章杰；闫媛；杨渝珍；杨业金
目的 探讨人正常鼻黏膜及鼻息肉黏膜上皮细胞的原代培养及鉴定,以备后续对其生物学特性研究之用.方法 取2006年～2007年行鼻窦内窥镜下摘除的鼻息肉及行鼻中隔手术切除的正常下鼻甲各 5 例.标本放入4℃无菌的 PBS(配有双抗)溶液中,在超净台中反复冲洗、浸泡,剪成米粒大后转入培养瓶中,用0.1%胶原酶Ⅳ消化过夜.次日取出,轻轻吹打,加入含10%胎牛血清的 DMEM/F12(1:1)培养液,置 37℃饱和湿度 CO2细胞培养箱中培养.采用ABC 贴壁法去除鼻黏膜上皮细胞中的成纤维细胞和红细胞.倒置相差显微镜下观察细胞形态、增殖及生长状况、有无污染.流式细胞仪检测细胞纯度.结果 鼻黏膜上皮细胞生长良好,可见 4 种细胞:纤毛柱状上皮细胞、无纤毛柱状上皮细胞、杯状细胞、基底细胞.透射电镜下鼻息肉黏膜上皮细胞膜表面纤毛较正常鼻黏膜上皮细胞的纤毛数减少,纤毛倒伏,胞质内有空泡形成.经流式细胞仪检测鉴定上皮细胞占 90.1%.结论 此方法培养的鼻黏膜上皮细胞纯度高,是一种较好的获得原代鼻黏膜上皮细胞的方法.
作者：夏忠芳；孔维佳；乐建新；王彦君；吴丽莎 刊期： 2008年第04期
目的 研究鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)患者 Epstein-Barr 病毒(EBV)感染及潜伏膜蛋白 1(1a-tent membrane protein-1,LMP-1)表达的情况.方法 采用免疫组化实验技术对 62 例鼻咽癌活检组织及 33 例慢性鼻咽炎组织中 LMP-1 的表达进行检测,同时采用免疫酶标法对这些患者外血 EBV 的 IgA/VCA 抗体进行检测.结果 外周血 EBV-IgA/VCA 检出总阳性率在 NPC 患者中为 90.32%(56/62),在慢性鼻咽炎患者中为 3.03%(1/33),两者之间差异具有显著性意义(P<0.05);LMP-1在NPC组织中表达的总阳性率为 59.68%(37/62),在慢性鼻咽炎组织中表达的阳性率为 6.06%(2/33),两者之间差异具有显著性意义(P<0.05);EBV-IgA/VCA与LMP-1共表达的患者占NPC 患者总数的 62.5%(35/56).结论 NPC 患者外周血 EBV-IgA/VCA 表达与肿瘤组织中 LMP-1 阳性表达具有明显相关性;鼻咽癌发病与 EBV 感染明确相关.
作者：褚汉启；熊浩；Jamal Alhosam；周良强；张平；黄孝文；崔永华 刊期： 2008年第04期
近年来随着高频电刀的广泛应用及肥胖人群的增多,切口脂肪液化已成为影响切口愈合的常见原因之一.它不仅延长患者住院时间,同时增加了患者的经济负担.
作者：辛亮；潘跃进 刊期： 2008年第04期
目的 了解湖北地区汉族人群内皮细胞蛋白 C 受体(EPCR)A6936G 变异的分布频率,探讨其与深静脉血栓形成的关系.方法 在湖北地区汉族人群中应用 PCR-RFLP 方法检测了 110 名深静脉血栓形成患者和 110 名健康体检者的 EPCR A6936G 变异.结果 深静脉血栓形成患者 AA、AG 和 GG 基因型的频率分别为 64.6%、33.6%和1.8%,而健康体检者 AA 和 AG 基因型的频率分别为 76.4%和23.6%,未发现 GG 基因型.深静脉血栓形成患者突变基因型(AG+GG)频率为 35.4%(OR为1.775,95%CI为1.072～2.934),突变等位基因(G)频率为 18.6%(OR为1.709,95%CI为1.008～2.897),均显著高于对照组(分别为23.6%和11.8%,均P<0.05).结论 湖北地区汉族人群中存在EPCR A6936G 变异,它与深静脉血栓患者血栓形成风险增高有关.
作者：王晓蓓；胡丽华 刊期： 2008年第04期
目的 评价超声引导下瘤体内注射重组人 p53 腺病毒治疗晚期难治性肝癌的临床疗效及超声导入基因治疗的临床应用价值.方法 对 57 例晚期肝癌患者行超声引导下瘤体内注射重组人 p53 腺病毒(rAd-p53),每次剂量1×1012VP或2×1012VP,每周 1 次,4 次 1 疗程,治疗后选择完成 1 个疗程及以上,并符合基因治疗入选标准者 38 例,采用彩色多普勒超声(彩超)及病理学检查评估其临床疗效.结果 彩超结果示:肝脏肿块均有不同程度缩小,其中 4 例患者肿块缩小明显(>50%);16 例患者肿块周边和内部彩色血流信号减少或消失.大部分患者病情稳定,症状好转,一般状况改善,Karuafsky 评分明显提高[术前(55.79±11.30)vs术后(61.05±21.64),P<0.05].11 例患者行肝穿刺活检组织病理学检查,7 例可见肿瘤组织纤维化伴淋巴细胞浸润及肿瘤组织明显变性坏死.治疗的不良反应主要为一过性自限性发热.结论 超声引导瘤内注射既能控制肝癌基因治疗的靶向性,又能对基因药物疗效进行影像学评估,具有较高的临床应用价值.
作者：贡雪灏；朱志兵；张家庭；李泉水；张琪 刊期： 2008年第04期
目的 探讨表皮葡萄球菌 ica 操纵子与细菌间多糖粘附索(polysaccharide intercellular adhesin,PIA)及生物膜表型之间的关系.方法 采用聚合酶链反应(PCR)检测 icaA 基因,刚果红琼脂平皿检测 PIA,微量板半定量法检测细菌生物膜表型;统计学分析 icaA 基因与 PIA 及生物膜表型之间的相关性.结果 49 株临床分离菌株中,32.7%(16/49)能形成生物膜,67.3%(33/49)无生物膜形成.icaA 基因阳性菌株中 80%(8/10)有生物膜形成,ica 操纵子与生物膜表型密切相关(P<0.01);PIA 阳性菌株中63.6%(14/22)有生物膜形成,PIA 与生物膜表型密切相关(P<0.01).结论 表皮葡萄球菌 ica 操纵子的存在与生物膜表型密切相关,PIA 的合成是生物膜形成的关键环节.
作者：邢铭友；刘莉娜；宋世会；龚凤云；朱旭慧；黄加权；宋建新；齐俊英 刊期： 2008年第04期
目的 探讨新型纳米荧光材料量子点标记的寡核苷酸探针在确定基因型中的应用价值.方法 采用以CdSe 为核心的量子点与 ApoEε4基因的等位基因特异性寡核苷酸反应合成探针.对 ApoEε4-PT7-PL 质粒和正常人标本进行 Southern blot检测,并与地高辛标记方法作相应比较.结果 量子点与地高辛标记显影结果完全一致.结论 量子点在 Southern blot 检测成像中表现出优良特性,可望替代传统标记物.
作者：杨华静；徐鹏；王坚苗；夏星；张苏明 刊期： 2008年第04期
目的 观察白藜芦醇(resveratrol,Res)对纤维蛋白诱导的体外大鼠脑血管内皮细胞基质金属蛋白酶 9(ma-trix metalloproteinases9,MMP9)高表达的影响.方法 将大鼠脑血管内皮细胞分离后培养,培养液中加入1.0 mg/ml纤维蛋白和不同浓度的白藜芦醇,通过 RT-PCR 检测脑血管内皮细胞中 MMP9 转录水平,应用明胶酶谱法(gelatin zy-mography)定量检测培养液中的 MMP9 水平.结果 加入不同浓度(0、1、5、10、25和50μmol/L)的白藜芦醇 24 h后,25μmol/L和50μtmol/L 白藜芦醇组的培养液中 MMP9 水平显著降低(P<0.01);RT-PCR 结果显示,25μmol/L 和 50/μmol/L 白藜芦醇组的大鼠脑血管内皮细胞中的 MMP9 显著下调(P0.01).结论 白藜芦醇通过降低纤维蛋白导致的大鼠脑血管内皮细胞中 MMP9 的表达,在神经系统炎性病变中发挥抑制性保护作用.
作者：薛峥；董黎娟；张苏明 刊期： 2008年第04期
目的 研究直肠肛门痔手术前后肛肠动力学的变化.方法 对 20 例重度痔患者用直肠肛管测压法检测手术前后的肛管静息压、高压区长度、肛管蠕动波频率及直肠肛管抑制反射阈值等 4 项指标.对痔病患者手术前后肛肠动力学进行比较,并与正常对照组进行对比.结果 手术后直肠肛管抑制反射阈值完全恢复,敏感率提高(P<0.05),肛管静息压较术前明显降低(P<0.05),高压区长度及肛管蠕动波频率手术前后差异无显著性意义(均P>0.0S);以上 4项指标术后与正常对照组比较差异均无显著性意义(均P>0.05).结论 吻合器痔上黏膜环切术可使重度痔患者的肛门静息压及直肠肛管抑制反射阈值恢复正常.
作者：唐迎春；郭先娥；严群 刊期： 2008年第04期
目的 观察透析治疗、降压药物治疗对慢性肾衰竭(CRF)终末期高血压的降压效果.方法 收集 CRF 终末期高血压患者 40 例,分为透析组(22例)和非透析治疗组(18例)进行治疗并分析其疗效.结果 ①透析组 5 例患者经充分透析后血压降至目标值(130/80 mmHg),其余 17 例加用血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)、钙离子通道阻滞剂(CCB)治疗后仍有 2 例血压难以降至目标值,此时加用利尿剂、β-受体阻滞剂后降至目标值以下.②非透析组均服用CCB,12 例患者血压难以降至目标值.加用利尿剂、β-受体阻滞剂后 6 例降至目标值以下.结论 充分透析可有效降压,在此基础上合理联用 ACEI、CCB及-β受体阻滞剂,同时纠正钙磷比例失调,控制甲状旁腺功能亢进可增强降压效果.
作者：陈向前 刊期： 2008年第04期
目的 构建靶向肿瘤坏死因子转换酶(TACE)的小发夹结构 RNA(shRNA)的真核表达载体,观察干扰TA-CE 表达对 HeLa 细胞增殖和凋亡的影响.方法 设计针对 TACE 基因的 4 个 shRNA 序列,构建真核表达载体 shR-NA1、shRNA2、shRNA3、shRNA4.通过酶切和测序等方法进行鉴定.转染 HeLa 细胞后,用 Reahime PCR 的方法检测其对 HeLa 细胞 TACE 基因表达的影响;用ELISA检测细胞分泌的 sTNF-α,间接反映干扰 TACE 的效果;用 MTT 法检测细胞增殖活性;用 DNA ladder 和流式细胞术检测细胞凋亡.结果 成功构建和筛选出了针对 TACE 基因的 3 个有效的特异性真核表达载体,且均在不同程度上抑制了 HeLa 细胞 TACE 基因的表达.ELISA 检测结果与 Reahime PCR实验结果相符.同时发现干扰 TACE 基因后,HeLa 细胞的生长受到抑制,凋亡率升高,与对照组相比差异有显著性意义(P<0.05).实验组转染 shRNA1～3 后 72 h 可见特征性的基因组 DNA ladder 条带.结论 所构建的TACE shR-NA 真核表达载体能显著抑制 TACE 的表达.干扰 TACE 基因的表达可有效抑制 HeLa 细胞的增殖并诱导其凋亡.
作者：章杰；闫媛；杨渝珍；杨业金 刊期： 2008年第04期
目的 研究大鼠局灶性大脑中动脉缺血再灌注过程中缺血脑区和远隔脑区氨基酸动态变化的差异.方法 颈内动脉插线法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,采用微透析技术取样,高效毛细管电泳一激光诱发荧光法检测,分别观察局灶性脑缺血再灌注过程中缺血脑区(纹状体)和远隔脑区(海马)细胞外 3 种氨基酸含量的动态变化.结果 纹状体细胞外谷氨酸、甘氨酸及γ-氨基丁酸 3 种氨基酸含量在局灶性大脑中动脉缺血 20 min 时即显著升高.再灌注后有所下降,在缺血 60 min 及再灌注 60 min 一直维持在显著高于基线值的水平;海马细胞外 3 种氨基酸含量缺血 20～40min 明显升高,以后有所回降,再灌注 20～40 min 又上升,缺血期和再灌注期分别出现一次高峰;假手术组动物纹状体和海马细胞外 3 种氨基酸含量在相应各时间点与基线值相比无显著变化.结论 局灶性大脑中动脉缺血再灌注不仅导致缺血脑区的损伤,在远隔脑区也引起相应的病理生理变化.
作者：杜一星；徐沙贝；谢敏杰；王义辉；喻志源；王伟 刊期： 2008年第04期
目的 检测皮肤鳞状细胞癌中 eIF-4E、p53 的表达,以探讨它们的临床意义.方法 用免疫组化 SABC 法分别检测 7 例正常成人皮肤以及 32 例皮肤鳞状细胞癌中 eIF-4E、p53 的表达水平.结果 在正常表皮中 eIF-4E、p53 表达均为阴性.在皮肤鳞状细胞癌中的表达率分别为 93.8%和56.3%,明显高于正常成人皮肤(P<0.05).结论 在皮肤鳞状细胞癌中,eIF-4E、p53 均可作为肿瘤标志物,且 eIF-4E 蛋白表达率高、特异性强,是一种更具潜质的肿瘤标志物.
作者：李慎秋；卫琴静 刊期： 2008年第04期
目的 观察己酮可可碱(pentoxifylline,PTX)对内毒素血症大鼠心肌热休克蛋白 70(HSPT0)和核因子-kB(NF-kB)的影响,探讨 PTX 对内毒素血症大鼠心肌损伤的保护作用及其机制.方法 采用直接注射内毒素的方法建立大鼠急性内毒素血症模型.18 只 Wistar 大鼠随机分成 3 组:假手术组、内毒素组、PTX 组.采用 Western blot 检测心肌胞质蛋白内 HSP70、抑制蛋白-kB(I-kB)和核蛋白内 NF-kB 的表达,同时观察心肌病理形态.结果 内毒素组心肌组织内 HSP70 和NF-kB 蛋白水平均明显增高,而 I-kB 蛋白水平明显降低,与假手术组比较差异有极显著性意义(P<0.01);予 PTX 干预后,心肌组织 HSP70 蛋白水平进一步增高.而 NF-kB 蛋白水平却明显下降,与内毒素组比较差异有极显著性意义(P<0.01).结论 PTX 可以通过增加内毒素血症大鼠心肌组织内 HSP70 蛋白表达和降低 NF-kB 活性,对心肌产生保护作用.
作者：祝伟；陈华文；吕青；万磊；钟强；郑智 刊期： 2008年第04期
目的 探讨解偶联蛋白-2(uncoupling protein-2,UCP-2)的过度表达对人 LO2 肝细胞系缺血再灌注损伤的影响及可能机制.方法 构建 UCP-2 真核表达质粒,转染 LO2 肝细胞并筛选出阳性克隆进行鉴定.将转染重组质粒组和对照组肝细胞进行缺血再灌注处理后,采用原位 Hoechest/PI 染色,荧光显微镜观察细胞损伤情况,Annexin V/PI 双标流式细胞仪检测细胞坏死率、凋亡率和存活率,并检测细胞内三磷酸腺苷(ATP)、活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)水平.结果 转染重组质粒组细胞在缺血再灌注后遭受的损伤显著重于对照组,转染重组质粒组细胞内 ATP 水平显著低于对照组,细胞坏死率、凋亡率、存活率与对照组细胞比较差异均有显著性意义(P<0.05).结论 肝细胞内 UCP-2 的过度表达加剧了缺血再灌注后细胞内 ATP 的耗竭,导致细胞遭受更为严重的损伤.
作者：万赤丹；王宏博；冯贤松；刘涛；程锐；勾善淼 刊期： 2008年第04期
目的 探讨干酪乳杆菌细胞壁成分(lactobacillus casei cell wall extract,LCWE)诱导小鼠产生冠状动脉炎的超抗原机制.方法 4周龄 Balb/c 小鼠 126 只,随机分为实验组(63只)和对照组(63只),分别于腹腔注射0.5 ml LC-WE 或等体积 PBS 溶液(对照组),注射前及注射后3 h、6 h、12 h、1 d、3 d、5 d、10 d、28 d分批处死,制备脾单个核细胞悬液,并留取心脏病理标本.检测各组注射前及注射后不同时间小鼠脾单个核细胞 TCR Vβ2、4、6mAb 的表达,以及脾单个核细胞悬液CD4+T 细胞 CD69 的阳性率.结果 ①病理学检查显示,实验组小鼠冠状动脉炎损害发生率为 92.10%,对照组为0,差异有显著性意义.②实验组小鼠在注射 LCWE 后 3 h,脾单个核细胞表达 TCR V/32、4、6 的 CD4+T 细胞百分比均明显增加,3 d 达高峰,其后逐渐消退,注射 LCWE 后3 h、6 h、12 h、1 d、3 d、5 d、10 d 与注射前比较及与 PBS组比较,差异均有极显著性意义(均P<0.01).③实验组小鼠脾单个核细胞 CD4+T 细胞 CD69 的阳性率,在 LCWE 注射后 3 h开始升高(19.32%),12 h达高峰(38.80%),以后明显下降,1 d为9.89%;与对照组比较,差异均有极显著性意义(均P<0.01).结论 国产 LCWE 具有超抗原活性特征.可刺激表达 TCR VβT 细胞的增殖和引起淋巴细胞早期活化.LCWE 单次腹腔注射诱导 Balb/c 小鼠产生的冠状动脉炎病理损害是通过超抗原机制实现的.
作者：覃丽君；范毅敏；牛美真；王宏伟；胡秀芬；康闽；杨杨；王丹丹；隗远祥；李秀云 刊期： 2008年第04期
目的 探讨金雀异黄素对兔外伤性增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)视网膜组织碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF) mRNA 和增殖细胞核抗原(proliferating cell nu-clear antigen,PCNA)表达的影响.方法 建立外伤性 PVR 兔模型,分为模型对照组及金雀异黄素治疗组.每组于制模后 7、14、21、28 d 分别将 2 只模型兔眼球取出制作标本,采用原位杂交法检测视网膜组织 bFGF mRNA 表达,采用免疫组织化学法检测 PCNA 表达.结果 ①外伤性 PVR 视网膜组织 bFGF mRNA 和 PCNA 表达呈现先升高后降低的动态变化,14 d 时达到峰值;②金雀异黄素治疗组在 7、14、21、28 d 时视网膜组织 bFGF mRNA 和 PCNA 表达均明显低于模型对照组,差异均有显著性意义(均P<0.05).结论 金雀异黄素能抑制外伤性 PVR 视网膜组织 bFGFmRNA 和PCNA 表达,具有防治外伤性 PVR 的潜能.
作者：游江；姜德咏 刊期： 2008年第04期
目的 研究多囊卵巢综合征(polycystie ovarian syndrome,PCOS)患者子宫内膜胰岛素受体底物(insulin re-ceptor substrate IRS)1 和 2 蛋白的表达及酪氨酸磷酸化的程度.探讨 PCOS 子宫内膜胰岛素抵抗的分子机制.方法 于月经周期第 1 天刮取 PCOS 合并胰岛素抵抗患者(PCOS组,15 例)和正常妇女(对照组,10 例)子宫内膜,行病理切片观察及免疫组化染色,计算机图像分析系统分析子宫内膜 IRS-1 和 IRS-2 蛋白的表达及酪氨酸磷酸化程度.结果 ①PCOS 组和对照组 IRS-1 蛋白表达的灰度值分别为(121.94±16.00)和(55.35±0.98),IRS-2 蛋白分别为(169.35±13.00)和(111.65±8.02),两组比较差异有显著性意义(P<0.01,P<0.05),PCOS 组子宫内膜 IRS-1 和 IRS-2 蛋白的表达明显降低;②PCOS 组子宫内膜 IRS 酪氨酸磷酸化的程度明显低于对照组,其灰度值分别为(141.98±22.50)、(102.72±9.78),两组比较差异有显著性意义(P<0.05).结论 PCOS 合并胰岛素抵抗患者子宫内膜组织的 IRS-1 和IRS-2 蛋白表达及酪氨酸磷酸化的程度异常所导致的受体后信号传导障碍,可能是发生胰岛素抵抗机制之一.
作者：盛慧；刘义；吕立群；刘向前 刊期： 2008年第04期
目的 探讨原发性肝细胞癌(HCC)中 Gli2、Cyclin D1 和 p21 的表达及其意义.方法 采用组织芯片和免疫组织化学方法以及 RT-PCR 检测了 44 对 HCC 和相应癌旁肝组织中 Gli2 蛋白和 mRNA 的表达情况,应用 Western blot检测了 Cyclin D1、p21 蛋白在两种组织中的表达差异.结果 免疫组化染色与 RT-PCR 示 Gli2 在 HCC 组织中的阳性表达率为 68.2%,而癌旁肝组织为38.6%,两者差异具有极显著性意义(P<0.01),且 Gli2 与 HCC 的组织分化和门静脉转移相关.Cyclin D1 蛋白在 HCC 中的表达显著高于癌旁肝组织(P<0.05).且与 Gli2 的表达呈正相关;而 p21 蛋白在癌旁肝组织中的表达显著高于 HCC,但与 Gli2 无明显相关性.结论 Gli2 过度激活可能通过上调 Cyelin D1 的表达而使肝癌细胞异常增殖,参与 HCC 的发生和发展.
作者：成薇婷；田德英；许凯 刊期： 2008年第04期
目的 研究微小染色体维持蛋白 5(MCM5) 在银屑病、鲍温病和鳞状细胞癌中的表达情况,并与上述疾病中细胞增殖核抗原(PCNA)蛋白的表达相对比,以寻找一种新的反映皮肤细胞增殖活性的标志物.方法 采用免疫组化ABC 法检测 MCM5 蛋白和 PCNA蛋白在 16 例寻常性银屑病、16 例鲍温病、38 例鳞状细胞癌和 12 例正常人皮肤组织石蜡包埋切片中的表达,并计算其标记指数.结果 ①银屑病组、鲍温病组和鳞状细胞癌组中 MCM5 蛋白标记指数明显高于正常对照组(P<0.01).②各研究组中,MCM5 和 PCNA 蛋白免疫组化染色特点相似.结论 MCM5 蛋白是检测皮肤组织中细胞增殖活性的良好标志物.
作者：黄琨；林能兴；吴艳；陈宏翔；李家文；涂亚庭；刘厚君 刊期： 2008年第04期
华中科技大学学报（医学版）杂志
主管:中华人民共和国教育部
主办：华中科技大学
