学术投稿

脂肪染色制片技术的改进

张芸;陈森林;赵林

关键词:脂肪变性, 染色质量, 冷冻切片, 卵泡膜细胞瘤, 染色方法, 自然干燥, 肿瘤组织, 病理诊断, 鼠肝组织, 染色过程, 科研工作, 浸入, 福尔马林, 材料, 脂肪瘤, 载玻片, 水溶液, 间叶瘤, 大批量, 制片
摘要:在临床病理诊断和科研工作中,HE染色切片中常出现的大小空泡是脂肪变性、水泡变性还是糖原贮积,需要用脂肪染色加以鉴别.以往传统的方法是用冷冻切片漂浮染色,在这种染色过程中由于切片厚,染色后附贴切片时容易产生折叠,影响切片的观察和诊断,同时也不适宜大批量制片.为此我们在不影响切片染色质量的基础上,对传统染色方法进行了以下改进,现介绍如下.1 材料与方法1.1 材料小白鼠肝组织20例,大小为0.5mm × 1mm×2mm;人体肿瘤组织5例,大小为2mm×2mm×0.2mm(黏液脂肪瘤1例,间叶瘤2例和卵泡膜细胞瘤2例).全部标本均经10%福尔马林固定后,浸入糖胶液24h以上,然后低温恒冷切片,切片厚4-6um,附贴于铬胶化载玻片上,自然干燥后,浸入2%明胶水溶液中10-20s,冰箱保存备用.
诊断病理学杂志相关文献
  • 定量组织病理学、细胞增殖和图像细胞计量DNA分析对弥散浸润性星形细胞瘤进行分级

    本文研究目的定量评价组织病理学对弥散浸润性星形细胞瘤进行分级的应用价值.研究方法在133例原发性弥散浸润星形细胞瘤患者中,选择几例可以定量分析者,用WHO及St Anne-Mayo对弥散浸润型星形细胞瘤进行分级的4个标准(核的不典型性、有丝分裂、内皮增殖和肿瘤坏死)的有关参数:①平均核大小(um2);②有丝分裂数(个/mm2);③内皮细胞级分(%);④坏死的面积分数(%);⑤核的级分(%);⑥单位体积的有丝分裂数(M/V;index);⑦Ki-67(MIB-1)标记指数(%);⑧核的DNA含量分析.然后,对这些参数进行定量分析,将评价分数与1979年和1993年WHO确定的病理恶性度分级方案与患者预后联系起来.再用统计学方法分析每一个参数对患者组织病理学恶性度分级及预后作用的大小,用接收器运行(receiver-operating characteristics,ROC)曲线分析每一个参数能使患者预后好的临界值是多少.以Cox成比例的多变量分析为基础,选择可以独立影响预后的参数建立一个决定预后的决定树模型.结果与结论所有的定量评价与患者的生存期有显著关系.平均核的大小为36um2,有丝分裂3个/mm2;内皮细胞级分为2.5%;缺乏或出现肿瘤坏死;肿瘤细胞核级分为16%;M/V-index是有丝分裂50个/mm2.DNA计量分析和患者的生存期没有明显关联.但是,Ⅱ级伴有DNA改变的星行细胞瘤比不伴有DNA改变的Ⅱ级患者生存期要短.Ⅱ级与Ⅲ级重要的区别在于是否存在有丝分裂活性,一个有丝分裂象不能认为具有有丝分裂活性,必须找到几个有丝分裂象才能诊断Ⅲ级星形细胞瘤.高的有丝分裂活性标志着恶性度很高.Ki-67免疫染色可以用来识别增殖强的肿瘤区域.内皮增殖不能作为分级的决定性指标.依据手术患者的特征曲线,有无肿瘤坏死以及核分裂计数(以瘤组织中核分裂数3个/mm2为界)是在不同生存状况不同患者中为敏感和具特征性的.根据这两个参数对肿瘤进行分类,对提示预后差者有很重要的大意义.根据ROC曲线确定定量参数的理想分界点的值,以参数对预后的影响程度为依据建立一个简单的决定树模型,统计学分析显示,此模型比1979年和1993年分级标准对预测患者的生存期更有指导意义.(首都医科大学宣武医院病理科张伟摘译徐庆中校对)

    作者: 刊期: 2001年第04期

  • 结肠黏液型类癌1例

    患者男性,65岁.因腹胀消瘦乏力3个月入院.肠镜检查:结肠肝曲狭窄,见菜花状肿块,质硬,易出血.取6块组织送检.病理报告:结肠肝曲癌.腹部透视:符合肿瘤引起机械性肠梗阻.手术所见:右半结肠肿瘤伴腹腔广泛转移,回盲部升结肠见2处肿瘤侵犯,狭窄明显,肠壁、大网膜、肠系膜均有转移结节,腹腔内有大量腹水,淡红色.临床诊断:右半结肠癌晚期伴腹腔转移.行右半结肠癌姑息切除术. 病理检查巨检:结肠一段长50cm,距近切端23cm处见一息肉样肿块突入肠腔,直径1.5cm,表面黏膜糜烂,黏膜下肠壁灰白增厚,肠系膜见弥漫成片质硬的增生结节.镜检:肿瘤细胞于黏膜下层生长,侵犯肠壁全层达肠系膜,细胞排列成腺管、腺泡状,仅少部分为索状排列,瘤细胞小,形态一致,多边形,核圆形,轻度异型,形态一致,胞浆、腺腔及间质中可见大量黏液组织(图1),核分裂象偶见.AB染色细胞内、外均(+)(图2),免疫组化CgA(+)(图3).

    作者:许海莺;陈宏颖 刊期: 2001年第04期

  • 阑尾黏液性囊腺癌继发腹膜假黏液瘤并累及右睾丸鞘膜及腹膜后1例

    患者男性,46岁.发现右阴囊肿物2年.患者于2年前无明显诱因出现右阴囊肿物,约核桃大,逐渐增大,无痛,平卧时肿物不能消失或缩小.查体:右阴囊内触及10cm× 8cm×7cm大小肿块,无触痛,不能还纳,右睾九未及.临床诊断:右睾丸鞘膜积液.B超示:右盆腔包裹性积液,右阴囊积液.手术探查:腹腔内有胶冻样黏液100ml,阑尾末端见一15cm×10cm×10cm囊性瘤,部分囊壁破裂,溢出胶冻样黏液;膀胱后腹膜、两侧后腹膜及部分肠管散在大量半透明大小不等的囊泡,内含黏液.右阴囊内有浑浊液体及胶冻样物,鞘膜组织质硬,破坏严重,行右睾丸切除术.

    作者:张伟;于俊秀;郭骏 刊期: 2001年第04期

  • 胃窦血管平滑肌脂肪瘤1例

    患者男性,76岁.食后胃脘胀满不适1月余.纤维胃镜示:胃窦小弯侧前壁见一2cm×2cm大小椭圆形淡黄色隆起,边界清楚,表面光滑,未见溃疡及出血,蠕动正常.以胃窦新生物性质待定手术.术中见胃窦部前壁黏膜下一约2cm×2cm大小肿物,包膜完整,光滑,质中,周围胃壁柔软,未见溃疡及肿物.临床诊断:黏膜下脂肪瘤.病理检查巨检:肿物大小1.7cm× 1.5cm×1.1cm,包膜完整,表面光滑,切面淡黄色,质软.镜检:肿物包膜完整,主要由成熟脂肪细胞组成,其中掺杂少量成熟平滑肌组织束(图1)及大小不一的血管(图2).免疫组化:肿瘤组织中平滑肌SMA(+)、desmin(+)、S-100(-),CD34(-).

    作者:鲁香凤;方杰;赵凤志;戴欣;杨会敏 刊期: 2001年第04期

  • 软组织多形性玻璃样变血管扩张性肿瘤1例

    患者女性,30岁.发现右腹股沟肿块半年余.查体:肿块位于右腹股沟内,如鸡蛋大,边界清,可活动,无触痛.生殖系统无异常.临床诊断:皮肤纤维瘤.手术切除,术中见肿物位于皮下,与周围无粘连.病理检查巨检:肿物呈卵圆形,6cm×5cm×5cm,包膜完整菲薄,切面大部分为实性,灰白色,质略硬;小部分为大小不等的囊腔和裂隙,内含少量灰红色液体.镜检:肿瘤主要由薄壁血管及纤维组织构成,管腔大小不等,管壁及其周围的胶原纤维透明变性(图1),扩张的血管内衬梭形内皮细胞,腔内有少量红细胞,部分管腔内可见血栓.血管之间有多形性瘤细胞,核深染,核仁清楚,部分瘤细胞显示明显的异型性,并可见瘤巨细胞,但未见核分裂象(图2).免疫组化染色:CD34(+),S-100(-),CK(-),SMA(-).

    作者:许艳梅;武培敬;武卫华 刊期: 2001年第04期

  • Harris苏木精染液配制改良法

    Harris明矾苏木精是哈瑞于1900年发明的.迄今为止,它仍然是世界各国病理技术室常用、重要的HE染液之一,也是经典、历史悠久的染液,几乎所有的常规切片、冷冻切片、涂片等染色都使用这种染液.它有很多优点,但也有不尽如人意之处.如:使用期较短,一般2-3个月就要更换一次;氧化结晶多,常需要在染色前捞去浮在表面的结晶,否则会污染切片;其着染力逐渐减退,时间越长,着染力就越差.因此,我们于1998年对Harris染液的配制方法进行了改良.并经过切片、冷冻切片、涂片等5万余张病理片的试验,效果满意.

    作者:李继军 刊期: 2001年第04期

  • 采用综合手段提高骨肿瘤穿刺活检病理诊断准确率

    本文旨在探讨针对不同类型的骨肿瘤,灵活采用相应的穿刺活检方法及病理检查手段,达到了既操作简便又提高诊断正确性的目的.1 材料与方法1.1 临床资料采用我院1978-2001年骨肿瘤及瘤样病变穿刺针吸活检术标本917例.男564例,女353例,年龄1-86岁,平均36.8岁.病变穿刺部位以股骨远端(211例,23.0%)和胫骨近端(149例,16.2%)为多,其余依次为髂骨、股骨近端、肱骨、骶骨等.

    作者:徐瑾;王瑞琳;李兰萍;魏典;于顺禄 刊期: 2001年第04期

  • 巨大幼年性颗粒细胞瘤1例

    患者女性,14岁.主因腹胀纳差乏力半年,加重1个月人院.患者消瘦,腹部膨隆.尿RBC20-22/HP,ESR 25mm/h,血β-HCC14.07MIU/ml(正常<8MIU),LDH-L 232U/L(正常50-204U/L).性激素检查,P及E2异常.CT、B超提示盆腹腔巨大囊实性占位性病变,以囊性为主.穿刺为血性液,AFP、CEA、CA-199、CA-153、CA-125大致正常.初诊:卵巢巨大囊肿,卵巢癌待排.剖腹探查:右卵巢巨大囊肿,上至肝下界,下至盆腔底,肿瘤内含咖啡色液体5500ml. 病理检查巨检:灰白色卵圆形肿物,大小15cm×15cm×4cm,已剖开,囊壁厚0.2-0.5cm,内壁见3个紫蓝色结节,大直径3cm.囊壁表面附有输卵管一段.镜检:瘤细胞排列成大小不等的滤泡,部分呈巨大滤泡状并形成囊腔,囊内积粉染物,囊壁为单层或多层粒细胞样细胞,细胞间可见红染无结构物质(图1).

    作者:孟宪华;笪冀平 刊期: 2001年第04期

  • 美国病理医师训练浅谈

    病理医师的成长是一个艰难漫长的过程,仅熟知理论无济于事,仅靠大量实践也不一定能成功,更重要的是在学习过程中不断加以分析归纳和积累,因此,病理诊断水平的提高来自于理论加实践再加思考之三者的有机结合.在此过程中,尽可能地吸收他人在训练中的有用经验,还是有帮助的.笔者收集整理美国病理医师训练的一些内容,供同道们参考.美国病理医师的训练始于医学生在医学院学习的第二年,在这期间,学生们用4-5个月的时间专门学习病理,主要采取讲大课,实验课(包括大体标本和显微镜观察),以及到医院轮转的形式.前两种形式与国内医学院的病理教学基本相似.同时,对病理有兴趣的同学还可以选择到医院的病理科去轮转,在那里主要采取小班教学,熟悉病理常规工作的一般流程.这些过程都在医学院二年级进行.

    作者:纪小龙;尹彤 刊期: 2001年第04期

  • 色素性隆突性皮肤纤维肉瘤2例

    例1 男性,23岁.右内踝包块10余年,近年增大,伴反复溃疡出血.临床诊断:脂肪肉瘤或滑膜肉瘤?遂行手术切除.术中见肿块位于皮下与腱膜之间,6cm×6cm×4cm大小,与周围组织有粘连. 病理检查巨检:灰白色肿瘤组织3cm×1.5cm×1.2cm,无包膜.切面灰白色间杂局灶黑色,质软.镜检:肿瘤位于真皮及皮下组织,呈浸润性生长.瘤细胞形态较一致,密集,呈较纤细或稍肥胖的梭形,瘤细胞境界不清,胞浆较少,嗜酸性,核呈梭形,可见核分裂1-3个/10HPF.大多数瘤细胞围绕小血管或胶原纤维呈车辐状排列,少数呈旋涡状或束状排列.瘤细胞间可见胞浆内含褐黑色色素颗粒的细胞散在,呈单极或多极胞突(图1).Perls和Fontana对比染色,前者阴性,而后者阳性,证实其为黑色素颗粒.瘤组织内灶性区域黏液变性,胶原纤维少,血管较丰富,未见组织细胞及多核巨细胞.免疫组化染色:梭形瘤细胞vimentin 、CD34(+),含黑色素细胞S-100(+).

    作者:苏平;郭立新;谢余澄 刊期: 2001年第04期

  • 脊椎霍奇金病浸润1例

    患者男性,17岁.盗汗3个月,腰痛2个月,加重伴双下肢活动障碍2周.查体:全身浅表淋巴结不肿大.T4椎体处轻微后突畸形,L3、4椎体处轻叩痛,双侧T4平面以下痛、触觉减退,右侧较左侧明显,右侧腰椎旁肌紧张,腰椎活动受限,上肢肌力V级,屈髋肌力Ⅱ级,屈膝肌力Ⅲ级,伸膝肌力Ⅱ级,屈踝伸踝Ⅲ-Ⅳ级,跟腱反射亢进,巴氏征(+),踝阵挛(+).X线片示:T4椎体变扁,其上缘骨皮质吸收破坏,L3-4椎间隙变窄,椎旁软组织肿胀,L3椎体右侧骨质吸收破坏,椎体变扁,右侧腰大肌肿胀.B超示:L3右侧椎旁可见无回声区,厚度约1cm;约L2平面、下腔静脉内侧及后方可见多个1-2.5cm低回声团,考虑为L3椎旁脓肿及腹腔淋巴结肿大.术中见T4椎体前方有一3cm×2cm×2.5cm大小的软组织肿块,略呈结节状,表面静脉怒张,切面呈鱼肉状,无明显干酪样坏死,T4椎体骨质破坏.

    作者:王西川;刘莉;刘卫平 刊期: 2001年第04期

  • 丙肝患者外周血单个核细胞分离方法的改进

    据陈良标等报道,丙型肝炎病毒(HCV)可感染慢性丙型肝炎患者外周血单个核细胞并在其中复制.但从外周血中提取单个核细胞(PBMC)进行免疫组化染色时,常有血小板的干扰,影响观察结果;另外,在检测HCV抗原(HCV-Ag)过程中,还存在血浆中HCV对PBMC的污染问题.为此,我们对分离方法进行了改进取得了满意的效果,现介绍如下.

    作者:李琳;沈志刚;田玉旺;陈佩兰 刊期: 2001年第04期

  • 食管基底细胞样鳞状细胞癌临床病理研究

    目的探讨食管基底细胞样鳞状细胞癌(BSCC)的临床病理特征及诊断标准.方法收集5例食管BSCC分别作HE、组织化学及免疫组化染色,其中2例作电镜观察.结果 BSCC主要由密集的小细胞组成,排列成实体小叶状及筛网状(假腺样),并见粉刺样坏死、玻璃样变性及基底膜样物质沉积(PAS+),4例BSCC均见不同分化程度的鳞状细胞癌成分,1例见局灶性鳞状细胞分化.免疫组化Ker(AE1/AE3)、Ker14、LM、PCNA及p53均阳性,4例Ker19阳性;仅见1例Syn阳性;S-100、CgA、NSE及SMA阴性.2例BSCC超微结构可见鳞状细胞分化及基底膜样物质沉积.患者发病年龄大,首次手术多数可见区域淋巴结转移,1例转移至肺,术后2个月死亡;4例随访无结果.结论 BSCC是鳞状细胞癌独特的组织学类型,分化低,预后较差.

    作者:曹立宇;陈向红;张洪福 刊期: 2001年第04期

  • 黏液表皮样癌中三种基因蛋白的表达及其意义

    目的了解p53,bcl-2和c-erbB-2蛋白在黏液表皮样癌中的分布,评价其对鉴别诊断及预后判断的意义.方法用免疫组织化学技术检测了41例黏液表皮样癌和10例正常涎腺组织的p53,bcl-2和c-erbB-2表达.结果c-erbB-2蛋白在正常涎腺的分布特征为导管上皮全部阳性(10/10),而腺泡上皮仅有1例阳性(1/10);黏液表皮样癌的阳性率低于正常涎腺,但阳性强度高于正常涎腺;p53蛋白在正常涎腺及黏液表皮样癌的阳性率分别为10%和51%,两者有显著性差异(P<0.01).而且,p53蛋白在高低分化两组黏液表皮样癌的阳性率也有差别(P<0.05);bcl-2在黏液表皮样癌的阳性率有高于正常涎腺的趋向结论在正常涎腺中c-erbB-2 主要分布在导管上皮.黏液表皮样癌和正常涎腺在p53,bcl-2和c-erbB-2表达方面有一定的差异.p53阳性表达的患者多具有低分化黏液表皮样癌的病理特征,但未能发现在黏液表皮样癌表达bcl-2和c-erbB-2的预后意义.

    作者:徐胜美;吴铭;陈灼怀 刊期: 2001年第04期

  • 胎儿先天性心脏横纹肌瘤1例

    患者女性,25岁.妊娠33周,胎动消失1天.即行B超检查显示胎儿死于宫内,且发现胎儿心脏肿瘤,行引产术. 病理检查巨检:于已切开的左心室见3个突向心室内的结节状肿物,大小分别为3.5cm×3cm×3cm,1cm×0.8cm×0.5cm和0.8cm×0.5cm×0.5cm,肿瘤有包膜,切面浅棕色,实性.镜检:肿瘤细胞呈圆形或卵圆形,核小,位于细胞中央,胞浆呈空泡状,核周围有细小粉染的胞浆条索连向胞膜,细胞呈蜘蛛状.肿瘤内偶见无空泡的肌母细胞,胞浆内可见横纹(图1,2).肿瘤周围心肌纤维受压、萎缩.

    作者:徐青;张林;付红梅 刊期: 2001年第04期

  • 直肠癌术前45Gy放疗效果的临床病理观察

    目的观察中低位直肠腺癌术前放疗效果的临床病理改变.方法对29例中低位直肠癌行术前45Gy放射治疗.直肠镜观察放疗前后直肠肿块的肉眼变化,并比较其活检标本与放疗后手术标本的病理形态学特征.结果放疗后直肠镜肿块肖失、肿块缩小和无明显变化者分别占13.8%、62.1%和24.1%.镜下69.0%的病例可见到瘤细胞明显消失、退变和坏死,以及间质纤维化;31.0%的病例对放射无明显反应.结论术前45Gy照射可使大多数直肠癌瘤体缩小,瘤细胞退变、坏死、消失,对中低位直肠癌保肛手术具有积极的作用.

    作者:李立;钱宏 刊期: 2001年第04期

  • 乳腺浸润性微乳头状癌1例

    患者女性,37岁.左乳晕下包块半年入院.查体:乳晕下触及1.0cm×0.5cm包块,质硬,界清,无压痛,皮肤无橘皮样改变.临床诊断:左乳腺导管内乳头状瘤;乳腺癌待除外.术中见肿物位于主输乳管旁,由两个相连结节构成,大小各约2cm×2cm×1cm. 病理检查巨检:结节状肿块2个,分别为1.2cm×0.8cm ×0.5cm和1.0cm×0.8cm×0.5cm,有部分包膜.切面实性,灰红色.镜检:肿瘤细胞呈立方形或柱状;胞浆红染,呈细颗粒状,核卵圆形,染色稍深,细胞排列成圆形/卵圆形/不规则形小团块;部分瘤细胞团外周有锯齿状边缘,部分中心有小的管腔呈乳头状.每个瘤细胞团和周围的纤维组织间存在无细胞间隙,间隙内空虚.间质内可见淋巴细胞浸润.瘤细胞团呈浸润性生长.

    作者:丁岚 刊期: 2001年第04期

  • 人原发性肝细胞癌中热休克蛋白70mRNA的表达

    目的检测热休克蛋白70mRNA在人原发性肝癌中的表达情况,探讨热休克蛋白70在原发性肝癌演变过程中的意义.方法采用原位杂交技术,用地高辛标记的热休克蛋白70cDNA探针检测41例人原发性肝癌组织及20例肝硬变组织.结果原位杂交结果显示41例人原发性肝癌组织中21例热休克蛋白70mPNA阳性(51.2%),0例肝硬变组织有11例阳性(55.0%),两组之间无显著差异(P>0.05).结论热休克蛋白70mRNA在人原发性肝癌组织中及肝硬变组织中有较高水平的表达,提示热休克蛋白70参与了原发性肝癌的发生及发展过程,对其生物学特性作进一步研究,可能为肝癌发病机制提供一定的理论依据.

    作者:胡沛臻;杨守京;马福成;刘彦仿 刊期: 2001年第04期

  • 脂肪染色制片技术的改进

    在临床病理诊断和科研工作中,HE染色切片中常出现的大小空泡是脂肪变性、水泡变性还是糖原贮积,需要用脂肪染色加以鉴别.以往传统的方法是用冷冻切片漂浮染色,在这种染色过程中由于切片厚,染色后附贴切片时容易产生折叠,影响切片的观察和诊断,同时也不适宜大批量制片.为此我们在不影响切片染色质量的基础上,对传统染色方法进行了以下改进,现介绍如下.1 材料与方法1.1 材料小白鼠肝组织20例,大小为0.5mm × 1mm×2mm;人体肿瘤组织5例,大小为2mm×2mm×0.2mm(黏液脂肪瘤1例,间叶瘤2例和卵泡膜细胞瘤2例).全部标本均经10%福尔马林固定后,浸入糖胶液24h以上,然后低温恒冷切片,切片厚4-6um,附贴于铬胶化载玻片上,自然干燥后,浸入2%明胶水溶液中10-20s,冰箱保存备用.

    作者:张芸;陈森林;赵林 刊期: 2001年第04期

  • 食管分叶状毛细血管性血管瘤1例

    患者男性,74岁.体检时发现大便潜血(+),时感前胸后背痛,可缓解.多次行胃镜检查:食管上段距门齿25cm3点处见一息肉样病变,体积进行性增大(直径从0.5cm增大至1.5cm),有短粗蒂,粉红色(图1),表面糜烂、充血.CT示:食管中上段(主动脉水平)右后壁结节影向腔内突出.增强造影与血管强化相近,符合血管瘤.

    作者:刘晓霞;乔旭柏;田自然;马正中 刊期: 2001年第04期

诊断病理学杂志

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主管:北京军区联勤部卫生部

主办:北京军区总医院