方银花;李晓琴;任洞;唐才智;冉新泽;粟永萍;程红缨
尽管肿瘤的诊疗技术在不断的探索中进步,我国恶性肿瘤患者死亡率仍然呈现持续增长的趋势,癌症已经超过心血管疾病成为威胁人类健康的第一大杀手.肿瘤的形成需经历一个复杂的过程,是机体内癌基因活化、抑癌基因失活以及稳定性基因发生改变的综合结果.但实际上,在肿瘤的整个发生发展过程中,肿瘤微环境和免疫系统同时发挥着重要的作用.“肿瘤免疫监视”学说认为,一旦细胞发生癌变,免疫系统能够对其进行识别、消灭,阻止肿瘤的发生[1].但是肿瘤细胞的异质性和高突变性决定了肿瘤细胞会发生各种突变,从而逃脱免疫监视[2-3].随着肿瘤细胞的不断进化和肿瘤微环境的逐步建立,有些肿瘤细胞终将摆脱机体的免疫监视,不断增殖并在临床上形成肿瘤[4].肿瘤发展与免疫系统的相互作用是一个长期的动态变化过程,肿瘤的突变往往伴随着对肿瘤特异性免疫反应的抑制,终建立起一个肿瘤免疫抑制的微环境[5-6].
作者:孔苗;谭松巍 刊期: 2017年第03期
目的 研究亚低温治疗对小儿重症病毒性脑炎患者血清及脑脊液神经元特异性烯醇化酶(NSE)、S100B蛋白水平的影响.方法 以2012年1月~2014年12月武汉儿童医院收治的83例重症病毒性脑炎患儿为研究对象,随机分为亚低温组和常规治疗组,亚低温组于入院24 h内实施全身亚低温治疗(目标温度为肛温32~35℃,疗程3~10 d),对照组给予常规治疗.观察患儿治疗前后临床症状,监测血清及脑脊液NSE、S100B蛋白水平.结果 ①与常规治疗组比较,亚低温治疗组患儿临床症状持续时间、格拉斯哥昏迷指数(GCS)评分以及住院时间明显缩短(P<0.05或P<0.01);②两组血清NSE、S100B含量在治疗后0、24 h比较差异无统计学意义(均P>0.05),在治疗后48、72 h及10d,亚低温治疗组患儿血清NSE、S100B水平低于常规治疗组,两组差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);③恢复期亚低温治疗组脑脊液NSE、S100B水平均低于常规治疗组,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01).结论 亚低温治疗可以降低重症病毒性脑炎患儿血清及脑脊液NSE、S100B蛋白水平,改善临床症状.
作者:陈锋;张芙蓉;孙继民;何生松;王君 刊期: 2017年第03期
目的 探讨重建股骨近端外侧壁完整性对A3型股骨转子间骨折行股骨近端防旋髓内钉(PFNA)内固定手术疗效的影响.方法 收集2014年6月至2016年6月在江苏大学附属医院行PFNA治疗A3型股骨转子间骨折且有完整随访资料的患者70例,按照是否重建外侧壁分为A组(外侧壁未重建组)、B组(外侧壁重建组).观察指标:年龄、骨质疏松程度(Singh指数)、手术时间、术中出血量、术后TAD(尖顶距)及Offset(偏心距)值、骨折初步愈合时间、内固定失效情况以及末次随访时Harris评分.结果 所有患者平均随访5.2个月(3~10个月).A、B两组患者的年龄、骨质疏松程度、手术时间、术中出血量及TAD之间的差异均无统计学意义(均P>0.05).而A组的内固定失效率、Offset短缩、骨折愈合时间均大于B组,末次随访Harris评分优良率小于B组,差异均具有统计学意义(均P<0.05).结论 A3型股骨转子间骨折由于外侧壁破损容易发生内固定失效以及转子间短缩等不良并发症;术中重建外侧壁,能够恢复其支撑作用,降低PFNA手术失效率,改善术后髋关节功能.
作者:王志钢;徐晓峰;陈奇;曹兴兵;孙继芾 刊期: 2017年第03期
目的 探讨Wnt/β-catenin信号通路的异常激活在鼻咽癌发生发展机制中可能的作用.方法 以10例正常鼻咽组织为对照,运用免疫组织化学技术检测24例鼻咽癌组织中Wnt2和β-catenin的表达水平及其在癌细胞中的定位情况;运用实时定量PCR技术和蛋白免疫印迹技术分别检测鼻咽癌组织中Wnt2和β-catenin基因和蛋白的表达水平.结果 免疫组化检测结果显示,在鼻咽癌标本中,Wnt2的表达明显高于对照组织,且阳性染色主要位于细胞质内;β-catenin在细胞膜上的表达量显著低于对照组织,而在细胞质和细胞核中的表达呈明显上调.实时定量PCR检测结果显示,Wnt-2 mRNA在鼻咽癌组织中的表达量明显高于对照组织(P< 0.01);β-catenin mRNA表达量则低于对照组织(P=0.016).蛋白免疫印迹技术检测结果表明,Wnt2蛋白在鼻咽癌组织中的表达高于对照组织,而β-catenin蛋白在受检肿瘤标本中的含量亦呈明显上调.结论 Wnt2、β-catenin在鼻咽癌组织中存在明显的异常表达,提示Wnt/β-catenin信号通路的异常激活可能是鼻咽癌发生发展的重要分子机制之一.
作者:黄孝文;崔伟伟;王宝凤;崔永华 刊期: 2017年第03期
目的 评价吉林市青年学生男男性行为(males who have sex with males,MSM)人群艾滋病行为的干预效果,为制定适合该人群的综合行为干预策略提供依据.方法 采用“分类滚雪球”方法对青年学生MSM人群开展横断面调查.综合干预措施包括利用新媒体开展宣传教育、行为干预、自愿咨询检测、同伴教育、安全套推广及性病门诊规范化服务等.对干预前后各300名青年学生MSM人群采取面对面匿名的方式对人口学特征、艾滋病防治知识了解情况、高危行为及干预服务措施等影响因素进行调查和分析.结果 艾滋病相关知识知晓率,干预前后分别为67.67%和94.33%.干预前近1次和近6个月在肛交时坚持使用安全套的比例分别为23.57%和11.79%,干预后分别为76.21%和62.10%.干预前后与异性发生性行为时安全套使用比例比较,近1次与女性发生性行为安全套使用率从23.53%上升到69.60%,近6个月安全套的使用率从15.44%上升到66.40%.干预前后近1年MSM人群曾有过性病相关症状的比例从21.33%下降到7.67%.结论 通过采用综合干预措施,吉林市青年学生MSM人群艾滋病知识知晓率明显提高;高危性行为的发生率减少;安全套的使用率有所提高.利用新媒介开展青年学生MSM人群干预,成本低、操作方便,可以作为传统行为干预模式的良好辅助措施.
作者:蔡勇;乔建国;孙殿伟 刊期: 2017年第03期
目的 观察温阳药新乌头碱对白血病细胞K562和K562耐柔红霉素细胞株(K562/DNR)的抑制作用及可能的分子机制.方法 应用MTT法,结合流式细胞术检测不同浓度新乌头碱对K562和K562/DNR增殖和凋亡的影响.通过Real-time PCR检测不同浓度新乌头碱作用72 h对K562和K562/DNR细胞C/EBPα、Caspase-3、p53凋亡相关基因表达的影响.结果 K562和K562/DNR细胞的增殖抑制率随着新乌头碱浓度增加及作用时间延长而上升,呈浓度、时间依赖性(均P<0.05).新乌头碱能引起K562和K562/DNR细胞凋亡,且随着药物浓度增加,凋亡率也逐渐升高,差异均有统计学意义(均P<0.05).Real-time PCR结果显示,经50μmol/L新乌头碱作用72 h,K562和K562/DNR细胞的C/EBPα表达下调,Caspase-3、p53表达上调,与正常对照组相比差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 新乌头碱能够引起K562和K562/DNR细胞发生凋亡,并且凋亡机制可能与下调C/EBPa基因及上调Caspase-3、p53基因有关.
作者:关心;杨同华;张超然;冯帅 刊期: 2017年第03期
目的 研究全反式维甲酸对支气管哮喘小鼠气道炎症及辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)细胞功能的调节作用.方法 采用卵清蛋白(OVA)腹腔注射致敏和雾化吸入激发建立支气管哮喘小鼠模型,分别用全反式维甲酸及泼尼松干预治疗15 d(1次/d),同时设立正常组及模型组.观察各组小鼠肺组织的炎症改变、细胞计数及肺泡灌洗液中IL-17、IL-10及TGF-β的含量.结果 泼尼松[7.5 mg/(kg·d)]组及全反式维甲酸高剂量[10 mg/(kg·d)]组肺部炎症改变较模型组明显减轻,全反式维甲酸低剂量[5 mg/(kg·d)]组炎症反应介于模型组及泼尼松组之间.模型组肺泡灌洗液中细胞总数、嗜酸性粒细胞及中性粒细胞计数均明显高于正常组;经泼尼松及高剂量全反式维甲酸干预后,细胞计数均明显下降,维甲酸低剂量组也呈下降趋势.模型组及全反式维甲酸低剂量组IL-17含量明显高于正常组,IL-10及TGF-β含量均低于正常组;而泼尼松组及全反式维甲酸高剂量组与正常组之间差异无统计学意义.与模型组相比,泼尼松组及全反式维甲酸高、低剂量组IL-17含量明显降低,IL-10及TGF-β的含量升高.泼尼松组及全反式维甲酸高剂量组各细胞因子之间无明显差异;与全反式维甲酸高剂量及泼尼松组相比,全反式维甲酸低剂量组IL-17含量升高,而IL-10及TGF-β含量降低.结论 全反式维甲酸可以通过调节Th17/Treg的细胞功能,从而改善哮喘小鼠的气道炎症反应,为治疗支气管哮喘提供新的干预措施.
作者:王君丽;韩冰;李小莉;张丹丹 刊期: 2017年第03期
目的 探讨PP2CE在人原发性肝癌组织中的表达、亚细胞定位及其与临床病理特征的关系.方法 收集武汉同济医院2010~2015年手术切除的原发性肝癌(HCC)及其对照的癌旁组织标本50例.采用荧光定量PCR法和免疫组织化学法分别检测PP2CE在肝癌及癌旁组织中mRNA和蛋白表达水平,分析其与临床病理资料之间的关系.免疫荧光法检测PP2CE在肝癌及癌旁组织中的亚细胞定位.结果 肝癌中PP2CE mRNA和蛋白表达水平较其对应的癌旁组织明显减少(均P<0.05),通过分析PP2CE免疫组化结果与临床病理特征的关系发现,PP2CE减少与肝癌大小、分化程度、门静脉侵犯和临床分期相关(均P<0.05).免疫荧光检测表明PP2CE主要表达于细胞质和核周.结论 PP2CE在HCC中表达减少,其可能参与抑制肝癌的发生和发展.
作者:徐卫华;黄焕军 刊期: 2017年第03期
目的 检测乳腺癌肿瘤组织中HOX转录反义RNA(HOTAIR)的表达,并观察HOTAIR对乳腺癌细胞系MCF-7侵袭转移能力的影响.方法 应用荧光定量PCR检测32对乳腺癌患者的肿瘤组织和癌旁正常组织中HO-TAIR的表达差异;通过慢病毒转染构建稳定高表达HOTAIR的MCF-7细胞株,Transwel1检测高表达HOTAIR对细胞侵袭能力的影响,光学显微镜下观察细胞的形态学变化,Western blot法检测上皮-间质转化(EMT)相关蛋白的变化.裸鼠尾静脉注射HOTAIR高表达的MCF-7细胞,观察肝脏转移瘤的形成.结果 在32对乳腺癌临床标本中,有24例肿瘤组织中HOTAIR的表达高于癌旁正常组织;MCF-7高表达HOTAIR后,细胞的侵袭能力增强,细胞发生EMT为特征的形态学变化,EMT相关的E cadherin表达降低,而Vimentin及Slug的表达升高.高表达HOTAIR的MCF-7细胞肝脏转移瘤成瘤能力更强.结论 乳腺癌临床标本中HOTAIR的表达增高,乳腺癌细胞系MCF-7中高表达HO-TAIR可诱使其发生EMT,并促进其侵袭转移.
作者:吕峰;孔舒欣;于洋;梁栋;张斌 刊期: 2017年第03期
近年来,纳米材料及其表面修饰技术的发展,使以纳米特性为基础设计生物相容性的纳米探针并用于疾病的显像、局部治疗和药物运输成为可能.其中金纳米颗粒可以与DNA[1]、多肽[2]、抗体[3]、放射性核素[4]等相偶联,实现对肿瘤的靶向检测、显像及治疗.此外,纳米颗粒在肿瘤区域具有渗透滞留效应(enhanced permeability and retention,EPR),可促进大分子物质的选择性分布,增加药效并减少系统副作用[5].在近红外区域(near infrared,NIR),生物组织中的血红蛋白和水对光的吸收少[6].
作者:张影影;覃春霞;张永学 刊期: 2017年第03期
目的 探索蛋白磷酸酶2A(PP2A)抑制剂LB-100对宫颈癌细胞Ca ski辐射敏感性的影响.方法 Ca ski(宫颈癌细胞株)及CCD 841 CoN(正常小肠上皮细胞株)给予不同浓度梯度(0~100 μmol/L) LB-100处理24 h后,以CCK-8法检测细胞活性,筛选佳药物作用浓度.在此药物浓度下,以对照(PBS)、单纯LB-100、单纯辐照及LB-100联合辐照等方式处理细胞(辐照剂量为0、2、4、6 Gy),通过平板克隆实验分别观察LB-100对Ca ski和CCD 841 CoN辐射敏感性的影响;再以相同的方式处理(细胞辐照剂量为6 Gy),通过流式细胞术检测凋亡及细胞周期,初探LB-100增强Ca ski辐射敏感性的机制.结果 LB-100对Ca ski及CCD 841 CoN的抑制作用呈药物剂量依赖性;2.5 μmol/L LB-100增强Ca ski细胞辐射敏感性,但对CCD 841 CoN的辐射敏感性无显著影响;LB-100联合辐照处理促进Ca ski细胞凋亡,LB-100联合辐照组细胞凋亡率与单纯辐照组比较差异有统计学意义[(8.76±1.02)% vs.(4.65±0.72)%,P<0.01];LB-100可下调Ca ski细胞G0/G1期所占比例,LB-100联合辐照组与单纯辐照组比较差异有统计学意义[(19.87±2.54)%vs.(30.73±1.18)%,P<0.05].结论 PP2A抑制剂LB-100通过促进凋亡、影响细胞周期,增强了人宫颈癌细胞株Caski的辐射敏感性,同时,其对正常肠上皮细胞CCD 841 CoN无辐射增敏作用,有望成为临床上增强宫颈癌放射治疗疗效的辅助药物.
作者:方银花;李晓琴;任洞;唐才智;冉新泽;粟永萍;程红缨 刊期: 2017年第03期
近年来研究发现,肠神经胶质细胞(enteric glial cells,EGCs)不仅仅发挥营养和支持肠神经元的作用,而且对调控神经元生长发育、神经回路功能和细胞凋亡、维持肠道稳态过程中均起到重要作用.如对肠神经系统(enteric nervous system,ENS)进行结构及功能整合,维持黏膜上皮屏障,调节胃肠道动力、营养摄取、分泌及调节血流,参与免疫或炎性反应等.其中,维持肠道上皮屏障的完整性是EGCs的一个重要特点,EGCs的缺失及损害会导致大鼠肠黏膜屏障完整性缺失,使其通透性增加,从而导致肠道炎症、出血及坏死等表现,本文就这一方面的研究进展进行简单阐述.
作者:李坤;陈婕 刊期: 2017年第03期
目的 研究三七皂苷Rg1对阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)模型大鼠空间学习记忆能力和磷酸化tau蛋白的作用及机制.方法 SD大鼠左侧脑室Aβ25-35注射复制AD模型,分别用低(25 mg/kg)、中(50mg/kg)、高剂量(100 mg/kg)的三七皂苷Rg1灌胃,2次/d,4周后进行Morris水迷宫实验检测学习记忆能力,并通过免疫印迹、免疫组织化学方法,检测各组大鼠海马tau蛋白磷酸化水平及分布的变化.结果 侧脑室注射Aβ25-35后,模型大鼠学习记忆能力显著低于正常对照大鼠;免疫印迹法检测结果显示,海马tau蛋白苏氨酸231位点磷酸化(PT231)水平明显增加,非磷酸化水平明显下降;形态学检测结果显示,模型大鼠海马DG区、CA1区和CA3区的PT231水平明显增加.中剂量的三七皂苷Rg1干预能显著改善模型大鼠在Morris水迷宫中学习记忆的能力;3种剂量的三七皂苷Rg1均能降低其海马DG、CA1、CA3区的tau蛋白PT231水平,且3种剂量之间的差异无统计学意义.结论 三七皂苷Rg1能改善Aβ25-35诱导的模型大鼠AD样空间学习记忆能力障碍及降低海马tau蛋白磷酸化水平.
作者:李沐哲;吴文辉;吴之平;任美玲;陈淑贤;郭晓玲;王平;林丽 刊期: 2017年第03期
目的 探究母代营养过剩对雄性子代能量代谢的影响.方法 C57BL/6J雌鼠随机分为高脂饮食组和正常饮食组,分别饲喂高脂或正常饲料2个月,然后与正常饮食C57BL/6J雄鼠交配,孕鼠在孕期和哺乳期继续摄取高脂或正常饲料.子一代雄鼠性成熟后与正常饮食C57BL/6J雌鼠交配得到子二代,子二代雄鼠性成熟后再与正常饮食C57BL/6J雌鼠交配得到子三代.测定子一代、子二代、子三代雄性小鼠体重、摄食量及随机血糖值.对子一代和子二代成年雄性小鼠进行腹腔糖耐量实验并记录肝脏、附睾周脂肪、皮下脂肪湿重值.检测子二代成年雄性小鼠血清胰岛素及下丘脑能量代谢相关基因表达情况.结果 营养过剩母鼠子一代和子二代雄性小鼠的体重、摄食量、能量摄入量及随机血糖值均高于对照组(均P<0.05),子三代之间的差异则无统计学意义(P>0.05).营养过剩母鼠子一代和子二代的成年雄性小鼠的附睾周脂肪脂体比、皮下脂肪脂体比、肝体比及糖耐量曲线下面积均高于对照组(均P<0.05).营养过剩母鼠子二代成年雄性小鼠的血清胰岛素浓度及下丘脑神经肽Y(NPY)、刺鼠相关蛋白(AGRP)、甘丙肽(GAL)、可卡因-安他非明转录调节肽(CART)、SIM1基因的表达量均高于对照组(均P<0.05).结论 高脂饮食诱导的营养过剩母代对雄性子代能量代谢的影响可持续至子二代,引起子二代下丘脑能量代谢相关基因表达异常.
作者:周群;李炯;张燚;关蕴良;王萍;张果 刊期: 2017年第03期
目的 研究CD44在胶质瘤中的表达和临床意义,以及CD44下调对胶质瘤细胞增殖、侵袭和凋亡的影响.方法 检索Oncomine数据库中关于CD44的信息,对其在各类型肿瘤及胶质瘤中的表达情况进行检索.利用R2基因分析可视化平台及TCGA数据库中下载的胶质瘤基因芯片数据集,分析CD44的表达水平与胶质瘤患者预后的关系.通过siRNA抑制CD44的表达,通过CCK-8试验、Transwell小室、流式细胞术检测CD44下调对胶质瘤U251细胞增殖、侵袭和凋亡的影响.结果 Oncomine数据库中共收集了467项不同肿瘤类型的关于CD44的研究结果,对比正常组织,有统计学差异的结果有68项,其中CD44表达增高的有51项,表达降低的有17项.胶质瘤中高表达的有10项,未搜索到低表达的项目,10项研究共包括955例样本.分析R2基因分析可视化平台(包含504例胶质母细胞瘤)及TCGA数据库(包含529例低级别胶质瘤)的基因芯片数据发现,CD44高表达患者预后更差.在胶质母细胞瘤中CD44高、低表达组患者2年生存率分别为13%和25%(P=0.000 1),在低级别胶质瘤中CD44高、低表达组患者5年生存率分别为47%和61%(P=0.001 0).采用特异性针对CD44基因的siRNA转染U251胶质瘤细胞可显著抑制CD44的表达,与阴性对照组和空白对照组相比,转染组的细胞增殖和侵袭明显受到抑制,且流式细胞学显示转染组对比阴性对照组细胞凋亡率增加,分别为7.10%和4.11% (P<0.05).结论 CD44在胶质瘤中高表达,可作为胶质瘤预后判断指标及潜在的治疗靶点.
作者:郭秋云;胡广原;韩娜;石磊;于洋;陈承奇;张孟贤 刊期: 2017年第03期
目的 探讨青年急性脑出血的临床特点、出血部位及病因分型.方法 回顾2010年1月~2015年1月期间,同济医院收治的694例年龄≤45岁的青年脑出血患者的临床资料.按年龄分为青少年组(<35岁)和青成年组(35~45岁),并对其发病特点及病因进行比较分析.结果 5年中,青年脑出血患者占同期收治的脑出血患者总数的比例波动在24.4%~30.5%之间,男女比例为1.9∶1.主要症状为头痛(59.5%)、偏瘫(46.5%)、意识障碍(29.5%)、失语(10.1%).危险因素有高血压(53.9%)、吸烟(40.4%)、饮酒(29.4%)、高血脂(26.1%)、家族史(17.3%)、糖尿病(5.9%).出血部位以深部半球(58.6%)和脑叶(37.9%)为主,小脑和脑干分别占4.3%、4.9%,青少年组(<35岁)在脑叶出血的比例上明显高于青成年组(35~45岁)(P<0.01),随年龄增长,脑叶出血的比例逐渐下降.病因有高血压合并动脉硬化(37.9%)、血管畸形(19.3%)、烟雾病(13.4%)、动脉瘤(8.8%)、肿瘤卒中(3.2%)、血液及凝血异常(2.0%)、其他及不明原因(19.9%),不同年龄段的病因组成存在显著差异,青少年组在颅内血管畸形的发生率上高于青成年组(P<0.01),且年龄每减少10岁,血管畸形的发生率增加2.44倍.结论 青年脑出血越来越常见,其临床症状轻,病因仍以高血压为主,但脑血管畸形占比明显升高,出血部位在脑叶的比例高,年龄越轻,这种趋势越显著.同时,烟雾病是青年脑出血人群需要重视的病因.
作者:黄梁江;李大勇;何永培;邓春初;熊永洁;张苏明 刊期: 2017年第03期
目的 构建人可溶性Tim-3(sTim-3)的重组质粒表达载体pET28a-sTim-3-EGFP,在大肠埃希菌中进行诱导表达并对其表达条件进行优化.方法 取健康人外周血提取总RNA,RT-PCR扩增Tim-3基因胞外段序列,克隆入已构建的表达载体pET28a-EGFP中,鉴定阳性克隆.重组质粒转化BL21 (DE3),通过调整IPTG浓度、诱导时机、诱导温度与诱导时间优化蛋白表达条件.结果 成功构建原核表达载体pET28a-sTim-3-EGFP,并转化BL21 (DE3)进行诱导表达.温度和IPTG浓度对蛋白表达量影响不大;在培养至A600nm值约为0.6~0.8时于25℃诱导5h可获得较高的蛋白表达.结论 成功表达可溶性重组蛋白sTim-3-EGFP,为该蛋白的进一步纯化生产及应用奠定了良好基础.
作者:白少云;卿吉琳;刘振;谭源福;陈治中 刊期: 2017年第03期
目的 介绍并探讨计算机辅助设计(CAD)与3D打印技术在下颌角成形术中的应用价值,以期优化手术模式与获得佳整形美容效果.方法 对来自四川大学华西口腔医院颌面外科与华中科技大学同济医院口腔科就诊的1 6例方脸患者术前拍摄头颅CBCT并进行三维数据重建,通过计算机辅助设计确定个性化下颌角截骨范围,用3D打印技术制作下颌骨模型,并制作实施准确手术的导板.在手术中用此导板引导进行下颌骨的“V-line”弧线截骨,部分患者同时结合颧骨颧弓与颏部的面部轮廓整形手术,术后效果通过3D曲线函数来评估.结果 所有患者术后均对自己面型满意,术后下颌骨两侧几乎完全对称,X线显示截骨线流畅平滑,完全达到术前设计要求.结论 计算机辅助设计与3D打印技术的有机结合为下颌角成形术的准确性、安全性与可预见性提供了新策略与新方法.数字化下颌角成形术的应用不仅提高了美容效果,而且能减少手术时间,降低手术难度并降低损伤重要神经血管的风险,值得临床推广应用.
作者:杨运强;顾旖菲;邵乐南;汤国雄;蒋梁;李殿奇;张广 刊期: 2017年第03期
目的 探讨高糖条件下肾小球系膜细胞Toll样受体4(TLR4)及其信号通路中下游因子MyD88、核因子-κB(NF-κB)以及炎性因子的表达变化,论证高糖环境下血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)与TLR4的对话关系,以期阐明TLR4信号通路在糖尿病肾病(DN)发病机制中的作用.方法 设计3对针对大鼠TLR4基因的特异性siRNA片段以及带有绿色荧光的阴性对照,筛选出转染效率高的siRNA,用于后续实验.第1部分实验在高糖的基础上分别加入AngⅡ、TLR4siRNA、血管紧张素Ⅱ受体阻断剂(ARB)、阴性对照siRNA,探讨高糖对各组细胞TLR4、MyD88及NF-κB表达的影响;第2部分实验在AngⅡ的基础上分别加入高糖、TLR4 siRNA、ARB、阴性对照siRNA,探讨AngⅡ对各组细胞TLR4,MyD88及NF-κB表达的影响.采用荧光定量PCR检测各组TLR4、MyD88 mRNA的表达,Western blot检测TLR4、MyD88及NF-κB蛋白表达水平的变化,ELISA法检测细胞上清液中白细胞介素-6(IL-6)及单核细胞趋化因子-1(MCP-1)的表达情况.结果 高糖及AngⅡ都可以上调TLR4、MyD88、NF-κB蛋白及TLR4、MyD88 mRNA的表达水平(均P<0.05),也可上调IL-6及MCP-1的表达(均P<0.01)且二者协同刺激情况下上调更明显.siRNA干扰及ARB可下调TLR4、MyD88、NF-κB蛋白及TLR4、MyD88 mRNA的表达,下调IL-6及MCP-1的表达,与高糖及AngⅡ组相比差异有统计学意义(均P<0.05).结论 高糖环境和AngⅡ刺激系膜细胞TLR4/MyD88信号通路激活,特异性TLR4 siRNA基因可以部分阻断由高糖及AngⅡ诱导的TLR4信号的激活,厄贝沙坦也可部分阻断TLR4信号通路,高糖和AngⅡ共刺激增强由TLR4介导的天然免疫炎症效应,TLR4/MyD88信号通路在此效应中扮演重要角色;TLR4 siRNA基因沉默技术为寻找DN的治疗方法提供了新思路,也为临床上使用ARB延缓DN进程提供了新的理论依据.
作者:王瑜;刘思逸;程玉花;张莉;江磊;吕金雷;陈钦开 刊期: 2017年第03期
目的 探索一种改进的贴壁培养神经干细胞的方法.方法 从胚胎期为15.5d的胎鼠大脑皮层中提取神经干细胞,在PO/FN(Poly-L-ornithine hydrochloride/Fibronectin)包被处理后的培养瓶中进行贴壁培养并传代,在倒置显微镜下观察神经干细胞的细胞形态,并通过免疫荧光法鉴定神经干细胞及其子代细胞进行分化操作之后的情况.结果 原代神经干细胞细胞形态清晰,免疫荧光标记物明显.结论 相对于传统神经球悬浮培养法该法处理简便,传代损耗低,容易观察到细胞形态和分化阶段,更有助于神经干细胞的培养和存储.
作者:杨骐昌;宋晓峰;韩平 刊期: 2017年第03期