陈智毅；谢明星；柳建华；梁伟翔；梁琨
目的 采用转化生长因子-β1(TGF-β1)转基因小鼠,研究高水平的TGF-β1对巩膜厚度以及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)水平的影响,以探讨TGF-β在巩膜重塑中的作用及可能的机制.方法 应用Alb/TGF-β1(Cys223,225Ser)转基因小鼠模型作为实验对象,同窝出生的C57BL/6J野生型小鼠作为对照组.ELISA法测定血浆TGF-β1浓度.Western blot法测定巩膜组织TGF-β1、MMP-2及TIMP-2浓度,应用Whatman Biometria凝胶分析软件分析Western blot结果.对全眼球经视神经乳头正中石蜡切片进行数码图像分析测定后极部巩膜厚度.结果 TGF-β1转基因小鼠血浆TGF-β1浓度约为野生型对照小鼠的1.68倍(P＜0.01),转基因小鼠巩膜组织中TGF-β1的表达水平是野生型小鼠的2.68倍(P＜0.01),MMP-2的表达水平和野生型小鼠差异无显著性意义,TIMP-2的水平是野生型小鼠的3.15倍(P＜0.01),转基因小鼠后极部巩膜厚度较野生型小鼠显著增厚(P＜0.01).结论 TGF-β1浓度增高会导致巩膜增厚.TGF-β1通过升高TIMP-2的水平抑制MMP-2的活性,从而抑制胶原的降解导致巩膜增厚.
作者：刘海霞；杨坤禹；项楠；张虹 刊期： 2007年第05期
目的 探讨转化生长因子β1(TGF-β1)信号转导通路下游信号分子Smad2、Smad3在TGF-β1促进大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)成骨分化中的作用.方法 采用RT-PCR、Western blot检测TGF-β1促MSCs成骨分化过程中Smad2、Smad3 mRNA和蛋白表达的变化;脂质体介导稳定转染Smad3△C,间接免疫荧光试验鉴定;采用RT-PCR检测转染细胞中碱性磷酸酶(ALP)和核心结合因子(cbfa1)mRNA的表达,用对硝基苯磷酸盐(PNP)法检测细胞ALP活性,用茜素红染色法检测细胞矿化能力,观察Smad3△C对MSCs成骨分化的影响.结果 在TGF-β1刺激后24 h,MSCs中Smad3的mRNA和蛋白表达量明显减少(P＜0.01),而整个刺激过程中,Smad2的mRNA和蛋白表达量无明显变化(P＞0.05);稳定转染细胞中c-Myc抗原阳性表达;受TGF-β1刺激后,MSCs和V-MSCs(空载体转染组)中ALP、cbfa1 mRNA的表达水平、矿化能力明显高于Smad3△C-MSCs;随TGF-β1刺激时间延长,Smad3△C-MSCs中ALP活性增加缓慢,仅于48 h有明显增加(P＜0.05),但与同时段MSCs和V-MSCs中ALP活性相比,差异有极显著性意义(P＜0.01).结论 TGF-β1促进MSCs成骨分化这一生物学效应的输出受Smad3特异性和选择性的调节.
作者：王运涛；郑启新；吴小涛；郭晓东；茅祖斌；陈辉；赵梓汝 刊期： 2007年第05期
目的 研究血吸虫肝纤维化小鼠肝组织中交感神经递质去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)及其受体(adrenal receptor,AR)的表达.方法 应用腹部敷贴尾蚴法使小鼠感染血吸虫.30只昆明种小鼠随机分成正常对照组(N组)和肝纤维化模型组(M组).采用光镜及电镜观察肝组织病理学改变,高效液相色谱-电化学(HPLC-ECD)法检测肝组织中NE的含量,同时应用Western blot方法检测肝脏组织中AR的表达水平.结果 血吸虫肝纤维化小鼠的肝组织中NE的含量明显低于正常小鼠,而AR的含量明显高于正常组,其差异具有统计学意义(P＜0.01).结论 小鼠血吸虫肝纤维化时肝组织中去甲肾上腺素表达减少,这可能是肝纤维化时交感神经促进肝纤维化发展的作用机制之一.
作者：刘红艳；段瑞娴；郭燕；高潇；唐望先 刊期： 2007年第05期
Marshll-White综合征临床少见,近几年来报道逐渐增多,自1994年以来国内已有20例报道[1-4].为分析该综合征的临床特点,我们对协和医院皮肤科门诊1999年10月至2006年6月所诊治的10例该综合征患者进行分析,现报道如下.
作者：樊超；朱里；刘文韬；黄长征；涂亚庭 刊期： 2007年第05期
目的 研究抗Fas锤头状核酶对T细胞Fas表达及其凋亡的影响,探讨增强供者淋巴细胞输注时移植物抗白血病(graft versus leukemia,GVL)效应的新策略.方法 构建可有效切割Fas mRNA的锤头状核酶真核质粒,电穿孔法将其导入小鼠细胞毒T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)细胞株CTLL-2中,借助RT-PCR和Western blot检测细胞Fas的表达,同时检测转染前后细胞Caspase-3活性的改变和细胞凋亡(Annexin Ⅴ-FITC法).MTT法检测空白对照组、转染空载体组及转染pU6-RZ596组CTLL-2细胞的增殖情况和体外杀伤粒-单核白血病细胞(WEHI-3)的活性.结果 构建的U6嵌合型锤头状核酶RZ596在细胞内能有效切割Fas,RT-PCR电泳检测其与β-actin条带的灰度比值:CTLL-2细胞空白对照组为(1.06±0.12),转染空载体组为(0.98±0.15),转染pU6-RZ596组为(0.43±0.11)(n=3);Fas蛋白的Western blot检测显示:以空白对照组灰度值为1,转染空载体组和转染pU6-RZ596组电泳条带的灰度比值分别为(0.98±0.13)和(0.45±0.08)(n=3),提示抗Fas锤头状核酶可明显降低小鼠活化CTLL-2的Fas水平.与高表达Fas配体(FasL)的WEHI-3细胞共孵育,CTLL-2细胞的存活率和体外杀伤活性明显增加,空白对照组、转染空载体组和转染pU6-RZ596组的细胞凋亡率分别为88%、84%和37%,对WEHI-3细胞杀伤活性分别为32%、31%和67%.结论 抗Fas锤头状核酶能显著降低小鼠活化CTLL-2细胞的Fas表达,使其免于Fas途径的凋亡.
作者：黎纬明；刘凌波；邹萍；何伟；张敏 刊期： 2007年第05期
目的 通过在缺血/再灌注心肌中应用阿片受体激动剂吗啡和阻滞剂纳络酮,研究缺血后处理的保护机制和吗啡药物后处理的保护作用.方法 SD大鼠60只随机分为6组行Langendorff心脏灌流:①停灌/再灌组(I/R);②纳络酮组(NAL);③缺血后处理组(Post-con);④纳络酮加后处理组(NAL+Post-con);⑤吗啡组(MOR);⑥吗啡加纳络酮组(MOR+NAL).观测左室内压变化速率(±dp/dtmax),心肌梗死面积,冠脉流出液中肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶含量(LDH),心肌超微结构改变.结果 心脏复灌初期采取缺血后处理或灌注吗啡可以改善心功能,减小梗死面积.纳络酮对停灌/再灌心肌没有影响,但可削弱缺血后处理的心肌保护效果并完全取消吗啡的心肌保护作用.结论 阿片受体的激活是缺血后处理心肌保护作用的机制之一.再灌之初给予吗啡能起到缺血后处理样的心肌保护作用.
作者：毛张凡；杜心灵；孙宗全；夏家红 刊期： 2007年第05期
目的 探讨牛磺酸在体外冲击波碎石术(ESWL)致肾损伤中的保护作用及机制.方法 40只家兔随机分为:生理盐水对照组、牛磺酸组.分别测定ESWL前后外周血中损伤相关因子内皮素(ET-1)、丙二醛(MDA)及保护相关因子一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量.并观察肾脏组织形态及细胞超微结构变化.结果 两组在ESWL后外周血ET-1、MDA含量均升高,NO和SOD的含量则均降低,同期牛磺酸组ET-1、MDA升高幅度明显低于对照组,同期牛磺酸组SOD、NO降低幅度也明显低于对照组.结论 牛磺酸可能通过减少肾组织氧自由基的产生,调节ET-1、NO水平之间平衡的机制,保护肾脏,缓解ESWL引起的肾脏损伤
作者：朱伟；曾甫清；刘聪；何延瑜 刊期： 2007年第05期
目的 研究皮质类固醇激素(布地奈德混悬液)对体外培养的变应性鼻炎鼻黏膜组织黏蛋白MUC5AC和MUC5B基因和蛋白表达的影响.方法 采用体外鼻黏膜组织培养方法,分空白对照组、组胺刺激组和组胺刺激加布地奈德干预组进行研究,培养后组织分别用RT-PCR和免疫组织化学2种方法检测黏蛋白MUC5AC和MUC5B基因和蛋白表达.结果 与其他两组相比,组胺刺激组黏蛋白MUC5AC和MUC5B基因及蛋白的表达均显著增强(均P＜0.05),而布地奈德干预组中黏蛋白MUC5AC和MUC5B基因及蛋白的表达与对照组相比差异无显著性意义(均P＞0.05).结论 皮质类固醇激素--布地奈德混悬液能下调黏蛋白MUC5AC和MUC5B基因和蛋白的表达,从而减少变应性鼻炎鼻黏膜黏液的过度分泌.
作者：龙小博；甄宏韬；彭璐；金肆；崔永华；高起学 刊期： 2007年第05期
目的 确定巨细胞病毒(CMV)体外能否直接攻击肝细胞,并建立肝细胞感染模型.方法 ①人肝细胞系感染:用人CMV(HCMV)AD169毒株感染正常人肝细胞系(L-02)和人胚肺成纤维细胞(HELF)与L-02共培养细胞,HC-MV感染的HELF细胞为阳性对照;②原代鼠肝细胞(PML)感染:用重组鼠CMV(MCMV)感染PML细胞.光镜观察细胞病变(CPE),电镜观察病毒颗粒,间接免疫荧光(IFA)法检测HCMV抗原;原位杂交法检测MCMV IE基因.PML性质经观察其特征性超微结构和检测培养上清白蛋白水平予以鉴定.结果 在PML细胞纯度＞95%(培养第8天)时感染病毒,3 d后＞80%细胞出现典型CPE;电镜下胞核和胞质内见大量病毒颗粒;病毒IE基因检测呈阳性.HELF细胞可被HCMV感染;而L-02细胞无论是单独,还是与HELF共培养,其病毒标志物均呈阴性,细胞结构保持正常.结论 原代鼠肝细胞体外可受到MCMV直接感染,为CMV肝炎的体外研究提供成功的肝细胞感染模型;而正常人肝细胞系不能感染HCMV,推测其表面HCMV受体发生改变或丢失.
作者：聂兴草；方峰；李红；董永绥；甄宏；李革 刊期： 2007年第05期
目的 研究武汉同济医院2004～2005年检出的表皮葡萄球菌的耐药情况,分析耐药趋势.方法 对检出菌株复苏、培养,进行常用抗生素的药物敏感性试验,分析药敏结果.结果 共检出表皮葡萄球菌61株,全部复苏、培养成功.苯唑西林耐药41株(占67.21%),苯唑西林敏感20株(占32.79%).苯唑西林耐药的表皮葡萄球菌(MRSE)组的多重耐药率及总耐药率均显著高于苯唑西林敏感的表皮葡萄球菌(MSSE)组.在体外药敏试验中,对头孢唑啉、头孢呋新、庆大霉素及氨苄-舒巴坦保持较低的耐药率(＜30%),而对SMZ-TMP、青霉素、红霉素、克林霉素及左氧沙星耐药率较高(＞50%),没有发现对万古霉素耐药的菌株.结论 表皮葡萄球菌耐药情况严重,MRSE的多重耐药率、总耐药率较高.
作者：邢铭友；田德英；刘莉娜；朱旭慧；孙自镛；黄加权；齐俊英 刊期： 2007年第05期
目的 探讨凋亡抑制基因Bcl-2和Bcl-XL在人卵巢癌细胞敏感株(A2780)及耐药株(AD6)中的表达及其在卵巢癌多药耐药发生中的分子机制.方法 采用DNA电泳、流式细胞技术及半定量逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术,检测不同浓度(3.0、6.0、9.9μg/ml)顺铂诱导的人卵巢癌细胞敏感株A2780及耐药株AD6的细胞凋亡及其Bcl-2和Bcl-XL基因的表达水平.结果 ①DNA凝胶电泳显示,不同浓度的顺铂均能诱导A2780和AD6细胞产生凋亡,呈现典型的凋亡梯度(DNA Ladder).②流式细胞仪分析结果显示,不同顺铂浓度作用下A2780和AD6细胞凋亡率不同,AD6明显低于A2780(P＜0.05).③RT-PCR结果显示,A2780和AD6细胞均表达Bcl-2、Bcl-XL,但在AD6细胞株中2基因的表达明显强于A2780.在6.0μg/ml顺铂作用下A2780和AD6细胞株中2基因表达下调,但仍以在AD6的表达强于A2780.结论 顺铂可诱导卵巢癌细胞凋亡,凋亡抑制基因Bcl-2和Bcl-XL在人卵巢癌多药耐药细胞株中高表达,是导致其细胞凋亡受抑制和对药物敏感性降低的重要原因.
作者：于利利；王泽华 刊期： 2007年第05期
目的 建立大鼠卵巢过度刺激综合征(OHSS)模型,研究囊性纤维化跨膜转导调节器(CFTR)在OHSS大鼠卵巢中表达的变化及意义.方法 未成年Wistar雌鼠,随机分为过度刺激组和常规刺激组,建立OHSS模型;比较两组间卵巢重量,血雌二醇水平;并分别通过免疫组织化学和免疫印迹法比较两组间卵巢组织中CFTR蛋白表达量的变化.结果 过度刺激组大鼠卵巢重量、血雌二醇水平显著高于常规刺激组;免疫组化方法检测到CFTR呈棕黄色颗粒表达于大鼠卵巢黄体细胞以及未排卵泡的黄素化颗粒细胞和卵泡膜细胞胞质,免疫组化和免疫印迹定量分析均显示过度刺激组卵巢CFTR蛋白表达量显著高于常规刺激组.结论 注射过量促性腺激素致大鼠血雌二醇水平异常升高,使卵巢内CFTR表达量显著增加,卵巢形成多发性滤泡囊肿和黄体囊肿,间质水肿,体积和重量增加,参与诱发OHSS.
作者：靳镭；汤瑞玲 刊期： 2007年第05期
目的 总结86例主动脉窦瘤破裂合并主动脉瓣关闭不全的外科治疗经验.方法 86例主动脉窦瘤破裂合并主动脉瓣关闭不全患者,合并室间隔缺损64例,感染性心内膜炎8例,右室流出道狭窄或右室双腔心10例.瘤破口和室缺均采用Dcron补片修补,主动脉瓣整形15例,主动脉瓣置换28例.余合并症均同期予以处理.结果 围手术期死亡1例,远期死亡4例.再次手术3例,其中急诊二次手术1例.主动脉窦瘤破裂修补术后残余分流2例,室缺修补术后残余分流2例.其余病例心功能明显改善,主动脉瓣关闭不全减轻,临床效果良好.结论 主动脉窦瘤破裂合并主动脉瓣关闭不全是少见的心脏疾病,手术是唯一有效的治疗方法.采用主动脉及心腔双切口利于心肌保护和确切修补主动脉窦瘤,纠正合并畸形.
作者：吴龙；孙宗全；张凯伦；蒋雄刚；周诚 刊期： 2007年第05期
目的 构建缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1alpha,HIF-1α)基因的表达质粒,转染肺癌细胞系A549后,观察其对化疗药物5-氟尿嘧啶(5-Fu)敏感性的变化.方法 采用RT-PCR方法扩增A549细胞内HIF-1α基因功能区片段,克隆至真核表达载体pcDNA3上,经脂质体Lipofectamine TM2000转染A549细胞后,G418筛选.Western blot检测转染前后多药耐药蛋白(MDR1)的表达变化.加入化疗药物5-Fu(0.1 mg/ml),用生长曲线观察A549细胞的生长情况,用流式细胞仪检测细胞凋亡指数,用Western blot检测Caspase3的活性变化.结果 转染HIF-1α后,MDR1表达上调.转染HIF-1α组的细胞增殖抑制、凋亡指数、Caspase3的活性均低于单独加5-Fu组.结论 HIF-1α能够增加肺癌细胞A549凋亡的阈值,从而增加细胞对化疗药物的耐受性.
作者：张惠兰；郦俊；张珍祥；徐永健 刊期： 2007年第05期
目的 探讨白细胞介素-10(IL-10)基因启动子区-1082位点多态性与冠状动脉疾病(CAD)相关性及其对血清IL-10水平的影响.方法 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析法(PCR-RFLP)检测50例CAD患者、60例健康对照者基因组DNA IL-10基因启动子区域-1082位点的基因多态性,并进行相关性分析.用双抗体夹心ELISA法测定血清IL-10水平.结果 CAD组血清IL-10水平显著低于健康对照组(P＜0.05).CAD组和健康对照组IL-10-1082A/G基因型和等位基因频率比较,差异有显著性意义.等位基因频率的相对风险分析显示,A等位基因携带者患CAD的相对风险是G等位基因的2.827倍.携带A等位基因的CAD患者血清IL-10水平显著低于非携带者.结论 IL-10基因启动子-1082位点多态性影响血清IL-10水平并可能与CAD的临床发展过程相关,其中A等位基因可能是CAD发病的遗传易感基因.
作者：陈剑；孙宗全；夏家红；徐磊 刊期： 2007年第05期
目的 探讨人工合成大麻素WIN55,212-2对大鼠三叉神经节神经元γ-氨基丁酸(GABA)激活电流(IGABA)的调制作用.方法 采用全细胞膜片钳技术.结果 ①实验中大部分受检细胞(91.84%,99/108)对胞外给予GABA(10～1 000 μmol/L)敏感,可记录到具有浓度依赖性的内向电流,该电流可被GABAA受体特异性拮抗剂荷包牡丹碱(Bicuculline)阻断.②预加WIN55,212-2(0.03～10μmol/L)对IGABA产生抑制作用,该抑制作用呈可逆性、浓度依赖性和非电压依赖性.WIN55,212-2使IGABA的量效曲线明显下移,而两者的阈值基本不变;大反应浓度时IGABA幅值减少了(48.83±4.78)%;两条曲线的半数有效浓度(EC50)值比较接近(36.85 μmol/L vs 25.76μmol/L).③WIN55,212-2对IGABA的抑制作用可被大麻素CB1受体选择性拮抗剂AM281阻断,不能被大麻素CB2受体选择性拮抗剂AM630阻断.细胞外灌流蛋白激酶C(PKC)的抑制剂BIM可部分逆转WIN55,212-2对IGABA的抑制作用.结论 大麻素WIN55,212-2作用于CB1受体,部分通过激活PKC途径来减少GABAA受体介导的电流,加强突触前抑制作用,这可能是大麻素的外周镇痛机制之一.
作者：周莹；刘长金；李爱；胡新武；陈蕾；刘烈炬 刊期： 2007年第05期
目的 研究抗心律失常肽(AAP10)对乳鼠心肌细胞急性缺氧时细胞间传导的影响.方法 原代培养的乳鼠心肌细胞,随机分为正常组、缺氧2 h组和100 nmol/L AAP10干预组,每组n=9.采用划痕标记染料示踪技术测定细胞间通讯,Western blot技术检测缝隙连接蛋白43(Connexin 43,Cx43)磷酸化水平的改变.结果 划痕标记染料示踪技术结果显示:缺氧组细胞间传导下降,而AAP10干预后能促进荧光黄的扩散.Western blot结果显示:缺氧组总Cx43蛋白表达下降,与正常组比较P＜0.01,而去磷酸化的Cx43(NP-Cx43)蛋白表达不变;AAP10干预组能提高总Cx43蛋白表达,与缺氧组比较P＜0.01,但对NP-Cx43蛋白表达无影响.结论 急性缺氧时磷酸化的Cx43(p-Cx43)蛋白表达下降,而AAP10改善传导主要通过促进Cx43磷酸化.
作者：王荣；张存泰；刘念；阮燕菲；王琳 刊期： 2007年第05期
目的 探讨体外受精-胚胎移植技术(IVF-ET)中单卵双胎妊娠的发生率及可能的机制.方法 回顾性分析2003年10月至2005年5月间实施体外受精-胚胎移植术并获得临床妊娠的617个周期,其中常规IVF-ET术周期442例,卵泡浆内单精子注射术(ICSI)周期175例;562个周期为新鲜胚胎移植周期,其余55个周期为冷冻-复苏周期.统计单卵双胎妊娠的发生率,分析可能影响其发生的相关因素.结果 617个临床妊娠周期中共发生单卵双胎妊娠16例,发生率为2.59%;其中单卵双绒毛膜双胎6例(37.5%),单绒毛膜双胎10例(62.5%);单卵双胎妊娠与非单卵双胎妊娠病例之间的年龄,促排卵方案、剂量与时间,移植胚胎数量与质量间差异均无显著性意义(P＞0.05);ICSI周期中单卵双胎的发生率(2.86%)高于常规IVF-ET周期(2.49%),但差异无显著性意义(P＞0.05);冷冻复苏周期中单卵双胎的发生率(7.27%)明显高于新鲜胚胎移植周期(2.14%)(P＜0.05).结论 IVF-ET术中单卵双胎的发生率高于自然妊娠,这可能与体外培养条件和冷冻复苏技术的应用有关,而单纯ICSI术不会明显提高单卵双胎的发生率.
作者：李舟；朱桂金；刘玉芹；章汉旺 刊期： 2007年第05期
目的 探讨子宫内膜异位症(EMT)和子宫腺肌病(AMS)患者异位及在位子宫内膜组织中血管内皮生长因子(VEGF)的表达及其在血管生成调控机制中的作用.方法 采用免疫组织化学SABC方法检测16例异位内膜组织、10例腺肌瘤组织、20例在位内膜组织中VEGF的表达,并和20例正常子宫内膜组织作对照.结果 VEGF在异位内膜组织(EMT,E)中阳性表达率为93.75%(15/16),强阳性表达8例;在腺肌瘤组织(AMS,A)中阳性表达率为80.00%(8/10),强阳性表达4例;于在位内膜组织(eutopic,e)中阳性表达率为55.00%(11/20),强阳性表达3例;对照组子宫内膜组织(control,C)中阳性表达率为20.00%(4/20),无强阳性表达.E+A与e阳性表达比较差异有极显著性意义(P＜0.01);E+A与C阳性表达比较差异有极显著性意义(P＜0.01);e与C阳性表达比较差异有显著性意义(P＜0.05).E+A与e强阳性表达比较差异有显著性意义(P＜0.05);E+A与C强阳性表达比较差异有极显著性意义(P＜0.01).结论 EMT、AMS异位及在位内膜组织高表达VEGF可能与EMT和AMS发生密切相关.
作者：周志强；章汉旺；俞维 刊期： 2007年第05期
目的 构建一种含人肽基脯氨酰顺反异构酶Pin1的质粒,以绿色荧光蛋白作为报告基因,观察其在宫颈癌HeLa细胞中的表达.方法 从人宫颈癌HeLa细胞中,以RT-PCR方法扩增出人Pin1基因全长cDNA序列(CDS),插入增强绿色荧光蛋白表达质粒pEGFP-C1,脂质体法转染HeLa细胞,荧光显微镜下观测绿色荧光蛋白的表达,免疫印迹法检测GFP-Pin1蛋白的表达.结果 RT-PCR扩增出人Pin1基因;构建pEGFP-C1-Pin1重组质粒,体外成功转染入宫颈癌HeLa细胞,在荧光显微镜下可见强绿色荧光蛋白的表达,免疫印迹法证实存在GFP-Pin1蛋白高表达;经G418筛选获得单细胞克隆.结论 重组质粒pEGFP-Pin1体外转染HeLa细胞后,目的基因能够在细胞内有效表达,检测方法简便可靠,为利用转染该目的基因的细胞进行下一步研究提供了实验基础.
作者：李红雨；朱涛；周金华；徐茜；胡春霞；邓东锐；王世宣；卢运萍；马丁 刊期： 2007年第05期
华中科技大学学报（医学版）杂志
主管:中华人民共和国教育部
主办：华中科技大学
