权国波；韩颖；刘秀珍；马恩普；刘安；靳鹏；曹伟
为观察P27(Kip1)蛋白在常见白血病患者中的表达,探讨其与白血病类别、染色体异常、临床疗效和预后的关系,用蛋白印迹法加化学发光法对82例初诊或复发白血病患者的骨髓或外周血进行P27(Kip1)蛋白的检测.结果显示,P27(Kip1)在急性淋巴细胞白血病(ALL)中表达高于在急性非淋巴细胞白血病(ANLL)(P=0.033)和慢性粒细胞白血病(CML)(P=0.008)中表达.P27(Kip1)在慢性淋巴细胞白血病(CLL)中表达高于在CML中表达(P=0.017).P27(Kip1)>0.655组首次化疗有效率(CR和PR)高于P27(Kip1)≤0.655组,两者有显著差异(P=0.041).急性白血病患者中,P27(Kip1)>0.655组生存期长于P27(Kip1)≤0.655组,P=0.0065;而且在ANLL(P=0.0271)、ALL(P=0.0266)组中均有显著差异,P27(Kip1)表达高的,生存时间长,P27(Kip1)表达低的,生存时间短.P27(Kip1)表达低似乎与ALL患者多种染色体异常相关(r=-0.775,P=0.04).而P27(Kip1)表达与白血病患者的性别、年龄、外周血白细胞数、原始细胞数、血LDH以及血尿酸水平无明显相关性.结论:P27(Kip1)表达的高低与急性白血病的首次化疗效果、生存时间密切相关,低表达预示着不良预后.
作者：卢瑞南；盛瑞兰；李建勇；朱广荣；丁小建；朱兰兰；苏恩本 刊期： 2004年第03期
为研究和比较人骨髓间充质干细胞(MSC)和脐血单个核细胞在体外的免疫调控能力,从人骨髓分离培养间充质干细胞,用Ficoll分离得到脐血单个核细胞,分别以不同剂量加入到外周血混合淋巴细胞培养体系和植物血凝素(PHA)刺激的外周血淋巴细胞转化体系中,用MTT还原法测定细胞增殖,分别观察MSC和脐血单个核细胞对混合淋巴细胞反应和淋巴细胞转化的影响.结果显示,5×104,1×104MSC以及2×105脐血单个核细胞均抑制混合淋巴细胞反应和PHA诱导的淋巴细胞增殖,而<1×104MSC和<2×105脐血单个核细胞对混合淋巴细胞反应和PHA诱导的淋巴细胞增殖的抑制作用均不明显;5×104MSC对淋巴细胞增殖的抑制能力明显强于2×105脐血单个核细胞.结论:大剂量的骨髓间充质干细胞和脐血单个核细胞在体外对混合淋巴细胞反应和PHA诱导的淋巴细胞转化均具有抑制作用,而且间充质干细胞的抑制能力强于脐血单个核细胞.
作者：魏晓飞；刘开彦 刊期： 2004年第03期
本研究旨在探讨汉防己甲素(tetrandrine,Tet)联合屈洛昔芬(droloxifene,DRL)对耐药细胞系K562/A02的逆转作用与诱导凋亡有无相关性.采用Annexin V/PI法测定耐药调节剂汉防己甲素、屈洛昔芬单独或联合应用后细胞凋亡的情况.结果发现0.62μg/ml汉防己甲素或1.94 μg/ml屈洛昔芬单独作用于K562细胞48小时后均可诱导一定比例的细胞凋亡,作用呈时间依赖性,两者联合应用作用增强.0.62μg/ml汉防己甲素或1.94μg/ml屈洛昔芬单独作用于K562/A02细胞均不能诱导细胞凋亡,两者联合应用72小时可诱导小部分细胞凋亡.结论:汉防己甲素,屈洛昔芬逆转耐药的机理与诱导K562/A02细胞凋亡无关.
作者：周云；陈宝安；董颖；张鹏；程坚；盛茗；王婷；高峰 刊期： 2004年第03期
重组腺病毒作为基因转移的载体已经广泛应用于基因治疗的基础研究和临床试验,但造血细胞由于缺乏腺病毒特异性受体柯萨奇-腺病毒受体(coxsacke virus and adenovirus receptor,CAR)导致转染效率较低,从而限制了腺病毒栽体在造血系统的应用.多种策略可以提高腺病毒转染造血细胞的效率,这些策略包括腺病毒本身的改造、造血细胞CAR表达水平的提高等.本文就这一领域的主要研究进展作一综述.
作者：王莉莎；段海峰；王立生 刊期： 2004年第03期
本研究目的是建立一种简单快速的扩增人外周血γδT细胞的方法,以便用于γδT细胞的生物学特性和临床过继性免疫治疗的研究.取人外周血5-10 ml,分离获取单个核细胞,用结核杆菌低分子多肽抗原(MTb-Ag)刺激细胞增殖,通过荧光单克隆抗体TCRγδ-PE染色及流式细胞仪检测γδT细胞所占比例,用MTT试验检测细胞毒活性.结果表明:MTb-Ag能特异地刺激外周血单个核细胞中的γδT细胞增殖,γδT细胞可达69.2%,对K562细胞具有较高的杀伤活性.结论:本方法是一种简单、快速、特异的体外扩增和获取人外周血γδT细胞的方法.
作者：王克强；侯彦强；李雁 刊期： 2004年第03期
为了探讨三氧化二砷(As2O3)对多发性骨髓瘤(MM)细胞株KM3的作用及其可能机制,用台盼蓝拒染法检测细胞生长抑制率,用光镜、透射电镜观察形态变化,用DNA电泳观察As2O3诱导KM3细胞凋亡,用流式细胞仪检测细胞周期的变化,用TRAP-PCR-ELISA法检测As2O3作用KM3细胞后的端粒酶活性变化,并用半定量RTPCR法检测端粒酶逆转录酶(hTERT mRNA)的表达水平.结果表明:As2O3抑制KM3细胞的生长,具有诱导细胞凋亡的作用;As2O3阻滞细胞于G2期;As2O3可抑制KM3细胞的端粒酶活性和hTERT mRNA的表达,且hTERTmRNA下降趋势与端粒酶活性相一致.结论:端粒酶及其逆转录酶活性的下调可能在As2O3诱导KM3细胞凋亡的过程中起了重要作用.
作者：郭振兴；金洁 刊期： 2004年第03期
多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)细胞的增殖及凋亡受骨髓造血微环境的调节.Notch信号是骨髓中细胞与细胞之间通讯的主要信号通路之一,它对多发性骨髓瘤细胞的调节作用目前并不清楚.本研究旨在阐明Notch信号对多发性骨髓瘤细胞凋亡的调节作用.利用RT-PCR分析多发性骨髓瘤细胞Notch信号分子的表达和采用逆转录病毒介导的基因转移方法将Notch-1胞内区(Intracellular domain of Notch,ICN)转入多发性骨髓瘤细胞株,以建立激活Notch信号的多发性骨髓瘤细胞系;采用台盼蓝拒染和TUNEL方法测定骨髓瘤细胞的死亡.结果表明:RT-PCR检测显示多发性骨髓瘤细胞表达Notch-1及相关分子,逆转录病毒可以介导外源Notch-ICN在骨髓瘤细胞中表达,激活Notch信号可以抑制二甲基鞘氨醇(N,N-dimethylsphingosine,DMS)诱导的多发性骨髓瘤细胞的凋亡.结论:Notch信号对多发性骨髓瘤细胞凋亡有抑制作用,这可能为多发性骨髓瘤的治疗提供新的靶点.
作者：贾向旭；鲁茁壮；王华；段海峰；张群伟；吴祖泽；王立生 刊期： 2004年第03期
为了探索成人多份脐血移植的可行性,对广州市脐血库1998年6月至2003年7月提供的13例非亲缘关系多份脐血移植进行回顾性分析.脐血均采自广州市妇婴医院正常分娩的足月顺产孕妇,脐血分离、冻存、复温方法参照纽约脐血库标准及相关文献;多份移植脐血HLA匹配为1/6-2/6位点不相合.结果表明:1998年6月至2003年7月,广州市脐血库向国内7家移植中心提供非亲缘关系脐血28份,治疗患者13例.受者中位年龄22(8-41)岁,中位体重50(21-75)公斤,28份脐血中TNC总输入量中位数为2.91×107/kg.13例中6例植入(中性粒细胞>5×108/L),植入率为46.1%,植入平均时间为19天.1例患者发生GVHD反应,1例患者发生自体恢复.生存率46.2%(6/13).结论:多份脐血移植具有良好的应用前景.
作者：廖灿；杨昕；许遵鹏；陈劲松；黄以宁；刘斌；吴韶清；辜少玲；李焱；汤雪薇；吴洁莹 刊期： 2004年第03期
为快速地获取高度纯化的纤溶酶-α2抗纤溶酶复合物(plasmin-α2-antiplasmin complex,PAP),对其纯化方法进行了改进.将尿激酶激活的新鲜乏血小板血浆上Lysine-Sepharose 4B亲和层析柱后,以不同成分的洗脱液分步洗脱.结果表明,每100 ml新鲜血浆能获取纯化PAP 3.0 mg,整个纯化过程可在数小时内完成.结论:本方法简单、快速、经济以及得率高.
作者：李建新；周芸；王红；郑佐娅；李稻；王鸿利 刊期： 2004年第03期
为了解急性早幼粒细胞白血病(APL)病人服用硫化砷(As4S4)制剂后的砷吸收及蓄积水平,应用氢化物原子吸收法测定了硫化砷治疗的APL病人血砷、尿砷及发砷含量.结果表明,APL病人服用硫化砷制剂7-9天的血砷水平为51.7±18.7 μg/L(n=41),尿砷水平为2359.1±1910.6μg/L(n=36),尿砷排出量为5.1±4.06mg/d(n=32);服药10-12天的血砷水平为61.7±22.7 μg/L(n=30),尿砷水平为2834.0±1958.3μg/L(n=27),尿砷排出量为6.3±4.98 mg/d(n=24);服药13-15天的血砷水平为62.8±25.1μg/L(n=34),尿砷水平为2859.3±2298.2μg/L(n=32),尿砷排出量为6.82±5.58 mg/d(n=24).停药7-9天的血砷水平为20.7±10.9μg/L(n=31),尿砷水平为525.5±337.1μg/L(n=28),尿砷排出量为1.76±1.3 mg/d(n=17);停药13-15天的血砷水平为16.1±10.1 μg/L(n=34),尿砷水平为207.1±164.5μg/L(n=28),尿砷排出量为0.42±0.27 mg/d(n=22).APL病人服用硫化砷(As4S4)制剂10天以上,血砷、尿砷及尿砷排出量达到稳定浓度,体内砷的吸收与排泄已基本达到平衡.服药期病例尿砷排出量为6.82±5.58 mg/d,则估计服药期APL病例每日吸收砷量为9.74±7.97mg/d,估计无机砷的吸收效率为(0.25±0.20)%.结论:在停药的2周过程中,体内吸收的砷大部分通过尿及其他途径排出体外,但仍有部分砷蓄积于体内,在口服硫化砷制剂治疗APL过程中,血砷浓度、尿砷浓度、尿砷排出量及毛发砷浓度可被认为监测砷吸收及蓄积的可靠指标.
作者：秦效英；李国选；江滨；陆道培 刊期： 2004年第03期
为了探讨脐血造血干细胞在液氮中短期冻存复苏后的效果,分别将各自为8例冻存6个月、1年、2年的脐血干细胞进行复苏,观察造血干细胞活性.有核细胞(NC)计数采用自动血细胞分析仪测定,CD34+细胞采用流式细胞技术测定,用体外造血细胞培养技术分析粒-巨噬细胞集落生成单位(CFU-GM)产率,台盼蓝染色法判断造血细胞存活率.结果表明:脐血造血干细胞在液氮中冻存6个月、1年、2年后解冻,其有核细胞、CD34+细胞、细胞活率、CFU-GM产率在3个不同冻存时间的差异无显著性.结论:脐血干细胞于液氮中短期冻存,其干细胞数量和细胞活性没有明显的变化,冻存效果较好.
作者：何吉；刘晋辉；姜侃；朱发明；严力行 刊期： 2004年第03期
本研究观察白血病和卵巢癌亲代及耐药细胞系中端粒酶活性及细胞外调节蛋白激酶(extracelluar regulated protein kinases ERK)磷酸化蛋白表达水平的变化,探讨端粒酶与ERK在白血病及卵巢癌耐药中的作用.采用MTT法评价白血病和卵巢癌亲代和耐药细胞系对HRT或DDP的敏感性,用流式细胞术分析这两种细胞系间细胞周期分布的差别,用端粒酶重复扩增技术(TRAP)、生物发光分析法定量和定性检测端粒酶活性及用Westernblot检测法检测磷酸化ERK1和ERK2蛋白的表达水平.结果表明:白血病和卵巢癌耐药细胞系处于G0/G1期的细胞比例增加,端粒酶活性和磷酸化ERK1/2蛋白表达水平耐药细胞系较亲代细胞系高.结论:耐药细胞系G0/G1期细胞比例增加可能是细胞产生耐药的一种标志.白血病和卵巢癌细胞系耐药的产生可能与端粒酶活性和磷酸化ERK1/2蛋白表达水平的增高有关.
作者：李登举；张瑶珍；张东华 刊期： 2004年第03期
本研究探讨慢性粒细胞白血病(CML)中变异Ph染色体易位的细胞遗传学特征并比较双色单融合(DC-SF)与双色双融合(DC-DF)bcr/abl探针荧光原位杂交技术(FISH)在变异易位CML中的应用价值.应用常规细胞遗传学方法分析我院42例CML变异Ph易位患者,其中9例进行DC-SF-FISH和11例进行DC-DF-FISH研究.结果表明:在642例Ph阳性CML中变异易位42例(6.5%),简单变异易位42.9%(18/42),复杂变异易位54.8%(23/42),遮蔽的或隐匿的Ph易位1例.除4,6号染色体外,其余染色体均被累及.4种类型变异易位分别出现于至少2个病例中.变异易住伴附加异常15例(35.7%).FISH检测bcr/abl阳性19例(95%),阴性1例.DC-DF-FISH显示除1例患者部分细胞(8.8%)能检测到abl/bcr融合信号外,其他患者皆缺乏该融合信号.但在易位后的9号和参与变异易位的另外染色体上分别可以见到abl和bcr基因信号.DC-SF-FISH不能观察到信号的变异特征.结论:CML变异Ph易住广泛累及除9,22外其他染色体,部分类型属重现性异常;FISH检测能给予精确的分子诊断,而DC-DF-FISH可提供直观的、准确的分子变异特征分析.
作者：刘旭平；刘世和；李承文；薄丽津；秦爽；代芸；钱林生 刊期： 2004年第03期
为了探讨非亲缘HLA相合供者骨髓移植(UD-BMT)治疗骨髓增生异常综合征(MDS)的可行治疗方案和疗效,采用HLA配型相合的非亲缘骨髓移植治疗1例骨髓增生异常综合征-难治性血细胞减少伴多系病态造血(MDS-RCMD)男性患者,31岁.预处理方案为马利兰、环磷酰胺、阿糖胞苷、甲基环己亚硝脲和抗胸腺细胞球蛋白.以霉酚酸酯、环孢菌素A加短疗程的甲氨喋呤预防移植物抗宿主病(GVHD).结果显示,移植后10天中性粒细胞(0.5×109/L,20天血小板升至58×109/L,3个月血红蛋白升至114 g/L,无GVHD发生;移植后无病存活时间已达9个月.结论:非血缘HLA相舍骨髓移植治疗骨髓增生异常综合征是可行而且有效的.
作者：高春记；达万明；张伯龙；韩晓萍；朱海燕；靳海杰；靖彧；黄文荣 刊期： 2004年第03期
通过干细胞因子(SCF)、FLT3配基(FL)联合白介素(IL)2,7,15等的不同组合体系体外扩增人脐血来源的CIK/NK细胞(CB-CIK/NK),探讨不同培养方式对CB-CIK/NK细胞诱导、扩增产率的影响.按诱导扩增体系的不同分3组:A组(SCF+IL2+IL7+IL15),B组(SCF+FL+IL2+IL7+IL15)和C组(IL2+IL7+IL15,对照组),培养21天,检测CD3+CD56+CIK细胞、CD3-CD56+NK细胞比例和扩增倍数.结果表明:经21天培养,A,B及C组CIK细胞比例分别为(19.84±2.93)%、(26.20±4.05)%及(24.03±4.99)%;而NK细胞的比例A、B及C组比例分别为(49.60±1.40)%、(51.16±6.45)%及(30.85±8.12)%.舍SCF+FL的B组扩增效率高,其中CIK细胞的扩增倍数由对照组(C组)的(575.81±221.72)倍增加至(796.09±278.47)倍(高为1 313倍);NK细胞由对照组(C组)的(30.39±14.47)倍增加至(65.85±30.83)倍(高为121.06倍).结论:通过合适的细胞因子组合可以同时扩增CB来源的CIK/NK细胞;联合诱导、扩增CB-CIK/NK细胞以采用含SCF+FL+IL2+IL7+IL15的培养体系为佳.
作者：黎阳；黄绍良；吴燕峰；魏菁；包蓉；周敦华 刊期： 2004年第03期
为探讨川芎嗪对骨髓移植小鼠早期造血重建过程中黏附分子CD44表达水平的影响,将BALB/c小鼠随机分为3组:正常对照组,骨髓移植对照组(简称对照组)和骨髓移植+川芎嗪治疗组(简称川芎嗪组),对照组和川芎嗪组每天分别胃饲生理盐水和川芎嗪.于骨髓移植(BMT)后第7,14,21,28天处死小鼠,计数外周血细胞、骨髓有核细胞,分析骨髓中造血组织面积及成熟红细胞容量,用流式细胞术和免疫组织化学检测骨髓细胞上CD44的表达水平,并于第10天取小鼠脾脏,计数脾集落形成单位.结果显示,骨髓移植后第7,14,21,28天川芎嗪组外周血白细胞、血小板、骨髓有核细胞计数、骨髓中造血组织面积均显著高于移植对照组,外周血红细胞计数在第7,14,21天也较对照组为高;同时,川芎嗪组CFU-S计数明显高于同期移植对照组,骨髓中成熟红细胞容量则显著低于对照组,川芎嗪组CD44的表达在第7,14,21,28天明显高于对照组.结论:川芎嗪可提高骨髓移植小鼠骨髓细胞表面CD44的表达水平,促进造血干/祖细胞的归巢,加速移植后骨髓的造血重建.
作者：罗琳；刘文励；孙汉英；周剑峰；付丽；刘丹；徐慧珍；路武 刊期： 2004年第03期
树突状细胞(DC)是目前发现的功能强的抗原呈递细胞,其在肿瘤免疫临床治疗中的应用受到越来越多的关注.目前,通过各种方法提取肿瘤抗原来冲击致敏DC,再将已培养成熟的DC回输到病人体内,以激发机体产生明确的抗肿瘤免疫应答,已成为有效的临床抗肿瘤治疗手段,也为肿瘤临床继手术切除、放化疗及其它综合治疗后又开辟了一个新的治疗途径.本文就DC的生物学特性、体外培养及其临床应用作一综述.
作者：俞志勇；陈虎；冯凯 刊期： 2004年第03期
本研究旨在探讨曲古菌素A(trichostatin A,TSA)高效低毒的抗癌机理.应用细胞培养、MTT法,免疫细胞化学技术和Annexin-V-FITC/PI双标流式细胞术观察TSA对HL-60细胞和正常人外周血单个核细胞(normal human peripheral blood mononuclear cell,NPBMNC)的生长抑制,组蛋白乙酰化水平以及诱导凋亡的影响.结果表明:TSA能够以时间、剂量依赖性方式抑制HL-60细胞增殖,36小时IC50为100 ng/ml.TSA能够诱导HL-60细胞凋亡,其作用也呈时间、剂量依赖性.TSA在显著诱导HL-60细胞凋亡的浓度和时间范围内对NPBMNC无明显的诱导凋亡作用.TSA处理4小时后,HL-60细胞和NPBMNC组蛋白乙酰化水平上调显著高于未用TSA各组(P<0.05),但两者之间无显著性差异(P>0.05).结论:TSA对HL-60细胞有明确的抑制增殖能力;TSA有明确的诱导HL-60细胞凋亡的能力,这可能是TSA体外抑制白血病细胞系HL-60生长和发挥抗白血病作用的主要机理之一;与NPBMNC相比较,TSA能够选择性诱导HL-60细胞凋亡;TSA选择性抑制HL-60细胞的机理与TSA调控HL-60细胞和NPBMNC组蛋白乙酰化水平的差异无关.
作者：陈维凯；陈燕；谷俊侠；崔国惠 刊期： 2004年第03期
为了探讨羟甲基戊二酸单酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶抑制剂对多发性骨髓瘤(MM)细胞增殖与凋亡的调控作用及机制,应用MTT比色法、光镜形态学观察、流式细胞术、DNA凝胶电泳及RT-PCR研究了美伐他汀(mevastatin)对MM细胞系U266细胞体外增殖与凋亡的影响.结果显示,美伐他汀以剂量及时间依赖方式抑制U266细胞增殖;细胞周期分析显示美伐他汀诱导U266细胞G0-G1期阻滞,但对p27蛋白及mRNA的表达无影响:在美伐他汀作用下U266细胞出现核染色质凝聚、核固缩、核碎裂等凋亡形态改变,PI-AnnexinV+细胞增多,线粒体跨膜电位(△ψm)下降,DNA凝胶电泳出现梯形条带,bcl-2 mRNA表达下调.加入外源性甲羟戊酸(mevalonate,MVA)可完全逆转美伐他汀对U266细胞增殖与凋亡的效应.结论:美伐他汀可通过MVA途径,诱导G0-G1期阻滞抑制增殖、下调bcl-2表达及降低线粒体膜电位触发U266细胞凋亡.
作者：刘泽林；罗建民；董作仁；王福旭；张学军；杨敬慈；杜行严；姚丽 刊期： 2004年第03期
本文概述了反义寡核苷酸作为基因治疗药物的状况,归纳了目前对妨碍反义寡核苷酸作为基因治疗药物取得快速进展的主要因素:反义寡核苷酸作为基因治疗药物的有效性;反义寡核苷酸作为基因治疗药物的毒副作用.从细胞和基因水平详细介绍目前对这些影响因素的分析:①反义寡核苷酸未能有效对靶基因的同源基因的鉴别是导致其毒副作用的主要原因.②靶基因的二、三级结构严重影响反义寡核苷酸达到靶位置.③影响反义寡核苷酸的传送和快速退火的问题.也介绍如何使用电子计算机方法对反义寡核苷酸的靶基因做全面分析,即对靶基因的二级结构和同源性分析,并终设计出反义寡核苷酸,达到降低反义寡核苷酸作为治疗药物的毒副作用,提高治疗的有效性的目的.后归纳出计算机辅助设计的方法.
作者：吴琦玮 刊期： 2004年第03期
中国实验血液学杂志
主管:实验血液学杂志
主办：中国科学技术协会
