庄正陵；郑启新；宋玉林；郭晓东；吴永超；肖锋
目的 应用腺病毒介导的转基因技术,研究过表达线粒体融合素基因-2(mitofusin-2,Mfn2)对WKY大鼠主动脉血管平滑肌细胞(rVSMCs)凋亡的影响并探讨其相关的信号通路.方法 体外培养rVSMCs,感染含有Mfn2基因的腺病毒载体(Adv-Mfn2-GFP).通过免疫组化染色显示细胞凋亡的形态学特征;采用琼脂糖凝胶电泳,Cell Death ELISA观察过表达Mfn2基因对细胞凋亡的影响;用Western blot检测感染Mfn2基因后不同时间点的磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)水平的变化.结果 rVSMCs感染Adv-Mfn2-GFP后能有效表达出相应蛋白;过表达Mfn2基因能明显促进rVSMCs凋亡,并抑制ET-1诱导的Akt活化和ERK活化,此作用显示出时间依赖性,且Akt活化受到的抑制更明显.结论 过表达Mfn2基因能明显促进WKY大鼠主动脉血管平滑肌细胞凋亡,其分子机制是抑制Ras信号途径的活化,分子作用靶点可能是Ras-PI3K-Akt信号通路.
作者：刘成；陈莉莉；王剑明；曹文静；陈光慧；郭小梅 刊期： 2007年第02期
目的 探讨氯化锂(lithium chloride, LiCl)对人肺泡Ⅱ型上皮细胞来源的A549细胞在细胞增殖和细胞周期方面的影响.方法 以不同浓度的LiCl作用A549细胞24 h后,采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)检测各组细胞的增殖活性;利用流式细胞术进行细胞周期分析;免疫细胞荧光技术检测糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase 3β,GSK3β)在各组细胞中的表达;并通过Western blot检测LiCl对GSK3β、磷酸化GSK3β(p-GSK3β)及Cyclin D1蛋白质表达水平的影响.结果 LiCl能提高A549细胞的增殖活性.且随着LiCl浓度的升高,处于G1期的细胞数量减少,而S期细胞数量增多,与正常对照组相比,差异具统计学意义(10 mmol/L组:P＜0.05;20 mmol/L组:P＜0.01).LiCl能使GSK3β表达降低而无酶活性的p-GSK3β表达升高;同时上调Cyclin D1的表达水平.结论 LiCl能加快A549细胞的G1/S期转换并促进增殖, GSK3β的活性受抑从而减少Cyclin D1的降解是其可能的机制.
作者：李建莎；朱敏；田丹；王满香；王芳；李娜萍；吴人亮 刊期： 2007年第02期
目的 构建小鼠内皮抑制素(endostatin)真核表达质粒,进行分泌性表达,研究其体外生物学活性,以进一步用于肿瘤的基因治疗.方法 人工合成小鼠Igκ轻链信号肽序列,RT-PCR获得小鼠内皮抑制素编码序列,一起克隆入真核表达载体pcDNA3.1中,对其进行酶切鉴定和序列分析.重组质粒经脂质体介导转染受体细胞BHK-21,ELISA检测细胞培养上清中内皮抑制素的含量.用此上清作用于经bFGF刺激的ECV304内皮细胞和HepG2肝癌细胞,MTT法检测细胞的增殖.结果 经酶切鉴定及DNA测序分析,Igκ信号肽序列及内皮抑制素编码序列成功克隆到目的位点上,其转染细胞上清中可以检测到分泌出的内皮抑制素,含量为(65.5±10.9)ng/106细胞;并且可以抑制ECV304内皮细胞的增殖,抑制率约为29.2%,而对HepG2肝癌细胞增殖没有影响.结论 成功构建了小鼠内皮抑制素真核质粒,其分泌性表达产物可以抑制内皮细胞的增殖,具有较好的生物学活性.
作者：黎培员；林菊生；冯作化；贺宇飞；周鹤俊；田德安 刊期： 2007年第02期
目的 研究闹羊花毒素Ⅲ对豚鼠心室乳头肌收缩力和心室肌细胞钠电流、钙电流和钠-钙交换电流的作用.方法 采用离体器官实验法记录心室乳头肌收缩力;采用全细胞膜片钳技术记录心室肌细胞钠电流、钙电流和钠-钙交换电流.结果 ①闹羊花毒素Ⅲ(0.1、0.3、1.0 μmol/L)对心室乳头肌有浓度依赖性的正性肌力作用,乳头肌收缩力分别增加(27.0±8.2)%、(56.0±16.6)%和(102.0±38.4)%( n=6,均 P＜0.01 ),更高浓度时(3.0 μmol/L)则诱发节律异常.3.0 μmol/L河豚毒素可对抗这些作用.②在钳制电压为+50 mV 时,1.0 μmol/L闹羊花毒素Ⅲ使钠-钙交换电流由(123±30)pA 增至(232±49)pA( n=5,P＜0.01 ).③ 1.0 μmol/L闹羊花毒素Ⅲ抑制钠电流,使钠电流峰值由(3.58±0.86)nA降至(1.30±0.38)nA( n=5,P＜0.01 ),而对钙电流无影响[给药前为(852±260)pA,给药后为(818±226)pA,n=5,P＞0.05].结论 闹羊花毒素Ⅲ的正性肌力作用机制主要是促进钠-钙交换电流,而不是增加钙电流.
作者：刘慧；胡壮丽；张德勇；胡燕；秦国伟；金满文 刊期： 2007年第02期
目的 研究Bmi-1和Mel-18基因在人急性髓系白血病细胞株HL-60凋亡过程中的表达.方法 将HL-60细胞用Proteasome抑制剂MG-132进行处理后,采用Real-Time RT-PCR法检测不同时间点的Bmi-1和Mel-18的表达水平,用流式细胞仪检测细胞凋亡状况,同时共聚焦显微镜观察细胞内NF-κB活性.结果 MG-132处理前HL-60细胞Mel-18表达水平很低,而Bmi-1表达水平较高;处理后Mel-18表达水平未见明显变化,而Bmi-1表达水平明显下降,细胞凋亡比例增加,同时观察到HL-60细胞内NF-κB活性明显抑制.结论 MG-132抑制NF-κB活性的过程中很可能通过下调Bmi-1的表达,诱导了HL-60细胞凋亡.
作者：崔睿；王萍；黄士昂 刊期： 2007年第02期
目的 将促黏附分子RGD肽(精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸)固定于胶原材料,检测其对细胞黏附性的影响.方法 实验分4组(n=12):耦联组采用化学交联剂Sulfo-LC-SPDP,使含RGD肽的GRGDSPC肽与胶原支架结合;混合组将GRGDSPC肽与胶原直接混合后涂层;以及单纯胶原涂层组和未涂层孔板组.采用X射线光电子能谱法(XPS)对材料作表面分析.MTT试验检测种植于材料表面的大鼠肌成纤维细胞的细胞黏附效率.结果 耦联组的XPS谱图检测到硫元素,证明已将RGD肽化学结合于胶原材料表面.MTT法检测显示,耦联组RGD肽固定胶原后细胞黏附效率明显高于其它各组,且呈时间和肽浓度依赖性.结论 RGD肽对胶原的表面修饰,可提高生物源性支架的细胞黏附性,促进组织工程心脏瓣膜构建.
作者：史嘉玮；董念国；孙宗全 刊期： 2007年第02期
目的 研究丙酮酸乙酯(EP)对缺血/再灌注(I/R)心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响,探讨其抑制缺血/再灌注心肌细胞凋亡的可能机制.方法 应用Langendorff主动脉逆行灌流的体外大鼠缺血/再灌注心脏模型,24只雄性大鼠随机分为3组(每组各8只):对照组,K-H液持续灌流120 min;缺血/再灌注组,平衡灌流30 min,全心停灌30 min,再灌60 min;EP组,实验程序与缺血/再灌注组相同,平衡15 min后和再灌注期间灌流使用含2 mmol/L EP的K-H液.检测心肌丙二醛(MDA)含量,分别以缺口末端标记法(TUNEL法)及免疫组化法检测心肌细胞凋亡指数(AI)及Bcl-2、Bax蛋白表达的变化.结果 缺血/再灌注组MDA含量,AI和Bcl-2、Bax蛋白表达水平均明显高于对照组(均P＜0.05);与缺血/再灌注组比较,EP组MDA含量,AI与Bax蛋白表达水平均下降,而Bcl-2蛋白表达水平显著增高(均P＜0.05).结论 EP可抑制缺血/再灌注后心肌细胞凋亡,此作用可能与其减轻氧化应激、上调Bcl-2和下调Bax蛋白表达水平有关.
作者：郭家龙；张凯伦；蒋雄刚；夏家红；孙宗全 刊期： 2007年第02期
目的 探讨血管内皮细胞衰老与细胞生物学特征变化的关系.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞,通过传代形成细胞的衰老模型.光镜下观察各代细胞的形态结构;流式细胞术检测细胞周期分布和细胞内自发荧光产物的变化;线粒体膜电位特异染色法检测线粒体膜电位的演变.结果 随着细胞传代次数的增加,血管内皮细胞结构逐步退化,细胞分裂减缓,细胞周期趋向停滞于G0/G1期.处于G0/G1期的细胞由第2次传代细胞的74.17%增加至第8次传代细胞的88.80%.细胞自发荧光有显著性增加,线粒体膜电位则有显著性降低.结论 在血管内皮细胞复制性衰老过程中,伴随着细胞形态退化,细胞周期分布异常,细胞内线粒体功能降低,脂质过氧化反应增强.
作者：赵海梅；杨彬；成蓓 刊期： 2007年第02期
目的 快速纯化tau蛋白,制备tau 蛋白的多克隆抗体.方法 依次使用差速离心、热失活、离子交换层析的方法纯化体外重组的人tau蛋白;用此纯化的蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,用Western blot检测组织来源的样品,确定所制备抗体的特异性和效价.结果 采用上述方法成功获得人类全长tau蛋白--tau40;同时,所制备的tau蛋白多克隆抗体效价高,特异性好.结论 本方法所获得的tau抗体效价高,特异性好,可以用于进一步的科学研究.
作者：王群；胡茂琼；张蕲；张永杰；徐雅飞；王建枝 刊期： 2007年第02期
目的 深入研究淫羊藿苷(icariin,ICA)的壮阳作用机制.方法 采用125I 放射免疫测定法,以西地那非(sildenafil,Sild)为阳性对照,观察ICA对家兔阴茎海绵体平滑肌组织中cGMP和cAMP水平的影响.结果 ICA 能直接升高cGMP 的含量,但对cAMP含量无显著影响.在cGMP激动剂硝普钠(SNP)存在下,ICA和Sild均能浓度依赖性地提高海绵体组织中cGMP浓度(P＜0.01),促进cGMP生成的EC50分别为4.62和0.42 μmol/L.同样的条件下,ICA和Sild 对cAMP 的浓度均无显著影响(P＞0.05).在cAMP激动剂前列腺素E1(PGE1)刺激下,ICA 和Sild 也能够提高海绵体组织中cAMP的浓度(P＜0.01),表现出浓度依赖性,促进cAMP生成的EC50分别为2.16、0.98 μmol/L.结论 ICA的壮阳作用机制与影响NO-cGMP信号通路有关,主要通过提高阴茎海绵体平滑肌中cGMP的浓度,从而舒张海绵体,增强阴茎勃起功能.
作者：蒋兆健；胡本容；付琴；汤强；向继洲；刘菊妍 刊期： 2007年第02期
目的 探讨DNA甲基转移酶抑制剂5-氮-2-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人胆管癌细胞株QBC-939中RASSF1A基因启动子区域甲基化状态及其表达的影响.方法 用5 μmol/L的5-Aza-CdR对QBC-939细胞进行化学干预24 h,用甲基化特异性PCR(MS-PCR)检测 RASSF1A基因启动子区域甲基化状态的改变,RT-PCR观察RASSF1A基因mRNA水平变化,Western blot检测RASSF1A蛋白的表达.结果 经5-Aza-CdR化学干预后,RASSF1A基因启动子区域由甲基化状态转变为非甲基化状态;RT-PCR和Western blot结果显示在干预组细胞中分别出现RASSF1A基因的DNA条带(280 bp)和蛋白质条带(40 kD),而对照组中没有相应条带出现.结论 DNA甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR能够诱导RASSF1A基因启动子区域去甲基化,并通过该机制诱导RASSF1A基因在人胆管癌细胞系QBC-939中的表达.
作者：左石；陈勇军；徐立宁；唐启彬；邹声泉 刊期： 2007年第02期
目的 探讨钙调蛋白激酶Ⅱ特异性抑制剂KN-93抗肥厚心肌室性心律失常发生的机制.方法 雌性新西兰大白兔随机分为4组:假手术组(sham组)、心肌肥厚组(LVH组)、心肌肥厚+KN-93组(KN-93组)、心肌肥厚+KN-92组(KN-92组),每组14只.LVH组、KN-93组及KN-92组通过缩窄腹主动脉制备兔心肌肥厚模型.8周后, 制备兔左室楔形心肌块的灌注模型,同步记录心内、外膜动作电位及跨壁心电图,观察低钾(2 mmol/L)、低镁(0.25 mmol/L)蒂罗德液灌流及慢频率(2 000～4 000 ms)刺激条件下各组早期后除极(EAD)和尖端扭转型室性心动过速(Tdp)的发生率.采用胶原酶消化法分离单个心肌细胞,应用膜片钳技术记录动作电位(AP),观察低钾、低镁蒂罗德液灌流及慢频率(0.25～0.5 Hz)刺激条件下,各组EAD的发生率.结果 在低钾、低镁蒂罗德液灌流及慢频率刺激条件下, 兔左室楔形心肌块水平,sham组、LVH组、KN-92组(0.5 μmol/L)及KN-93组(0.5 μmol/L)EAD的发生率分别为0/10、10/10、9/10和5/10,Tdp的发生率分别为0/10、5/10、4/10和1/10.单个心肌细胞水平,Sham组、LVH组、KN-92组(0.5 μmol/L)及KN-93组(0.5 μmol/L)EAD的发生率分别为0/12、11/12、10/12和5/12.结论 钙调蛋白激酶Ⅱ介导心肌肥厚兔室性心律失常的发生,其主要作用机制是通过增加EAD的发生率,从而触发室性心律失常的发生.
作者：柯俊；张存泰；马业新；刘俊；刘念；阮燕菲；林立 刊期： 2007年第02期
目的 探讨糖皮质激素对于活化大鼠嗜碱性白血病细胞(RBL-2H3,简称RBL)表达白细胞介素-4(IL-4)的影响.方法 分别利用抗原和钙离子载体A23187激活RBL,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测地塞米松和氢化可的松对活化RBL表达IL-4的影响.结果 经A23187活化的RBL,加入10-10和10-8mol/L地塞米松培养24 h后,其IL-4表达量分别降至对照的45.2%和14.5%,加入10-9和10-7mol/L氢化可的松后,其IL-4表达量分别降至对照的56.4%和9.0%.经抗原活化的RBL,加入10-8和10-6mol/L地塞米松后,其IL-4表达量分别降至对照的28.7%和12.0%,加入10-8和10-6mol/L氢化可的松后,其IL-4表达量分别降至对照的52.1%和11.5%.[HTH]结论糖皮质激素对于活化RBL表达IL-4具有极大的抑制作用,提示糖皮质激素在临床上治疗哮喘的作用与其抑制肥大细胞表达IL-4存在一定关系.
作者：张继成；吴健民；张才成；吕文利 刊期： 2007年第02期
目的 研究5-氟尿嘧啶(5-FU)纳米磁性颗粒在荷瘤裸鼠体内的靶向性分布.方法 制备荷瘤小鼠异位肝癌模型(荷瘤鼠),随机分3组,每组8只.A组:5-FU原液治疗组;B组:单纯5-FU纳米磁性颗粒治疗组,无磁场应用;C组:实验组,在肿瘤内部建立300高斯(GS)的磁场,药物应用同B组.采用高效液相色谱(HPLC)分析法检测离体组织中5-FU药物浓度,原子吸收光谱法(AAS)测定荷瘤鼠组织中的铁浓度,磁共振成像(MRI)检测5-FU纳米磁性颗粒在荷瘤鼠体内组织分布.结果 在肿瘤组织内建立内磁场后,尾静脉注射5-FU纳米磁性颗粒(250 mg/kg),与无磁场的相同药物治疗组及单纯5-FU对照组比较,HPLC检测荷瘤鼠的肿瘤组织中5-FU浓度显著增加(P＜0.01),AAS检测肿瘤组织中铁浓度也显著增加,肿瘤组织MRI的T2加权像发生变化,呈现低信号.结论 在磁场引导下,5-FU纳米磁性颗粒中磁性载体和所载药物在荷瘤鼠体内具有肿瘤靶向性分布.
作者：郑建伟；徐戎；唐滔；王剑明；曾繁典；邹声泉 刊期： 2007年第02期
目的 检测人卵和胚胎中线粒体基因组的表达,探讨线粒体基因表达水平与卵母细胞发育潜能的关系.方法 收集临床常规体外授精(IVF)和单精子卵胞浆内注射(ICSI)不受精的成熟卵母细胞以及不适合移植和冷冻保存的胚胎,单个细胞裂解液制备单个卵母细胞或胚胎总RNA,半定量逆转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)检测线粒体DNA(mtDNA)编码的5个呼吸链蛋白基因的mRNA含量.结果 在所有未受精人卵和胚胎中都检测到了线粒体5种基因的mRNA;未受精人卵ND2、ND5、COⅡ、Cytb、ATP酶6的mRNA含量分别为:(0.38±0.16)、(0.75±0.31)、(0.49±0.22)、(0.74±0.30)、(0.53±0.24),明显低于胚胎中相应5种基因mRNA的含量,其分别为(2.16±0.41)、(3.40±0.53)、(2.40±0.40)、(3.26±0.46)、(2.32±0.42),与胚胎的mRNA含量相比,均P＜0.01;三原核胚胎和发育阻滞胚胎的5种基因mRNA水平差异没有显著性意义.结论 线粒体基因表达下降可能参与卵母细胞不受精的机制,并与卵母细胞的发育潜能有关.
作者：黄睿；李涛；黄敏珍；张敏芳；庄广伦 刊期： 2007年第02期
目的 研究表面活性蛋白B(SP-B)、甲状腺转录因子1(TTF-1)在新生儿肺透明膜病中的表达与分布,并分析SP-B基因结构变化,探讨SP-B在肺透明膜病中的作用.方法 回顾性研究28例新生儿肺透明膜病尸检病例,应用免疫组织化学方法检测SP-B、TTF-1在肺泡Ⅱ型上皮细胞中的表达;通过PCR-SSCP方法检测SP-B基因第4外显子是否有突变.结果 免疫组织化学染色显示SP-B、TTF-1表达显著减少,PCR-SSCP结果未见SP-B第4外显子突变.结论 新生儿肺透明膜病与肺泡Ⅱ型上皮细胞SP-B表达减少有关,SP-B下调可能与TTF-1低表达相关.
作者：李敏才；时燕；李娜萍；吴人亮；王曦 刊期： 2007年第02期
目的 检测胆管癌和癌旁胆管组织中Survivin蛋白和mRNA的表达,探讨其在胆管癌发生发展中的作用.方法 应用免疫组化SP法检测48例胆管癌和其中30例癌旁胆管组织中Survivin蛋白的表达,同时应用RT-PCR技术检测这些组织标本中Survivin mRNA的表达,并与临床病理资料进行相关性分析.结果 48例胆管癌组织中,Survivin蛋白阳性表达率为79.2%(38/48), 在癌旁胆管组织中Survivin蛋白阳性表达率6.7%(2/30),两者比较差异有显著性意义(P＜0.05).48例胆管癌组织中,有30例Survivin mRNA的表达高于配对正常组织, 胆管癌组织中Survivin mRNA的表达水平(2.18±1.21)明显高于正常对照组织(1.01±1.03) (P＜0.05).临床病理资料的相关性分析显示,胆管癌组织中Survivin蛋白和mRNA的表达分布与临床病理特征无相关性.结论 Survivin基因转录和蛋白表达可能参与胆管癌的发生发展过程,检测Survivin表达可能有助于阐明胆管癌的发生机制.
作者：左克强；艾开兴；郭兴军；宋自芳；陈立波；郑启昌 刊期： 2007年第02期
目的 探讨儿童非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin lymphoma, NHL)病理组织中细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(extracellular matrix metalloproteinase inducer,EMMPRIN)和基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9, MMP-9)的表达,以及两者表达间的相关性.方法 免疫组织化学SP染色方法检测47例NHL病理切片中的EMMPRIN和MMP-9的表达,采用Spearman等级相关分析方法分析EMMPRIN表达与MMP-9的相关性,同时分析其与临床分期及预后的关系.结果 ①EMMPRIN在儿童NHL的表达阳性率为81%(38/47),其中T细胞型NHL的强阳性率为76%(19/25),B细胞型NHL的强阳性率为36%(8/22),两者强阳性表达率差异有极显著性意义(P＜0.01).② MMP-9在儿童NHL中的表达阳性率为79%(37/47),其中T细胞型NHL的强阳性率为72%(18/25),B细胞型NHL的强阳性率为23%(5/22),两者强阳性表达率差异有极显著性意义(P＜0.01).③ EMMPRIN的表达与MMP-9有显著正相关性(rs=0.913,P＜0.05).④Ⅲ期+Ⅳ期组以及存活时间＜5年组EMMPRIN、MMP-9的强阳性表达率均分别高于Ⅰ期+Ⅱ期组和存活时间≥5年组.结论 儿童NHL细胞高表达EMMPRIN和MMP-9,且T细胞型NHL的表达明显高于B细胞型,两者表达强度与临床分期及预后有关,可能作为NHL预后判断指标之一.
作者：刘爱国；胡群；陶红芳；张柳清；周晟；胡迎 刊期： 2007年第02期
目的 研究依达拉奉对脑出血大鼠血肿周围脑组织细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响,探讨其对脑出血后脑组织损害的保护作用.方法 36只SD大鼠随机分为依达拉奉组、脑出血组和假手术组,每组12只.用尾状核注射自体血法建立脑出血模型;检测丙二醛(MDA)含量,以TUNEL法及免疫组化法检测神经细胞凋亡数及Bcl-2、Bax蛋白表达的变化.结果 出血组脑组织MDA含量、细胞凋亡数和Bcl-2、Bax蛋白表达水平均明显高于假手术组;与出血组相比,依达拉奉组MDA含量、细胞凋亡数与Bax蛋白表达水平均下降,而Bcl-2蛋白表达水平显著增高.结论 依达拉奉可抑制出血后神经细胞凋亡,此作用可能与其减轻氧化应激、上调Bcl-2和下调Bax蛋白表达水平有关.
作者：陈吉相；季艳梅；孙圣刚；徐芳 刊期： 2007年第02期
目的 了解武汉地区肺炎链球菌的红霉素耐药机制.方法 收集152株肺炎链球菌,琼脂稀释法测定抗菌药物低抑菌浓度,红霉素-克林霉素双纸片扩散法检测耐药表型,聚合酶链式反应检测红霉素耐药基因ermB和mefA.结果 152株肺炎链球菌红霉素耐药率达84.21%(128/152),耐药表型主要为cMLSB (98.44%), 2株菌(1.56%)为M表型耐药.128株红霉素耐药肺炎链球菌ermB基因总检出率98.44%(126/128),其中40株菌(31.25%)同时检出ermB和mefA基因,2株菌(1.56%)仅检出mefA基因.结论 武汉地区红霉素耐药肺炎链球菌的发生率高,ermB基因是主要的耐药机制,介导cMLSB表型耐药,双纸片扩散法对此耐药表型的检测有很好的预见性.
作者：张璟；孙自镛 刊期： 2007年第02期
华中科技大学学报（医学版）杂志
主管:中华人民共和国教育部
主办：华中科技大学
