郭成；段建峰；刘青光；张雷；杨雪；宋涛；姚英民
目的 观察GAD65基因修饰的间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)在癫痫大鼠脑内的表达及对癫痫发作的影响.方法 原代培养大鼠MSCs,流式细胞仪鉴定第3代细胞纯度;用LV5 GFP-GAD65病毒液转染MSCs,并鉴定蛋白表达;将GAD65基因修饰的MSCs移植至戊四氮癫痫大鼠模型侧脑室后,观察其对癫痫大鼠行为学、脑电图的影响;Western blot检测细胞移植后大鼠海马组织内GAD65的表达.结果 流式细胞仪检测第3代MSCs可以达到较高纯度;LV5-GFP-GAD65转染细胞后,MSCs中能够正确过表达GAD65;细胞移植后GAD65-MSCs组大鼠癫痫的发作次数减少,发作级别减低;脑电图结果表明癫痫发作痫波减少;Western blot检测结果显示GAD65-MSCs组大鼠海马组织中GAD65含量增高.结论 脑内移植GAD65基因修饰的MSCs能明显抑制大鼠的癫痫发作.
作者：赵元淑；罗淼珊；邓镇；谢柳；余涵；陈丽；胡景鑫；朱晓琴；雷水生 刊期： 2013年第06期
目的 探讨1-磷酸神经鞘氨醇(sphingosine 1-phosphate,S1P)对联合培养的大鼠骨骼肌成肌细胞及新生大鼠心肌细胞缺氧/复氧所致细胞损伤的影响.方法 体外分离与培养新生大鼠心肌细胞,并与大鼠骨骼肌成肌细胞共同培养,构建缺氧/复氧损伤模型,于复氧期开始给予S1P干预.利用2,4二硝基苯肼显色法检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性,硫代巴比妥酸显色法检测丙二醛(maleic dialdehyde,MDA)含量,原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡,并比较各组间差异,从而观察S1P对共同培养新生大鼠心肌细胞和大鼠骨骼肌成肌细胞缺氧/复氧诱导细胞损伤的影响.结果 ①新生大鼠心肌细胞在培养24 h后开始贴壁生长,培养6d内细胞数量未见明显变化,培养2d后倒置显微镜下见散在的具有搏动能力的心肌细胞,第3天可见散在的心肌细胞相互间连接成合胞且可见细胞搏动,4～5d呈同一节律的搏动.②100、500、1 000 nmol/L S1P均可减少共培养心肌细胞和骨骼肌成肌细胞缺氧/复氧损伤后LDH活性和MDA含量,即可减轻复氧所诱导的细胞损伤.③S1P可抑制共培养心肌细胞和骨骼肌成肌细胞缺氧/复氧损伤后的细胞凋亡.结论 S1P可减少因复氧所诱导的共同培养细胞损伤,抑制细胞凋亡.
作者：于欢；谷翔；张普华；徐良贤；陈培良；秦仲君；赵勇 刊期： 2013年第06期
目的 观察非体外循环下双向格林分流术治疗复杂先天性心脏病的疗效.方法 2009年3月～2011年11月间42例确诊为复杂先天性心脏病、术前影像学资料证实不能行一期解剖矫治或生理矫治手术的患者,采用非体外循环下双向格林分流术进行治疗,总结治疗效果.并与2008年5月～2009年8月间在体外循环下实施的12例双向格林分流术患者资料进行比较.结果 非体外循环组除1例患者自动出院以外,其余患者均康复出院.术中患者平均自体转流时间为(36.4±15.2)min,术前血氧饱和度为(65.6±8.7)％,术后早期血氧饱和度为(86.7±9.1)％,术后3个月血氧饱和度为(89.5±8.9)％,平均呼吸机辅助时间为(14.2±4.6)h;康复者血氧饱和度明显上升,活动耐受量及心功能显著改善.结论 非体外循环下双向格林分流术是一种安全的治疗复杂先天性心脏病的手术方式,临床效果优于体外循环下手术.术前选择合适的手术适应证、术中进行通畅的腔静脉-肺动脉吻合、术后正确的处理是确保手术成功的关键.
作者：高开柱；肖明第；陈小中；王宜青；王吉祥；肖亦敏；李小波；程云阁 刊期： 2013年第06期
目的 研究脱钙人牙基质(decalcified tooth matrix,DTM)复合胶原材料对实验性兔股骨缺损的修复作用.方法 新西兰大白兔24只,随机分为2组,无菌条件下麻醉动物,于股骨远端钻孔制备直径约6 mm、深约5 mm的骨缺损模型;实验组于缺损区植入脱钙人牙基质复合胶原材料,对照组不进行任何植入处理.术后1、4、8、12周每组分别处死3只动物,进行大体观察、同步辐射X射线观察及组织学观察,并对成骨量进行分析.结果 从大体观察结果来看,术后12周,实验组新生骨长入骨缺损处,植入材料与周围骨组织间界面基本消失,而对照组骨缺损处明显凹陷.同步辐射X射线观察显示,实验组术后4周材料开始降解吸收;术后8周骨缺损区密度已基本接近宿主骨;术后12周骨缺损区密度与正常骨骼无明显差异.组织学观察结果显示,实验组术后4周新生骨组织开始生长;术后8周后可见大量成骨细胞和破骨细胞,新生骨向材料内生长;术后12周缺损部位已经长出成熟的骨组织,骨小梁融合并且排列致密.成骨量分析结果显示,在术后4、8、12周,实验组新生骨含量都明显高于对照组,说明该复合材料具有良好的成骨性能,对兔股骨缺损有明显修复作用.结论 脱钙人牙基质复合胶原材料是较理想的支架材料,具有良好的诱导成骨作用,可作为一种新型复合材料修复骨缺损,具有良好的临床应用前景.
作者：李佳楠；钟小忠；鲁金辉 刊期： 2013年第06期
目的 改进小鼠胰岛的分离、纯化及移植方法.方法 基于传统小鼠胰岛移植模型,优化胶原酶消化液配方,标准化胰腺组织的消化过程,改用Histopaque 1077作为纯化胰岛的离心介质,改进胰岛制备物输送至肾包膜下的方法;相差显微镜下观察所获胰岛的形态,用双硫腙(DTZ)对胰岛进行特异性染色并计算胰岛产量及纯度;采用吖啶橙-碘化丙啶(AO-PI)染色法观察胰岛活性;制备糖尿病小鼠模型,设计胰岛移植组(10只)及假手术对照组(10只),检验胰岛移植物治疗糖尿病的效果.结果 健康胰岛有完整包膜,DTZ染色后呈猩红色,平均每只小鼠可收获(200±30)个胰岛团,终纯度(90±5)％;荧光显微镜下,AO-PI染色后,正常胰岛显示绿色,死亡胰岛显示红色,胰岛存活率为(93±3)％;糖尿病小鼠接受同系胰岛移植后,90％的小鼠逆转糖尿病,对照组小鼠的血糖无改善.结论 成功改进胰岛移植模型,简化和标准化小鼠胰岛的分离、纯化及移植过程,有助于该模型成为胰岛移植研究的常规方法.
作者：马俊磊；曾怡；张冬梅；姜松；李幸；戴晓敏；汪晶；宫念樵 刊期： 2013年第06期
目的 探究Twist介导的衰老逃逸在宫颈癌侵袭转移过程中的作用.方法 免疫组织化学法检测70例宫颈鳞状细胞癌标本中Twist和衰老指标CBX3的表达;合成靶向Twist的小干扰RNA瞬时转染宫颈鳞癌细胞SiHa,免疫细胞化学及β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老变化.结果 Twist在早期宫颈鳞癌(Ⅰ a～Ⅱa期)及晚期宫颈鳞癌(Ⅱb～Ⅲb期)组织中表达强阳性率分别为6.7％和15.0％,CBX3表达强阳性率分别为10.0％和0％;而在发生或未发生淋巴结转移的宫颈鳞癌组织中,Twist表达强阳性率分剐为25.0％和2.4％,CBX3表达强阳性率分别为0％和7.2％.Twist在早、晚期宫颈鳞癌组织表达改变与CBX3相反.低表达Twist的SiHa中CBX3表达上调,并伴有β-半乳糖苷酶染色增强.结论 Twist在宫颈癌发展过程中表达逐渐升高,其介导的衰老逃逸贯穿宫颈癌侵袭转移的整个过程.
作者：王恬；陶涛；阿比丹·吐尔汗江；汪雯雯；栗妍；王世宣 刊期： 2013年第06期
高度近视(highmyopia,HM,＞-6.00D)与原发性开角型青光眼(primary open-angle glaucoma,POAG)常同时存在.HM者发生POAG比例为正常人的6倍(1.2％与0.21％)[1],POAG患者中近视率达78.72％,远高于非POAG对照组的62.22％,这种近视率差异只由HM引起[2].这些数据提示两者的发生发展可能存在相互影响,进一步揭示两者关系,有望为HM和POAG的研究和治疗提供理论基础.1 组织病理学基础在近视眼中,随着眼轴变长,视乳头及其周围的巩膜拉长、变薄,视乳头周围巩膜的变化使球后脑脊髓腔向视乳头区域延伸.HM的视神经和Bruch膜之间出现间隙,视神经纤维层与Bruch膜、脉络膜距离变大,视乳头周围视网膜缺乏Bruch膜和脉络膜的支撑,仅存视神经纤维层.
作者：凌云；刘海霞 刊期： 2013年第06期
由美国癌症学会进行的一项新调查显示,2009年美国结直肠癌的年发病人数和死亡人数分别为146 970例和49 920例,在所有肿瘤中排第3位[1].目前,在结直肠癌的影像学诊断,复发转移及治疗反应监测中,传统影像学技术如计算机断层显像(computed tomography,CT)、磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)、结直肠镜、直肠内超声(endorectal ultrasonography,EUS)、胸片等仍占主导地位.正电子发射断层/计算机断层显像(positron emission tomography/computed tomography,PET/CT)是一种集功能代谢影像与解剖影像于一体的融合显像模式,其通过应用不同种类的显像剂从分子水平反映肿瘤的代谢、增殖等情况,因此在肿瘤发生或复发转移早期就可进行诊断.
作者：李崇佼；兰晓莉；张永学 刊期： 2013年第06期
目的 探讨野生型(wt)-p53与JunB融合基因抑制裸鼠肝细胞肝癌(肝癌)移植瘤的作用.方法 将18只BALB/c裸鼠按随机数字表法随机分为实验组、阴性对照组和空白对照组,每组6只,分别接种wt-p53与JunB融合基因质粒、携带GFP的空质粒及单纯肝癌细胞HepG2,于注射后的28 d处死荷瘤裸鼠,测量肿瘤体积、肿瘤重量,计算肿瘤抑制率.结果 3组裸鼠移植瘤位于背侧皮下,实验组裸鼠移植瘤较小,阴性对照组与空白对照组裸鼠移植瘤均明显隆起于裸鼠背部皮下.实验组移植瘤的体积、重量明显小于阴性对照组,差异均有统计学意义(LSD-t=4.63,P=0.006;LSD-t=19.56,P＜0.01);实验组移植瘤的体积、重量也明显小于空白对照组,差异均有统计学意义(LSD-t=5.74,P=0.002;LSD-t =27,22,P＜0.01);阴性对照组与空白对照组间移植瘤的体积、重量差异无统计学意义(LSD-t=1.59,P=0.171;LSDt=2.00,P=0.101).实验组平均肿瘤抑制率为84％.结论 wt-p53和JunB融合基因可明显抑制裸鼠肝癌移植瘤的生长.
作者：郭成；段建峰；刘青光；张雷；杨雪；宋涛；姚英民 刊期： 2013年第06期
大多数情况下,儿童尿失禁是由逼尿肌/括约肌功能性协调障碍所致,治疗效果不确定.单侧肾发育不良伴输尿管异位开口的经典症状是既有正常排尿又有持续滴尿现象,与假性尿失禁症状相似.单侧肾发育不良伴输尿管异位开口虽然少见,据中国新生儿缺陷监测调查,其发生率约为29/100万[1],但是一旦确诊,手术治疗可以彻底治愈.我院2008年至2012年期间采用后腹腔镜肾切除术治疗11例小儿肾发育不良伴输尿管异位开口,本文对其临床症状、诊断方法以及治疗方式进行了回顾性分析,现报道如下.
作者：朱梁；朱斌；赵晓昆；杨罗艳；钟朝辉 刊期： 2013年第06期
目的 观察中药补肾安胎方及其拆方对超促排卵模型小鼠子宫内膜基质金属蛋白酶-2、-9(MMP-2,MMP-9),基质金属蛋白酶抑制因子-3(TIMP-3)表达的影响.方法 以昆明种小鼠为研究对象,并以孕马血清(PMSG)诱发超促排卵模型,将小鼠随机分为正常组(自然周期)、模型组(PMSG+ HCG)、活血组(模型十活血中药)、补肾组(模型十补肾中药)、补肾安胎组(模型十补肾安胎中药),每组24只,自开始腹腔注射PMSG或生理盐水的当天清晨分别予双蒸水或中药灌胃,直至处死小鼠的当天清晨.于妊娠第5、7天取小鼠子宫,免疫组化法检测MMP-2、MMP-9、TIMP-3的表达部位,实时定量PCR检测MMP-2、MMP-9、TIMP-3的mRNA表达.结果 免疫组化显示:MMP-2、MMP-9及TIMP-3蛋白在妊娠第5天表达在初级蜕膜带,随着蜕膜化发展,逐渐表达于整个蜕膜化间质细胞中.实时定量PCR显示:妊娠第5天,与正常组相比,模型组MMP-9、TIMP-3 mRNA表达均升高,差异有统计学意义(P＜0.05).妊娠第7天,与正常组相比,模型组MMP-2、MMP-9及TIMP-3 mRNA表达均明显降低(均P＜0.05);各中药组均高于模型组,差异有统计学意义(均P＜0.05),其中活血组差异更显著(P＜0.01).结论 补肾安胎方及其拆方均能对超促排卵小鼠基质金属蛋白酶及其抑制因子的表达有促进作用,未发现活血药对着床有负面影响.
作者：孟艳岑；张明敏；崔丹丹 刊期： 2013年第06期
目的 通过观察转化生长因子-β(TGF-β)3种不同亚型(β1、β2和β3)对前软骨干细胞(PSCs)的增殖分化及细胞外基质合成的影响,为构建组织工程学软骨组织寻找理想的细胞因子.方法 通过免疫磁珠分选法得到经过筛选和纯化的PSCs细胞,分别用含有浓度为10 ng/mL的3种亚型的重组TGF-β培养液对PSCs进行培养.PSCs培养后第0、3,6、9天,采用MTT法与BrdU/PI双参法测细胞增殖及DNA合成水平,采用RT PCR法测定ColⅡ、Aggrecan基因的表达.采用免疫组化法测定培养2周后各组细胞SOX9蛋白表达情况.结果 培养3d后,TGF-β1组PSCs的增殖活性明显较对照组下降(P＜0.05),而TGF-β2、TGF-β3组增殖活性与对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05).6d后,与对照组相比,TGF-β1组细胞增殖活性明显降低(P＜0.05);而TGF-β2、TGF-β3组则显示了相反的结果,增殖活性较对照组明显增强,且TGF-β3组高于TGF-β2组(P＜0.05).DNA合成呈同样趋势.RT PCR分析显示,随着时间的延长,与对照组相比,TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3组ColⅡ基因表达均呈上升趋势;TGF-β1与TGF-β3组Aggrecan的表达亦较对照组增加,但TGF-β2组Aggrecan的基因表达无明显改变.免疫组化检测结果显示,TGF-β1、TGF-β3组的SOX9蛋白合成高于对照组(P＜0.05),而TGF-β2组与对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论 TGF-β1能抑制PSCs增殖活性,而TGF-β2和TGF-β3具有促进PSCs增殖的作用,TGF-β1与TGF-β3均能促进PSCs细胞分化,而TGF-β2对于分化的诱导作用不明显.
作者：丁然；王庆；蔡贤华 刊期： 2013年第06期
目的 研究康艾冻干粉针剂体内外抗肿瘤细胞的活性.方法 建立小鼠S1s0、H22肿瘤模型,测定不同浓度康艾粉针溶液体内对荷瘤小鼠肿瘤的抑制作用.同时进行体外实验,选取小鼠肿瘤细胞S180、人肝癌细胞HepG2,分别以与不同浓度的康艾粉针溶液体外共同培养作为给药组,与5-Fu共同培养作为阳性对照组,并设空白对照组.MTT法检测待测药物对肿瘤细胞的抑制作用,荧光显微镜下观察药物对HepG2细胞核形态学特征的影响,采用流式细胞仪对HepG2细胞的细胞周期时相及凋亡率进行分析.结果 康艾粉针在给药剂量为3～12 g/kg时,对S180、H22荷瘤小鼠肿瘤均产生明显的体内抑制作用,且在该剂量范围内呈现一定的量效关系,对小鼠S180肿瘤的抑制率为20.20％～54.55％,对H22肿瘤的抑制率为30.18％～68.65％.康艾粉针对小鼠S180、人肝癌细胞HepG2的增殖均有明显的抑制作用,且具有直接杀死HepG2以及诱导HepG2凋亡的双重作用.结论 康艾冻干粉针剂具有良好的体内外抗癌活性.
作者：刘璐；曾凡波；杜光 刊期： 2013年第06期
目的 探讨肝切除术后预防性使用特利加压素对患者肝肾功能的影响.方法 将2009年10月至2011年10月期间武汉协和医院连续收治的肝储备功能差或肝切除范围大的原发性肝癌患者随机分为试验组和对照组,试验组(T组)48例,术后预防性使用特利加压素,对照组(C组)45例,未使用特利加压素,观察两组手术前后总胆红素(T-Bil)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)含量变化.结果 两组患者一般资料、肝功能分级、肝癌大小及合并癌栓情况、术中情况等具有可比性(均P＞0.05).术前两组各观察指标无明显差异(均P＞0.05);T组患者的血AST、BUN、Cr水平于术后第4天、第7天均明显低于C组(均P＜0.05),ALT、T-Bil水平于术后第7天明显低于C组(均P＜0.05);T组未出现并发肝肾综合征病例,C组出现2例.结论 术后预防性使用特利加压素对合并肝硬化的肝叶切除术患者的肝肾功能具有保护作用,并可减少术后肝肾综合征的发生.
作者：孙平；杨勇；郑启昌 刊期： 2013年第06期
目的 比较来氟米特(LEF)与霉酚酸酯(MMF)治疗糖尿病肾病大鼠的疗效.方法 健康雄性SD大鼠40只,随机分成4组:正常对照组(N组)、糖尿病肾病组(D组)、糖尿病肾病十霉酚酸酯组(M组)、糖尿病肾病十来氟米特组(L组),后3组予以高糖高脂饮食喂养,4周后一次性腹腔注射STZ 40 mg/kg制模.M组、L组分别予以MMF 10mg/(kg·d)、LEF 5 mg/(kg·d)灌胃干预,共8周.0周、4周、8周分别检测大鼠血肌酐、尿肌酐、24 h尿蛋白定量,计算内生肌酐清除率(Ccr);于8周末取肾组织行病理检查并予病理学评分,免疫组化检测肾组织中血管细胞粘附分子-1(VCAM 1)的表达.结果 ①24 h尿蛋白:M组4周时无明显变化,8周时明显下降(P＜0.05);L组4周时即有明显减少(P＜0.05),8周时进一步下降(P＜0.05).②Ccr:M组和L组各时间点均无明显变化,组间比较差异亦无统计学意义(P＞0.05).③病理学评分:M组与D组相比差异无统计学意义;L组较M组、D组均有明显下降(均P＜0.05).④VCAM 1表达:与D组相比,M组明显减少(P＜0.05),L组无明显变化.结论 LEF在降低蛋白尿,改善肾脏病理学评分方面强于MMF,但对于微血管病变的控制上MMF则更具有优势.
作者：李广胜；曾艳；李秋月；周静；吕金雷 刊期： 2013年第06期
目的 探讨胃癌根治术中完整网膜囊切除对术后局部复发及生存率的影响.方法 检索Pubmed(1966年1月至2012年10月)、Embase(1974年1月至2012年10月)、中国知网(1994年1月至2012年10月)等数据库并交叉核对文献,初筛纳入英文文献359篇、中文文献101篇.再依纳入标准“胃癌行D1-D2根治术、对术中行网膜囊完整切除与不完整切除进行分组、术后3年行局部复发率及总生存率的统计”筛选,共入选6篇文献.采用RevMan 5.2软件进行Meta分析.结果 纳入6篇文献,共1 869例D1-D2胃癌根治术患者的临床资料.其中完整网膜囊切除组1 370例,非完整网膜囊切除组499例,两组局部复发率差异无统计学意义[OR=0.92,95％CI(0.62,1.37)],3年总生存率间差异无统计学意义[OR=0.78,95％ CI(0.53,1.16)].其中进展期胃癌,完整网膜囊切除组237例,非完整网膜囊切除组225例,两组间局部复发率差异无统计学意义[OR=0.84,95％CI(0.54,1.31)],3年总生存率差异无统计学意义[OR=0.76,95％CI(0.48,1.20)].结论 D1-D2胃癌根治术中进行完整网膜囊切除对降低局部复发率和提高患者生存率方面没有明显优势.
作者：左东；王钢；陆艺；龚建平 刊期： 2013年第06期
目的 研究miR-218对卵巢癌细胞A2780转移侵袭的影响及可能机制.方法 miR-218 mimics转染A2780细胞,实时定量PCR检测转染效率;对转染前后细胞进行划痕及Transwell实验,并采用Western blot分析Wnt2B蛋白表达的改变.采用双萤光素酶报告基因检测系统验证Wnt2B是否为miR-218靶基因.结果 A2780细胞转染miR-218 mimics后,细胞运动侵袭功能受到明显抑制,Wnt2B蛋白表达明显下降,其为miR-218直接作用的靶基因.结论 miR-218可能通过靶向Wnt2B抑制卵巢癌细胞A2780的转移侵袭功能.
作者：饶玉梅；纪妹；史惠蓉；陈彩虹 刊期： 2013年第06期
目的 研究多层螺旋CT(MSCT)肺气肿指数在预测慢性阻塞性肺疾病(COPD)急性加重风险中的应用价值.方法 COPD患者共264例(全部符合GOLD 2011年修订版诊断标准)纳入该研究,所有患者行肺功能检查,并采用MSCT在大呼气末扫描全肺,用Pulmo肺定量软件测定肺气肿指数(LAA％,即以-910 HU为阈值,测定肺低衰减区占全肺体积的百分比). COPD急性加重次数通过EXACT问卷获得.将患者上1年COPD急性加重次数与肺功能及肺气肿指数进行统计学分析.结果 多变量Logistic回归分析发现,对于深呼气末LAA％≥15％的COPD患者,在校正CAT评分和FEV1后,LAA％每增加1％,相应COPD急性加重风险增加1.12倍(P＜0.01).结论 肺气肿加重与COPD急性加重有关,是独立于FEV1的指标,MSCT定量测量肺气肿指数有助于发现可能发生COPD急性加重的患者,并早期给予积极干预.
作者：杨士芳；高兴林；吴健；张金娥；刘春玲 刊期： 2013年第06期
高钙血症是指血清离子钙浓度的异常升高(＞2.60 mmol/L).高钙血症是恶性肿瘤患者常见的并发症之一,称为恶性肿瘤性高钙血症(MAH).不同肿瘤发生MAH的概率有很大差异,恶性实体肿瘤如肺癌、乳腺癌是高钙血症的常见原因之一.MAH也见于某些恶性血液病,如多发性骨髓瘤、成人T细胞白血病/淋巴瘤等.但急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)发生高钙血症的概率很低[1-2],尤其是成人B-ALL.我们成功治疗了1例成人B-ALL合并的重度高钙血症,现报道如下.
作者：段铱；王迪；熊晶；李登举 刊期： 2013年第06期
目的 构建jak2a野生型(wilde type,wt)载体并完成其在斑马鱼体内的过表达,运用邻联茴香胺染色观察其对红系造血的影响,为后续探讨斑马鱼骨髓增殖性疾病(myeloproliferative disorders,MPD)模型的Jak/Stat信号通路奠定基础.方法 根据jak2a基因GenBank NM_131093序列V581F突变位点上下游序列设计引物,以pGM-T-jak2aV581F质粒载体为模板进行PCR后,用DpnⅠ酶对产物进行消化去除模板,转化感受态细菌DH5α,通过蓝白筛选酶切鉴定阳性菌落,小量提取质粒,NdeⅠ限制性内切酶线性化pGM T-jak2a-wt质粒,运用T7 Transcript Aid酶对jak2a基因进行体外转录及加帽.经凝胶电泳对目的片段进行鉴定.以200 ng/μL浓度jak2a-wt mRNA加帽产物显微注射斑马鱼单胞期受精卵,运用邻联茴香胺染色检测其对红系增殖的影响.结果 完成pGM-T-jak2a V581F的定点突变,成功构建pGM-T-jak2a-wt载体,DNA序列分析的结果与GenBank上的序列(NM 131093)一致,酶切线性化及体外转录加帽pGM-T-jak2a-wt,凝胶电泳鉴定RNA分子大小与预期完全一致.对过表达jak2a的鱼卵进行邻联茴香胺染色,发现斑马鱼卵黄囊及ICM区红细胞明显增多.结论 成功完成斑马鱼pGM-T-jak2a VS81F基因定点突变并体外转录及加帽pGM-T-jak2a-wt,体内过表达jak2a对红系发生有显著影响.
作者：朱贤敏；姜利军；赵磊；关军；肖湘慧；张义成 刊期： 2013年第06期
华中科技大学学报（医学版）杂志
主管:中华人民共和国教育部
主办：华中科技大学
