谢艳萍;温晓红;姜志强;辅桓钦;戴利成;韩慧
目的 探讨血管紧张素Ⅱ 1型受体(AT1受体)的自身激动性抗体(AT1-AAs)激动培养的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)AT1受体并激活细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)信号途径的能力.方法 采用亲和层析法提取先兆子痫患者血清中的AT1-AAs.培养大鼠主动脉VSMCs.应用血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)或AT1-AAs刺激培养的细胞.而后,采用免疫印迹法测定细胞中ERK1/2的表达;逆转录PCR检测细胞c-fos基因的表达;应用钙离子的荧光探针Fluo-3/AM负载培养VSMCs,应用共聚焦显微镜检测细胞荧光强度变化以反映细胞内游离钙水平的变化.结果 AT1-AAs能够发挥与血管紧张素Ⅱ类似的效应,能够激动AT1受体,促使ERK1/2的磷酸化并促进其下游的c-fos在VSMCs中的表达;并且ERK1/2的磷酸化一定程度依赖于钙离子信号.结论 由于ERK1/2信号通过促进血管炎症、纤维化及血管收缩造成血管重塑,AT1-AAs可能通过该途径参与先兆子痫患者的循环障碍.
作者:舒砚文;肖宏;孙艳香;朱峰;廖玉华 刊期: 2011年第06期
目的 研究泽泻总三萜提取物对大鼠尿草酸钙结石形成的影响,从而确认泽泻抗泌尿系结石的活性成分.方法 在实验的28 d内给予乙二醇及阿法骨化醇诱导雄性SD大鼠泌尿系草酸钙结石形成.造模的同时分别给予不同剂量的泽泻总三萜提取物,分别为205.2、68.4及22.8 mg/kg.实验结束时,检测各组大鼠体重,血尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、P、Ca2+、Mg2+含量,24 h尿量,尿pH值,24 h尿Ca2+、Mg2+、尿草酸(Ox)的分泌量,右肾系数,肾Ca2+、Mg2+含量;显微镜下观察肾组织切片中草酸钙结晶沉积及病理变化,评价泽泻总三萜对泌尿系结石形成的影响.结果 乙二醇及阿法骨化醇诱导的泌尿系草酸钙结石大鼠血BUN、Cr、24 h尿Ox、尿Ca2+分泌量、肾Ca2+含量及右肾系数明显升高,肾Mg2+含量明显下降.泽泻总三萜提取物能降低泌尿系结石大鼠的血BUN、Cr、24 h尿Ca2+含量、肾Ca2+含量及右肾系数水平,增加24 h尿量及肾组织Mg2+含量.肾组织病理学检查可知泽泻总三萜能减少大鼠肾组织内草酸钙晶体的沉积,改善肾脏组织的损伤情况.结论 泽泻总三萜提取物可以有效抑制乙二醇及阿法骨化醇诱导的大鼠泌尿系草酸钙结石的形成,泽泻总三萜是泽泻抗泌尿系结石的活性成分.
作者:区淑蕴;苏倩;彭可垄;刘继红;尹春萍 刊期: 2011年第06期
目的 综合评价DYX1C1基因1249G>T多态性与阅读障碍易感性之间的关系.方法 全面检索相关文献,收集2011年8月前有关DYX1C1基因1249G>T多态性与阅读障碍易感性关系的病例对照研究及以家系为基础的传递/不平衡检验(TDT),采用Catmap软件包进行Meta分析.结果 该研究共纳入文献7篇.合并病例对照研究和TDT研究的Meta分析结果显示,合并后OR值为0.68(95%CI=0.28~1.65,P=0.394).亚组分析结果显示,病例对照研究合并后OR值为1.15(95%CI=0.74~1.79,P=0.522);TDT研究合并后OR值为0.31(95%CI=0.07~1.41,P=0.130).敏感性分析进一步表明该结果稳定性较好.结论 该研究提示DYX1C1基因1249G>T多态性与阅读障碍易感性不存在明显关联.
作者:杨俊;莫胜男;邹丽;宋然然;徐勇 刊期: 2011年第06期
目的 研究RNA干扰(RNA interference,RNAi)抑制Aurora B基因表达对卵巢癌细胞A2780细胞紫杉醇化疗敏感性的影响.方法 采用RNAi方法,将不同浓度AURKB siRNA转入A2780细胞(实验组),同时设阴性对照组和空白对照组,并以不同浓度紫杉醇作用各组细胞.采用MTT检测细胞存活率;AnnexinⅤ-FITC/PI检测细胞凋亡率;Western blot检测细胞内Caspase-3蛋白水平;Hoechst染色观察细胞凋亡.结果 A2780细胞转染不同浓度siRNA后,随着siRNA浓度增加,细胞存活率逐渐下降,至50 pmol/L时,实验组与空白对照组和阴性对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);不同浓度紫杉醇处理各组细胞,随着紫杉醇浓度增加,细胞存活率明显下降,当紫杉醇浓度至10 μmol/L时,实验组与空白对照和阴性对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);50 pmol/L siRNA 转染A2780细胞48 h,再以10 μmol/L 浓度紫杉醇处理细胞,实验组细胞凋亡率明显增加,与空白对照组和阴性对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01);50 pmol/L浓度siRNA转染A2780 细胞48 h,再以10 μmol/L 浓度紫杉醇处理细胞,实验组细胞内Caspase-3蛋白表达明显上调,细胞凋亡明显增加.结论 Aurora B的抑制可增强A2780细胞对紫杉醇的化疗敏感性,并使细胞凋亡增加.
作者:任利容;梁铭霖;肖兰;王泽华 刊期: 2011年第06期
目的 探讨穿心莲有效成分(API0134)是否具有抑制小鼠腹腔巨噬细胞基质金属蛋白酶-2和基质金属蛋白酶-9(MMP-2,MMP-9)活性及其mRNA表达的作用.方法 用腹腔冲洗的方法收集小鼠腹腔巨噬细胞,使用氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激巨噬细胞,同时分别以不同浓度的API0134对巨噬细胞进行干预.采用免疫荧光方法、明胶酶谱法和RT-PCR的方法检测ox-LDL和API0134对巨噬细胞MMP-2、MMP-9活性和表达的影响.结果 与对照组相比,ox-LDL组MMP-2及MMP-9活性和mRNA表达显著升高(均P<0.01).与ox-LDL组相比,加入50 μg/mL API0134组MMP-2及MMP-9的活性和mRNA表达变化不明显(均P>0.05),而加入100、200 μg/mL API0134组的MMP-2及MMP-9的活性和mRNA表达均有不同程度的下降(均P<0.05).结论 穿心莲有效成分能够抑制ox-LDL对巨噬细胞MMP-2及MMP-9活性和mRNA表达的上调作用,因此可能具有维护粥样斑块稳定,减少斑块破裂危险的作用.
作者:曹好好;刘环芹;杨鹏;李树生 刊期: 2011年第06期
目的 探讨降低海马NO含量对凋亡相关因子的调节作用.方法 体内和体外实验均分为4组:生理盐水对照组(NS组),海人酸致痫组(KA组),氨基胍预处理+海人酸组(AG+KA组)和氨基胍组(AG组).采用免疫细胞化学法显示体外培养的海马神经元在不同处理因素作用24 h和48 h后bcl-2、bax的免疫反应性.采用Western blot法或半定量RT-PCR法检测各组大鼠造模后24 h、48 h时 bcl-2、bax蛋白及Apaf-1 mRNA的表达情况.结果 在体外实验中,KA组bcl-2的免疫反应较NS组减弱而bax的免疫反应增强;AG+KA组bcl-2的免疫反应较KA组增强而bax的免疫反应减弱;AG组与NS组相比无明显差异.体内实验中,Western blot检测显示大鼠海马组织中bcl-2和bax蛋白的表达水平呈负相关,其趋势与体外实验结果一致;半定量RT-PCR检测显示Apaf-1 mRNA的含量在造模后24 h和48 h时间点,KA组明显高于NS组(P<0.05),而AG预处理则明显拮抗KA诱导的Apaf-1 mRNA高表达.结论 降低NO含量可以上调bcl-2蛋白的表达,下调bax和Apaf-1 mRNA的表达.
作者:徐院花;唐振刚;李正莉;尧青 刊期: 2011年第06期
心脏骤停(caridiac arrest,CA)是心脏病危重并发症之一,其80%以上是由心室颤动(ventricular fibrillation,VF)所致[1].冠心病及其它心脏病、精神和躯体遭受巨大冲击都可导致心脏骤停.本实验旨在通过药物和介入方法建立大动物室颤模型,为临床心脏骤停后的心肺复苏研究提供可靠的室颤动物模型.
作者:林敬阳;屈百鸣;金钦阳;洪银维 刊期: 2011年第06期
目的 探讨不同消毒方法对饮水中有机提取物所致人肝肿瘤HepG2细胞的氧化损伤和凋亡作用的影响.方法 分别采用不同预消毒方法(氯、二氧化氯或臭氧)结合氯消毒对汉江水进行消毒,提取消毒水中有机物,分别测定不同消毒水中有机提取物对人肝肿瘤HepG2细胞活性氧族(ROS)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)水平及细胞凋亡率的影响.结果 不同消毒方法对水中有机提取物的氧化应激水平的影响无明显差异,对细胞凋亡的影响也无明显差异.结论 与常规的氯预消毒方法比较,二氧化氯以及臭氧预消毒的汉江水对HepG2细胞的氧化应激和凋亡的影响无明显差异.对于有机物含量较高的汉江水,单纯改变预消毒方法,并不能减低水中有机提取物的氧化应激水平和凋亡毒性.
作者:陈建文;邓菁;吕斌;田峰;张梦;伍雅婷;刘飞 刊期: 2011年第06期
目的 研究水通道蛋白4(AQP4)在肺腺癌中的表达及其对肺腺癌细胞增殖与迁移的影响.方法 收集20例经病理切片确诊的肺腺癌组织和4例癌周正常肺组织(距癌缘4~6 cm,病理证实无肿瘤细胞),通过LSAB免疫组化法检测其中AQP4的表达.以APQ4-shRNA转染培养的肺腺癌细胞,通过Western blot法检测细胞中AQP4及E-cadherin的表达;通过MTT法和Transwell小室法分别检测AQP4表达对肺腺癌细胞增殖与迁移的影响.结果 AQP4在肺腺癌组织中表达阳性率为 55%(11/20),正常肺组织均为阴性.在肺腺癌细胞株中,AQP4均呈阳性表达且与E-cadherin蛋白的表达呈负相关;AQP4的表达对肺腺癌细胞增殖无明显影响(P>0.05).细胞迁移实验48 h后,与对照组比较,AQP4-shRNA转染组细胞迁移显著减少(8.9 % vs 14.8%,P<0.05).结论 AQP4与肺腺癌的发生和迁移均相关;AQP4可能通过调节E-cadherin蛋白的表达而促进肺腺癌细胞的迁移.
作者:谢艳萍;温晓红;姜志强;辅桓钦;戴利成;韩慧 刊期: 2011年第06期
目的 探索一种用显微外科技术制备小鼠肺缺血再灌注损伤模型的方法,并对其效果进行评估.方法 将30只C57BL/6J小鼠随机分成2组(缺血再灌注组和假手术组),每组15只.缺血再灌注组采用无创血管夹夹闭左肺门60 min,再灌注120 min,建立肺缺血再灌注模型.获取标本,检测肺湿干重比值,用光镜和电镜观察肺组织结构变化.结果 肺缺血再灌注组湿干重比值明显高于假手术组(P<0.01),光镜、电镜下均可观察到严重的肺损伤改变.结论 成功建立了小鼠肺缺血再灌注损伤模型,且方法简单,易于操作,成功率高,为肺缺血再灌注损伤机制研究提供了一种可行的模型.
作者:郑志坤;李劲松;王建军;江科;张俊;乔新伟 刊期: 2011年第06期
目的 探讨增强miR-146b-3p表达对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 Real time PCR检测miR-146b-3p在6种人胰腺癌细胞系(MIA PaCa-2、BxPC-3、AsPC-1、PANC-1、SW1990、PC-3)和手术切除的12对胰腺癌/癌旁组织中的表达.将Pre-miR-hsa-miR-146b-3p Precursor 转染MIA PaCa-2 细胞,Real time PCR检测转染后miR-146b-3p的表达变化,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫印迹法(Western blot)检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-8的表达变化.结果 与正常胰腺组织相比,miR-146b-3p在6种胰腺癌细胞系中均呈低表达,以MIA PaCa-2细胞为明显;12对胰腺组织中,癌组织miR-146b-3p表达水平均低于癌旁组织.同阴性对照组比较,转染前体组的MIA PaCa-2细胞,miR-146b-3p表达增强383.25倍,细胞增殖能力下降,细胞凋亡率增加,蛋白Bcl-2表达降低(50.0%),Bax表达升高(4.29倍).结论 miR-146b-3p在胰腺癌细胞系和癌组织中低表达;上调胰腺癌细胞MIA PaCa-2中 miR-146b-3p的表达,能够抑制增殖和诱导细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2表达,上调Bax的表达有关.
作者:林凡;王欣;俞亚红;王敏;洪晓泉 刊期: 2011年第06期
目的 研究ADAMTS13及其突变体于体外流动状态下裂解血管性血友病因子(VWF),降低血小板粘附形成血栓能力的差异.方法 将全长ADAMTS13(FL)及缺失TSP2-8CUB1+2(MDTCS)和缺失CUB1+2(delCUB)cDNA质粒瞬时转染COS7细胞,Western blot检测各瞬时表达细胞分泌的蛋白.利用流体力学装置平板流动小室(Flow Chamber)培养人脐静脉内皮细胞,并通过蠕动泵加压流动培养液模拟人体血管内流动状态,荧光显微镜观测加入ADAMTS13或其突变体蛋白后荧光标记的血小板聚集状态的差异.结果 成功在真核表达细胞内瞬时表达ADAMTS13及其突变体蛋白,简单纯化并经Western blot检测各表达蛋白相对分子量与预期一致.Flow Chamber模拟人体血管内剪切力作用下,FL蛋白和MDTCS蛋白可以不同程度地抑制血小板凝集,delCUB蛋白抑制血小板凝集的能力显著下降.结论 成功瞬时表达全长ADAMTS13及其突变体蛋白.初步证实流动状态下ADAMTS13羧基端是参与裂解VWF以抑制血小板凝集的主要区域.
作者:孙婧;赵霞;陈素华;艾继辉 刊期: 2011年第06期
目的 探讨miR-192对人肝癌细胞株HepG2中RB1基因表达的调节作用.方法 运用生物信息学方法对miR-192进行靶基因预测并分析其潜在靶基因RB1;将含有miR-192结合位点的RB1 mRNA 3′端非编码区(3′UTR)片段和在miR-192结合位点进行突变的RB1 3′UTR突变片段克隆至报告基因载体pMIR-Report luciferase vector,重组质粒分别命名为pMIR-RB1和pMIR-RB1-mut;将重组质粒、Beta-gal内参质粒和microRNA共转染HepG2细胞,双荧光素酶报告基因系统检测各实验组中细胞荧光素酶的表达;SYBR Green荧光定量PCR和Western blot分别在mRNA和蛋白水平检测miR-192对内源性RB1表达的调节作用.结果 生物信息学分析筛选出89个miR-192的潜在靶基因,RB1基因是其中之一;测序验证重组质粒pMIR-RB1和pMIR-RB1-mut构建成功;过表达miR-192时,共转染pMIR-RB1质粒的细胞相对荧光素酶活性(4.80±0.36)较相应过表达miR-NC组(7.90±0.91)明显降低(P<0.05),而共转染pMIR-Luc或pMIR-RB1-mut质粒的细胞相对荧光素酶活性[pMIR-Luc:(7.68±1.04);pMIR-RB1-mut:(7.56±0.99)]较相应过表达miR-NC组[pMIR-Luc:(7.86±0.73);pMIR-RB1-mut:(7.82±1.05)]无显著差异;上调miR-192水平显著降低HepG2细胞中内源性RB1 mRNA[(0.56±0.10)vs (1.05±0.13)]和蛋白(47% vs 100%)的表达.结论 RB1基因是miR-192的一个靶基因,在HepG2细胞中,miR-192通过直接结合RB1 mRNA 3′UTR而负性调控RB1基因表达.
作者:谢琼慧;王梦漪;谢卫国;何星星;常莹;蒋翔;阮琼芳;林菊生 刊期: 2011年第06期
目的 评价音乐对父母陪伴下小儿麻醉诱导的影响.方法 以父母和小儿术前焦虑程度为首要研究目标,父母满意程度为次要研究目标.将100例ASA Ⅰ或Ⅱ级的择期手术患儿,年龄2~10岁,随机分成2组:音乐辅助组(音乐辅助父母陪伴)和对照组(单纯父母陪伴).通过术前焦虑评分(mYPAS评分)测定两组小儿术前焦虑程度;通过状态-特质焦虑问卷(STAI)测定父母术前焦虑程度;通过视觉模拟评分(VAS)评价父母满意程度.结果 音乐辅助组父母术前焦虑评分降低(P<0.05),满意评分略升高,但差异无统计学意义(P>0.05);音乐辅助组小儿焦虑评分较低,但是两组之间的差异无统计学意义.结论 音乐辅助可以减轻父母在陪伴小儿麻醉诱导期间的焦虑心理,但对小儿的焦虑心理作用有限.
作者:李冶秋;许强;周婷;王磊 刊期: 2011年第06期
目的 观察内毒素预处理对内毒素血症大鼠肝Toll样受体4(TLR-4)、核因子-κB(NF-κB)和白细胞间粘附分子-1(ICAM-1)表达的影响,探讨内毒素预处理对内毒素血症肝损伤的保护作用及机制.方法 采用直接注射内毒素脂多糖(LPS,10 mg/kg体重)的方法建立大鼠急性内毒素血症模型,实验动物随机分成3组:生理盐水对照组(N组);内毒素脂多糖(LPS)组(L组)和LPS预处理组(P组),其中P组在制模前分别经腹腔注射LPS 0.25、0.50 mg/kg体重.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝组织TLR-4 mRNA表达,免疫印迹法(Western blot)检测肝组织NF-κB表达,免疫组化法检测肝组织ICAM-1表达,取肝脏(肝左上叶)用10%的中性甲醛固定观察肝脏病理形态.结果 内毒素血症时,肝脏组织TLR-4、NF-κB和ICAM-1水平明显增加,显著高于N组(P<0.05),而经内毒素预处理的模型动物肝脏组织TLR-4、NF-κB和ICAM-1水平明显降低(P<0.05),P组肝脏组织病理学改变较L组减轻.结论 内毒素预处理能够减轻内毒素血症导致的肝损伤,其机制可能与抑制TLR-4信号传导通路及减少单核巨噬细胞内NF-κB和ICAM-1的表达有关.
作者:陈华文;祝伟;李树生 刊期: 2011年第06期
目的 探讨8-羟基二氢小檗碱对NIT-1细胞胰岛素分泌的影响及其机制.方法 采用不同浓度8-羟基二氢小檗碱干预NIT-1细胞后,以放射免疫法、液体闪烁计数法、酶法,分别检测其胰岛素水平、葡萄糖利用、葡萄糖激酶(GK)活性.结果 在低浓度葡萄糖(5.5 mmol/L)刺激下,与空白对照组相比,加入高浓度8-羟基二氢小檗碱(1.0 μmol/L)的NIT-1细胞胰岛素分泌增加、葡萄糖利用活跃,且GK酶活性增强(P<0.05);在高浓度葡萄糖(16.5 mmol/L)刺激下,与空白对照组相比,加入不同浓度8-羟基二氢小檗碱(0.5、1.0 μmol/L)的NIT-1细胞胰岛素分泌增加、葡萄糖利用活跃,且GK酶活性增强(P<0.01或P<0.05).结论 8-羟基二氢小檗碱能促进葡萄糖刺激下NIT-1细胞的胰岛素分泌,其机制可能与增加NIT-1细胞葡萄糖利用、增强GK酶活性有关.
作者:徐丽君;陆付耳;王增四;易屏;魏世超;董慧;邹欣 刊期: 2011年第06期
目的 应用RNA干扰技术(RNAi)研究针对CD105的小片段RNA(siRNA)抑制CD105在体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)中表达的情况,观察CD105沉默后对细胞生长的影响.方法 根据人的CD105 mRNA序列选择3个不同的靶位点,分别合成3条CD105 siRNA,并同时合成阴性对照和阳性对照siRNA.采用脂质体介导的基因法转染至体外培养的HUVECs中,采用RT-PCR检测各组细胞CD105表达水平,Western blot检测干扰前后CD105蛋白表达水平,并用MTT法检测人HUVECs的细胞活力.结果 RT-PCR和Western blot检测表明,3号CD105 siRNA能有效沉默CD105的表达,转染后的HUVECs中CD105 mRNA水平和蛋白表达水平明显下降.MTT结果表明CD105的下调导致了HUVECs活力的下降.结论 特异性的siRNA可以下调HUVECs中CD105 mRNA及蛋白表达水平,减低细胞活力.也提示CD105可能对体外培养HUVECs的生长有促进作用,CD105可以作为治疗新生血管的靶点.
作者:丁怡;张明昌 刊期: 2011年第06期
目的 构建单纯疱疹病毒2型(HSV-2)感染细胞蛋白27(ICP27)基因与pcDNA3.1(+)真核表达质粒的重组质粒pcDNA3.1(+)/ ICP27.方法 通过RT-PCR方法从HSV-2培养物中提取RNA制备ICP27的编码基因UL54 DNA,将其与载体pcDNA3.1(+)连接.通过双酶切和测序鉴定重组质粒是否构建成功,Western blot法鉴定重组质粒在真核细胞COS-7中表达.结果 重组质粒pcDNA3.1(+)/ ICP27构建成功,可在COS-7中表达.结论 成功构建了可在真核细胞内表达的pcDNA3.1(+)/ ICP27重组质粒,为下一步研究该重组质粒作为DNA疫苗的免疫学效应奠定了基础.
作者:李慎秋;梁宁;赵红磊;邹婕;谢春丽;蒋思 刊期: 2011年第06期
目的 探讨口服避孕药(OC)预处理在有自发排卵的不孕患者体外受精/单精子卵胞浆内显微注射(IVF/ICSI)长方案中的价值.方法 回顾性分析1 668个新鲜周期,并根据降调前是否用OC预处理分为2组:A组为在长方案降调之前使用OC预处理组,B组为降调前未使用OC组.比较两组之间各参数及结局.结果 两组促性腺激素(Gn)用量及刺激天数、获卵数、受精率、卵裂率、妊娠率、流产率、反应不良取消周期率、功能性囊肿发生率均无统计学差异.但A组降调后血清雌激素(E2)值及HCG注射日内膜值低于B组,HCG日E2值以及因有卵巢过度刺激综合征(OHSS)风险取消新鲜周期移植的概率高于B组;35岁以上患者降调后激素水平及HCG日内膜值均低于B组,Gn用量大于B组.结论 使用OC预处理并不能降低功能性囊肿的发生率或者提高妊娠率,而且可能导致垂体抑制过度,在年龄偏大的患者中表现尤其明显.
作者:杨学舟;章汉旺 刊期: 2011年第06期
目的 探讨建立外周左向右分流的新型兔肺动脉高压模型的方法.方法 手术建立颈部、腋部、颈部+腋部分流模型,术后16及24周开胸测肺动脉压力,取心肺标本,行苏木精-伊红和Gomori's 醛复红染色,观察肺小动脉肌化程度及继发性右室肥厚.结果 术后16周颈部+腋部分流组的肺血流动力学指标、肺小血管肌化程度及继发性右室肥厚改变明显,24周时上述指标进一步加重;而24周时,颈部分流仅引起轻度肺动脉高压,腋部分流组未见改变.结论 较单纯颈部或腋部分流模型,颈部+腋部双分流是一种更为成功的分流型肺动脉高压模型.
作者:刘成珪;王永生;孟刘坤;肖亚琼;张凯伦 刊期: 2011年第06期