响

目的研究GnRH对胃肠道内5-HT分泌的影响. 方法胃腔直接注射GnRH类似物阿拉瑞林(Alarelin GnRH-A)以模拟外分泌产生的GnRH,并以免疫组织化学、高压液相色谱电化学检测(HPLC-ECD)的方法对阿拉瑞林刺激后胃及十二指肠内5-HT免疫反应细胞、血清中5-HT含量进行检测. 结果胃腔内注射GnRH-A后,大鼠胃及十二指肠内5-HT免疫反应阳性细胞密度显著增多,但血清中5-HT含量显著减少. 结论外分泌的GnRH对于5-HT的释放起明显抑制作用,但对5-HT的合成可能不产生影响.

作者：朱晓东；王玉珍；刘晓宁；黄威权 刊期： 2003年第05期

新生大鼠视网膜神经干细胞的分离培养与诱导分化

目的初步探讨新生大鼠视网膜神经干细胞的诱导分化. 方法从新生大鼠视网膜分离具有自我更新能力的细胞克隆,传代.用脑源性神经营养因子(BDNF)与血清单独或联合培养诱导其分化,采用免疫细胞化学及免疫荧光化学技术对分化前后的细胞进行鉴定. 结果分离获得的细胞具有连续克隆的能力,表达nestin.分化后细胞分别表达多种神经元及神经胶质细胞的特异性标志物;BDNF与血清联合作用可使细胞向神经元分化的比例提高. 结论新生大鼠视网膜内存在具有自我更新与多分化潜能特性的神经干细胞,BDNF作为辅助诱导剂,可促进其存活、分化、成熟,并可能诱导其向神经元方向分化.

作者：陈宁；李昌琪；伍校琼；蔡维君；黄菊芳；刘丹；罗学港 刊期： 2003年第05期

NT-3基因修饰施万细胞与神经干细胞联合移植治疗全横断脊髓损伤的实验研究

为探索一种治疗急性脊髓损伤的新策略,本实验先用核荧光标记培养的神经干细胞(NSCs);再用含神经营养素-3基因的腺病毒(AdvNT-3)感染培养的施万细胞(SCs),简称NT-3-SCs.然后建立大鼠全横断脊髓损伤模型,向损伤处分别移植NSCs、SCs+NSCs和NT-3-SCs+NSCs.所有动物存活60d后,进行爬网格测验和BBB评分.接着在脊髓横断处远端组织内注射荧光金(FG),动物再存活7d.在处死动物前检测皮质运动诱发电位(CMEP)和皮质体感诱发电位(CSEP).

作者：郭家松；曾园山；李海标；李晓君 刊期： 2003年第05期

同型半胱氨酸对大鼠胚胎发育的毒性作用

目的研究同型半胱氨酸(homocysteine,HCY)和同型半胱氨酸诱导基因(homocysteine-induced gene,HCY-2)与心脏畸形的关系. 方法大鼠妊娠8、9、10 3d尾静脉注射同型半胱氨酸,分别于第13、15、 17、19d 取材,用组织学和免疫组织化学ABC法观察心脏畸形和基因Hcy-2在心脏上的表达并进行图像定量分析. 结果HCY对大鼠胚胎心脏有明显致畸作用,主要为心脏偏位,心脏过小;室间隔缺损,心房缺失等;ABC法显示基因Hcy-2在给药组胚胎心脏中表达增强. 结论 HCY对心脏发育是一种新的毒性因子;Hcy-2基因的过度表达与心脏畸形发生可能有一定关系.

作者：吴俊；李英；吕丹瑜；毕振伍 刊期： 2003年第05期

MK-801和L-NA对成年仓鼠视网膜节细胞轴突损伤后存活与再生的影响

目的研究NMDA受体阻断剂MK-801和一氧化氮合酶抑制剂L-NA对成年仓鼠视网膜节细胞(下称节细胞)轴突切断后存活和再生的影响. 方法切断动物左侧视神经后分两组:存活组存活2、7或14d;再生组视神经眶侧断端同一段坐骨神经吻合后存活28d.所有实验动物自视神经切断前1d开始,每日接受腹腔注射MK-801和/或L-NA直至处死. 结果存活节细胞均数在MK-801组与对照组间无显著性差异,但L-NA组在术后2和7d节细胞数较对照组显著增加,合用MK-801/L-NA较单用MK-801或L-NA使更多节细胞存活.而MK-801或L-NA对节细胞轴突在周围神经移植物内的再生均无明显作用. 结论 1mg/kg剂量的MK-801对节细胞的存活无明显作用,但同时阻断NMDA受体和抑制一氧化氮合酶比单纯抑制一氧化氮合酶对节细胞有更强的神经保护作用.1.0mg/kg MK-801或4.5mg/kg L-NA对节细胞轴突的再生无明显促进作用.

作者：游思维；郑拱秋；叶嘉勋；苏国辉 刊期： 2003年第05期

人前磨牙牙髓牙本质复合体Ⅰ型和Ⅲ型胶原的来源及分布

目的探讨牙髓牙本质复合体Ⅰ型和Ⅲ型胶原的来源与分布. 方法收集人前磨牙,固定、脱钙、石蜡包埋、切片、用SABC法进行免疫组织化学染色,显示Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白. 结果Ⅰ型胶原在牙髓内十分丰富,聚集成束,根髓中致密,以粗纤维束沿神经血管纵行分布;冠髓中纤维束较细、大量分支、变细,随意分布,交织成疏松的纤维网.从根尖至牙冠,从牙髓中央至周边,纤维束由粗变细,沿途分支,大部分终止于牙髓基质,少部分经成牙本质细胞间进入前期牙本质.此外成牙本质细胞、成纤维细胞与血管内皮细胞亦见Ⅰ型胶原蛋白表达.前期牙本质Ⅰ型胶原染色深,与牙髓基质和成牙本质细胞突起内者相延续,成熟牙本质近髓1/3可见Ⅰ型胶原阳性免疫反应物.Ⅲ型胶原在牙髓牙本质复合体的表达基本与Ⅰ型胶原类似,仅数量和密度略少. 结论牙髓牙本质复合体内的Ⅰ型和Ⅲ型胶原可能由成牙本质细胞、成纤维细胞和血管内皮细胞产生;不仅牙髓内存在Ⅰ型和Ⅲ型胶原,而且前期牙本质也有Ⅰ型和Ⅲ型胶原.

作者：朱世柱；丁晓勇；薛敬玲；朱艺；孟杨；王纪 刊期： 2003年第05期