汪洪；张翼；刘彦隆；李校堃；杨树林
目的构建人谷草转氨酶（AST）高效重组表达体系。方法优化编码人 AST的核苷酸密码子，合成人 AST新的基因，并将其克隆至 pRSF-Duet表达载体中，转化大肠杆菌 BL21，以异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导蛋白的表达，并通过改变诱导剂浓度、振摇速度及诱导温度优化表达条件，以产生可溶性蛋白。可溶性蛋白经镍离子柱亲和层析及分子筛层析纯化，以 SDS-PAGE电泳及蛋白质免疫印迹鉴定蛋白的性质，对重组蛋白的活性及在血清基质中的稳定性进行检测。结果经过优化的 AST密码子在大肠杆菌中的使用频率均在10%以上；重组蛋白存在于上清和沉淀中，经表达优化，在 IPTG终浓度为2 mmol/L、25℃、150 r/min振摇8 h诱导条件下，可增加可溶性蛋白的产率，纯化后的目的蛋白经电泳及免疫印迹鉴定为谷草转氨酶，活性可达136000 U/L，且在含有蛋白酶抑制剂的血清中稳定存在。结论通过密码子优化，成功构建了重组 AST的高效表达系统，重组蛋白可以达到作为参考物质原料的要求。
作者：王玉梅；徐超；刘艳；高尚先 刊期： 2014年第05期
近年，知识产权，特别是专利在促进我国医药生物技术研发和产业发展中的作用越来越大。随着我国国家知识产权战略的逐步推进，医药企业实现由仿制向自主创新的模式转变将成为大势所趋。为了能及时有效地保护科研人员的智力成果，申请专利是佳选择。为了帮助广大医药工作者进一步了解医药及生物领域知识产权保护的政策和法律法规，提高发明专利申请文件的质量，了解专利局的审查实践，更好地做好专利申请工作。我刊特邀了国家知识产权局专利局专利审查协作北京中心相关专家撰写了系列讲座，希望能够对医药企业，科研院所的相关工作人员提供一定的帮助。
作者：张秀丽；邢维玲 刊期： 2014年第05期
协会转化医学平台线上服务平台将于10月开通。为了做好协会转化医学平台的工作，9月17日我会信息服务部张雯同志陪同吴朝晖秘书长专程赴医科院药物研究所进行调研，就如何开展项目转化工作与开发处程永浩处长交流了意见。程处长表示转化医学平台是协会利用行业优势，为会员和行业服务的一个非常好的平台，有助于推动我国医药生物技术成果的研发、转化和应用，但转化工作专业性强，建议协会成立一个转化医学的专家团队，并表示药物所愿意与协会合作，共同推动平台的发展。
作者： 刊期： 2014年第05期
紫杉醇主要来源于红豆杉，作为一种“重磅炸弹”式的抗肿瘤药物，自1992年12月被美国 FDA批准上市以来，一直是销售额大的植物抗肿瘤药。但由于紫杉醇的天然含量极低，约占含量高的树皮部位的万分之二，加之红豆杉生长缓慢，早期从野生红豆杉中获取紫杉醇曾给红豆杉资源造成毁灭性破坏。目前主要依靠化学半合成或苗圃栽培手段制取。苗圃栽培虽然对保护野生红豆杉资源具有积极意义，但栽培红豆杉中紫杉醇含量低微的本质没有发生改变。另一方面，红豆杉中存在着大量的紫杉醇结构类似物，其中包括含量数十倍于紫杉醇的7-木糖-10-去乙酰紫杉醇，而后者在脱除木糖基之后形成的10-去乙酰紫杉醇仅需在 C10位乙酰化即可产生紫杉醇[1]。如能将这类副产物转变成紫杉醇，不仅可以减少其对环境的污染，还可以“变废为宝”，大大提高红豆杉资源的利用率。脱除木糖基可用化学法或生物酶法来完成，其中后者的专一性强、环境友好。但由于天然细胞中β-木糖苷酶的酶量普遍偏低，用筛选得到的微生物直接进行转化效率不高[2-3]，本实验室已尝试用基因工程方法解决这一问题。我们已从具有转化7-木糖-10-去乙酰紫杉醇为10-去乙酰紫杉醇能力的真菌香菇中克隆得到了7-木糖紫杉烷糖基水解酶 LXYL-P1-2，该酶隶属于糖基水解酶的第3家族，是一种全新的和双功能的β-木糖苷酶和β-葡萄糖苷酶，能高效且专一性地水解包括7-木糖-10-去乙酰紫杉醇在内的7-木糖紫杉烷的木糖基，生成相应的7-羟基紫杉烷。已对该酶及其重组菌开展了酶的表征、高密度发酵与生物催化等研究[4-6]。本文报告工程酵母细胞高压破碎条件、蛋白低温保藏和去糖基化处理对 LXYL-P1-2酶活性的影响，为利用纯化的重组酶进行酶结构与功能关系等的研究提供保障。
作者：陈天娇；朱平 刊期： 2014年第05期
免疫细胞治疗又称细胞免疫治疗或细胞过继免疫治疗，近年来发展迅速，被誉为继手术、化疗、放疗后第四种有前景的肿瘤治疗方法，其临床研究在国外非常活跃，某些种类的免疫细胞治疗也已经获得临床应用。但我国对免疫细胞治疗的管理尚不明晰，对我国免疫细胞治疗的发展非常不利，甚至给患者带来安全隐患。中国医药生物技术协会会同所属生物技术临床应用专业委员会首次将我国免疫细胞治疗调研结果公布，并在参考国际管理经验基础上对我国相关部门对免疫细胞治疗的管理提出对策，以期起到抛砖引玉的作用，为科学规范此项治疗建言献策。
作者：胡泽斌；吴朝晖；任秀宝；高尚先 刊期： 2014年第05期
丙型肝炎呈世界性分布，各国丙型肝炎病毒（HCV）感染率为0.1%~10%，平均为3%，1.7亿~2亿人感染了 HCV。我国一般人群 HCV感染率为3.2%[1]。成人感染 HCV后，50%~80%发展成慢性肝炎，其中约20%可发展为肝硬化。肝硬化患者中，每年1%~4%可发展为肝癌[2]。由于目前对丙型肝炎已有有效的治疗方法，因此对 HCV感染者的病毒检测，既有利于控制丙肝的传播和预防，又有利于丙肝患者的治疗。
作者：申爽；奉淼 刊期： 2014年第05期
8月29日上午，由我会主办、北京清大天一科技有限公司协办的新版药典细胞培养基有关标准研讨会在北京飞天大厦举行。
作者： 刊期： 2014年第05期
结直肠癌发病率和病死率在国内外有逐年上升趋势。世界范围内，每年约有120万新发和60万死亡病例[1]。在我国，结直肠癌的发病率现在年平均增长4%，估计每年有40万新发病例。2004-2005年全国第三次死因回顾抽样调查显示，结直肠癌占恶性肿瘤死亡原因第五位，死亡率达到7.42/10万[2]。手术后的复发和转移是导致治疗失败的主要原因，传统的放、化疗效率低，毒副作用大，远远不能满足临床需求。近半个世纪，结直肠癌的治疗方式已经从单纯的手术切除转向由手术治疗为主，放、化疗和生物治疗等为辅助治疗手段的多学科联合治疗[3]。
作者：高旭；刘佐军；李晓滨 刊期： 2014年第05期
8月19日，北京市计算中心培训事业部王忠林经理一行来到协会，与协会吴朝晖秘书长、杂志社田春英和会展与咨询部田洪鉴进行了会谈。北京市计算中心是北京市计划委员会、北京市科教组批复成立的一所科研服务型事业单位。据介绍，近年来计算中心的业务向高性能计算和云计算领域发展，其中生物计算服务也是其为企业、科研院所等提供相应的计算服务之一，计算中心与我会人员商讨了共同举办生物信息技术类培训的合作，旨在为生物技术从业人员提供实验数据信息处理的技术培训。
作者： 刊期： 2014年第05期
为指导各地做好埃博拉出血热疫情防控和医疗救治准备工作，国家卫生计生委印发了《埃博拉出血热相关病例诊断和处置路径》。规定了留观病例、疑似病例和确诊病例的判别标准，还规定了相关病例管理办法。详情请登录国家卫生和计划生育委员会网站 http：//www.nhfpc.gov.cn/yzygj/s3593g/201408/1839a9d5a3734d43812549a016b462a6.shtml查阅。
作者： 刊期： 2014年第05期
8月9日，我会组织专家赴内蒙对兰州民海生物工程有限公司位于海拉尔的牛血清采血点进行了现场检查。此前，专家组已完成对兰州民海生物工程有限公司牛血清生产现场检查和产品抽样，本次主要对其牛血清采血点进行了认真检查，专家组将对本次采血点的检查、前期牛血清生产现场检查和样品抽样结果进行综合，得出牛血清生产质量复查的结论。
作者： 刊期： 2014年第05期
进入21世纪，我国社会经济快速发展，医学科研投入大幅增加，人们对科研产出的预期增大，使得医学科研人员压力增大，加之不良社会风气和浮躁心态作祟，导致科研不端行为时有发生。近年来国内外在呼吁加强科学共同体科研诚信自律的同时，有关部门也相继制定了科研诚信守则或行为规范，对推动诚信建设起到了重要作用。为引导卫生计生领域广大医学科研人员提高诚信意识，遵守诚信原则，养成良好科研行为习惯，国家卫生计生委组织制订了《医学科研诚信和相关行为规范》（以下简称《规范》），以加强卫生计生领域的医学科研诚信行为规范和监管体制建设。
作者： 刊期： 2014年第05期
《国家中长期科学和技术发展规划纲要（2006-2020年）》和《中共中央国务院关于深化科技体制改革，加快国家创新体系建设的意见》颁布以来，我国科技投入持续大幅度增长，多渠道、多方向的投入体系初步建立。但是，由于科技管理方式与快速增长的科研资金还不完全适应，科研项目和资金管理方面还存在一些问题：各类科技计划项目安排分散重复、科技资源配置效率不高；管理不够科学透明；资金使用合规性和效益亟待提高。要切实解决这些问题，唯有以项目和资金管理改革作为突破口，双管齐下，深化改革，创新体制机制。
作者： 刊期： 2014年第05期
重组蛋白产品，即通过 DNA重组技术使目的基因在相应宿主细胞中表达所获得的蛋白产品。其中，E.coli 源的占42%，酵母源的占21%，中国仓鼠卵巢（Chinese hamster overy，CHO）细胞源的占29%。而在与治疗和预防相关的重组蛋白中，CHO细胞源的已近70%[1]。
作者：刘娜；袁宝珠 刊期： 2014年第05期
目的从抗病毒角度探讨西多福韦对宫颈癌细胞 CaSki内人乳头瘤病毒16（HPV16）的抑制作用及对细胞周期的影响。方法用 MTT法检测西多福韦对细胞的毒性；用实时定量 PCR法检测其对病毒 E6、E7 mRNA水平的影响；用 Western blot方法检测其对病毒蛋白 E6、E7和细胞抑癌蛋白 p53、pRb表达水平的影响；用流式细胞法检测其对宫颈癌细胞周期的影响。结果西多福韦对宫颈癌细胞毒性较正常细胞大。可使HPV16阳性宫颈癌细胞 CaSki内 E6、E7 mRNA和蛋白水平降低，大抑制率分别为（33.38±8.00）%、（28.32±2.73）%和98.92%、97.46%；可以使 p53、pRb蛋白水平升高，大浓度时可以上调12.06和3.53倍；对 HPV16阴性宫颈癌细胞 C-33A p53蛋白表达无影响，但可提高 pRb蛋白水平；可导致 CaSki和 C-33A细胞发生 S期阻滞，高浓度组细胞相对对照组 S期分别增加22.83%和67.64%。结论西多福韦可以在对细胞无毒的浓度下，抑制宫颈癌细胞内的 HPV16，诱导宫颈癌细胞发生 S期阻滞。
作者：韩芳；陆巧妮；徐力昆；窦媛媛；李玉环 刊期： 2014年第05期
为加强埃博拉出血热医院感染预防与控制准备工作，国家卫生与计划生育委员会组织制定了《埃博拉出血热医院感染预防与控制技术指南（第一版）》。对埃博拉出血热防控和埃博拉出血热患者及密切接触者的管理提出了要求。
作者： 刊期： 2014年第05期
目的建立以胰岛新生相关蛋白启动子为靶点的高通量筛选模型，用于胰岛新生相关蛋白基因表达上调剂的筛选。方法以叙利亚金黄地鼠基因组 DNA为模板扩增胰岛新生相关蛋白核心启动子序列，克隆至 pGL4.17质粒载体构建重组质粒。采用脂质体介导的方法将重组质粒和内参质粒 pRL-TK共转染金黄地鼠胰岛β细胞 HIT-T15，双荧光素酶报告基因系统检测荧光素酶的表达活性。对瞬时转染条件进行优化，以豆蔻酸-佛波醇-乙酸酯作为阳性对照来评价模型的有效性，并利用该细胞模型对本研究所的化合物库进行筛选。结果构建了重组荧光素酶报告基因质粒 pGL4.17-INGAP，并成功转染 HIT-T15细胞株。对模型进行优化后，应用阳性对照对其进行评价，Z'因子为0.57，适用于进行高通量筛选。用该模型筛选了本所化合物库，其中白藜芦醇显示出较好的上调作用，EC50为1.6μg/ml。结论成功建立了以胰岛新生相关蛋白启动子为靶点的基因表达上调剂筛选模型。
作者：张许萌；王林林；任浩；何琪杨；陈汝贤；解云英 刊期： 2014年第05期
纳米材料由于其极小的尺寸，拥有许多常规材料所不具备的优良特性，如光学性能、电磁学性能、热力学性能、量子力学性能等，使其在诸多领域尤其是在生物医学领域具有广阔的应用前景。生物医用无机纳米颗粒是指纳米级的无机纳米核分散于溶剂中所形成的胶体分散系统。无机核的组成包括贵金属（如 Au、Ag、Pt、Pb等），半导体材料（如 CdSe、CdS、ZnS、TiO2、PbS等），磁性材料（如 Fe2O3或 Co纳米颗粒）以及复合材料（如 FePt、CoPt等）。依据其组成材料的不同，纳米颗粒可具有一系列独特性质，诸如高电子密度、强光学吸收性质、磷光或荧光性质及具有磁矩等。
作者：杨冬 刊期： 2014年第05期
目的分离珍稀濒危兰科药用铁皮石斛谷氨酸脱羧酶（GAD）基因并进行生物信息学和表达分析。方法采用 RT-PCR和 RACE技术获基因 cDNA全长；利用生物信息学软件分析蛋白理化性质、结构域和三维建模等分子特性；用 DNASTAR 6.0和 MEGA 4.0分别进行氨基酸多序列比对和进化树分析；借助实时定量 PCR检测基因表达。结果分离到DoGAD基因，cDNA全长1795 bp，编码一条由498个氨基酸组成的多肽，分子量55.90 kD，等电点5.32；DoGAD蛋白不含跨膜域或信号肽，具有谷氨酸脱羧酶和磷酸吡哆醛依赖的脱羧酶结构域（17-443、37-381）；DoGAD与植物 GADs蛋白一致性为69.5%~78.8%，隶属于 GADs分子进化树的植物类群；DoGAD转录本在石斛叶和茎中相对表达量较高，分别为根中的5.16和3.92倍。结论成功克隆得到铁皮石斛谷氨酸脱羧酶基因全长， DoGAD 的表达特征暗示其可能在铁皮石斛叶和茎中发挥重要的调控作用。
作者：张岗；胡本祥；李依民；张大为；郭顺星 刊期： 2014年第05期
2013年年底到2014年9月期间，协会组织中国食品药品检定研究院等有关单位专家对内蒙古金源康生物工程有限公司、内蒙古维克生生物科技有限公司、呼和浩特市草原绿野生物工程材料有限公司、兰州民海生物工程有限公司、兰州荣晔生物科技有限责任公司五家牛血清生产企业进行牛血清生产企业生产质量复查。按照《全国牛血清生产企业达标手册》的规定，专家对企业的牛血清生产现场、牛血清采血点进行了科学严谨的现场检查、并抽取生产样品送往中检院进行检测。专家也对企业提出了意见，企业根据意见进行了整改并提交了整改报告。五家企业均达到了复查通过的标准，经我会理事长办公会讨论、同意对其颁发《牛血清生产企业达标证书》。
作者： 刊期： 2014年第05期
中国医药生物技术杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中国医药生物技术协会
