邓卓霞；王勇利；杜海军；司勇锋；兰桂萍；孙金杰；杨涌；韩星
目的 为了更加直观地观察腺病毒(Adenovirus,Ad)与细胞之间的相互作用,本研究拟构建一株经绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Protein,GFP)标记(pⅨ)蛋白的5型重组腺病毒(Ad5-IXGFP).方法 我们将GFP基因构建至腺病毒穿梭质粒pShuttle中Ⅸ基因3'端,通过与骨架质粒pAdeasy-1在E.coli BJ5183细菌内的同源重组,获得了重组腺病毒质粒pAd5-IXGFP.将pAd5-IXGFP质粒经Pac Ⅰ酶切线性化后转染293细胞,拯救出重组腺病毒Ad5-IXGFP.结果 经扩增和超速离心纯化后可获得浓度为6.9×1011 vp/ml的重组腺病毒.该病毒于4℃与HEp-2细胞孵育后,重组病毒吸附于HEp-2细胞表面,用荧光显微镜观察,可见绿色荧光.结论 利用反向遗传学技术对重组腺病毒外壳蛋白pⅨ进行修饰,成功制备的经GFP标记的重组腺病毒可用于实时动态追踪腺病毒颗粒感染细胞的过程.
作者：邹小辉；郭小娟；王敏；屈建国；鲁茁壮；洪涛 刊期： 2016年第02期
目的 通过分析2012-2015上海地区成年人甲型H3N2流感病毒的分子流行病学及HA抗原漂变情况,从而了解甲型H3N2流感病毒分子流行及变异变迁规律.方法 采集2012-2015年间上海地区三家哨点医院流感样成人病例的呼吸道标本,收集临床资料.提取标本核酸后用实时荧光PCR检测流感病毒,对甲型流感病毒阳性的标本进一步进行基因分型.对H3N2阳性标本扩增血凝素(HA)基因片段、测序和进行基因变异分析.结果 总共收集2 346例病例,甲型流感病毒核酸检测阳性病例331例,其中273例为H3 N2流感病毒阳性,58例为2009 pdmH1N1流感病毒阳性.2012年-2015年期间,上海地区H3N2流感病毒在每年的冬春季流行,但在2014年和2015年均呈现夏季流行高峰.对2012年-2015年间获得的上海地区180个H3N2流感病毒的HA基因全长序列进行系统进化树分析发现:2012-2015年间H3N2流感病毒总共引起了3个主要的流感流行峰,分别是2013年12月-2014年1月、2014年7-8月和2015年7-8月,且分别属于三个不同的基因簇:A/Finland/385/2013类似株,为group 3C.3b;A/Switzerland/9715293/2013类似株(SW13),为group 3C.3a和A/Hong Kong/5783/2014类似株(HK14),group 3C.2a分支.比较3个流行峰的甲型H3 N2流感病毒,发现血凝素蛋白氨基酸序列存在一定差异,主要分布于抗原表位和受体结合位点(RBS).结论 2012-2015年间,上海地区流行的H3N2流感病毒出现明显的2次抗原漂变,可能是导致上海地区近年来H3N2流感流行的原因.
作者：夏益兰；张万菊；田棣；代发辉；宋志刚；冯净净；揭志军；杨天芸；郭雪君 刊期： 2016年第02期
目的 探索实验室高通量检测前临床样本中病毒核酸特异性纯化富集的方法.方法 以负链RNA病毒发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)为模拟样本,针对病毒基因组S、M和L三个片段设计杂交探针,并进行5'端生物素修饰,与链霉亲和素修饰磁珠共价结合,纯化样本中SFTSV核酸,比较研究特异性纯化富集对样本二代测序效果的影响.结果 cDNA文库制备时全转录组扩增前或后进行特异性富集纯化均较不开展富集纯化有显著改善,有效数据比例分别为5.57％、6.39％、2.71％,差别具有显著性(x2=9 799.8,P＜0.001).对全转录组扩增前或后进行特异性富集纯化对测序结果进行比较分析时发现,扩增后进行纯化优于扩增前(P＜0.001).结论 基于核酸杂交的病毒基因组特异性富集纯化方法可有效降低二代测序中背景值,提高测序效率,具有高通量检测前特异性纯化富集样本的作用.
作者：王利静；刘林；李建东；李伟红；张硕；梁米芳；李德新 刊期： 2016年第02期
目的 检测经典Wnt/β-catenin信号通路在朊病毒感染的细胞模型SMB-S15中的功能状态.方法 运用real time-PCR方法检测了朊病毒感染的细胞模型SMB-S15中,经典Wnt/β-catenin信号通路调控的靶基因mRNA表达水平;应用Western Blot方法检测稳定感染羊瘙痒因子Chandler株的小鼠神经细胞系SMB-S15中经典Wnt/β-catenin信号通路的相关调控蛋白及靶蛋白的表达.结果 与磷酸戊聚糖治愈的细胞对照SMB-PS相比,SMB-S15细胞中经典Wnt信号通路的靶基因cyclin D1、c-myc、survivin转录水平均有显著下调.经典Wnt信号通路的调控蛋白中,磷酸化p-catenin (Ser33,37,Thr41)表达明显上调,且其靶基因cyclin D1的蛋白表达明显下调,失活形式磷酸化糖原合成激酶(GSK-3β Ser9)表达明显下调.结论 在朊病毒感染的细胞模型SMB-S15中经典Wnt/β-catenin信号通路被抑制.
作者：孙静；王晶；陈利娜；杨晓东；肖康；陈操；田婵；石琦；董小平 刊期： 2016年第02期
目的 研究安徽阜阳2013年冬季手足几病患儿合并其他病毒感染情况.方法 根据手足口病病例诊断标准诊断收集2013年11月-2013年12月安徽阜阳手足口病住院病例及资料,采集患儿血清.使用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测血清标本中的细小病毒B19、I型单纯疱疹病毒、巨细胞病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的IgM抗体.整理分析患儿合并病毒感染情况.结果 2013年11月-2013年12月45份手足口病患儿血清腺病毒IgM阳性30例(67.7％),呼吸道合胞病毒IgM阳性8例(17.8％),细小病毒B19 IgM阳性8例(17.8％),巨细胞病毒IgM阳性3例(6.7％),单纯疱疹病毒IgM阳性l例(2.2％),血清中未检测出现副流感病毒IgM抗体.同时发现多例合并两种以上病毒IgM阳性现象.结论 2013年阜阳地区冬季手足口病合并腺病毒、呼吸道合胞病毒和细小病毒B19等为主的感染.
作者：于洁；牛军伟；谢涵坤；宋娟；宋芹芹；夏冬；王欣玲；罗小暖；朱红梅 刊期： 2016年第02期
广东省是我国病毒性脑炎流行较为严重的地区之一,自开展乙脑疫苗的广泛接种以后,乙脑的发病率明显下降,但广东省内还存在大量其他病毒引起的脑炎和不明原因病毒性脑炎.本文就广东省病毒性脑炎流行现状、媒介蚊虫、疫苗接种和病原学等情况进行综述.
作者：吴延杰；申红卫；石向辉；钟建明；马学军 刊期： 2016年第02期
目的 在乳腺癌中检测人乳头瘤病毒和小鼠乳腺肿瘤病毒的存在,期望能为乳腺癌的基因治疗提供可能的靶点.方法 取76例乳腺癌石蜡组织,应用PCR和巢式PCR方法检测组织中HPV L1、HPV16E6、HPV16E7、HPV18E6和HPV18E7,MMTV的env基因序列,并进行了测序分析.结果 在76份样本中,HPV L1阳性7例(9.21％),且测序后均为HPV18基因型;HPV16 E6和HPV16E7无阳性;HPV18 E6阳性5例(6.58％);HPV18 E7阳性7例(9.21％);MMTV的env基因阳性23例(30.26％).结论 HPV18型相关基因与MMTV的env基因在乳腺癌中有存在,结果提示乳腺癌与HPV的相关性不是很高,但乳腺癌和MMTV或许有一定的相关性,也为乳腺癌的基因治疗提供了可能的靶点.
作者：颜晨；陈云新；滕智平；沈丹华；李劲涛；曾毅 刊期： 2016年第02期
目的 建立灵敏、特异的GIV诺如病毒的荧光定量检测方法.方法 合成针对GIV诺如病毒的特异性引物以及Taqman探针,优化反应体系及条件,根据我国新发人GIV诺如病毒序列(GenBank序列号:KC894731)构建荧光定量检测的RNA标准品,对其灵敏度、特异性、重复性进行评估,以传统逆转录-聚合酶链反应(Reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)的方法作为参考评价.结果 该方法检测的灵敏度可以达到1.0×102拷贝/μl,检测范围为102 ～ 108拷贝/μl;与GⅠ、GⅡ诺如病毒、肠道腺病毒、轮状病毒、星状病毒等无交叉反应;批内和批间重复性实验的循环阈值(Ct)变异系数(CV)分别小于1.31％和3.68％;在阳性粪便标本的对比检测中发现,该方法与普通RT-PCR相比具有灵敏度高、能够定量的优势.结论 本研究建立的检测GIV诺如病毒的荧光定量一步RT-PCR法,可应用于G1V诺如病毒的检测.
作者：敖元云；虞结梅；周冬梅；靳淼；李莉莉；段招军 刊期： 2016年第02期
目的 探讨适应性免疫应答(adaptive immune response)中CD4+T淋巴细胞在不同HBV感染状态患者中功能的差异.方法 采集健康成人(healthy individuals,HI)、急性乙型肝炎(acute hepatitis B,AHB)、慢性HBV感染免疫耐受期(immune tolerance phase,IT)和免疫清除期(immune clearance phase,IC)患者的外周静脉全血.应用流式细胞术检测外周血CD4+T细胞频数,表面功能分子CD69表达,Th1、Th2亚群细胞频数及Th1/Th2比值,并分析其在HBV感染不同状态患者中的差异.结果 共收集健康人、急性乙型肝炎、慢性HBV感染免疫耐受期和免疫清除期患者各12、33、30、49例.急乙肝组CD4+T细胞频数(AHB,39.99±8.00％)显著高于免疫耐受组(IT,33.86±6.87％)和免疫清除组(IC,34.52±9.17％)(F =4.584,P=0.004),其余各组差异无显著性;急乙肝组的CD69分子的平均荧光强度(mean fluorescence intensity,MFI) (25.56±9.01)也显著高于免疫清除组(21.66±3.38)和免疫耐受组(21.57±5.58)(F=3.291,P=0.023),而AHB、IC、IT、HI各组的CD69分子绝对分子数(absolute molecular count,ABC)依次降低,且差异均有统计学意义(F=15.201,P=0.000).HBV各感染状态的Th2/Th1比值均无显著性差异(1.76±0.54,1.57±0.59,1.76±0.67,P＞0.05).结论 急性乙型肝炎患者的CD4+T细胞频数及细胞表面活化分子CD69均显著高于慢性HBV感染组;Th2型应答在HBV各感染状态的CD4+T细胞应答中均占主导地位.
作者：张丹；李明慧；屈晓晶；靳丽；张璐；路遥；谢尧；刘顺爱；成军 刊期： 2016年第02期
目的 建立一种快速检测肠道病毒71型(EV71) IgM抗体的均相ELISA新技术.方法 首先克隆表达纯化EV71 VP1蛋白,使用生物素标记该蛋白.通过ELISA法摸索出Bio-EV71 VP1的适抗原量为0.0375 μg.优化供体微球、受体微球、血清等实验反应体系,建立EV71 VP1的均相酶联免疫检测方法的IgM检测技术.使用EV71感染的手足口病(HFMD)患者和健康人血清进行均相酶联免疫检测方法检测评价,并与ELISA检测结果相比较.结果 获得EV71 VP1纯化蛋白并生物素化.摸索出均相酶联免疫检测方法的体系:5 μg/ml受体微球、0.037 5μg生物素化的VP1、20μg/ml供体微球、血清2μl,总体系为20μl.采用ELISA和均相酶联免疫检测方法检测方法对样本血清进行IgM检测.两种方法同时检出手足口病患者lgM阳性16份;14份ELISA法检出阴性样本中,均相酶联免疫检测方法法检出阳性6份.20份健康人血清,2种方法检测结果均为阴性.结论 本研究初步建立了EV71 VP1 IgM的均相酶联免疫检测方法.
作者：崔雨；王颖；甘星；宋娟；韩俊 刊期： 2016年第02期
目的 通过检测患儿脑脊液和血清标本中的HPeV和NPEV,结合临床探讨其在儿童中的感染特征.方法 收集2014年1月至12月首都儿科研究所附属儿童医院来自600例16岁以下怀疑中枢神经系统感染或脓毒症患儿的脑脊液标本543份和血清标本173份,其中116例患儿同时收集到脑脊液和血清标本.通过实时荧光RT-PCR和巢式RT-PCR的方法对HPeV和NPEV进行筛查及分型.结果 在终诊断为CNS感染的136例患儿中,HPeV阳性率为1.5％,NPEV阳性率为16.9％;诊断为脓毒症的51例患儿中,HPeV阳性率为5.9％,NPEV阳性率为3.9％;其他诊断的413例患儿中,HPeV阳性率为3.4％,NPEV阳性率为2.9％.HPeV感染患儿以0月～＜3月年龄组多,而NPEV则以3岁～＜7岁组多.NPEV感染的高峰为7月～9月,而HPeV感染的高峰为11月和12月.结论 HPeV感染患儿年龄低于NPEV感染患儿,HPeV和NPEV可在儿童中引起脓毒症或CNS感染等严重疾病.
作者：吴迪；宋秦伟；张又；钱渊；丁雅馨；赵林清；邓洁；王芳；孙宇 刊期： 2016年第02期
目的 探讨原发性肝细胞癌(HCC)血清学肿瘤标志物AFP、AFP-L3异质体、AFP-L3/AFP比值、GP73和部分常规血液学指标在患者术后复发中的预测价值和动态变化.方法 对36例HCC患者术后随访2年,检测其在术前、术后和复发三个时间段的血清学标志物和血液学指标浓度,采用Kaplan-Meier生存曲线、log-rank检验法和COX风险模型分析术前指标对复发风险的预测价值,采用配对t检验和Wilcoxon符号秩检验比较上述指标在患者术前、术后和复发时的动态变化.结果 所有患者2年随访率为94.4％,中位生存期为10月,复发率为91.2％.经Kaplan-Meier生存曲线和log-rank单因素分析发现,仅有术前GP73浓度对患者术后复发具有预测价值(x2=4.695,P=0.03),COX多因素分析发现AFP-L3、PT、PTA与患者术后复发时间有关,是患者术后复发的独立预测因子.配对分析发现AFP、AFP-L3、GP73、TBIL、ALT共5项指标在手术后会出现显著改变(P＜0.05),AFP、AFP-L3、AFP-L3/AFP、GP73共4项指标在肿瘤复发时会出现显著改变(P＜0.05).结论 术前GP73水平可作为HCC术后复发的预测因子,AFP等血清学指标的监测对HCC患者的手术疗效评估具有一定的指导意义.
作者：李波；陈霖；徐军；李筱涵；朱剑功；李媛媛；李伯安；毛远丽 刊期： 2016年第02期
目的 确定我国O1群El Tor生物型霍乱弧菌“噬菌体-生物分型”方案中“溶原性测定”中检测噬菌体的种类,研究溶原性测定的原理.方法 选择O1群El Tor型霍乱弧菌76株、O1群古典株8株、O139群菌株34株,利用溶原性测定方法检测菌株溶原性,检测菌株自发产生的溶原性噬菌体种类,检测阳性和阴性菌株染色体中该前噬菌体基因组,并检测这些菌株对溶原性噬菌体919TP(弧菌噬菌体K139家族)的敏感性.结果 O1群El Tor型菌株溶原性测定为阳性的19株菌,其释放的噬菌体主要为K139家族,具有溶原化的K139噬菌体,并对溶原性噬菌体919TP的敏感性为阴性;O1群El Tor型菌株22株对溶原性噬菌体919TP的敏感性为阳性,溶原性测定全部为阴性,基因组中不含有K139噬菌体;6株O1群古典型菌株溶原性检测为阳性株,但产生的噬菌体不是K139类;0139群菌株中5株溶原性测定为阳性,能检测到溶原性K139噬菌体基因组,并且34株菌全部不能被919TP感染.结论 O1群El Tor型霍乱弧菌“噬菌体-生物分型”方案中溶原性测定指标主要检测的是菌株释放K139类噬菌体的能力,即是否有K139噬菌体的溶原化并释放子代,“对溶原性噬菌体的敏感性”检测的是菌株能否被K139家族噬菌体(919TP)感染,因此生物分型中“溶原性测定”与“对溶原性噬菌体的敏感性”两个指标是相关联的.
作者：申小娜；张京云；付秀萍；李杰；梁未丽；阚飙 刊期： 2016年第02期
目的 分析鼠埃博拉病毒核蛋白(NP)特异性单克隆抗体抗原结合表位,了解其免疫学特性.方法 经生物信息学分析后,将NP分段重组表达,并分别以之为抗原,通过免疫印迹和竞争ELISA的方法对4株埃博拉病毒核蛋白特异性单抗的抗原结合表位进行分析.结果 经生物信息学表位分析后将埃博拉病毒全长核蛋白分为rNP1-418,rNP419-639和rNP640-739三段进行重组制备,免疫印迹法分析表明4株鼠单抗均识别线性表位,结合位点位于C端100 aa.通过对C端100 aa即rNP640-739 N端连续截短20 aa的方法进行鉴定,4株鼠单抗抗原表位位于埃博拉核蛋白C末端20 aa,但其中2株单抗无明显竞争.结论 明确了具有不同结合位点的埃博拉核蛋白特异性单抗,为免疫学快速检测试剂的研究奠定基础.
作者：孙丽娜；周荣苹；刘洋；芜为；李川；仇佩虹；李德新；梁米芳 刊期： 2016年第02期
乙型肝炎病毒(hepatitis B vlrus,HBV)表面抗原(HBsAg)作为HBV感染的主要标志之一,近年来,其定量检测开始应用于HBV感染状态评估和指导抗病毒疗效分析领域.治疗过程中血清HBsAg水平的下降速度或HBsAg和HBVDNA水平共同下降可预测CHB患者抗病毒治疗的持续病毒学应答及治疗结束后HBsAg的血清学转换.本研究拟对HBsAg的定量分析以及对慢乙肝患者诊疗的指导意义做一综述.
作者：杨笑萍；刘寿荣 刊期： 2016年第02期
文章总结分析了作者在从事科研院所外事管理岗位工作实践中的阶段性认识,通过对日常基本工作方法和流程的深入思考,分析出目前科研院所外事管理工作在管理主动性、创新性、精细化水平、服务观念和意识等方面的提升空间,并有针对性的提出优化思路和建议,通过充分履行岗位职责、优化工作流程等途径,增强工作主动性,建立科学系统的精细化管理体系,提高工作效率和服务水平,充分发挥管理工作的导向效能,促进科研事业发展.
作者：徐晶 刊期： 2016年第02期
目的 研究人副流感病毒3型(hPIV3) HN受体结合位点中保守氨基酸功能.方法 采用定点突变与同源重组相结合方法将HN受体结合位点中的7个保守氨基酸突变为丙氨酸(A),分别为R192A、D216A、E409A、R424A、R502A、Y530A和E549A,各突变株在BHK-21细胞内表达并测定其免疫沉淀反应、蛋白表达效率、促细胞融合、受体结合和神经氨酸酶活性.结果 各突变株在BHK-21细胞内折叠加工正常并成功转运到细胞膜,其膜表面蛋白表达率与野毒株相比差别无统计学意义;各突变株促细胞融合活性不同程度下降,R502A降低多,为野毒株的14.2％;各突变株受体结合活性也不同程度降低,突变株吸附豚鼠红细胞与吸附人红细胞的能力大体一致;各突变株神经氨酸酶活性变化程度不同,R502A下降多,为18.6％;E549A下降少,为94.9％.结论 hPIV3HN蛋白受体结合位点中的保守氨基酸对HN的促细胞融合活性有重要作用,第502位精氨酸(R)是关键氨基酸.
作者：褚福禄；温红玲；王志玉 刊期： 2016年第02期
目的 通过对肠道病毒性脑炎(Enterovirus Encephalitis,EVE)的患儿T细胞活化亚群、细胞因子的检测,探讨其在EVE发病机制中的可能作用.方法 选择2014年6月至2015年7月浙江大学医学院附属儿童医院神经科病房收住院的24例脑脊液肠道病毒阳性的EVE患儿为病例组,其中14例予活化T细胞亚群检测,24例均予细胞因子流式测定,同期门诊体检的49例健康儿童为对照组.通过流式细胞术检测两组外周血CD25 +/CD3+ CD4+、CD69 +/CD3+CD4+、HLA-DR/CD3+ CD4+、CD25 +/CD3+ CD8+、CD69 +/CD3+ CD8+、HLA-DR/CD3+ CD8+,及IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α、INF-γ水平.结果 病例组外周血CD69/CD3+ CD4+、CD69/CD3+ CD8+的表达含量(1.193％ ±2.849％,0.696％±1.242％)低于对照组(Z=-2.722,P=0.006;Z=-3.321,P=0.001).外周血病例组IL-2的表达水平(3.342±1.089 pg/ml)低于对照组(Z=-2.722,P=0.019);而IL-6,TNF-α的表达水平(123.046±355.349;3.367±1.717 pg/ml),与对照组相比,有所增加,差异有统计学意义(Z=-3.471,P=0.001;Z=-4.803,P＜0.001).结论 EVE患儿存在一定程度的免疫功能紊乱,T细胞活化亚群和细胞因子可能参与了EVE的发病过程.
作者：方春艳；邹小杰；袁哲峰；黄明海；高峰 刊期： 2016年第02期
目的 分析ADAM10对铜离子诱导后的PrP蛋白的剪切特点.方法 常规方法表达、纯化人PrP全长蛋白(aa 23-230),利用氯化铜对纯化后的PrP蛋白进行诱导.用不同浓度的ADAM10对PrP蛋白进行处理,检测诱导后全长蛋白及剪切片段的PK抗性.结果 重组人PrP蛋白经Cu2诱导后具有部分抵抗PK消化的特点.Cu2+诱导后的PrP蛋白可被ADAM10剪切,具有剂量依赖性.ADAM10对Cu2+诱导的PrP蛋白处理后抵抗PK消化的能力明显加强.结论 ADAM10可以剪切Cu2+诱导的PrP蛋白,同时增加了处理后PrP蛋白的PK抗性.
作者：陈操；吕燕；石琦；董小平 刊期： 2016年第02期
目的 评估两种等温扩增方法在二代测序(Next generation sequencing,NGS)病毒鉴定中的应用,为利用二代测序进行病毒鉴定提供参考.方法 选取了两份病原已知的重症肺炎病人咽拭子,分别采用单引物等温扩增(Single primer isothermal amplification,SPIA)和多重置换等温扩增(Multiple displacement amplification,MDA)的方法进行反转录扩增.扩增产物进行NGS测序和宏基因组学分析.结果 SPIA扩增产物片段较短,扩增效率较低;而MDA扩增的产物片段较长,扩增效率也高.SPIA法在两份样本中均检测到目标病原,且目标病原基因组覆盖度较高.MDA在其中一份样本中未能检测出目标病原.结论 SPIA与MDA扩增方法均可用于NGS病原鉴定.SPIA法扩增效率较低,成本较高,但检测病原的能力高于MDA.
作者：邹晓辉；赵翔；冯兆民；王大燕；舒跃龙 刊期： 2016年第02期
中华实验和临床病毒学杂志
主管:实验和临床病毒学杂志
主办：中国科学技术协会
