王运涛；郑启新；吴小涛；郭晓东；茅祖斌；陈辉；赵梓汝
目的 探讨凋亡抑制基因Bcl-2和Bcl-XL在人卵巢癌细胞敏感株(A2780)及耐药株(AD6)中的表达及其在卵巢癌多药耐药发生中的分子机制.方法 采用DNA电泳、流式细胞技术及半定量逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术,检测不同浓度(3.0、6.0、9.9μg/ml)顺铂诱导的人卵巢癌细胞敏感株A2780及耐药株AD6的细胞凋亡及其Bcl-2和Bcl-XL基因的表达水平.结果 ①DNA凝胶电泳显示,不同浓度的顺铂均能诱导A2780和AD6细胞产生凋亡,呈现典型的凋亡梯度(DNA Ladder).②流式细胞仪分析结果显示,不同顺铂浓度作用下A2780和AD6细胞凋亡率不同,AD6明显低于A2780(P＜0.05).③RT-PCR结果显示,A2780和AD6细胞均表达Bcl-2、Bcl-XL,但在AD6细胞株中2基因的表达明显强于A2780.在6.0μg/ml顺铂作用下A2780和AD6细胞株中2基因表达下调,但仍以在AD6的表达强于A2780.结论 顺铂可诱导卵巢癌细胞凋亡,凋亡抑制基因Bcl-2和Bcl-XL在人卵巢癌多药耐药细胞株中高表达,是导致其细胞凋亡受抑制和对药物敏感性降低的重要原因.
作者：于利利；王泽华 刊期： 2007年第05期
目的 观察丙酮酸乙酯(EP)对急性出血坏死性胰腺炎(AHNP)大鼠全身毛细血管渗漏(SCL)的影响,探讨下调血清高迁移率族蛋白1(HMGB1)水平在AHNP治疗中的作用.方法 采用胰管逆行灌注人工胆汁的方法复制大鼠AHNP模型.随机分为正常对照组(Normal组,n=8)、假手术组(Sham组,n=8)、AHNP组(n=16)、EP组(n=16).EP组建模12 h开始使用EP治疗.建模24 h取材,检测与水分渗漏相关的肺系数、肺湿/干比、腹水量.使用伊文氏蓝(EBD)尾静脉注射,检测与蛋白渗漏相关的腹水、肺、胰腺、空肠、回肠、耳廓组织EBD含量;Western blot法检测血清中HMGB1的含量.结果 建模后24 h,EP组血清HMGB1浓度明显低于AHNP组[(87±16)ng/ml vs.(154±22)ng/ml,P＜0.05].EP组大鼠腹水量、肺系数、肺湿/干比明显低于AHNP组,均P＜0.05.EP组大鼠胰腺、空肠、回肠和耳廓组织EBD含量明显低于AHNP组.结论 下调血清HMGB1水平可有效减轻AHNP大鼠SCL的程度.
作者：杨智勇；陶京；周峰；熊炯炘；吴河水；王春友 刊期： 2007年第05期
目的 应用磁共振扩散成像(DWI)和波谱(MRS)技术界定超急性脑梗死缺血半暗带,力求提出量化评定标准.方法 13例发病时间在2～6 h以内的超急性脑梗死患者行MRI检查,包括DWI及MRS技术,并在2～28 d内复查T2 WI确定终梗死范围.对梗死中心区、缺血半暗带及对侧镜像区,测量其扩散变化及代谢改变.结果 ①梗死中心区与缺血半暗带表观扩散系数(ADC)平均值分别为7.01×10-4 mm2/s及9.36×10-4 mm2/s,相对ADC(rADC)平均值分别为0.63及0.87,梗死中心区ADC及rADC均明显降低,缺血半暗带ADC及rADC轻度下降,二者之间差异有显著性意义(P＜0.05).②超急性脑梗死的典型MRS改变为乳酸(Lac)浓度升高和氮-乙酰天门冬氨酸盐(NAA)水平降低.以肌酸和磷酸肌酸(Cr)为内标准的NAA/Cr比值、Lac/Cr比值及相对NAA(rNAA)在梗死中心区与缺血半暗带之间差异均无显著性意义(P＞0.05).③缺血半暗带区ADC值轻度降低(＜22%)、Lac升高且NAA正常或轻度下降(＜14%);而ADC值明显降低(25%～53%)、Lac升高且NAA明显下降(16%～34%)的区域为不可逆损伤区的可能性大.④1例疑腔隙性脑梗死发病2 h DWI见右丘脑小团异常高信号灶,ADC下降幅度为16%,11d后复查T2 WI见原右丘脑高信号完全消失,提示为缺血半暗带,而非梗死.结论 DWI和MRS的联合应用可发现超急性脑梗死,并预测缺血半暗带.
作者：朱文珍；漆剑频；王伟 刊期： 2007年第05期
目的 观察核转录因子-κB(NF-κB)圈套寡核苷酸对NF-κB活性的影响,研究Survivin在其诱导肝癌细胞HepG2凋亡中的作用.方法 将异硫氰酸荧光素(FITC)标记的NF-κB圈套寡核苷酸转染至HepG2细胞中,荧光倒置显微镜和共聚焦显微镜进行核内定位观察,凝胶迁移率实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)检测转染前后NF-κB活性变化;流式细胞仪和TUNEL检测细胞凋亡率;Western blot检测凋亡抑制蛋白Survivin的改变.结果 NF-κB圈套寡核苷酸转染后定位于细胞核内,EMSA显示转染后NF-κB活性明显下降.与未处理组、转染错义组相比,转染NF-κB圈套寡核苷酸组的HepG2细胞凋亡率增加,Survivin蛋白表达下调[(39.8±1.9)、(42.7±2.5)vs(20.1±3.1)].结论 NF-κB圈套寡核苷酸具有促进肝癌细胞HepG2凋亡的作用,其机制可能与下调Survivin的表达有关.
作者：张万广；杨盛力；李哲夫；张峰；徐宗全；王其；张志伟 刊期： 2007年第05期
目的 制备抗乙型肝炎表面抗原(HBsAg)单克隆抗体,建立检测变异HBsAg的方法.方法 用血源HBsAg免疫BALB/c小鼠,制备可以识别变异HBsAg的抗-HBs单抗.筛选出可以较好识别变异HBsAg的单抗mAb1,优化该抗体ELISA检测HBsAg的方法,与2种HBsAg检测试剂比较检测变异HBsAg的能力.对6份临床样品进行检测及序列分析,以证实方法的可靠性.结果 经过筛选,得到1种可以较好识别包括G145R在内的大多数变异HBsAg的单抗.检测变异HBsAg的能力优于市售HBsAg诊断试剂.结论 制备的单抗可以用于ELISA检测变异HBsAg,减少HBsAg变异株的漏检率.
作者：刘慎沛；田拥军；杨燕；杨东亮 刊期： 2007年第05期
目的 初步分析高氧暴露下早产大鼠肺组织线粒体蛋白质表达谱的改变,并对还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)脱氢酶亚单位4(ND4)的动态表达进行研究.方法 建立高氧暴露早产大鼠动物模型,采用双向电泳检测线粒体蛋白质差异性表达,运用RT-PCR和Western blot方法分别检测ND4 mRNA及其蛋白表达.结果 与空气组比较,高氧暴露4 d导致46种肺组织线粒体蛋白质出现差异性表达;高氧暴露1、4和7 d,早产大鼠肺组织ND4 mRNA和蛋白表达均较空气对照组显著降低(均P＜0.01),10 d时,差异则无显著性意义(P＞0.05).结论 高氧暴露导致肺细胞线粒体(包括呼吸链)功能状态改变可能是促使肺损伤发生发展的重要因素.
作者：李文斌；常立文；容志惠；卢红艳；汪鸿；刘伟；蔡成 刊期： 2007年第05期
Marshll-White综合征临床少见,近几年来报道逐渐增多,自1994年以来国内已有20例报道[1-4].为分析该综合征的临床特点,我们对协和医院皮肤科门诊1999年10月至2006年6月所诊治的10例该综合征患者进行分析,现报道如下.
作者：樊超；朱里；刘文韬；黄长征；涂亚庭 刊期： 2007年第05期
目的 通过在缺血/再灌注心肌中应用阿片受体激动剂吗啡和阻滞剂纳络酮,研究缺血后处理的保护机制和吗啡药物后处理的保护作用.方法 SD大鼠60只随机分为6组行Langendorff心脏灌流:①停灌/再灌组(I/R);②纳络酮组(NAL);③缺血后处理组(Post-con);④纳络酮加后处理组(NAL+Post-con);⑤吗啡组(MOR);⑥吗啡加纳络酮组(MOR+NAL).观测左室内压变化速率(±dp/dtmax),心肌梗死面积,冠脉流出液中肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶含量(LDH),心肌超微结构改变.结果 心脏复灌初期采取缺血后处理或灌注吗啡可以改善心功能,减小梗死面积.纳络酮对停灌/再灌心肌没有影响,但可削弱缺血后处理的心肌保护效果并完全取消吗啡的心肌保护作用.结论 阿片受体的激活是缺血后处理心肌保护作用的机制之一.再灌之初给予吗啡能起到缺血后处理样的心肌保护作用.
作者：毛张凡；杜心灵；孙宗全；夏家红 刊期： 2007年第05期
目的 研究血吸虫肝纤维化小鼠肝组织中交感神经递质去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)及其受体(adrenal receptor,AR)的表达.方法 应用腹部敷贴尾蚴法使小鼠感染血吸虫.30只昆明种小鼠随机分成正常对照组(N组)和肝纤维化模型组(M组).采用光镜及电镜观察肝组织病理学改变,高效液相色谱-电化学(HPLC-ECD)法检测肝组织中NE的含量,同时应用Western blot方法检测肝脏组织中AR的表达水平.结果 血吸虫肝纤维化小鼠的肝组织中NE的含量明显低于正常小鼠,而AR的含量明显高于正常组,其差异具有统计学意义(P＜0.01).结论 小鼠血吸虫肝纤维化时肝组织中去甲肾上腺素表达减少,这可能是肝纤维化时交感神经促进肝纤维化发展的作用机制之一.
作者：刘红艳；段瑞娴；郭燕；高潇；唐望先 刊期： 2007年第05期
目的 探讨人工合成大麻素WIN55,212-2对大鼠三叉神经节神经元γ-氨基丁酸(GABA)激活电流(IGABA)的调制作用.方法 采用全细胞膜片钳技术.结果 ①实验中大部分受检细胞(91.84%,99/108)对胞外给予GABA(10～1 000 μmol/L)敏感,可记录到具有浓度依赖性的内向电流,该电流可被GABAA受体特异性拮抗剂荷包牡丹碱(Bicuculline)阻断.②预加WIN55,212-2(0.03～10μmol/L)对IGABA产生抑制作用,该抑制作用呈可逆性、浓度依赖性和非电压依赖性.WIN55,212-2使IGABA的量效曲线明显下移,而两者的阈值基本不变;大反应浓度时IGABA幅值减少了(48.83±4.78)%;两条曲线的半数有效浓度(EC50)值比较接近(36.85 μmol/L vs 25.76μmol/L).③WIN55,212-2对IGABA的抑制作用可被大麻素CB1受体选择性拮抗剂AM281阻断,不能被大麻素CB2受体选择性拮抗剂AM630阻断.细胞外灌流蛋白激酶C(PKC)的抑制剂BIM可部分逆转WIN55,212-2对IGABA的抑制作用.结论 大麻素WIN55,212-2作用于CB1受体,部分通过激活PKC途径来减少GABAA受体介导的电流,加强突触前抑制作用,这可能是大麻素的外周镇痛机制之一.
作者：周莹；刘长金；李爱；胡新武；陈蕾；刘烈炬 刊期： 2007年第05期
目的 采用转化生长因子-β1(TGF-β1)转基因小鼠,研究高水平的TGF-β1对巩膜厚度以及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)水平的影响,以探讨TGF-β在巩膜重塑中的作用及可能的机制.方法 应用Alb/TGF-β1(Cys223,225Ser)转基因小鼠模型作为实验对象,同窝出生的C57BL/6J野生型小鼠作为对照组.ELISA法测定血浆TGF-β1浓度.Western blot法测定巩膜组织TGF-β1、MMP-2及TIMP-2浓度,应用Whatman Biometria凝胶分析软件分析Western blot结果.对全眼球经视神经乳头正中石蜡切片进行数码图像分析测定后极部巩膜厚度.结果 TGF-β1转基因小鼠血浆TGF-β1浓度约为野生型对照小鼠的1.68倍(P＜0.01),转基因小鼠巩膜组织中TGF-β1的表达水平是野生型小鼠的2.68倍(P＜0.01),MMP-2的表达水平和野生型小鼠差异无显著性意义,TIMP-2的水平是野生型小鼠的3.15倍(P＜0.01),转基因小鼠后极部巩膜厚度较野生型小鼠显著增厚(P＜0.01).结论 TGF-β1浓度增高会导致巩膜增厚.TGF-β1通过升高TIMP-2的水平抑制MMP-2的活性,从而抑制胶原的降解导致巩膜增厚.
作者：刘海霞；杨坤禹；项楠；张虹 刊期： 2007年第05期
目的 探讨选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂Celebrex对人胆囊癌GBC-SD细胞系血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 采用RT-PCR、免疫细胞化学技术以及Western blot联合检测Celebrex对GBC-SD细胞系VEGF mRNA和蛋白表达的影响,并观察量效和时效关系.结果 随着药物浓度的增加(0、40、80、120、160 μmol/L)和作用时间的延长(0、12、24、48、72 h),VEGF mRNA和蛋白表达均呈现出了相应的下降趋势.结论 Celebrex可以有效地抑制人胆囊癌GBC-SD细胞系VEGF的表达.
作者：胡均；王敏；程旋；刘文松；陈敏；秦仁义 刊期： 2007年第05期
目的 探讨Zn、Cu、TNF-α及细胞凋亡在胎膜早破发病机制中的作用及意义.方法 采集胎膜早破25例及足月妊娠正常分娩无并发症孕妇25例临产前肘静脉血,微分电位法测血清微量元素;放射免疫分析法测定血清中TNF-α浓度;分娩后取胎膜组织,石蜡包埋切片后行TUNEL法原位标记,镜下观察凋亡细胞并计算凋亡指数.结果 ①胎膜早破组血清TNF-α浓度明显高于正常对照组,差异有极显著性意义(P＜0.01).②胎膜早破组母血Zn、Cu值低于正常对照组,差异有极显著性意义(P＜0.01),Fe、Ca、Mg值两组间差异无显著性意义(P＞0.05).③胎膜早破组细胞凋亡指数(13.34±3.87)明显高于正常对照组(2.12±0.71),P＜0.01.结论 TNF-α可降解细胞外基质,促炎,促细胞凋亡,是胎膜早破的重要促发因子,微量元素Zn、Cu的含量改变与胎膜早破发病密切相关.
作者：张玲玲；张雄；李蓉 刊期： 2007年第05期
目的 总结86例主动脉窦瘤破裂合并主动脉瓣关闭不全的外科治疗经验.方法 86例主动脉窦瘤破裂合并主动脉瓣关闭不全患者,合并室间隔缺损64例,感染性心内膜炎8例,右室流出道狭窄或右室双腔心10例.瘤破口和室缺均采用Dcron补片修补,主动脉瓣整形15例,主动脉瓣置换28例.余合并症均同期予以处理.结果 围手术期死亡1例,远期死亡4例.再次手术3例,其中急诊二次手术1例.主动脉窦瘤破裂修补术后残余分流2例,室缺修补术后残余分流2例.其余病例心功能明显改善,主动脉瓣关闭不全减轻,临床效果良好.结论 主动脉窦瘤破裂合并主动脉瓣关闭不全是少见的心脏疾病,手术是唯一有效的治疗方法.采用主动脉及心腔双切口利于心肌保护和确切修补主动脉窦瘤,纠正合并畸形.
作者：吴龙；孙宗全；张凯伦；蒋雄刚；周诚 刊期： 2007年第05期
目的 探讨转化生长因子β1(TGF-β1)信号转导通路下游信号分子Smad2、Smad3在TGF-β1促进大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)成骨分化中的作用.方法 采用RT-PCR、Western blot检测TGF-β1促MSCs成骨分化过程中Smad2、Smad3 mRNA和蛋白表达的变化;脂质体介导稳定转染Smad3△C,间接免疫荧光试验鉴定;采用RT-PCR检测转染细胞中碱性磷酸酶(ALP)和核心结合因子(cbfa1)mRNA的表达,用对硝基苯磷酸盐(PNP)法检测细胞ALP活性,用茜素红染色法检测细胞矿化能力,观察Smad3△C对MSCs成骨分化的影响.结果 在TGF-β1刺激后24 h,MSCs中Smad3的mRNA和蛋白表达量明显减少(P＜0.01),而整个刺激过程中,Smad2的mRNA和蛋白表达量无明显变化(P＞0.05);稳定转染细胞中c-Myc抗原阳性表达;受TGF-β1刺激后,MSCs和V-MSCs(空载体转染组)中ALP、cbfa1 mRNA的表达水平、矿化能力明显高于Smad3△C-MSCs;随TGF-β1刺激时间延长,Smad3△C-MSCs中ALP活性增加缓慢,仅于48 h有明显增加(P＜0.05),但与同时段MSCs和V-MSCs中ALP活性相比,差异有极显著性意义(P＜0.01).结论 TGF-β1促进MSCs成骨分化这一生物学效应的输出受Smad3特异性和选择性的调节.
作者：王运涛；郑启新；吴小涛；郭晓东；茅祖斌；陈辉；赵梓汝 刊期： 2007年第05期
目的 探讨穿心莲对实验性肝硬化大鼠肠道细菌移位的作用,为其临床应用提供依据.方法 将30只肝硬化模型大鼠随机分为4组:穿心莲(AN)组[n=8,穿心莲0.5 g/(kg·d)],诺氟沙星(NF)组[(n=8,诺氟沙星0.3 g/(kg·d)],穿心莲+诺氟沙星(AN+NF)组[n=8,穿心莲0.5 g/(kg·d)+诺氟沙星0.3 g/(kg·d)],肝硬化对照(CN)组[n=6,生理盐水2 ml/(kg·d)],治疗2周后结束.比较各组大鼠死亡率,取外周静脉血检测血浆肿瘤坏死因子α(TNF-α)、一氧化氮(NO)水平;取肠系膜淋巴结、血液、肝、脾和回肠内容物做细菌培养;采用高压液相色谱法检测肠黏膜通透性;部分肝脏和回肠组织作病理切片检查.结果 与CN组相比,AN、NF和AN+NF组的TNF-α、NO浓度显著降低(均P＜0.05),回肠细菌计数和细菌移位发生率显著下降(均P＜0.05),AN和NF组的肠道通透性显著下降(均P＜0.05).病理检查发现CN组肝硬化大鼠回肠绒毛变短、破坏,炎症细胞浸润增多,而其他3组的肠绒毛结构改变不明显.结论 穿心莲能有效阻断肝硬化大鼠的肠道细菌移位.
作者：吴春明；覃慧敏；李洪涛；宋建新 刊期： 2007年第05期
目的 构建缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1alpha,HIF-1α)基因的表达质粒,转染肺癌细胞系A549后,观察其对化疗药物5-氟尿嘧啶(5-Fu)敏感性的变化.方法 采用RT-PCR方法扩增A549细胞内HIF-1α基因功能区片段,克隆至真核表达载体pcDNA3上,经脂质体Lipofectamine TM2000转染A549细胞后,G418筛选.Western blot检测转染前后多药耐药蛋白(MDR1)的表达变化.加入化疗药物5-Fu(0.1 mg/ml),用生长曲线观察A549细胞的生长情况,用流式细胞仪检测细胞凋亡指数,用Western blot检测Caspase3的活性变化.结果 转染HIF-1α后,MDR1表达上调.转染HIF-1α组的细胞增殖抑制、凋亡指数、Caspase3的活性均低于单独加5-Fu组.结论 HIF-1α能够增加肺癌细胞A549凋亡的阈值,从而增加细胞对化疗药物的耐受性.
作者：张惠兰；郦俊；张珍祥；徐永健 刊期： 2007年第05期
目的 探讨白细胞介素-10(IL-10)基因启动子区-1082位点多态性与冠状动脉疾病(CAD)相关性及其对血清IL-10水平的影响.方法 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析法(PCR-RFLP)检测50例CAD患者、60例健康对照者基因组DNA IL-10基因启动子区域-1082位点的基因多态性,并进行相关性分析.用双抗体夹心ELISA法测定血清IL-10水平.结果 CAD组血清IL-10水平显著低于健康对照组(P＜0.05).CAD组和健康对照组IL-10-1082A/G基因型和等位基因频率比较,差异有显著性意义.等位基因频率的相对风险分析显示,A等位基因携带者患CAD的相对风险是G等位基因的2.827倍.携带A等位基因的CAD患者血清IL-10水平显著低于非携带者.结论 IL-10基因启动子-1082位点多态性影响血清IL-10水平并可能与CAD的临床发展过程相关,其中A等位基因可能是CAD发病的遗传易感基因.
作者：陈剑；孙宗全；夏家红；徐磊 刊期： 2007年第05期
目的 探讨体外受精-胚胎移植技术(IVF-ET)中单卵双胎妊娠的发生率及可能的机制.方法 回顾性分析2003年10月至2005年5月间实施体外受精-胚胎移植术并获得临床妊娠的617个周期,其中常规IVF-ET术周期442例,卵泡浆内单精子注射术(ICSI)周期175例;562个周期为新鲜胚胎移植周期,其余55个周期为冷冻-复苏周期.统计单卵双胎妊娠的发生率,分析可能影响其发生的相关因素.结果 617个临床妊娠周期中共发生单卵双胎妊娠16例,发生率为2.59%;其中单卵双绒毛膜双胎6例(37.5%),单绒毛膜双胎10例(62.5%);单卵双胎妊娠与非单卵双胎妊娠病例之间的年龄,促排卵方案、剂量与时间,移植胚胎数量与质量间差异均无显著性意义(P＞0.05);ICSI周期中单卵双胎的发生率(2.86%)高于常规IVF-ET周期(2.49%),但差异无显著性意义(P＞0.05);冷冻复苏周期中单卵双胎的发生率(7.27%)明显高于新鲜胚胎移植周期(2.14%)(P＜0.05).结论 IVF-ET术中单卵双胎的发生率高于自然妊娠,这可能与体外培养条件和冷冻复苏技术的应用有关,而单纯ICSI术不会明显提高单卵双胎的发生率.
作者：李舟；朱桂金；刘玉芹；章汉旺 刊期： 2007年第05期
目的 建立准确度高、灵敏性好的反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定血浆中盐酸伐昔洛韦水解产物阿昔洛韦的浓度,以研究盐酸伐昔洛韦片在体内的药代动力学及相对生物利用度.方法 采用两制剂双周期交叉试验设计,18名男性健康志愿者先后分别单剂量口服盐酸伐昔洛韦受试片剂或参比片剂300 mg,采用RP-HPLC,以更昔洛韦为内标,测定血浆阿昔洛韦浓度.用3P97药代动力学程序处理血药浓度数据并计算参数,并作出生物等效性评价.结果 口服盐酸伐昔洛韦受试片剂和参比片剂后的药代动力学参数AUC0-t分别为(9.87±2.48)和(9.94±2.67)(μg·h)/ml,AUC0-∞分别为(10.84±2.98)和(10.83±3.18)(μg·h)/ml;Cmax分别为(3.06±0.66)和(3.16±0.66)(μg·h)/ml;Tmax分别为(1.25±0.26)和(1.17±0.24)h.受试盐酸伐昔洛韦片剂以AUC0-t和AUC0-∞计算其相对生物利用度分别为(100.6±11.7)%和(101.7±13.3)%.结论 建立的阿昔洛韦血药浓度监测方法灵敏、准确,测定结果可靠;统计分析结果表明受试制剂与参比制剂具有生物等效性.
作者：金悠；李玉倩；朱征；周俊；龙利红；陈建国 刊期： 2007年第05期
华中科技大学学报（医学版）杂志
主管:中华人民共和国教育部
主办：华中科技大学
