李建莎；朱敏；田丹；王满香；王芳；李娜萍；吴人亮
目的 检测人卵和胚胎中线粒体基因组的表达,探讨线粒体基因表达水平与卵母细胞发育潜能的关系.方法 收集临床常规体外授精(IVF)和单精子卵胞浆内注射(ICSI)不受精的成熟卵母细胞以及不适合移植和冷冻保存的胚胎,单个细胞裂解液制备单个卵母细胞或胚胎总RNA,半定量逆转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)检测线粒体DNA(mtDNA)编码的5个呼吸链蛋白基因的mRNA含量.结果 在所有未受精人卵和胚胎中都检测到了线粒体5种基因的mRNA;未受精人卵ND2、ND5、COⅡ、Cytb、ATP酶6的mRNA含量分别为:(0.38±0.16)、(0.75±0.31)、(0.49±0.22)、(0.74±0.30)、(0.53±0.24),明显低于胚胎中相应5种基因mRNA的含量,其分别为(2.16±0.41)、(3.40±0.53)、(2.40±0.40)、(3.26±0.46)、(2.32±0.42),与胚胎的mRNA含量相比,均P＜0.01;三原核胚胎和发育阻滞胚胎的5种基因mRNA水平差异没有显著性意义.结论 线粒体基因表达下降可能参与卵母细胞不受精的机制,并与卵母细胞的发育潜能有关.
作者：黄睿；李涛；黄敏珍；张敏芳；庄广伦 刊期： 2007年第02期
目的 检测胆管癌和癌旁胆管组织中Survivin蛋白和mRNA的表达,探讨其在胆管癌发生发展中的作用.方法 应用免疫组化SP法检测48例胆管癌和其中30例癌旁胆管组织中Survivin蛋白的表达,同时应用RT-PCR技术检测这些组织标本中Survivin mRNA的表达,并与临床病理资料进行相关性分析.结果 48例胆管癌组织中,Survivin蛋白阳性表达率为79.2%(38/48), 在癌旁胆管组织中Survivin蛋白阳性表达率6.7%(2/30),两者比较差异有显著性意义(P＜0.05).48例胆管癌组织中,有30例Survivin mRNA的表达高于配对正常组织, 胆管癌组织中Survivin mRNA的表达水平(2.18±1.21)明显高于正常对照组织(1.01±1.03) (P＜0.05).临床病理资料的相关性分析显示,胆管癌组织中Survivin蛋白和mRNA的表达分布与临床病理特征无相关性.结论 Survivin基因转录和蛋白表达可能参与胆管癌的发生发展过程,检测Survivin表达可能有助于阐明胆管癌的发生机制.
作者：左克强；艾开兴；郭兴军；宋自芳；陈立波；郑启昌 刊期： 2007年第02期
目的 研究5-氟尿嘧啶(5-FU)纳米磁性颗粒在荷瘤裸鼠体内的靶向性分布.方法 制备荷瘤小鼠异位肝癌模型(荷瘤鼠),随机分3组,每组8只.A组:5-FU原液治疗组;B组:单纯5-FU纳米磁性颗粒治疗组,无磁场应用;C组:实验组,在肿瘤内部建立300高斯(GS)的磁场,药物应用同B组.采用高效液相色谱(HPLC)分析法检测离体组织中5-FU药物浓度,原子吸收光谱法(AAS)测定荷瘤鼠组织中的铁浓度,磁共振成像(MRI)检测5-FU纳米磁性颗粒在荷瘤鼠体内组织分布.结果 在肿瘤组织内建立内磁场后,尾静脉注射5-FU纳米磁性颗粒(250 mg/kg),与无磁场的相同药物治疗组及单纯5-FU对照组比较,HPLC检测荷瘤鼠的肿瘤组织中5-FU浓度显著增加(P＜0.01),AAS检测肿瘤组织中铁浓度也显著增加,肿瘤组织MRI的T2加权像发生变化,呈现低信号.结论 在磁场引导下,5-FU纳米磁性颗粒中磁性载体和所载药物在荷瘤鼠体内具有肿瘤靶向性分布.
作者：郑建伟；徐戎；唐滔；王剑明；曾繁典；邹声泉 刊期： 2007年第02期
目的 将促黏附分子RGD肽(精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸)固定于胶原材料,检测其对细胞黏附性的影响.方法 实验分4组(n=12):耦联组采用化学交联剂Sulfo-LC-SPDP,使含RGD肽的GRGDSPC肽与胶原支架结合;混合组将GRGDSPC肽与胶原直接混合后涂层;以及单纯胶原涂层组和未涂层孔板组.采用X射线光电子能谱法(XPS)对材料作表面分析.MTT试验检测种植于材料表面的大鼠肌成纤维细胞的细胞黏附效率.结果 耦联组的XPS谱图检测到硫元素,证明已将RGD肽化学结合于胶原材料表面.MTT法检测显示,耦联组RGD肽固定胶原后细胞黏附效率明显高于其它各组,且呈时间和肽浓度依赖性.结论 RGD肽对胶原的表面修饰,可提高生物源性支架的细胞黏附性,促进组织工程心脏瓣膜构建.
作者：史嘉玮；董念国；孙宗全 刊期： 2007年第02期
目的 深入研究淫羊藿苷(icariin,ICA)的壮阳作用机制.方法 采用125I 放射免疫测定法,以西地那非(sildenafil,Sild)为阳性对照,观察ICA对家兔阴茎海绵体平滑肌组织中cGMP和cAMP水平的影响.结果 ICA 能直接升高cGMP 的含量,但对cAMP含量无显著影响.在cGMP激动剂硝普钠(SNP)存在下,ICA和Sild均能浓度依赖性地提高海绵体组织中cGMP浓度(P＜0.01),促进cGMP生成的EC50分别为4.62和0.42 μmol/L.同样的条件下,ICA和Sild 对cAMP 的浓度均无显著影响(P＞0.05).在cAMP激动剂前列腺素E1(PGE1)刺激下,ICA 和Sild 也能够提高海绵体组织中cAMP的浓度(P＜0.01),表现出浓度依赖性,促进cAMP生成的EC50分别为2.16、0.98 μmol/L.结论 ICA的壮阳作用机制与影响NO-cGMP信号通路有关,主要通过提高阴茎海绵体平滑肌中cGMP的浓度,从而舒张海绵体,增强阴茎勃起功能.
作者：蒋兆健；胡本容；付琴；汤强；向继洲；刘菊妍 刊期： 2007年第02期
目的 研究外源性基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)抑制剂强力霉素在肺缺血再灌注损伤中的保护作用.方法 建立大鼠肺缺血再灌注模型,通过明胶酶谱法测定肺泡灌洗液(BAL)中明胶酶即MMP-2、MMP-9活性,免疫组化法测定肺组织中MMP-2、MMP-9的分布及含量,考马斯亮蓝比色法测定BAL中总蛋白的含量, 测定肺组织湿干重比值,观察肺组织病理学改变.结果 肺缺血再灌注后,MMP-2、MMP-9分泌及激活有显著提高,应用强力霉素30 mg/(kg·d)后,MMP-2、MMP-9分泌及激活被显著抑制,BAL中总蛋白含量显著降低,肺组织的病理改变显著减轻.结论 强力霉素通过抑制明胶酶的分泌及激活,降低基底膜的降解,减轻肺水肿,达到肺保护作用.
作者：罗海燕；孙宗全；蒋雄刚；冯汉萍；孙图成；陈新忠；冯剑锷；江萍 刊期： 2007年第02期
目的 探讨非血缘关系异基因造血干细胞移植(URD-SCT)的疗效和相关并发症.方法 22例白血病患者接受URD-SCT治疗.预处理方案:所有患者均采用马利兰联合环磷酰胺(BUCY2)或改良BUCY2预处理方案.移植物抗宿主病(GVHD)预防:22例均采用酶酚酸酯(MMF)+环孢素A(CsA)+短程甲氨蝶呤(MTX)方案,其中,4例用猪抗淋巴细胞球蛋白(ALG),16例于移植0 d和移植后4 d使用赛尼哌(CD25单抗),2例同时用ALG和CD25单抗.供者细胞回输:输注有核细胞中位数为4.5×108/kg,CD34+细胞中位数为4.3×106/kg.结果 1例早期死亡不能评估,1例未植活,20例经血型、染色体及DNA多态性检测证实植活.急性Ⅱ～Ⅳ度GVHD 8例;慢性GVHD 8例:局限性3例,广泛性5例.感染:移植后100 d内感染者17例,病原学确诊为细菌感染3例,真菌感染2例,巨细胞病毒(CMV)感染6例.存活情况:100 d内死亡5例,100 d后死亡5例,其余患者无病存活.结论 进一步降低移植相关并发症已成为URD-SCT需解决的首要问题.对无血缘供者的高危白血病患者,在严格控制移植适应证情况下,URD-SCT仍是治疗的重要手段之一.
作者：夏凌辉；邹萍；游泳；黎纬明；张纯；方峻；刘芳；宋善俊 刊期： 2007年第02期
目的 研究鼠神经干细胞在二维自组装多肽凝胶支架材料表面生长及分化情况,证明多肽凝胶可作为神经组织工程支架材料.方法 取新生1周内乳鼠的大脑皮质,机械分离出神经干细胞,无血清培养液(DMEM/F12+bFGF+EGF+B27)培养,免疫组化SABC法对神经干细胞进行鉴定;然后,将其接种到凝胶支架材料表面(实验组)及多聚赖氨酸包被的盖玻片表面(对照组),倒置相差显微镜观察干细胞的生长及分化情况.结果 免疫组化法鉴定:培养的细胞为神经干细胞, Nestin(+).神经干细胞可分化为神经元及星形胶质细胞,NSE(+),GFAP(+).倒置相差显微镜观察:实验组中,接种的神经干细胞生长良好,7 d后可分化为有突起神经细胞;对照组中,7 d后未发现长出突起神经细胞.结论 二维自组装多肽凝胶对神经干细胞有良好细胞相容性,可作为神经组织工程支架材料.
作者：庄正陵；郑启新；宋玉林；郭晓东；吴永超；肖锋 刊期： 2007年第02期
目的 研究大鼠骨髓来源树突状细胞(DC)的培养扩增方法及用肿瘤细胞裂解物致敏的树突状细胞(TAA/DC)的免疫学特性.方法 用含重组大鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rrGM-CSF)、重组大鼠白细胞介素-4(rrIL-4)和重组大鼠肿瘤坏死因子-α(rrTNF-α)的培养体系将近交系大鼠骨髓细胞诱导扩增为DC;用大鼠卵巢癌细胞的肿瘤细胞裂解物(TAA)致敏未成熟DC,获得TAA/DC;用流式细胞术分析DC、TAA/DC细胞的免疫表型.结果 含rrGM-CSF、rrIL-4和rrTNF-α的培养体系可在体外诱导大鼠骨髓单个核细胞分化为成熟的DC;TAA可促进DC的分化成熟,TAA/DC的细胞免疫表型显著增强.结论 大鼠骨髓细胞可在体外诱导为成熟的DC;负载肿瘤全抗原的DC表达与抗原提呈相关的分子增高,提示其抗原提呈能力增强.
作者：乔宝丽；张震宇；刘晋玮；翟妍 刊期： 2007年第02期
目的 为终揭示大鼠背根神经节神经元上天然瞬时外向钾通道的结构与功能调节提供依据.方法 采用双极电压钳技术记录非洲爪蟾卵母细胞上表达的Kv4.2电流,用全细胞膜片钳技术记录大鼠背根神经节神经元上瞬间外向钾电流(IA),并对二者进行动力学特征的比较.结果 背根神经节神经元上IA和Kv4.2通道电流①均具有明显的A型电流特征;②半数大激活电位分别为(-29.5±3.1) mV和(-3.9±1.0) mV;③半数大失活电位分别为(-78.5±3.4) mV和(-48.5±0.6) mV;④失活后再激活恢复时间常数(τ)分别为(32.0±4.8) ms和(71.4±13.2) ms.结论 Kv4.2通道电流可能是背根神经节神经元上IA电流的主要成分, 但不是唯一成分.
作者：聂辉；张玉芹；李享元；余文静；罗加烈；胡霞敏；李之望 刊期： 2007年第02期
目的 探讨糖皮质激素对于活化大鼠嗜碱性白血病细胞(RBL-2H3,简称RBL)表达白细胞介素-4(IL-4)的影响.方法 分别利用抗原和钙离子载体A23187激活RBL,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测地塞米松和氢化可的松对活化RBL表达IL-4的影响.结果 经A23187活化的RBL,加入10-10和10-8mol/L地塞米松培养24 h后,其IL-4表达量分别降至对照的45.2%和14.5%,加入10-9和10-7mol/L氢化可的松后,其IL-4表达量分别降至对照的56.4%和9.0%.经抗原活化的RBL,加入10-8和10-6mol/L地塞米松后,其IL-4表达量分别降至对照的28.7%和12.0%,加入10-8和10-6mol/L氢化可的松后,其IL-4表达量分别降至对照的52.1%和11.5%.[HTH]结论糖皮质激素对于活化RBL表达IL-4具有极大的抑制作用,提示糖皮质激素在临床上治疗哮喘的作用与其抑制肥大细胞表达IL-4存在一定关系.
作者：张继成；吴健民；张才成；吕文利 刊期： 2007年第02期
目的 考察苛求芽孢杆菌(ATCC 26904)分泌型尿酸酶的特性和将其应用于直接动力学尿酸酶法测定血清尿酸的有效性.方法 苛求芽孢杆菌分泌的尿酸酶经DEAE-cellulose层析纯化后,用于以积分法分析尿酸酶反应曲线预测反应体系本底的直接动力学尿酸酶法测定血清尿酸.结果 苛求芽孢杆菌分泌的尿酸酶只含1种肽链,分子量为34.7 kD(1kD=0.992 1 ku),其米氏常数为(0.22±0.01)mmo1/L(n=11),黄嘌呤抑制常数为(36±3) μmo1/L(n=4).用此尿酸酶,只要被分析反应曲线终点的底物浓度低于起点的30%,应用积分法就能可靠预测本底;直接测定反应前吸收,可使直接动力学尿酸酶法不受常见血清成分、酶活性变化和15 μmo1/L黄嘌呤等干扰.监测0.025 U/ml尿酸酶反应5 min的数据,其线性响应范围为1～50 μmol/L;所得临床标本血清尿酸含量(Ck)与过氧化物酶偶联间接终点平衡法(Ce)正相关(Ck=-0.008+1.046Ce,r=0.996,n=206),但Bland-Altman法分析表明两种方法不一致.结论 苛求芽孢杆菌分泌的尿酸酶可用于直接动力学尿酸酶法测定尿酸,并可保障其优势.
作者：赵运胜；赵利娜；杨根庆；陶佳；卜友泉；廖飞 刊期： 2007年第02期
目的 构建小鼠内皮抑制素(endostatin)真核表达质粒,进行分泌性表达,研究其体外生物学活性,以进一步用于肿瘤的基因治疗.方法 人工合成小鼠Igκ轻链信号肽序列,RT-PCR获得小鼠内皮抑制素编码序列,一起克隆入真核表达载体pcDNA3.1中,对其进行酶切鉴定和序列分析.重组质粒经脂质体介导转染受体细胞BHK-21,ELISA检测细胞培养上清中内皮抑制素的含量.用此上清作用于经bFGF刺激的ECV304内皮细胞和HepG2肝癌细胞,MTT法检测细胞的增殖.结果 经酶切鉴定及DNA测序分析,Igκ信号肽序列及内皮抑制素编码序列成功克隆到目的位点上,其转染细胞上清中可以检测到分泌出的内皮抑制素,含量为(65.5±10.9)ng/106细胞;并且可以抑制ECV304内皮细胞的增殖,抑制率约为29.2%,而对HepG2肝癌细胞增殖没有影响.结论 成功构建了小鼠内皮抑制素真核质粒,其分泌性表达产物可以抑制内皮细胞的增殖,具有较好的生物学活性.
作者：黎培员；林菊生；冯作化；贺宇飞；周鹤俊；田德安 刊期： 2007年第02期
目的 探讨Survivin基因对卵巢癌细胞紫杉醇(Taxol)敏感性的影响.方法 构建Survivin正义全长真核表达质粒(pcDNA3.1-Survivin),经脂质体包裹转染人卵巢癌细胞A2780,以转染pcDNA3.1空载体的A2780细胞为对照.RT-PCR和蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测Survivin mRNA和蛋白质的表达;MTT比色法检测紫杉醇对两组细胞存活率的影响;流式细胞仪(FACS)检测细胞凋亡率.结果 ① RT-PCR和Western blot检测提示转染pcDNA3.1-Survivin组中Survivin mRNA和蛋白质表达明显高于空载体组.② MTT比色法和FACS检测提示转染pcDNA3.1-Survivin组细胞存活率明显高于空载体组,细胞凋亡率明显低于空载体组,差异均有显著性意义(P＜0.05).pcDNA3.1-Survivin转染后的A2780细胞对紫杉醇的敏感性明显降低.结论 卵巢癌对紫杉醇的耐药性可能与Survivin基因表达有关.
作者：马晓黎；邢辉；翁丹卉；宋晓红；卢运萍；马丁 刊期： 2007年第02期
目的 探讨肺耐药蛋白(lung resistance protein, LRP)与人卵巢癌顺铂耐药细胞A2780/DDP顺铂耐药表型的关系及其分子机制.方法 应用LipofectamineTM介导反义寡核苷酸(AsODN)体外转染人卵巢癌细胞;采用RT-PCR和Western blot法检测转染前后细胞中LRP基因的表达;应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和流式细胞仪检测顺铂对转染前后细胞的杀伤效应;通过高效液相色谱仪(HPLC)检测经LRP AsODN或抗LRP单克隆抗体作用后,顺铂在A2780/DDP细胞质、核中的吸收和排泄情况.结果 与非耐药亲本细胞A2780相比,A2780/DDP细胞内LRP表达明显增高.LRP AsODN能明显降低A2780/DDP细胞中LRP表达水平,逆转其顺铂耐药表型.经LRP AsODN或抗-LRP单克隆抗体作用后,A2780/DDP细胞中顺铂含量明显增高,尤以胞核中的含量上升为甚,而其从核中的排泄受到显著性抑制.结论 LRP可能参与介导人卵巢癌细胞顺铂耐药表型的产生,并可能与顺铂在卵巢癌细胞胞质囊泡以及细胞核质交换中的代谢过程密切相关.
作者：王薇；鲍丽萍；邢辉；杨晓葵；翁丹惠；田训；司马妮；王世宣；卢运萍；马丁 刊期： 2007年第02期
目的 对河南省汉族群体的6个短串联重复序列(short tandem repeat,STR)基因座等位基因频率进行研究,获得河南汉族群体D19S253、D14S306、D18S535、D11S2368、D12S391、D4S2639基因座的群体遗传学数据.方法 对133名无血缘关系河南汉族个体的EDTA抗凝血样用酚-氯仿法提取DNA,应用多重PCR扩增技术结合聚丙烯酰胺凝胶电泳对D19S253、D14S306、D18S535、D11S2368、D12S391、D4S2639 6个基因座在河南地区汉族人群中的基因型分布进行分析.结果 6个基因座的基因型频率分布均符合Hardy-Weinberg平衡,各基因座的观察杂合度分别为0.764、0.854、0.844、0.921、0.813、0.807,6个位点的累积个体识别率为0.999 999 88,累计非父排除率为0.999 31,累计个体匹配率为1.16×10-7.结论 6个基因座在河南汉族群体中具有较高的非父排除率和个体识别率,在法医学和群体遗传学研究中有一定的应用价值.
作者：陈辉；郑红；连建华；宋国英；李晓雯；张钦宪 刊期： 2007年第02期
目的 研究依达拉奉对脑出血大鼠血肿周围脑组织细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响,探讨其对脑出血后脑组织损害的保护作用.方法 36只SD大鼠随机分为依达拉奉组、脑出血组和假手术组,每组12只.用尾状核注射自体血法建立脑出血模型;检测丙二醛(MDA)含量,以TUNEL法及免疫组化法检测神经细胞凋亡数及Bcl-2、Bax蛋白表达的变化.结果 出血组脑组织MDA含量、细胞凋亡数和Bcl-2、Bax蛋白表达水平均明显高于假手术组;与出血组相比,依达拉奉组MDA含量、细胞凋亡数与Bax蛋白表达水平均下降,而Bcl-2蛋白表达水平显著增高.结论 依达拉奉可抑制出血后神经细胞凋亡,此作用可能与其减轻氧化应激、上调Bcl-2和下调Bax蛋白表达水平有关.
作者：陈吉相；季艳梅；孙圣刚；徐芳 刊期： 2007年第02期
目的 研究表面活性蛋白B(SP-B)、甲状腺转录因子1(TTF-1)在新生儿肺透明膜病中的表达与分布,并分析SP-B基因结构变化,探讨SP-B在肺透明膜病中的作用.方法 回顾性研究28例新生儿肺透明膜病尸检病例,应用免疫组织化学方法检测SP-B、TTF-1在肺泡Ⅱ型上皮细胞中的表达;通过PCR-SSCP方法检测SP-B基因第4外显子是否有突变.结果 免疫组织化学染色显示SP-B、TTF-1表达显著减少,PCR-SSCP结果未见SP-B第4外显子突变.结论 新生儿肺透明膜病与肺泡Ⅱ型上皮细胞SP-B表达减少有关,SP-B下调可能与TTF-1低表达相关.
作者：李敏才；时燕；李娜萍；吴人亮；王曦 刊期： 2007年第02期
目的 研究神经元型一氧化氮合酶(nNOS)在2～7月龄正常人胎脑大脑皮质和海马结构的表达情况.方法 采用免疫组织化学技术,光镜下观察nNOS在不同月龄正常人胎脑大脑皮质和海马结构的表达情况;利用计算机图像分析技术测量不同月龄额叶皮质和海马结构内嗅区皮质nNOS表达的平均吸光度.结果 光镜下2月龄时人胎脑大脑皮质和海马结构中没有nNOS表达,3月龄时上述部位开始出现nNOS阳性产物的表达,阳性产物主要存在于神经细胞的胞质和突起,胞核不着色.4月龄时阳性产物增多(P＜0.05),5月龄与4月龄之间相比变化不明显(P＞0.05),6、7月龄nNOS表达持续增强(P＜0.05).结论 nNOS在3～7月龄的人胎脑大脑皮质和海马结构中有表达,其表达与胎脑神经细胞的发育规律一致,表明其产物一氧化氮(NO)与人胎脑的发育密切相关.
作者：李洪英；董大翠；张艳 刊期： 2007年第02期
目的 探讨儿童非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin lymphoma, NHL)病理组织中细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(extracellular matrix metalloproteinase inducer,EMMPRIN)和基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9, MMP-9)的表达,以及两者表达间的相关性.方法 免疫组织化学SP染色方法检测47例NHL病理切片中的EMMPRIN和MMP-9的表达,采用Spearman等级相关分析方法分析EMMPRIN表达与MMP-9的相关性,同时分析其与临床分期及预后的关系.结果 ①EMMPRIN在儿童NHL的表达阳性率为81%(38/47),其中T细胞型NHL的强阳性率为76%(19/25),B细胞型NHL的强阳性率为36%(8/22),两者强阳性表达率差异有极显著性意义(P＜0.01).② MMP-9在儿童NHL中的表达阳性率为79%(37/47),其中T细胞型NHL的强阳性率为72%(18/25),B细胞型NHL的强阳性率为23%(5/22),两者强阳性表达率差异有极显著性意义(P＜0.01).③ EMMPRIN的表达与MMP-9有显著正相关性(rs=0.913,P＜0.05).④Ⅲ期+Ⅳ期组以及存活时间＜5年组EMMPRIN、MMP-9的强阳性表达率均分别高于Ⅰ期+Ⅱ期组和存活时间≥5年组.结论 儿童NHL细胞高表达EMMPRIN和MMP-9,且T细胞型NHL的表达明显高于B细胞型,两者表达强度与临床分期及预后有关,可能作为NHL预后判断指标之一.
作者：刘爱国；胡群；陶红芳；张柳清；周晟；胡迎 刊期： 2007年第02期
华中科技大学学报（医学版）杂志
主管:中华人民共和国教育部
主办：华中科技大学
