熊安秀；金润铭；白燕；林雯；吴晓燕；费洪宝
目的应用噬菌体环肽库筛选肿瘤坏死因子α(TNF-α)的模拟肽,为研制模拟TNF-α的新型多肽药物奠定基础.方法用亲和纯化的可溶性TNF受体1 (sTNFR 1)作为筛选配基,对噬菌体随机环肽库进行亲和筛选,利用胞毒效应进行生物学筛选,并进一步对某些阳性克隆进行序列测定和分析.结果经3轮筛选,每轮的投入/产出比逐轮提高,说明筛选具有良好的富集效果.并得到模拟跨膜型TNF-α (TM-TNF-α)、可溶型TNF-α(S-TNF-α)的模拟肽和拮抗TNF作用的sTNFR 1 封闭肽.获得了TM-TNF-α的模拟肽的氨基酸序列的基序.结论获得的模拟TM-TNF-α生物学效应的sTNFR 1结合肽,可望发展成为一种新的TNF-α肽类新药.
作者：熊霞辉；石文芳；张磊；李清芬；姜小丹；龚非力；李卓娅 刊期： 2005年第02期
目的初步探讨人乳头瘤病毒(human papillomavirus, HPV)感染与非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)发生的相关性.方法用通用型引物PCR检测60例NSCLC和30例肺良性病变组织中HPV的感染率;用分型引物对阳性标本进行HPV16,18分型.用免疫组化方法检测 P53及Rb蛋白在肺癌组织中的表达.结果 60例NSCLC及30例良性病变组织中HPV的检出率分别为21例(35.0%)和1例(3.3%),二者差异具有显著性意义 (P<0.05).肺鳞癌HPV感染率(48.6%)显著高于肺腺癌(13.0%)(P<0.05),早期(Ⅰ期)肺癌HPV感染率(48.6%)显著高于进展期(Ⅱ～Ⅲ期,18.5%)(P<0.05),吸烟组HPV感染率(47.4%)显著高于非吸烟组(13.6%)(P<0.05).60例肺癌组织中34例P53蛋白阳性(56.7%),42例Rb蛋白阳性(70%),二者的表达在HPV感染阳性组和阴性组无显著性差异.结论 HPV感染在NSCLC的发生中可能起到一定的作用.
作者：姜蕊；吴翠环；郑丽端；赵时宇；陈多恩 刊期： 2005年第02期
目的观察体外培养的星形胶质细胞(astrocyte, AS)对物理损伤的反应,探讨细胞周期调控对AS活化及增殖的影响.方法建立体外培养大鼠纯化的AS机械损伤模型,利用免疫细胞化学方法观察损伤区的细胞增殖细胞核抗原(PCNA)、5-溴脱氧尿苷(BrdU)的动态变化;以及周期素依赖的蛋白激酶(CDK)选择性抑制剂olomoucine干预后PCNA、BrdU表达的变化.结果物理损伤后24 h,损伤边缘区AS明显活化,细胞数目增加、胞体肥大,且交织成网状; PCNA表达增强, BrdU阳性细胞比率增加,大量AS进入增殖期.特异性细胞周期抑制剂olomoucine干预后,AS的 PCNA表达增强被抑制,胞体肥大程度减轻,BrdU阳性细胞比率减少.结论损伤刺激可促使胶质细胞细胞周期(cell cycle)启动、反应性增殖活化; olomoucine可以通过抑制CDK调控反应性AS的肥大、增殖.
作者：朱舟；王伟；谢敏杰；余勇飞；陈晨；杜鹏 刊期： 2005年第02期
目的观察雷公藤内酯酮(T7)对活化的小鼠腹腔巨噬细胞(MΦ)分泌一氧化氮(NO)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响.方法分离、纯化巨噬细胞,给予不同浓度T7进行培养,以Griess试剂检测培养上清液中的NO含量,以MTT法检测培养上清液中的TNF-α活性.结果 T7在浓度0.4～3.2 mg/L、时间4～24 h范围内对MΦ分泌的NO和TNF-α具有显著抑制作用(P<0.01),且呈剂量和时间依赖关系.结论 T7可以抑制MΦ的活性.
作者：何为；潘建青；曾叶；任燕；王辉丽；杨业金 刊期： 2005年第02期
目的采用开放式拉细麦管(open pulled straws, OPS)法玻璃化冷冻技术,探讨卵丘颗粒细胞对未成熟卵母细胞冻融后存活率及其发育能力的影响.方法小鼠生殖泡期卵丘-卵母细胞复合物(COC)或完全去颗粒细胞后的裸卵(DO)用OPS法玻璃化冻存,复苏后行体外成熟培养(IVM);COC直接行IVM作为对照组.结果 COC及裸卵冻融后存活率(分别为69.49%、77.90%)、成熟率(分别为56.10%、56.74%)无显著性差异,但成熟率均显著低于对照组(82.28%).结论在未成熟卵的玻璃化冷冻中颗粒细胞对卵母细胞冻存无保护作用.
作者：任新玲；章汉旺；朱桂金；靳镭；刘群 刊期： 2005年第02期
目的研究大鼠肺纤维化中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和转化生长因子-β(TGF-β)的表达及己酮可可碱对它们的影响.方法采用气管内灌注博来霉素的方法建立大鼠肺纤维化模型,设对照组、模型组和己酮可可碱治疗组,每组12只,再各分为第7天和第28天组.测定28 d时肺组织中羟脯氨酸含量和溶胶原活性以判断纤维化程度及治疗效果,同时用免疫组化法观察7、28 d时MCP-1和TGF-β在肺组织中的表达变化.结果模型组羟脯氨酸含量显著增高、溶胶原活性下降,而己酮可可碱治疗组与对照组比较无明显差异.与对照组比较,模型组MCP-1和TGF-β的表达显著增高(均P<0.01),己酮可可碱治疗组也有所增高,但均明显低于模型组(均P<0.01).结论己酮可可碱可抑制鼠肺纤维化,调节MCP-1和TGF-β的表达可能是己酮可可碱抑制鼠肺纤维化的机制之一.
作者：辛建保；李艳；马万里 刊期： 2005年第02期
目的研究高糖环境中人肾小球系膜细胞(human mesangial cells, HMC)中血清和糖皮质激素诱导的激酶(serum and glucocorticoid-inducible kinase,SGK)3种亚型SGK1、SGK2和SGK3的表达及意义.方法将培养的HMC分为正常组(5.5 mmol/L D-葡萄糖)、高糖组(25 mmol/L D-葡萄糖)和甘露醇对照组(19.5 mmol/L甘露醇和5.5 mmol/L D-葡萄糖).采用RT-PCR方法检测SGK1、SGK2和SGK3 mRNA的表达,Western blot方法检测SGK1蛋白的表达.结果在高糖及甘露醇刺激下,HMC中SGK1、SGK2和SGK3 mRNA及SGK1蛋白的表达明显上调(P<0.05);其中高糖上调SGK的表达明显高于甘露醇(P<0.05).结论高糖能促进HMC的SGK1、SGK2和SGK3 mRNA及SGK1蛋白的表达,SGK1可能是高糖作用于HMC的细胞内信号通路中靶分子之一,由它介导的高糖信号转导途径在糖尿病肾病的发生中可能起了重要作用.
作者：王全胜；张晓丽；张阿丽；王玉梅；邓安国；朱忠华；冯玉锡 刊期： 2005年第02期
目的探讨白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)与癫痫发病及其与胶质细胞的关系.方法将SD大鼠随机分为2组:1.生理盐水对照组,腹腔注射与致痫剂等容量的生理盐水;2.戊四氮(PTZ)组,PTZ 60 mg/kg腹腔注射后2、4、8、12 h取脑,每个时间点、每项检测各8只.①采用行为学观察方法观察大鼠的行为表现;②用免疫组织化学方法(SABC法)显示大鼠大脑皮质和海马星形胶质细胞胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)含量的变化;③用Western blot方法测定大鼠大脑皮质和海马匀浆后细胞周期素D1(cyclin D1)表达的变化;④采用放射免疫分析方法测定大鼠大脑皮质和海马组织匀浆及脑脊液中IL-1β、TNF-α含量的变化.结果 PTZ组大鼠在注射PTZ 1～2 min后出现癫痫发作,而对照组无癫痫发作;注射PTZ 4 h后GFAP含量升高,与对照组比较GFAP表达明显增强(P＜0.05);注射PTZ 2 h后cyclin D1表达增加,与对照组比较差异有显著性意义(P＜0.05);IL-1β、TNF-α在大鼠大脑皮质和海马组织匀浆及脑脊液中的含量在注射PTZ后均有不同程度的升高,与对照组比较差异有显著性意义(P＜0.05).结论大鼠癫痫发作时星形胶质细胞被激活,胶质细胞增殖并合成和分泌IL-1β、TNF-α等细胞因子,从而促进癫痫的发生和发展.
作者：王珍；刘庆莹；朱长庚；王伟 刊期： 2005年第02期
目的研究甲状腺功能异常状态下脂肪细胞分泌的脂肪细胞因子在血浆中的变化,从而了解甲状腺激素对脂肪细胞因子的影响.方法甲状腺功能亢进组(甲亢组)28例,男女各14例,甲状腺功能减退组(甲减组)14例,均为女性,正常对照组30例,男女各15例,均空腹抽取肘正中静脉血,测血脂、糖代谢指标及脂联素、促酰化刺激蛋白及补体C3水平.结果与正常对照组比较,甲亢组的脂联素水平明显升高,促酰化刺激蛋白无明显差异,补体C3明显降低,血脂水平明显降低,游离脂肪酸明显升高,空腹血糖及胰岛素也明显升高;甲减组的体重指数增加,血脂增加,而其它指标均无明显变化.相关分析显示脂联素与甲状腺激素FT3、FT4成正相关,其它指标间均无明显的相关性.结论甲状腺激素及甲亢状态可能促进脂联素的产生,而甲亢状态下脂联素的产生机制尚有待进一步的研究.
作者：余海英；张木勋；Katherine Cianflone；张建华；杨雁；王宏伟；卢慧玲 刊期： 2005年第02期
目的探讨细胞间粘附分子-1反义寡核苷酸(ICAM-1-ASO)静脉注射后在小鼠体内的分布及其对心脏组织ICAM-1表达的作用.方法 FITC荧光标记的ICAM-1-ASO(10 mg/kg)经小鼠颈外静脉注射6 h后,应用荧光显微镜观察其在小鼠体内的分布;取心脏组织进行免疫组织化学及半定量RT-PCR检测,观察心脏组织中ICAM-1的表达,研究ICAM-1-ASO对心脏组织ICAM-1表达的作用.结果 ICAM-1-ASO经静脉注射6 h后,在肾脏以及心脏组织中可见较多的颗粒状荧光分布,而在肝、肺、脾组织中仅见少量散在的荧光分布.RT-PCR检测表明ICAM-1-ASO(10 mg/kg)可降低心脏组织中ICAM-1 mRNA水平;但免疫组织化学检测各组间ICAM-1的蛋白水平未显示出显著性差异.结论 ICAM-1-ASO经静脉注射6 h后可以明显抑制心脏组织ICAM-1 mRNA的表达,其作用的理想靶器官是心脏和肾脏.
作者：柳祎；孙宗全 刊期： 2005年第02期
目的研究间α胰蛋白酶抑制物(IαI)在实验性肾草酸钙结石大鼠肾组织中的表达及意义.方法采用乙二醇和氯化铵诱导形成大鼠肾草酸钙结石模型,检测各组大鼠肾功能、肾组织Ca2+含量和草酸钙晶体沉积、尿生化,并用免疫组化和计算机图像分析技术观察IαI在肾组织的表达情况.结果模型组大鼠的血清Cr、BUN、肾Ca2+含量、24 h尿Ca2+和草酸分泌量均明显高于正常组(P<0.05).正常肾组织IαI分布仅在近曲小管,而在结石组肾组织的近曲小管、上皮细胞、皮髓质交界处等的表达显著增加.结论高草酸尿和草酸钙结晶的沉积能使肾脏通过合成更多的IαI来抑制草酸钙晶体的形成.
作者：曹正国；刘继红；周四维；叶章群；米其武 刊期： 2005年第02期
目的研究吉西他滨诱导人乳腺癌细胞系MCF-7细胞产生凋亡.方法应用MTT法、DNA电泳技术及流式细胞术观察吉西他滨诱导人MCF-7细胞凋亡.结果吉西他滨作用后,MTT结果显示细胞生长抑制率随药物浓度的增加而逐渐增大;DNA断裂电泳可见典型的梯形DNA条带,大小约180～200 bp的整倍数递增,随吉西他滨作用时间延长和浓度的增加而逐渐增强;流式细胞术分析,吉西他滨1.0 μg/ml和10.0 μg/ml作用24 h后,凋亡细胞比例分别为8%和14%;作用48 h后分别增加到15%和29%.结论吉西他滨可以诱导乳腺癌细胞产生凋亡,呈时间和剂量依赖性.
作者：邵军；黄韬；樊海宁 刊期： 2005年第02期
目的了解幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, Hp)对甲硝唑的耐药状况,研究相关的多重基因突变,为深入揭示Hp耐药的分子机制提供相关资料.方法分离培养54株Hp,以琼脂稀释法检测Hp的甲硝唑低抑菌浓度(deterimination of minimal inhibitory concentration,MIC),用PCR方法扩增甲硝唑耐药相关基因(rdxA、frxA、fdxB),经分子克隆后DNA测序,分析敏感株和耐药株耐药基因的序列及其与耐药性的关系.结果武汉地区人群Hp对甲硝唑的耐药率为67%;甲硝唑耐药基因序列分析表明,耐药临床株的rdxA和(或)frxA基因存在插入、缺失和点突变.结论 Hp对甲硝唑耐药不仅与rdxA有关,同时存在frxA、fdxB基因突变.frxA、fdxB基因的突变可能与rdxA在Hp耐甲硝唑中有协同作用.
作者：李耿；田拥军；叶嗣颖；胡国平；廖芳；张正茂；曹雪芹 刊期： 2005年第02期
目的观察小檗碱(berberine, Ber)对离体兔阴茎海绵体平滑肌条的舒张效应,探索其作用机制.方法采用离体平滑肌张力变化记录技术观察Ber对离体兔海绵体肌条的作用.结果在离体兔阴茎海绵体平滑肌标本上①Ber、西地那非(sildenafil,Sild)、罂粟碱(papaverine, Pap)及氨力农(amrinone, Amr)均可浓度依赖性地引起舒张效应,其作用强度依次为Sild>Ber>Pap＞Amr,EC50分别为0.84,6.20,15.00和27.69 μmol/L.②当NO合酶抑制剂L-NAME (0.1 mmol/L)存在时,Ber的大舒张效应由100.0 %降低到(84.0 ± 3.4)%.当同时加入L-Arginine(1 mmol/L)时,可部分对抗L-NAME的作用,Ber对海绵体的大舒张效应可恢复到(96.0 ± 4.5)%.③Ber (1,10 μmol/L) 浓度依赖性地增强乙酰胆碱(ACh)引起的舒张效应,ACh的大效应分别由(72.0 ± 3.6)% 升高到(81.0 ± 5.4)% 或(93.0 ± 6.3)%.④Ber(1,10 μmol/L)对KCl 去极化引起的收缩反应的作用微弱(P＞0.05).结论 Ber对兔阴茎海绵体具有浓度依赖性舒张作用,其机制与影响NO-cGMP信号通路有关.
作者：谭艳；汤强；胡本容；向继洲 刊期： 2005年第02期
目的观察坐骨神经慢性收缩损伤(CCI)后小剂量吗啡连续腹腔注射对大鼠痛敏的影响,以及脊髓背角c-fos基因及TrkA受体表达,探讨吗啡耐受的可能机制.方法选择雌性SD大鼠40只,随机分为4组,A组:假手术组,B组:CCI组,C组:CCI+生理盐水组,D组:CCI+吗啡组[5 mg/(kg·d)],分别于术前2 d,术后7、14 d进行热痛阈测试,免疫组织化学方法检测术后7、14 d c-fos基因及TrkA受体的表达.结果 A组术后术侧热痛阈轻度下降,与术前相比差异无显著性意义.B、C、D组术后术侧呈现不同程度热痛阈下降,以术后14 d为著,B、C组与A组相比,差异均有极显著性意义(均P<0.01),D组与A组相比,差异有显著性意义(P<0.05).CCI术后14 d脊髓c-fos基因、TrkA受体的表达较术后7 d明显增加,c-fos基因的表达主要集中于脊髓背角表层Ⅰ～Ⅱ、Ⅲ～Ⅳ层的中间内侧部,TrkA受体分布于Ⅱ～Ⅴ层.c-fos基因、TrkA受体的表达在B、C、D 3组与A组相比,差异具有显著性意义(P<0.05);D组与B组相比,差异无显著性意义(P>0.05).结论小剂量吗啡连续腹腔注射不能有效抑制坐骨神经损伤后热痛觉过敏及脊髓背角c-fos基因、TrkA受体的表达,可能与长时间使用吗啡导致脊髓背角神经元兴奋性进一步升高,发生中枢可塑性改变,以及脊髓背角神经元μ-阿片受体脱敏感有关.
作者：万丽；罗爱林；田玉科 刊期： 2005年第02期
目的研究在髓性白血病原代细胞和肿瘤细胞株中共济失调毛细血管扩张症突变基因(ATM)的转录水平,以确定反义封闭ATM基因治疗在白血病中应用的可行性.方法利用半定量RT-PCR技术,检测了正常人及31例髓性白血病患者和9种肿瘤细胞株的ATM mRNA表达量.结果 31例髓性白血病患者及9种肿瘤细胞株中ATM mRNA表达量普遍降低.结论由于白血病患者中ATM mRNA表达量普遍降低,因此,反义封闭ATM对于白血病原代细胞基因治疗的适应性有待商榷.
作者：汤屹；刘文励；周剑锋；徐慧珍；路武 刊期： 2005年第02期
目的研究基质金属蛋白酶-2,9(MMP-2、MMP-9)及其抑制因子-1,2(TIMP-1、TIMP-2)在老年性白内障晶状体上皮细胞的表达,探讨其在老年性白内障发病中的作用.方法对40例老年性白内障患者(排除代谢性和继发性白内障)和8例晶状体脱位(晶状体透明)患者晶状体前囊膜,用免疫组化方法(SP法)和免疫荧光技术检测MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2的表达.结果 MMP-2、MMP-9、 TIMP-1、TIMP-2在老年性白内障晶状体上皮细胞表达均为阳性,而在透明晶状体上皮细胞仅1例表达阳性,其余为阴性.MMP-2在老年性白内障组和透明晶状体组平均吸光度(A值)分别为(0.447 9±0.093 7)、(0.145 8±0.053 6);TIMP-2为(0.573 4±0.109 4)、(0.135 7±0.023 1);MMP-9为(0.177 9±0.065 5)、(0.039 2±0.009 3);TIMP-1为(0.279 0±0.062 6)、(0.092 2±0.028 2).结论基质金属蛋白酶及其抑制因子在老年性白内障发病机制中可能发挥重要作用.
作者：谢二娟；张虹；胡维琨；李贵刚；彭洁 刊期： 2005年第02期
目的研究IL-18抗柯萨奇B3病毒(Coxsackie B3 virus,CVB3)的作用.方法将心肌细胞分为4组.感染组:用CVB3感染心肌细胞;干预组:心肌细胞感染病毒后加入IL-18(4～30 ng/ml);IL-18组:正常心肌细胞加入IL-18(8 ng/ml);对照组:正常心肌细胞.观察培养心肌细胞病变(CPE)及心肌酶谱乳酸脱氢酶(LDH)和磷酸肌酸激酶(CK)的变化.并进行IL-18大无毒剂量实验.结果感染组感染病毒后第2、5天心肌细胞病变程度较其余3组明显,LDH和CK浓度明显升高,与其余3组比较差异有极显著性意义(P<0.01).IL-18浓度≥40 ng/ml对正常心肌细胞有毒性作用;在4～20 ng/ml范围内对感染心肌细胞具有保护作用.结论 IL-18可以抑制CVB3对心肌细胞的损伤,对CVB3感染的心肌细胞有保护作用.
作者：李玲；刘亚黎；彭华；林雯；陈立敏；蒙冰 刊期： 2005年第02期
目的探讨内质网Ca2+-ATP酶抑制剂thapsigargin对白血病多药耐药细胞株K562/A02化疗敏感性的影响.方法用MTT比色法检测K562/A02细胞耐药性、thapsigargin的增殖抑制活性及其对K562/A02细胞化疗敏感性的影响;丫啶橙(AO)/溴化乙锭(EB)染色荧光显微镜观察thapsigargin处理后K562/A02细胞形态改变;流式细胞仪(FCM)检测P-糖蛋白(P-gp)表达;荧光显微镜检测P-gp功能.结果①thapsigargin对K562和K562/A02细胞的增殖抑制活性呈剂量和时间依赖性,K562/A02细胞较K562细胞对thapsigargin更敏感,thapsigargin诱导K562/A02细胞呈现典型的凋亡细胞形态学改变.②K562/A02细胞对阿霉素(ADM)、柔红霉素(DNR)、长春新碱(VCR)、依托泊苷(VP-16)、高三尖杉酯碱(HHT)和米托蒽醌(MXT)均出现不同程度的耐药性;thapsigargin抑制K562/A02细胞P-gp功能而对其表达无影响,thapsigargin能增加K562/A02细胞对ADM、DNR、VCR、VP-16、HHT和MXT的化疗敏感性.结论 Thapsigargin能诱导白血病多药耐药细胞株K562/A02细胞凋亡并能部分逆转K562/A02的多药耐药性;thapsigargin的多药耐药逆转功能可能与其凋亡诱导作用和抑制P-gp功能有关.
作者：冯献启；刘芳；邹萍 刊期： 2005年第02期
目的探讨哇巴因诱导Jurkat细胞凋亡的机制.方法四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察哇巴因对Jurkat细胞生长的抑制作用;应用DNA片段分析、流式细胞术观察细胞凋亡;半定量逆转录PCR(RT-PCR)检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase3)基因表达水平;应用Western blot测定Caspase3的活性亚单位;比色法检测Caspase3活性.结果哇巴因能诱导Jurkat细胞凋亡,在细胞凋亡过程中,Caspase3活性明显升高.结论 Caspase3活化参与了哇巴因诱导Jurkat细胞的凋亡过程.
作者：熊安秀；金润铭；白燕；林雯；吴晓燕；费洪宝 刊期： 2005年第02期
华中科技大学学报（医学版）杂志
主管:中华人民共和国教育部
主办：华中科技大学
