方春艳；邹小杰；袁哲峰；黄明海；高峰
目的 探索实验室高通量检测前临床样本中病毒核酸特异性纯化富集的方法.方法 以负链RNA病毒发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)为模拟样本,针对病毒基因组S、M和L三个片段设计杂交探针,并进行5'端生物素修饰,与链霉亲和素修饰磁珠共价结合,纯化样本中SFTSV核酸,比较研究特异性纯化富集对样本二代测序效果的影响.结果 cDNA文库制备时全转录组扩增前或后进行特异性富集纯化均较不开展富集纯化有显著改善,有效数据比例分别为5.57％、6.39％、2.71％,差别具有显著性(x2=9 799.8,P＜0.001).对全转录组扩增前或后进行特异性富集纯化对测序结果进行比较分析时发现,扩增后进行纯化优于扩增前(P＜0.001).结论 基于核酸杂交的病毒基因组特异性富集纯化方法可有效降低二代测序中背景值,提高测序效率,具有高通量检测前特异性纯化富集样本的作用.
作者：王利静；刘林；李建东；李伟红；张硕；梁米芳；李德新 刊期： 2016年第02期
目的 通过分析2012-2015上海地区成年人甲型H3N2流感病毒的分子流行病学及HA抗原漂变情况,从而了解甲型H3N2流感病毒分子流行及变异变迁规律.方法 采集2012-2015年间上海地区三家哨点医院流感样成人病例的呼吸道标本,收集临床资料.提取标本核酸后用实时荧光PCR检测流感病毒,对甲型流感病毒阳性的标本进一步进行基因分型.对H3N2阳性标本扩增血凝素(HA)基因片段、测序和进行基因变异分析.结果 总共收集2 346例病例,甲型流感病毒核酸检测阳性病例331例,其中273例为H3 N2流感病毒阳性,58例为2009 pdmH1N1流感病毒阳性.2012年-2015年期间,上海地区H3N2流感病毒在每年的冬春季流行,但在2014年和2015年均呈现夏季流行高峰.对2012年-2015年间获得的上海地区180个H3N2流感病毒的HA基因全长序列进行系统进化树分析发现:2012-2015年间H3N2流感病毒总共引起了3个主要的流感流行峰,分别是2013年12月-2014年1月、2014年7-8月和2015年7-8月,且分别属于三个不同的基因簇:A/Finland/385/2013类似株,为group 3C.3b;A/Switzerland/9715293/2013类似株(SW13),为group 3C.3a和A/Hong Kong/5783/2014类似株(HK14),group 3C.2a分支.比较3个流行峰的甲型H3 N2流感病毒,发现血凝素蛋白氨基酸序列存在一定差异,主要分布于抗原表位和受体结合位点(RBS).结论 2012-2015年间,上海地区流行的H3N2流感病毒出现明显的2次抗原漂变,可能是导致上海地区近年来H3N2流感流行的原因.
作者：夏益兰；张万菊；田棣；代发辉；宋志刚；冯净净；揭志军；杨天芸；郭雪君 刊期： 2016年第02期
目的 探讨原发性肝细胞癌(HCC)血清学肿瘤标志物AFP、AFP-L3异质体、AFP-L3/AFP比值、GP73和部分常规血液学指标在患者术后复发中的预测价值和动态变化.方法 对36例HCC患者术后随访2年,检测其在术前、术后和复发三个时间段的血清学标志物和血液学指标浓度,采用Kaplan-Meier生存曲线、log-rank检验法和COX风险模型分析术前指标对复发风险的预测价值,采用配对t检验和Wilcoxon符号秩检验比较上述指标在患者术前、术后和复发时的动态变化.结果 所有患者2年随访率为94.4％,中位生存期为10月,复发率为91.2％.经Kaplan-Meier生存曲线和log-rank单因素分析发现,仅有术前GP73浓度对患者术后复发具有预测价值(x2=4.695,P=0.03),COX多因素分析发现AFP-L3、PT、PTA与患者术后复发时间有关,是患者术后复发的独立预测因子.配对分析发现AFP、AFP-L3、GP73、TBIL、ALT共5项指标在手术后会出现显著改变(P＜0.05),AFP、AFP-L3、AFP-L3/AFP、GP73共4项指标在肿瘤复发时会出现显著改变(P＜0.05).结论 术前GP73水平可作为HCC术后复发的预测因子,AFP等血清学指标的监测对HCC患者的手术疗效评估具有一定的指导意义.
作者：李波；陈霖；徐军；李筱涵；朱剑功；李媛媛；李伯安；毛远丽 刊期： 2016年第02期
目的 对高载量标本HBV-DNA稀释检测时稀释液进行选择和评价,期望筛选出较为理想适用于临床的稀释液.方法 以阴性质控品作为标准稀释液,阴性血清、生理盐水、蒸馏水作为候选稀释液,分别对定值标准品(浓度为2.00×109 IU/ml)进行10倍、100倍的稀释检测,比较使用候选稀释液与标准稀释液的检测结果,同时进行偏差分析.结果 在10倍稀释时,使用蒸馏水稀释与标准稀释液稀释,其检测结果间差异无统计学意义(=2.04,P＞0.05),偏差小于行业标准规定的总允许误差;使用阴性血清、蒸馏水时检测结果高于标准稀释(P＜0.05),分别有16.67％和20.00％的偏差超过行业标准规定的总允许误差.在100倍稀释时,使用待选稀释液,其检测结果均高于使用标准稀释液时,差异有统计学意义(P＜0.05),且以蒸馏水作为稀释液时的检测结果与以标准稀释液稀释时的检测结果呈良好的线性关系,其公式为Y=0.963X+0.267;使用不同稀释液时偏差均小于行业标准规定的总允许误差,以标准稀释液偏差小,其次为蒸馏水、生理盐水、阴性血清(P＜0.05).结论 在10倍稀释时,适稀释液为阴性质控品与蒸馏水;在100倍稀释时,适稀释液为阴性质控品,其次为蒸馏水、生理盐水、阴性血清,以蒸馏水作为稀释液时,可通过公式y=0.963X+0.267对检测结果进行校正,确保结果更为精确.
作者：汪东剑；余维涛；张晓云；刘冬萍；邱华琴；彭慧琼 刊期： 2016年第02期
目的 确定我国O1群El Tor生物型霍乱弧菌“噬菌体-生物分型”方案中“溶原性测定”中检测噬菌体的种类,研究溶原性测定的原理.方法 选择O1群El Tor型霍乱弧菌76株、O1群古典株8株、O139群菌株34株,利用溶原性测定方法检测菌株溶原性,检测菌株自发产生的溶原性噬菌体种类,检测阳性和阴性菌株染色体中该前噬菌体基因组,并检测这些菌株对溶原性噬菌体919TP(弧菌噬菌体K139家族)的敏感性.结果 O1群El Tor型菌株溶原性测定为阳性的19株菌,其释放的噬菌体主要为K139家族,具有溶原化的K139噬菌体,并对溶原性噬菌体919TP的敏感性为阴性;O1群El Tor型菌株22株对溶原性噬菌体919TP的敏感性为阳性,溶原性测定全部为阴性,基因组中不含有K139噬菌体;6株O1群古典型菌株溶原性检测为阳性株,但产生的噬菌体不是K139类;0139群菌株中5株溶原性测定为阳性,能检测到溶原性K139噬菌体基因组,并且34株菌全部不能被919TP感染.结论 O1群El Tor型霍乱弧菌“噬菌体-生物分型”方案中溶原性测定指标主要检测的是菌株释放K139类噬菌体的能力,即是否有K139噬菌体的溶原化并释放子代,“对溶原性噬菌体的敏感性”检测的是菌株能否被K139家族噬菌体(919TP)感染,因此生物分型中“溶原性测定”与“对溶原性噬菌体的敏感性”两个指标是相关联的.
作者：申小娜；张京云；付秀萍；李杰；梁未丽；阚飙 刊期： 2016年第02期
目的 建立一种快速检测肠道病毒71型(EV71) IgM抗体的均相ELISA新技术.方法 首先克隆表达纯化EV71 VP1蛋白,使用生物素标记该蛋白.通过ELISA法摸索出Bio-EV71 VP1的适抗原量为0.0375 μg.优化供体微球、受体微球、血清等实验反应体系,建立EV71 VP1的均相酶联免疫检测方法的IgM检测技术.使用EV71感染的手足口病(HFMD)患者和健康人血清进行均相酶联免疫检测方法检测评价,并与ELISA检测结果相比较.结果 获得EV71 VP1纯化蛋白并生物素化.摸索出均相酶联免疫检测方法的体系:5 μg/ml受体微球、0.037 5μg生物素化的VP1、20μg/ml供体微球、血清2μl,总体系为20μl.采用ELISA和均相酶联免疫检测方法检测方法对样本血清进行IgM检测.两种方法同时检出手足口病患者lgM阳性16份;14份ELISA法检出阴性样本中,均相酶联免疫检测方法法检出阳性6份.20份健康人血清,2种方法检测结果均为阴性.结论 本研究初步建立了EV71 VP1 IgM的均相酶联免疫检测方法.
作者：崔雨；王颖；甘星；宋娟；韩俊 刊期： 2016年第02期
目的 了解儿科门诊流感样病例和住院严重急性呼吸道感染病例中人偏肺病毒(hMPV)感染状况、病毒基因特征.方法 选取2011-2013年杭州地区哨点医院,儿科呼吸道门诊、住院病例共2 593例,流感样病例采集咽拭子1 676份,住院重急性呼吸道感染病例采集气管吸取物917份.用实时荧光RT-PCR方法检测hMPV核酸,阳性样本用RT-PCR方法对hMPV融合蛋白(F)基因片段扩增、序列与基因分型.实验结果作描述性统计和样本率的卡方检验.结果 门诊检出率6.62％(111/1 676),住院检出率6.32(58/917),检出率差异无统计学意义(x2=0.086,P=0.769).门诊与住院hMPV性别检出率差异无统计学意义.＜1岁组住院患儿检出率(6.33％,43/679)高于门诊(2.79％,19/681),差异有统计学意义(x2=9.808,P=0.002).hMPV阳性患儿平均年龄门诊(31.33±18.50月)＞住院(10.41±8.28月).冬季门诊检出率13.56％(59/435)高于住院8.06％(20/248),差异有统计学意义(x2=4.669,P=0.031).hMPV共感染检出率住院(31.04％,19/58)高于门诊(18.01％,20/111),差异有统计学意义(x2 =4.663,P=0.031).门诊和住院hMPV均以A2亚型多,不同基因型的临床特征不明显.结论 门诊与住院hMPV感染率无差异,hMPV阳性患儿平均年龄门诊大于住院,冬季hMPV检出率门诊高于住院,门诊与住院hMPV共感染主要病原不同,研究期间门诊与住院基因型均以A2为主.
作者：寇宇；于新芬；李钧；杨旭辉；周银燕；潘劲草；谢立；孙昼；濮小英 刊期： 2016年第02期
目的 研究安徽阜阳2013年冬季手足几病患儿合并其他病毒感染情况.方法 根据手足口病病例诊断标准诊断收集2013年11月-2013年12月安徽阜阳手足口病住院病例及资料,采集患儿血清.使用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测血清标本中的细小病毒B19、I型单纯疱疹病毒、巨细胞病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的IgM抗体.整理分析患儿合并病毒感染情况.结果 2013年11月-2013年12月45份手足口病患儿血清腺病毒IgM阳性30例(67.7％),呼吸道合胞病毒IgM阳性8例(17.8％),细小病毒B19 IgM阳性8例(17.8％),巨细胞病毒IgM阳性3例(6.7％),单纯疱疹病毒IgM阳性l例(2.2％),血清中未检测出现副流感病毒IgM抗体.同时发现多例合并两种以上病毒IgM阳性现象.结论 2013年阜阳地区冬季手足口病合并腺病毒、呼吸道合胞病毒和细小病毒B19等为主的感染.
作者：于洁；牛军伟；谢涵坤；宋娟；宋芹芹；夏冬；王欣玲；罗小暖；朱红梅 刊期： 2016年第02期
目的 获取原核表达过程中自发生物素化的风疹病毒(Rubella Virus,RV)重组抗原E1(RV-E1),并初步评价其抗原性.方法 将2×BirA酶底物(BSP)插入到RV-E1抗原优势表位区域aa 148-295的羧基端,硫氧还蛋白(Thioredoxin,TRX)插入到RV-E1的氨基端,密码子优化后全基因合成;在大肠埃希进行表达,并利用亲和层析和离子交换层析纯化获取生物素化的RV-E1抗原;利用Western Blotting技术对目的蛋白进行鉴定,并建立风疹病毒IgM抗体检测方法,初步评价此方法对阴阳血清样本的鉴别能力.结果 获取高度均质的生物素化的可溶性RV-E1抗原,WB实验表明目的蛋白不但可以被RV-E1抗原和TRX抗原单克隆抗体识别,而且可以被标记HRP的链霉亲和素所识别.分别对50份风疹病毒感染阳性血清、阴性血清和健康人血清进行检测,发现一致性优异.结论 RV-E1诊断抗原携带BSP,可以在大肠埃希菌表达过程中自发共价结合生物素分子,并可以作为新型诊断抗原应用于生物素-亲和素ELISA血清学检测中.
作者：苏秋东；郭敏卓；邱丰；贾志远；卢学新；孟庆玲；田瑞光；高燕；毕胜利 刊期： 2016年第02期
广东省是我国病毒性脑炎流行较为严重的地区之一,自开展乙脑疫苗的广泛接种以后,乙脑的发病率明显下降,但广东省内还存在大量其他病毒引起的脑炎和不明原因病毒性脑炎.本文就广东省病毒性脑炎流行现状、媒介蚊虫、疫苗接种和病原学等情况进行综述.
作者：吴延杰；申红卫；石向辉；钟建明；马学军 刊期： 2016年第02期
文章总结分析了作者在从事科研院所外事管理岗位工作实践中的阶段性认识,通过对日常基本工作方法和流程的深入思考,分析出目前科研院所外事管理工作在管理主动性、创新性、精细化水平、服务观念和意识等方面的提升空间,并有针对性的提出优化思路和建议,通过充分履行岗位职责、优化工作流程等途径,增强工作主动性,建立科学系统的精细化管理体系,提高工作效率和服务水平,充分发挥管理工作的导向效能,促进科研事业发展.
作者：徐晶 刊期： 2016年第02期
乙型肝炎病毒(hepatitis B vlrus,HBV)表面抗原(HBsAg)作为HBV感染的主要标志之一,近年来,其定量检测开始应用于HBV感染状态评估和指导抗病毒疗效分析领域.治疗过程中血清HBsAg水平的下降速度或HBsAg和HBVDNA水平共同下降可预测CHB患者抗病毒治疗的持续病毒学应答及治疗结束后HBsAg的血清学转换.本研究拟对HBsAg的定量分析以及对慢乙肝患者诊疗的指导意义做一综述.
作者：杨笑萍；刘寿荣 刊期： 2016年第02期
目的 检测经典Wnt/β-catenin信号通路在朊病毒感染的细胞模型SMB-S15中的功能状态.方法 运用real time-PCR方法检测了朊病毒感染的细胞模型SMB-S15中,经典Wnt/β-catenin信号通路调控的靶基因mRNA表达水平;应用Western Blot方法检测稳定感染羊瘙痒因子Chandler株的小鼠神经细胞系SMB-S15中经典Wnt/β-catenin信号通路的相关调控蛋白及靶蛋白的表达.结果 与磷酸戊聚糖治愈的细胞对照SMB-PS相比,SMB-S15细胞中经典Wnt信号通路的靶基因cyclin D1、c-myc、survivin转录水平均有显著下调.经典Wnt信号通路的调控蛋白中,磷酸化p-catenin (Ser33,37,Thr41)表达明显上调,且其靶基因cyclin D1的蛋白表达明显下调,失活形式磷酸化糖原合成激酶(GSK-3β Ser9)表达明显下调.结论 在朊病毒感染的细胞模型SMB-S15中经典Wnt/β-catenin信号通路被抑制.
作者：孙静；王晶；陈利娜；杨晓东；肖康；陈操；田婵；石琦；董小平 刊期： 2016年第02期
目的 建立甲型流感病毒(Influenza A virus,IAV)和肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,SP)协同感染小鼠模型,在该模型中初步探索自噬和凋亡的发生情况.方法 将IAV和SP以不同顺序感染Balb/c小鼠,观察其体重变化和死亡率,检测其肺部IAV和SP滴度、病理改变情况,建立IAV ～ SP协同感染动物模型.使用免疫组化法检测自噬特征蛋白LC3及凋亡特征蛋白Caspase-3的表达情况.结果 IAV～SP组第二次感染后24 h时小鼠肺部IAV和SP滴度高,死亡率也明显高于其他各组,48 h病理改变也为严重.免疫组化结果显示IAV感染早期(24 h～48 h)LC3蛋白表达出现峰值,Caspase-3缓慢上升;晚期(72 h～96 h)Caspase-3蛋白表达出现峰值,而LC3蛋白表达逐渐下降.结论 本研究成功建立了1AV～ SP协同感染动物模型,模型鼠中自噬先于凋亡发生,为进一步研究自噬和凋亡在IAV～ SP协同感染中的作用奠定了基础.
作者：秦臻；王红仁；黄筱钧；罗俊；游江舟；李婉宜；杨远；周琳琳；李明远 刊期： 2016年第02期
目的 从肾综合征出血热(HFRS)患者外周血单个核细胞(peripheral blood leukocytes,PBMC)中分离汉坦病毒,并对分离株全基因组序列测定及进化分析.方法 采集急性期HFRS患者外周血,分离PBMC后与Vero-E6细胞混合培养分离汉坦病毒,通过Real-time PCR和IFA法检测,扩增分离株全基因组片段进行序列测定及分析,并采用SX26分离株样本与HFRS患者恢复期血清和免疫接种者血清各50份进行微量中和试验.结果 成功分离到两株汉滩型毒株并获得全基因组序列,进化分析显示与西安分离株XAAa10091712同源性较高;微量中和试验结果显示50份HFRS患者恢复期血清分别中和分离株SX26与疫苗株Z10,中和抗体滴度差异有统计学意义,另50份免疫接种者血清样本针对SX26和Z10毒株产生的中和抗体阳转率分别为72％及88％,差异有统计学意义.结论 通过PBMC分离汉坦病毒可作为病毒分离的另一种途径;流行株与Z10疫苗株的抗原性存在差别,疫苗株产生的抗体中和流行株效果较弱,提示病毒进化过程中已发生部分变异,为疫苗免疫效果研究和肾综合征出血热的防治工作提供依据.
作者：马颖欣；余鹏博；张全福；李建东；王世文；李德新 刊期： 2016年第02期
目的 初步探讨广西地区鼻咽癌患者、血清VCA/IgA阳性高危人群及血清VCA/IgA阴性健康人群EB病毒LMP2特异性细胞免疫状态的差异.方法 选择广西苍梧地区经血清学筛查VCA/IgA阳性高危人群志愿者60例,对照为血清VCA/IgA筛查阴性的健康志愿者20例,同时选取广西壮族自治区人民医院经病理确诊鼻咽癌患者134例,分离外周血单个核细胞(PBMC),采用酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测外周血中LMP2特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)免疫水平.比较鼻咽癌患者与健康志愿者、高危人群外周血LMP2特异性CTL免疫状态的差异.结果 鼻咽癌患者LMP2特异性CTL免疫水平明显低于健康志愿者及血清EB病毒抗体阳性人群,差异有统计学意义(P＜0.01);血清EB病毒抗体阳性三种不同滴度人群间LMP2特异性T细胞免疫反应差异有统计学意义(P=0.002);鼻咽癌Ⅰ、Ⅱ期患者同Ⅲ期及Ⅳ期患者的LMP2特异性T细胞免疫反应存在差异(P＜0.01).结论 三类人群间LMP2特异性CTL水平的差异可能是导致EB病毒长期潜伏感染并导致鼻咽癌发生的重要原因,针对LMP2的特异性免疫治疗有望降低鼻咽癌的发生率.
作者：邓卓霞；王勇利；杜海军；司勇锋；兰桂萍；孙金杰；杨涌；韩星 刊期： 2016年第02期
目的 了解2012年12月至2013年1月期间我国广州5起胃肠炎暴发诺如病毒的分子流行病学特征.方法 收集2012年12月至2013年1月广州市5起胃肠炎暴发(A-E)共274份粪便标本和流行病学资料,利用RT-PCR方法对诺如病毒进行检测,对扩增产物进行序列测定.用Clustal X 1.83和MEGA 5.05生物软件对诺如病毒序列进行序列比对和系统进化分析.用SPSS17.0软件进行统计分析.结果 诺如病毒的总阳性率为20.07％(55/274),其中,A高校诺如病毒阳性率为8.70％(2/23)、B幼儿园为36.36％(8/22)、C高校为36.07％(22/61)、D社区卫生中心为100％(5/5)、E高校为11.04％(18/163),60岁及以上年龄组诺如病毒阳性率为100％(6/6),10-19岁年龄组为47.37％(9/19),9岁及以下年龄组为36.36％(8/22).系统进化分析表明33份成功分型的阳性标本均为诺如病毒GⅡ.4型新变异株Sydney 2012感染.结论 诺如病毒是引起广州市急性胃肠炎暴发的主要病原之一,GⅡ.4型新变异株Sydney 2012是当年流行的优势毒株.
作者：谢华萍；耿进妹；刘静雯；陈纯；蔡文锋；狄飚；袁俊 刊期： 2016年第02期
目的 分析ADAM10对铜离子诱导后的PrP蛋白的剪切特点.方法 常规方法表达、纯化人PrP全长蛋白(aa 23-230),利用氯化铜对纯化后的PrP蛋白进行诱导.用不同浓度的ADAM10对PrP蛋白进行处理,检测诱导后全长蛋白及剪切片段的PK抗性.结果 重组人PrP蛋白经Cu2诱导后具有部分抵抗PK消化的特点.Cu2+诱导后的PrP蛋白可被ADAM10剪切,具有剂量依赖性.ADAM10对Cu2+诱导的PrP蛋白处理后抵抗PK消化的能力明显加强.结论 ADAM10可以剪切Cu2+诱导的PrP蛋白,同时增加了处理后PrP蛋白的PK抗性.
作者：陈操；吕燕；石琦；董小平 刊期： 2016年第02期
目的 研究人副流感病毒3型(hPIV3) HN受体结合位点中保守氨基酸功能.方法 采用定点突变与同源重组相结合方法将HN受体结合位点中的7个保守氨基酸突变为丙氨酸(A),分别为R192A、D216A、E409A、R424A、R502A、Y530A和E549A,各突变株在BHK-21细胞内表达并测定其免疫沉淀反应、蛋白表达效率、促细胞融合、受体结合和神经氨酸酶活性.结果 各突变株在BHK-21细胞内折叠加工正常并成功转运到细胞膜,其膜表面蛋白表达率与野毒株相比差别无统计学意义;各突变株促细胞融合活性不同程度下降,R502A降低多,为野毒株的14.2％;各突变株受体结合活性也不同程度降低,突变株吸附豚鼠红细胞与吸附人红细胞的能力大体一致;各突变株神经氨酸酶活性变化程度不同,R502A下降多,为18.6％;E549A下降少,为94.9％.结论 hPIV3HN蛋白受体结合位点中的保守氨基酸对HN的促细胞融合活性有重要作用,第502位精氨酸(R)是关键氨基酸.
作者：褚福禄；温红玲；王志玉 刊期： 2016年第02期
目的 评估两种等温扩增方法在二代测序(Next generation sequencing,NGS)病毒鉴定中的应用,为利用二代测序进行病毒鉴定提供参考.方法 选取了两份病原已知的重症肺炎病人咽拭子,分别采用单引物等温扩增(Single primer isothermal amplification,SPIA)和多重置换等温扩增(Multiple displacement amplification,MDA)的方法进行反转录扩增.扩增产物进行NGS测序和宏基因组学分析.结果 SPIA扩增产物片段较短,扩增效率较低;而MDA扩增的产物片段较长,扩增效率也高.SPIA法在两份样本中均检测到目标病原,且目标病原基因组覆盖度较高.MDA在其中一份样本中未能检测出目标病原.结论 SPIA与MDA扩增方法均可用于NGS病原鉴定.SPIA法扩增效率较低,成本较高,但检测病原的能力高于MDA.
作者：邹晓辉；赵翔；冯兆民；王大燕；舒跃龙 刊期： 2016年第02期
中华实验和临床病毒学杂志
主管:实验和临床病毒学杂志
主办：中国科学技术协会
