薛军；林茂芳
为了研究GM-CSF可溶性α受体solGM-Rα在急性髓系白血病患者体内的表达,探讨其与AML患者临床特征的相关性及临床意义,以酶联免疫吸附试验ELISA法检测66例初治AML患者血浆标本solGM-Rα的含量,并与AML患者MIC检测结果及临床资料相结合,进行综合分析.结果表明:AML患者血浆solGM-Rα浓度明显高于正常对照,在M3型低(3897.75±2651.43pg/ml),而在M5型高(9990.02±6325.43pg/ml)(P＜0.05).solGM-Rα增高者多见于MIC的M5型,后者常伴有外周血白细胞增多、骨髓粒系原始细胞增多及CD34、CD95和CD116抗原高表达等特性.结论:solGM-Rα升高可能提示预后不良,GM-CSF及其受体系统介导的靶向杀伤值得进一步研究.
作者：肖溶；张日；王友良；朱子玲；陈涛；杨建和 刊期： 2006年第02期
本研究观察615鼠骨髓来源树突状细胞(DC)与白血病细胞L615融合瘤苗L615/DC体内外诱导特异性抗白血病免疫的能力.分别制备615鼠骨髓来源DC,用PEG融合法将DC与照射灭活的L615制备L615/DC融合瘤苗并免疫动物,用MTT法和LDH法测定L615/DC融合瘤苗免疫鼠脾细胞体外MLR反应和对L615特异性杀伤活性,同时通过免疫治疗实验检测L615/DC融合瘤苗的体内抗白血病作用.结果表明:研究获得了具有特征形态的树突状细胞,MLR反应表现出强大的异基因免疫刺激功能,当L615/DC融合瘤苗免疫鼠的脾细胞再次接触L615抗原时表现出强烈的增殖活性;LDH实验显示,融合瘤苗组、共培瘤苗组和灭活L615组均可在体外诱导扩增出L615特异性CTL,但融合瘤苗组的CTL在不同效靶比、不同孵育时间的特异性杀伤活性均明显高于另两组(P＜0.01).体内免疫治疗实验中L615/DC融合瘤苗治疗组平均寿命为25.7±1天,有1/4小鼠长期存活,而对照组全部死亡,平均寿命17.5±1天.2个月后对治疗组存活鼠用致死剂量L615攻击不发病.结论:L615/DC融合瘤苗可诱导强大的特异性抗L615免疫,它不仅在体外能特异性识别并杀伤L615细胞,还可有效抑制荷瘤鼠体内肿瘤的生长,延长存活时间,并产生免疫记忆,抵抗肿瘤的二次攻击.L615/DC融合瘤苗为肿瘤免疫治疗提供了新的手段.
作者：于津浦；李牧；葛薇；马双；尤胜国 刊期： 2006年第02期
为了构建pEGFP-C1/U6载体介导MDR1短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达的质粒,针对MDR1的19碱基大小的片段,分别设计2对寡核苷酸,形成双链后将其依次连入带有U6启动子的pEGFP-C1载体(命名为pEGFP-C1/U6),两对DNA双链连接后形成中间由9个碱基序列间隔的反向互补序列,构建成能产生MDR1短发卡RNA的质粒.结果表明:经酶切、连接后构建成的质粒(pEGFP-C1/U6/A和pEGFP-C1/U6/B),经酶切与测序证实构建成功,无任何碱基突变.结论:成功构建了能表达MDR1 shRNA的质粒载体pEGFP-C1/U6/A和pEGFP-C1/U6/B,此项研究结果可能为临床上逆转肿瘤多药耐药提供一种有效的方法.
作者：肖希斌；谢兆霞 刊期： 2006年第02期
本研究探讨存活蛋白(survivin)在骨髓增生异常综合征(MDS)发病中的可能作用及寻找凋亡和血管新生两种不同的机制在MDS中可能存在的联系.采用免疫细胞化学的方法检测survivin、Bcl-2和VEGF在MDS低危、高危患者和AML患者及对照者骨髓中的单个核细胞的表达情况,并分析三者间的关系.结果表明:survivin、Bcl-2和VEGF在MDS低危组、高危组和AML组的表达率和积分均逐渐增高,除Bcl-2在MDS低危组和对照组的差异无统计学意义外(P＞0.05),三者在各组间的表达差异均有统计学意义(P＜0.05),且三者间的表达率均呈正相关关系.结论:survivin、Bcl-2和VEGF参与了MDS的发病并与疾病病程进展有关,凋亡异常和血管新生可能通过以上3种蛋白的相互作用在MDS的发病中存在着某种联系.
作者：孙慧；马杰；孙玲；刘林湘；赵莉敏 刊期： 2006年第02期
为了研究rAAV载体介导的血小板无力症基因治疗的可行性,构建了由CMV启动子调控的rAAV2-Ⅱb、rAAV2-Ⅲa病毒载体,并采用多种方法验证了rAAV2-Ⅱb和rAAV2-Ⅲa病毒载体在真核细胞中的表达能力,其中包括用RT-RCR方法检测BHK-21细胞感染24小时(MOI=1×105 v.g/cell)后目的基因在mRNA水平的表达,用流式细胞术的方法检测不同MOI和目的基因表达之间的量效关系,采用Western blot的方法检测BHK-21细胞感染48小时后(MOI=1×105v.g/cell)目的基因在蛋白水平的表达,用免疫荧光法检测BHK-21细胞感染48小时后(MOI=105 v.g/cell)目的基因在细胞表面的表达,以及应用PAC-Ⅰ结合试验验证所表达的GPⅡb/Ⅲa蛋白功能.结果表明,在MOI=1×105v.g/cell条件下,在BHK-21细胞感染24小时后即可在mRNA水平上检测到目的基因的表达,在48小时可在蛋白水平检测到目的基因的表达;在一定剂量范围内目的基因的表达量随着MOI的增加而增加,但MOI过高反而使表达量下降,目的基因表达产物活化之后能与PAC-I结合,并具有正常的生物学活性.结论:rAAV2载体能有效地介导GPⅡb、GPⅢa基因在真核细胞内表达,所表达的产物都具有正常的生物学活性,此结果为rAAV2载体在血小板无力症基因治疗中的应用打下了基础.
作者：王凯；彭建强；陈方平；吴小兵 刊期： 2006年第02期
本研究旨在探讨流式微珠阵列法检测Th1/Th2细胞因子表达及IFN-γ应用于T淋巴细胞白血病治疗的临床价值.以不同浓度IFN-γ诱导培养Jurkat细胞48小时,用流式微珠阵列法检测培养上清液中IL-2、IL-6、TNFα和IFN-γ表达,并采用流式细胞术检测膜上IL-2受体(CD25)的表达.结果表明:IFN-γ诱导Jurkat细胞IL-2和TNF-α的表达呈浓度依赖性升高,未检测到IL-6表达,CD25表达明显升高.结论:Jurkat细胞能被IFN-γ诱导高表达Th1细胞因子和CD25,流式微珠阵列法能准确客观地反映Th1/Th2细胞因子表达的动态变化.
作者：李婉红；王玲莉 刊期： 2006年第02期
为了研究c-IAP2及其拮抗素Smac基因在白血病中的表达及对成人急性白血病(AL)患者的预后意义,采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测103例白血病患者c-IAP2、Smac的mRNA表达水平,20名健康人为正常对照,K562、Kg-1a细胞株为阳性对照.结果表明:c-IAP2、Smac在初治AL中的表达较正常对照组明显升高,两者的表达为高度正相关,治疗缓解后c-IAP2、Smac的表达明显下降,与初治AL组有明显差异(P＜0.05),复发后c-IAP2、Smac基因的表达又复升高.c-IAP2mRNA和Smac mRNA在慢性粒细胞性白血病慢性期(CML-CP)组的表达率和表达水平均高于正常对照组,但无统计学意义(P＞0.05).在初治AL患者中,c-IAP2、Smac表达阳性的患者缓解率均低于表达阴性的患者.结论:c-IAP2 mRNA、Smac mRNA过度表达和急性白血病的发病呈正相关;c-IAP2、Smac高表达的患者完全缓解率低,预后不良;c-IAP2、Smac可作为急性白血病的发病、复发及预后判断的指标之一.
作者：王艳；周建辉 刊期： 2006年第02期
本研究探测在亚甲蓝(methylene blue,MB)光化学法处理单份血浆过程中,加入维生素C(vitamine C,Vit C)是否影响病毒的灭活效果,是否对血浆蛋白活性成分具有保护作用.用水泡性口炎病毒(vesiculfar stomatitis virus,VSV)作为指示病毒,在人血浆中加入不同浓度Vit C和终浓度为1μmol/L的亚甲蓝,应用4000 lx荧光强度照射并于不同时间取样检测.以细胞病变效应评价对VSV的灭活效果,用RT-PCR检测病毒核酸的变化,并采用Clauss法、一期法和微量免疫电泳等方法对亚甲蓝光化学法处理前后的血浆蛋白含量和活性进行分析.结果发现,VSV血浆在加入240μmol/L Vit C并经MB-光照60分钟后,病毒滴度下降＞8 lg TCID50/ml;RT-PCR法也检测不到病毒核酸;血浆中的纤维蛋白原和凝血因子Ⅷ的回收率分别为83.55%和81.67%,与不加Vit C进行亚甲蓝光化学法处理结果相比有显著提高(P＜0.05);微量免疫电泳显示,血浆中的大部分蛋白成分含量没有明显改变,免疫原性也未受到明显影响.结论:血浆中加入一定量的Vit C不仅不影响亚甲蓝光化学法对病毒的灭活效果,而且有效地保护了血浆蛋白活性成分,因此Vit C可作为亚甲蓝光化学法处理血浆时的保护剂,能有效地提高单份新鲜冷冻血浆的质量.
作者：李燕；李明远；蒋仁举；贾文祥 刊期： 2006年第02期
转化生长因子β(TGF-β)及其受体的基因突变已被证实在肿瘤形成中具有重要的作用,在许多肿瘤中都发现有TGF-βⅡ型受体(TβR-Ⅱ)表达异常或表达缺失.为了了解急性白血病患者TβR-Ⅱ基因是否存在异常,本研究应用大范围RT-PCR的方法分段扩增急性白血病原代细胞TβR-Ⅱ的编码序列,并结合序列测定技术,分别对6例急性白血病患者以及11例正常人TβR-Ⅱ的编码序列进行突变检测.全部患者经骨髓细胞形态检查符合FAB诊断标准且骨髓原始细胞≥90%.肝素抗凝骨髓4-5 ml,分离单个核细胞,用TRIZOL试剂提取总RNA,反转录后行PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳分析PCR产物.回收目的片段,克隆到PGEM-T载体,进行序列的测定.结果显示:在检测的病人中有2例病人中存在TβR-Ⅱ的同种型,而此2例病人临床预后不良.结论:部分白血病病人存在TβR-Ⅱ的同种型,而且该同种型可能与预后有关.
作者：陈萍；陈元仲；吴勇；黄慧芳；李乃农 刊期： 2006年第02期
本研究利用蛋白质组学方法将急性白血病(acute leukemia,AL)细胞与正常白细胞进行差异蛋白质组分析,为AL的分子诊断和白血病发生的分子机制研究奠定基础.利用二维凝胶电泳将40例AL患者的AL细胞和20例正常自愿者淋巴细胞、粒细胞的蛋白质进行分离,利用MALDI-TOF-MS生物质谱和电喷雾串联质谱(ESI-MS/MS)对差异表达的蛋白质进行鉴定分析.结果表明:在AL细胞与正常细胞的差异表达蛋白质中,一些与肿瘤的恶性转化(如Op18和NM23-H1)、细胞增殖(如PCNA)、抑制凋亡(如肿瘤坏死因子抑制蛋白)等相关的蛋白在AL细胞中高表达,而一些与正常白细胞分化和生理功能相关的蛋白质在AL细胞中低表达.结论:AL的发生涉及到众多的细胞事件,一些与恶性转化,细胞增殖和抑制凋亡等相关的蛋白在AL细胞中高表达,蛋白质组学分析为急性白血病发病的分子机理的解析提供了一个新的手段.
作者：崔久嵬；王冠军；李薇；王杰；张学敏 刊期： 2006年第02期
为了了解冻存复苏过程对骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)生物学特性和支持造血能力的影响,采用常规方法分离培养骨髓MSC,将传代后的细胞用含10%二甲亚砜、40%胎牛血清的IMDM细胞冻存液保存在-196℃液氮中,观察短期(4周)和中期(9-15月)复苏后MSC的活性、免疫表型、多向分化能力和支持造血的能力,并同冻存前的MSC进行比较.结果表明:中短期冻存后的MSC的细胞活性分别为(90士3.75)%和(93士2.51)%;冻存后细胞的增殖能力、免疫表型、体外分化为脂肪和骨细胞的能力、支持集落(CFU-GM,CFU-E,CFU-GEMM)的生长作用和冻存前MSC相似.结论:骨髓MSC在液氮中短期和中期保存后,细胞活性略有下降,但是并不影响MSC的增殖、分化和支持造血能力.
作者：赵智刚；唐晓琼；黎纬明；游泳；邹萍 刊期： 2006年第02期
本研究构建人CD14真核表达质粒,建立转基因CD14阳性细胞系,为建立急性单核细胞白血病(M5)导向治疗动物模型提供研究材料.从正常人外周血单个核细胞抽提总RNA,以无RNA酶的DNA酶处理,RT-PCR扩增CD14基因,T-A克隆测序并与GenBank中人CD14的基因序列比较核实.通过双酶切和体外连接法将目的基因克隆至表达载体pcDNA 3.1(+);用Superfect transfection reagent将重组质粒pcDNA 3.1(+)/CD14转染到C57BL/6小鼠黑色素瘤细胞B16,经G418筛选,用流式细胞术检测CD14蛋白的表达情况,初步筛选出CD14阳性的细胞系B16/CD14.结果表明:测序及GenBank中序列比较结果显示扩增到的人CD14基因序列是正确的,酶切结果表明表达质粒构建正确.流式细胞术筛选到2个CD14阳性表达的细胞系B16/CD14(标准CD14-PE阳性细胞百分数分别为25.28%、36.59%,2F9-FITC为25.59%、36.32%).结论:建立了人CD14抗原阳性表达的鼠细胞系B16/CD14,为人M5动物模型的建立及其导向治疗的研究奠定了坚实的基础.
作者：宁铂涛；汤永民；徐妍；陈燕飞；曹江 刊期： 2006年第02期
本研究旨在探讨非清髓异基因外周血造血干细胞移植(NAPBSCT)后造血嵌合体的临床意义.采用FBC(氟达拉宾+白消安+环磷酰胺)±阿糖胞苷(Ara-C)预处理方案,对28例血液病患者进行NAPBSCT,采集供者和受者术前外周血及术后不同时间段的序列血样,用STR-PCR结合聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染色和凝胶成像分析技术半定量方法计算供体细胞嵌合率.结果显示:移植后1月,28例患者中1例移植失败,22例形成完全供者造血嵌合体(CC),5例形成混合造血嵌合体(MC);移植后7天时供者细胞即占优势(74.71%),较中性粒细胞(ANC)和血小板(Plt)的平均恢复时间均明显提前;CC组的aGVHD发生率高于MC组(P＜0.05),两组cGVHD发生率无显著差异(P＞0.05);1例MC患者发生早期移植排斥;CC组和MC组复发率无显著差异(P＞0.05),1例在CC状态下复发.3例MC患者经早期临床干预治疗获得CC和完全缓解.结论:造血嵌合体的动态定量检测对判断早期植入,预测移植物排斥、复发和GVHD,以及指导临床干预治疗具有重要意义.
作者：陈宝安；熊辉霞；丁家华；苏恩本；赵刚；王骏；高冲；孙耘玉；程坚 刊期： 2006年第02期
为了研究氨磷汀治疗特发性血小板减少性紫癜(ITP)的近期疗效,对3例用氨磷汀治疗的特发性血小板减少性紫癜的高龄患者进行了观察.患者的年龄分别为88、75和65岁.治疗方案为氨磷汀400毫克/天,每周连续5天静脉滴注后,休息2天,连用4周.结果表明:治疗4周以后3例患者均出现很好的近期疗效,2例患者血小板数在治疗开始后第1周恢复正常,1例在治疗2周后恢复正常,所有患者在治疗停止4个月后血小板数仍保持在正常水平,不需要激素、丙种球蛋白等其他治疗措施,且未见明显的毒副作用.结论:氨磷汀治疗高龄ITP患者具有良好的近期疗效,提示氨磷汀在ITP治疗方面有着良好的应用前景,但对其长期临床疗效有待进一步研究.
作者：范辉；朱宏丽；姚善谦；卢学春；庄晓萌；杨洋 刊期： 2006年第02期
为了探讨不同的细胞因子组合对脐血单个核细胞体外的扩增作用及扩增后CD49d和CXCR4的变化,将新鲜脐血标本分离的单个核细胞接种于含有不同细胞因子组合的无血清无基质培养体系中培养7天,在0天,7天检测有核细胞数,CD34+细胞数及CD34+CXCR4+,CD34+CD49d+的细胞数和集落形成单位(CFU)数.根据不同细胞因子组合实验分组为:对照组;SF组(SCF+FL);SFT组(SCF+FL+TPO)和SFT6组(SCF+FL+TPO+IL6).结果表明,和对照组相比,SF组合仅能低水平支持脐血造血细胞扩增,加入TPO后即SCF/FL/TPO组合能有效的扩增脐血细胞,但SFT和SFT6两组之间差异却无明显发生(P＞0.05);SF,SFT和SFT6 3组的细胞因子组合均可提高脐血CD34+细胞CD49d,CXCR4的表达,但3组之间差异无显著性(P＞O.05).结论:SF组合可协同扩增人造血细胞,但协同作用较弱;TPO在脐血造血干/祖细胞体外扩增中起重要调节作用,而IL-6作用不显著;SCF/FL/TPO 3种因子组合不仅可促进脐血造血祖细胞的扩增,而且可上调脐血造血细胞CD49d,CXCR4表达.
作者：毛平；许力；莫文健；应逸；许艳丽；林秀梅 刊期： 2006年第02期
为了探讨三氧化二砷(As2O3)对多发性骨髓瘤(MM)患者骨髓基质细胞(BMSC)增殖及其分泌白细胞介素-6(IL-6)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)能力的影响,用体外培养MM患者骨髓的方法获得BMSC.BMSC和MM细胞株CZ-1单独或共同培养,给予不同浓度As2O3(1-20.0 μmol/L)处理,用MTT法检测细胞活性,用ELISA法检测IL-6、VEGF的分泌水平.结果表明:As2O3对CZ-1细胞有生长抑制作用,48小时后细胞生长抑制50%的浓度(IC50)为2.3 μmol/L,但对BMSC的生长无影响;MM患者BMSC高分泌IL-6、VEGF,经As2O3作用后BMSC分泌IL-6、VEGF降低,骨髓瘤细胞和BMSC相互作用导致的过量IL-6、VEGF分泌也可被As2O3抑制,其抑制程度与对照组相比有显著性差异(P＜0.05).结论:As2O3不能抑制BMSC的生长,但可以抑制其分泌IL-6及VEGF.
作者：谭竞；刘霆；朱焕玲；孟文彤；余江 刊期： 2006年第02期
为了解细胞周期蛋白E2(cyclin E2)和存活蛋白(survivin)在急性白血病中基因表达及两者间的相关性,采用逆转录-聚合酶链反应的方法检测了84例成人急性白血病患者(16例复发患者,60例初治患者和8例持续缓解患者)和20例正常人的cyclinE2和survivin mRNA的表达.结果表明:①cyclinE2在急性白血病中表达的阳性率(70.24%)高于对照组(0%);survivin在急性白血病中表达的阳性率(72.62%)高于对照组(30%);②在急性白血病中cyclin E2的表达与survivin的表达呈正相关性,r=0.65;③cyclinE2阳性组缓解率(55.81%)低于cyclinE2阴性组(88.24%),cyclin E2阳性组复发率(41.67%)高于阴性组(20%);复发组cyclin E2表达率在三组中高,持续缓解组cyclin E2表达率在三组中低,④cyclin E2在急性髓系白血病患者表达率(59.32%)低于急性淋巴细胞白血病患者的表达率(96%);与发病时白细胞计数未见有统计学意义的相关.结论:首次证实cyclin E2在急性白血病中有异常表达,且对临床预后有不良影响;cyclin E2在急性白血病中的表达与survivin有正相关,提示cyclin E2在急性白血病中有可能作为一种微小残留病变的检测指标.
作者：王颖；徐世荣；林凤茹；郭晓楠；任金海 刊期： 2006年第02期
microRNA(而RNA)是一组在进化上高度保守、非编码蛋白、参与转录后调节的小分子RNA(19-25核苷酸).为了进一步明确miRNA的加工机制及功能和定量研究miRNA的表达水平,应用液相杂交和Northern blot两种方法检测miR-28在B细胞淋巴瘤细胞系中的表达并进行了比较.结果表明:液相杂交和Northern blot检测miR-28均显出阳性结果,但液相杂交所用的细胞总RNA量(5μg)明显少于Northern b1ot(30μg),液相杂交的条带信号也较Northern blot的强.结论:液相杂交是一种较Northern b1ot更为快速、简便和敏感的检测miR-28的方法.
作者：徐卫；李建勇；陆凤翔 刊期： 2006年第02期
为了探讨小干扰RNA(siRNA)对K562/A02细胞Polo样激酶1(PLK1)基因的抑制作用及其对细胞周期、细胞增殖和耐药性的影响,将构建的针对PLK1 mRNA的siRNA真核质粒,导入K562/A02细胞,用RT-PCR和Western-blot方法分析PLK1基因在转染前后的表达差异;台盼蓝拒染试验检测细胞存活率;流式细胞术(FACS)检测细胞周期和细胞内阿霉素(ADM)的积累量;MTT试验检测细胞对ADM的药物敏感性.结果显示,与对照组相比,转染24和48小时后,siRNA-PLK1质粒转染组的PLK1 mRNA下降(34.7±2.1)%和(56.6±1.5)%,蛋白水平下降(49.9±3.2)%和(62.1±1.7)%;转染24和48小时后,细胞存活率下降了30%和59%;转染48小时后,G2/M期细胞比例提高了2.77倍,同时细胞内ADM积累量显著提高;对ADM药物敏感性的相对率为73.8%.结论:PLK1基因沉默能有效抑制K562/A02细胞生长,使细胞周期停滞在G2/M期,同时使得细胞内ADM积累量提高,对ADM敏感性增强.
作者：刘林；张敏；邹萍；田蕾；刘芳 刊期： 2006年第02期
为了观察大剂量足叶乙甙(VP16)和粒细胞集落刺激因子(G-CSF)在恶性血液病人动员采集自体外周血造血干/祖细胞的有效性和安全性,对10例恶性血液病患者(多发性骨髓瘤6例,非霍奇金淋巴瘤4例),第1天用足叶乙甙1.6g/m2静脉持续滴注10小时,第3天起给予G-CSF 5μg/kg,每日1次,皮下注射,直至采集结束.结果显示:用VP16后平均第11(9-13)天开始外周血造血干/祖细胞单采,获CD34+细胞9.4×106/kg(4.2-17.3×106/kg),每例CD34+细胞＞4.0×106/kg.平均采集次数2.6(1-4)次.1例发生口咽黏膜炎、2例尿道炎、咽喉炎.结论:足叶乙甙1.6g/m2和G-CSF 5μg/kg是恶性血液病动员采集自体干祖细胞的有效安全方案.
作者：陆化；李建勇；葛峥；刘澎；吴雨洁；吴汉新；张晓艳；钱思轩；洪鸣；张闰 刊期： 2006年第02期
中国实验血液学杂志
主管:实验血液学杂志
主办：中国科学技术协会
