李娟；罗绍凯；黄俊琪
在人类的一些肿瘤中已发现存在Gsα基因突变.本研究室在白血病细胞系的研究中发现了Gsα基因的3个缺失突变体以及野生型的Gsα(分别命名为Gsα L-1,500 bp;Gsα L-2,300bp;Gsα L-3,200 bp和Gsα-4,1 200bp),并已在一些急性白血病患者中检测到.为进一步研究这些缺失体的结构、功能和生物学意义,作者将克隆了GsαL-1,GsαL-2和Gsα-4基因的质粒分别转化到大肠杆菌DH5α中,提取DNA,采用特异引物进行PCR扩增,获得相应的目的基因,分别将其克隆到pET22b(+)表达载体上,再转化大肠杆菌进行表达.经培养,取菌体行SDS-PAGE电泳分析.研究结果:3个基因都有相应分子量的蛋白表达,且均以包涵体形式存在.这表明构建的这3个基因确具完整的基因结构,及相应的蛋白表达.本研究为进一步研究它们的功能及其与白血病发生的关系打下了基础.
作者：楼金星；黄君健；司艺玲；李杰之；赵亚力；叶棋浓；黄翠芬 刊期： 2000年第04期
评价大剂量环磷酰胺化疗方案联合G-CSF对乳腺癌患者外周血造血干细胞的动员效果.动员方案为在常规联合化疗方案的基础上,提高环磷酰胺剂量2-4倍,化疗后当外周血WBC降至1.0×10 9/L以下时给予G-CSF,150微克/次,2次/日.在WBC恢复升高至5.0×10 9/L以上时,进行外周血造血干细胞采集.结果共有10例乳癌患者完成了上述方案的外周血造血干细胞动员,WBC降低的中位低值为0.8(0.4-1.0)×10 9/L,造血干细胞的中位采集次数为2(2-3)次;采集的CD34+细胞中位数为6.43(1.99-18.75)×10 6/kg.结论提示,大剂量环磷酰胺化疗方案联合G-CSF是乳癌患者理想的外周血造血干细胞动员方案.
作者：吴世凯；宋三泰；刘晓晴；江泽飞；闫安文；王文虎；于静新；曲怡梅 刊期： 2000年第04期
Rh血型是继ABO血型发现后临床意义大的一个血型,已鉴别的Rh抗原现在总计有40多种,但与临床有关的抗原有5个,即C,c,D,E和e[1].Rh抗体绝大多数为免疫性抗体.
作者：李珍；张沂扬；田华 刊期： 2000年第04期
WT1基因能抑制生长因子和生长因子受体的转录,因此被归类为肿瘤抑制基因,但在人类白血病细胞WT1基因呈高表达,其表达水平与预后呈负相关.WT1基因的反义寡核苷酸可抑制白血病细胞增殖、诱导细胞凋亡;野生型的WT1转染髓系祖细胞后,可使细胞失去受粒细胞集落刺激因子的诱导分化,而代之以持续增殖.这些现象提示,在造血祖细胞WT1基因可能起癌基因的作用.
作者：王嵘 刊期： 2000年第04期
为探索p15INK4B基因在CpG岛高甲基化对白血病发病机制的重要作用,应用敏感的甲基化特异的MSP-PCR的测定方法,测定了p15INK4B基因在急性粒细胞白血病(AML)和慢性粒细胞白血病(CML)中甲基化的表达变化.研究结果表明,p15INK4B基因操纵区在AML和CML中的甲基化发生率分别为83.9%(26/31)和0%(0/28).结论提示:甲基化是p15INK4B基因在AML中主要的失活方式之一,并可在病程进展中出现甲基化,使病情加重;在CML中无甲基化的发生,说明p15INK4B基因的功能在CML中可能是完整的.
作者：郭秀枝；范洪涛；吴穷；周涛；郭秋野；陈鹏；许敏华；张学莉；罗更新；肖扬；梁实 刊期： 2000年第04期
采用RT-PCR,单链构象多态性(SSCP)和核苷序列分析检测85例急性非淋巴细胞白血病(ANLL)病人外周血单个核细胞中GATA-2基因的表达和突变情况.结果发现绝大多数ANLL都表达了GATA-2基因(89.4%),并发现1例M1病人的PCR产物较正常产物大,序列分析显示在GATA-2基因第二锌指区出现18个核苷酸的插入突变,使其GATA-2因子的第二锌指增加6个氨基酸,其中含有1个能与锌离子结合的半胱氨酸.该插入突变可能引起GATA-2的功能改变,该结果为首次发现ANLL中的GATA-2基因的插入突变.
作者：李扬秋；杨力建；陈少华；卢育洪；张洹 刊期： 2000年第04期
为探索p15INK4B和p16INK4A基因在多发性骨髓瘤中的甲基化的表达,采用敏感的甲基化特异的MSP-PCR测定方法,检测了24例多发性骨髓瘤(MM)p15INK4B和p16INK4A基因甲基化的情况.结果显示,MM中p15INK4B和p16INK4A基因甲基化发生率分别为70.8%(17/24)和58.3%(14/24),产物分别为148 bp和150 bp的片段,其中2例Ⅱ期和2例Ⅲ期的有浆细胞瘤的MM患者发生2个基因同时甲基化,有5例2个基因都没有发生甲基化.这5例的瘤细胞均为分化较成熟的小浆细胞.结论提示,p15INK4B和p16INK4A基因甲基化在MM细胞中有一定的发生率,可能与MM发病机制有关.
作者：范洪涛；郭秀枝；吴穷；周涛；谭广销；王绿娅；张学莉；罗更新；许敏华 刊期： 2000年第04期
为了研究Ca2+在VP-16(etoposide)诱导HL-60细胞凋亡中的作用,采用流式细胞术,激光共聚焦显微镜和Western印迹方法进行观察.结果显示,VP-16可诱导HL-60细胞凋亡,并可引起细胞内Ca2+浓度的增加;细胞外钙离子螯合剂EGTA不抑制其诱导的细胞凋亡,而细胞内钙离子螯合剂BAPTA-AM可抑制此过程,并且可抑制细胞色素C的释放.实验结果提示,Ca2+在细胞凋亡和细胞色素C的释放过程中起重要的作用.
作者：石红霞；李莉；袁兰；何其华；王申五；王德炳 刊期： 2000年第04期
急性移植物抗宿主病(aGVHD)是异基因造血干细胞移植的主要并发症,严重限制其应用.细胞因子网络在aGVHD的发病中起重要作用,其作用机制在小鼠模型中已经得到清楚的阐述,而人类aGVHD的发病机制尚需进一步探讨.动态监测移植后血清细胞因子sIL-2R,TNF-α和IFN-γ等的表达或检测移植前细胞因子的基因表达可以对aGVHD进行预测,从而有助于采取针对性的预防措施. GVHD有移植物抗白血病作用(GVL).GVHD和GVL是可分的.细胞因子IL-2,IL-12,IL-11,KGF和G-CSF有降低GVHD保存GVL的作用.
作者：居小萍；王健民 刊期： 2000年第04期
本研究应用RevTet-On基因表达系统,通过四环素衍生物强力霉素(doxcycline,Dox)调控血小板生成素(TPO)基因在NIH3T3细胞中的表达.首先应用基因重组技术构建含TPO基因的重组质粒pRevTRE/TPO,然后将RevTet-On基因调控系统的pRevTet-On和pRevTRE/TPO分别转染PT67细胞,从而包装RevTet-On和RevTRE/TPO重组逆转录病毒,同时将此两种病毒感染NIH3T3细胞,建立整合入RevTet-On和RevTRE/TPO逆转录病毒的阳性细胞株(RevTet-On3T3/TPO).通过Dox调节TPO基因在此细胞株中表达,培养基中加入2 mg/L Dox或不加Dox,然后用RT-PCR,Western印迹和ELISA方法检测TPO基因表达情况.结果发现,RevTet-On3T3/TPO当培养基中不加Dox时用RT-PCR和Western印迹检测未见TPO表达,用ELISA检测表达TPO量低;在培养基中加入Dox时,RT-PCR和Western印迹检测可见TPO表达,且TPO表达量高,为不加Dox时的91倍.本实验表明,通过建立逆转录病毒整合的NIH3T3细胞株,利用四环素及其衍生物Dox调节TPO基因的表达,为TPO基因治疗的进行提供了有用的工具.
作者：魏旭东；伏爽；藏维平；武莎莎；王申五；王德炳 刊期： 2000年第04期
为了探讨人胎盘无细胞悬液对骨髓造血干/祖细胞的体外扩增作用及与已知的几种细胞因子进行比较,用人胎盘无细胞悬液及IL-3,GM-CSF,IL-3+IL-6+GM-CSF+EPO作为刺激因子,并应用甲基纤维素半固体培养体系对骨髓GM-CFU,GM-GEMM和BFU-E进行了培养和比较.研究结果表明,人胎盘无细胞悬液对骨髓CFU-GM,CFU-GEMM和BFU-E体外扩增适蛋白浓度是200-300μgL,人胎盘无细胞悬液作刺激因子对骨髓造血干/祖细胞的体外扩增效果优于单独IL-3,单独GM-CSF和IL-3+IL-6+GM-CSF+EPO组.结论提示,人胎盘无细胞悬液可能含有多种细胞因子,用人胎盘无细胞悬液作扩增剂体外扩增骨髓造血干/祖细胞细胞具有有效而价廉的特点.
作者：李娟；罗绍凯；黄俊琪 刊期： 2000年第04期
1989年Brown等[1]报道吲哚美辛(indomethacin,IN,消炎痛)具有抗白血病作用.我们近的研究表明,IN能诱导K562细胞及原代培养的慢性粒细胞白血病(CML)细胞凋亡,并阻止细胞周期进行[2].有关IN对K562细胞增殖的影响,国内目前未见报道.本实验较系统地观察了IN对K562细胞增殖及bcr/abl融合基因表达的影响.
作者：涂传清；张广森 刊期： 2000年第04期
采用一组系列相关单克隆抗体和流式细胞术间接免疫荧光法分析85例初治儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)患者的免疫表型,观察儿童ALL髓系抗原表达及其与临床和生物学特性的关系.研究结果表明,儿童ALL髓系抗原阳性率达21.2%,以CD13和CD33阳性常见.T系ALL与B系ALL上髓系抗原表达无差异(P＞0.75).T/B混合ALL中髓系抗原表达率较高(7例中3例阳性).ALL-L2与ALL-L1髓系抗原表达无差异(P＞0.05);髓系抗原阳性ALL与髓系抗原阴性ALL临床生物学特征、染色体数量及其结构变化均无差异(P＞0.25);髓系抗原阳性病例完全缓解(CR)率低于阴性病例,1年内复发率高于阴性病例,但均无差异(P＞0.05).结论提示,儿童ALL髓系抗原表达与治疗缓解率无关;T/B混合ALL的髓系抗原的表达较高,且预后不良.
作者：张学兰；钱建新；李建勇 刊期： 2000年第04期
为探讨高三尖杉酯碱(homoharringtonine,HHT)抗慢性髓细胞白血病(CML)的机制,以CML细胞系K562细胞为对象,应用Annexin V-PI双标志和Western印迹杂交技术,观察HHT对细胞凋亡和P210bcr/abl癌蛋白的影响.结果表明,5-20 ng/ml浓度的HHT可诱导K562细胞凋亡,但随着药物浓度的增加细胞出现坏死性死亡;HHT可使细胞内融合蛋白P210bcr/abl的含量约减少70%,而对正常存在于细胞内的P145c-abl无影响.上述结果证实,HHT通过对P210bcr/abl的定向抑制作用促进CML细胞凋亡,这可能是其抗CML的分子机制.本研究为HHT在临床上的进一步应用提供了实验基础.
作者：王恒湘；郭子宽；纪树荃 刊期： 2000年第04期
用流式细胞术计数脐带血,外周血及其采集物中的CD34+细胞数已被普遍采用.然而,不同实验之间的CD34+细胞计数差异非常大.本文就影响结果的主要因素,目前国际上采用的标准化方案和不同方案之间的比较进行综述.我们实验室应用ProCOUNT试剂盒检测了45例脐带血,12份正常骨髓和4例外周血采集物中的CD34+细胞的数量,结果表明ProCOUNT为标准化程度较高的方法,有利于减少不同实验之间CD34+细胞计数的差异.
作者：刘艳荣；陈珊珊；于弘 刊期： 2000年第04期
树突状细胞(dendritic cells,DCs)作为专职的抗原递呈细胞,已被广泛地应用于临床的肿瘤疫苗治疗.目前的临床方案大多为分次给病人注射＞10 6个细胞/次,不同批次培养的DCs,连续4-6周.为了提高疗效,简化治疗程序及规范疗程,有必要将DCs低温保存,使患者在治疗过程中得到同批次的培养的DCs.本实验从患者外周血采取单个核细胞,经细胞淘洗分离单核细胞,在800 U/ml GM-CSF+100 ng/ml IL-13的培养条件下,将单核细胞于Teflon疏水袋中诱导产生DCs.将DCs以-1℃梯度降温及不控温两种方式将DCs冻存于-80℃及液氮中.1个月后,42℃快速复温.检测其免疫表型(CD1a,CD14,CD40,CD80,CD83,CD86,CD54,CD58,CD16,CD32,CD64,HLA-DR)及其对自体及异体淋巴细胞的刺激作用.结果表明,2种方式的低温保存及复温过程不改变DCs的免疫表型及对淋巴细胞的刺激功能.结论:应用Teflon袋,能够从外周血单核细胞中诱导出大批量的DCs,这些DCs可被低温保存而不改变其功能,为其l临床应用奠定了基础.
作者：曹华；VERG Véronique；MARTINACHE Chantal；LEON Anne；GORIN Norbert-Claude；BERNARD Jacky；LOPEZ Manuel 刊期： 2000年第04期
为了探讨三氧化二砷(As2O3)对骨髓增生异常综合征(MDS)粒单系细胞的体外作用,用半固体、液体培养及APAAP法检测不同浓度As2O3对24例MDS患者CFU-GM和CD33,CD15,bcl-2表达的影响.结果发现,AS2O3随着浓度的增加对CFU-GM的抑制作用增强;0.388 μmol/L时对丛的抑制大于集落,其中低危组70.78%对34.05%,高危组86.76%对65.86%(P＜0.01);0.194 μmol/L时使低危组丛减少,而使集落增加,高危组丛减少,集落不变.高浓度(1.94 μmol/L)时CD33与CD15表达降低,bcl-2表达减少,细胞出现核染色质固缩,胞浆浓缩;低浓度(0.194μmol/L)时低危组CD33减少,CD15增加,高危组CD33减少,CD15不变,bcl-2减少,且出现上述细胞形态学改变.由上述结果推测,高浓度As2O3抑制MDS粒单系造血,促使粒单系细胞凋亡;低浓度诱导低危组粒单系细胞增殖分化,抑制高危组粒单系细胞生长,促使粒单系细胞凋亡.
作者：刘艳艳；翟亚萍；侯凤喜；席雨人；张东升 刊期： 2000年第04期
为探讨rhGM-CSF对VP-16诱导的HL-60细胞凋亡的影响,我们观察了预先应用rhGM-CSF孵育的HL-60细胞由VP-16诱导的凋亡过程及凋亡相关基因bcl-2和fas的表达变化.应用光学显微镜和电子显微镜观察细胞形态和超微结构的变化,凝胶电泳检测DNA的碎片,流式细胞术检测细胞凋亡率、bcl-2和fas的表达.实验结果显示,rhGM-CSF可抑制VP-16诱导的HL-60细胞的凋亡,它加强了VP-16对bcl-2表达的下调作用,抑制了VP-16对fas表达的上调作用.由此推测,rhGM-CSF可能是通过下调fas表达降低HL-60细胞对VP-16的敏感性.
作者：刘复强；靳新强；杨敏；杨凌；王津津；吴轶苹；翟艳苓；刘元波 刊期： 2000年第04期
逆转录病毒载体被广泛用作对造血细胞进行基因转移的工具,转导方法的改进有赖于应用可快速分析并被高效选择的基因标志.为此,我们克隆了增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因,并构建可表达EGFP的逆转录病毒载体LGSN,通过脂质体转染和交互感染方法建立高滴度的逆转录产病毒细胞,用以分析对造血细胞标记EGFP基因的可行性.流式细胞术和荧光显微镜检测发现,EGFP病毒转录的GP+envAm12细胞和K562细胞均可发出稳定的绿色荧光信号,阳性率可分别达97%和86%;聚合酶链反应分析显示LGSN转导细胞内有原病毒的整合.上述结果提示,作为新一代选择性标志,EGFP是适于研究对造血细胞基因转移与表达的报告基因,对促进人类基因治疗的研究有重要意义.
作者：傅建新；王玮；卢大儒；岑建农；陈子兴 刊期： 2000年第04期
中国实验血液学杂志
主管:实验血液学杂志
主办：中国科学技术协会
