马颖欣；余鹏博；张全福；李建东；王世文；李德新
目的 获取原核表达过程中自发生物素化的风疹病毒(Rubella Virus,RV)重组抗原E1(RV-E1),并初步评价其抗原性.方法 将2×BirA酶底物(BSP)插入到RV-E1抗原优势表位区域aa 148-295的羧基端,硫氧还蛋白(Thioredoxin,TRX)插入到RV-E1的氨基端,密码子优化后全基因合成;在大肠埃希进行表达,并利用亲和层析和离子交换层析纯化获取生物素化的RV-E1抗原;利用Western Blotting技术对目的蛋白进行鉴定,并建立风疹病毒IgM抗体检测方法,初步评价此方法对阴阳血清样本的鉴别能力.结果 获取高度均质的生物素化的可溶性RV-E1抗原,WB实验表明目的蛋白不但可以被RV-E1抗原和TRX抗原单克隆抗体识别,而且可以被标记HRP的链霉亲和素所识别.分别对50份风疹病毒感染阳性血清、阴性血清和健康人血清进行检测,发现一致性优异.结论 RV-E1诊断抗原携带BSP,可以在大肠埃希菌表达过程中自发共价结合生物素分子,并可以作为新型诊断抗原应用于生物素-亲和素ELISA血清学检测中.
作者：苏秋东；郭敏卓；邱丰；贾志远；卢学新；孟庆玲；田瑞光；高燕；毕胜利 刊期： 2016年第02期
目的 在乳腺癌中检测人乳头瘤病毒和小鼠乳腺肿瘤病毒的存在,期望能为乳腺癌的基因治疗提供可能的靶点.方法 取76例乳腺癌石蜡组织,应用PCR和巢式PCR方法检测组织中HPV L1、HPV16E6、HPV16E7、HPV18E6和HPV18E7,MMTV的env基因序列,并进行了测序分析.结果 在76份样本中,HPV L1阳性7例(9.21％),且测序后均为HPV18基因型;HPV16 E6和HPV16E7无阳性;HPV18 E6阳性5例(6.58％);HPV18 E7阳性7例(9.21％);MMTV的env基因阳性23例(30.26％).结论 HPV18型相关基因与MMTV的env基因在乳腺癌中有存在,结果提示乳腺癌与HPV的相关性不是很高,但乳腺癌和MMTV或许有一定的相关性,也为乳腺癌的基因治疗提供了可能的靶点.
作者：颜晨；陈云新；滕智平；沈丹华；李劲涛；曾毅 刊期： 2016年第02期
目的 建立灵敏、特异的GIV诺如病毒的荧光定量检测方法.方法 合成针对GIV诺如病毒的特异性引物以及Taqman探针,优化反应体系及条件,根据我国新发人GIV诺如病毒序列(GenBank序列号:KC894731)构建荧光定量检测的RNA标准品,对其灵敏度、特异性、重复性进行评估,以传统逆转录-聚合酶链反应(Reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)的方法作为参考评价.结果 该方法检测的灵敏度可以达到1.0×102拷贝/μl,检测范围为102 ～ 108拷贝/μl;与GⅠ、GⅡ诺如病毒、肠道腺病毒、轮状病毒、星状病毒等无交叉反应;批内和批间重复性实验的循环阈值(Ct)变异系数(CV)分别小于1.31％和3.68％;在阳性粪便标本的对比检测中发现,该方法与普通RT-PCR相比具有灵敏度高、能够定量的优势.结论 本研究建立的检测GIV诺如病毒的荧光定量一步RT-PCR法,可应用于G1V诺如病毒的检测.
作者：敖元云；虞结梅；周冬梅；靳淼；李莉莉；段招军 刊期： 2016年第02期
目的 建立甲型流感病毒(Influenza A virus,IAV)和肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,SP)协同感染小鼠模型,在该模型中初步探索自噬和凋亡的发生情况.方法 将IAV和SP以不同顺序感染Balb/c小鼠,观察其体重变化和死亡率,检测其肺部IAV和SP滴度、病理改变情况,建立IAV ～ SP协同感染动物模型.使用免疫组化法检测自噬特征蛋白LC3及凋亡特征蛋白Caspase-3的表达情况.结果 IAV～SP组第二次感染后24 h时小鼠肺部IAV和SP滴度高,死亡率也明显高于其他各组,48 h病理改变也为严重.免疫组化结果显示IAV感染早期(24 h～48 h)LC3蛋白表达出现峰值,Caspase-3缓慢上升;晚期(72 h～96 h)Caspase-3蛋白表达出现峰值,而LC3蛋白表达逐渐下降.结论 本研究成功建立了1AV～ SP协同感染动物模型,模型鼠中自噬先于凋亡发生,为进一步研究自噬和凋亡在IAV～ SP协同感染中的作用奠定了基础.
作者：秦臻；王红仁；黄筱钧；罗俊；游江舟；李婉宜；杨远；周琳琳；李明远 刊期： 2016年第02期
目的 了解2012年12月至2013年1月期间我国广州5起胃肠炎暴发诺如病毒的分子流行病学特征.方法 收集2012年12月至2013年1月广州市5起胃肠炎暴发(A-E)共274份粪便标本和流行病学资料,利用RT-PCR方法对诺如病毒进行检测,对扩增产物进行序列测定.用Clustal X 1.83和MEGA 5.05生物软件对诺如病毒序列进行序列比对和系统进化分析.用SPSS17.0软件进行统计分析.结果 诺如病毒的总阳性率为20.07％(55/274),其中,A高校诺如病毒阳性率为8.70％(2/23)、B幼儿园为36.36％(8/22)、C高校为36.07％(22/61)、D社区卫生中心为100％(5/5)、E高校为11.04％(18/163),60岁及以上年龄组诺如病毒阳性率为100％(6/6),10-19岁年龄组为47.37％(9/19),9岁及以下年龄组为36.36％(8/22).系统进化分析表明33份成功分型的阳性标本均为诺如病毒GⅡ.4型新变异株Sydney 2012感染.结论 诺如病毒是引起广州市急性胃肠炎暴发的主要病原之一,GⅡ.4型新变异株Sydney 2012是当年流行的优势毒株.
作者：谢华萍；耿进妹；刘静雯；陈纯；蔡文锋；狄飚；袁俊 刊期： 2016年第02期
目的 了解儿科门诊流感样病例和住院严重急性呼吸道感染病例中人偏肺病毒(hMPV)感染状况、病毒基因特征.方法 选取2011-2013年杭州地区哨点医院,儿科呼吸道门诊、住院病例共2 593例,流感样病例采集咽拭子1 676份,住院重急性呼吸道感染病例采集气管吸取物917份.用实时荧光RT-PCR方法检测hMPV核酸,阳性样本用RT-PCR方法对hMPV融合蛋白(F)基因片段扩增、序列与基因分型.实验结果作描述性统计和样本率的卡方检验.结果 门诊检出率6.62％(111/1 676),住院检出率6.32(58/917),检出率差异无统计学意义(x2=0.086,P=0.769).门诊与住院hMPV性别检出率差异无统计学意义.＜1岁组住院患儿检出率(6.33％,43/679)高于门诊(2.79％,19/681),差异有统计学意义(x2=9.808,P=0.002).hMPV阳性患儿平均年龄门诊(31.33±18.50月)＞住院(10.41±8.28月).冬季门诊检出率13.56％(59/435)高于住院8.06％(20/248),差异有统计学意义(x2=4.669,P=0.031).hMPV共感染检出率住院(31.04％,19/58)高于门诊(18.01％,20/111),差异有统计学意义(x2 =4.663,P=0.031).门诊和住院hMPV均以A2亚型多,不同基因型的临床特征不明显.结论 门诊与住院hMPV感染率无差异,hMPV阳性患儿平均年龄门诊大于住院,冬季hMPV检出率门诊高于住院,门诊与住院hMPV共感染主要病原不同,研究期间门诊与住院基因型均以A2为主.
作者：寇宇；于新芬；李钧；杨旭辉；周银燕；潘劲草；谢立；孙昼；濮小英 刊期： 2016年第02期
目的 分析ADAM10对铜离子诱导后的PrP蛋白的剪切特点.方法 常规方法表达、纯化人PrP全长蛋白(aa 23-230),利用氯化铜对纯化后的PrP蛋白进行诱导.用不同浓度的ADAM10对PrP蛋白进行处理,检测诱导后全长蛋白及剪切片段的PK抗性.结果 重组人PrP蛋白经Cu2诱导后具有部分抵抗PK消化的特点.Cu2+诱导后的PrP蛋白可被ADAM10剪切,具有剂量依赖性.ADAM10对Cu2+诱导的PrP蛋白处理后抵抗PK消化的能力明显加强.结论 ADAM10可以剪切Cu2+诱导的PrP蛋白,同时增加了处理后PrP蛋白的PK抗性.
作者：陈操；吕燕；石琦；董小平 刊期： 2016年第02期
目的 通过对肠道病毒性脑炎(Enterovirus Encephalitis,EVE)的患儿T细胞活化亚群、细胞因子的检测,探讨其在EVE发病机制中的可能作用.方法 选择2014年6月至2015年7月浙江大学医学院附属儿童医院神经科病房收住院的24例脑脊液肠道病毒阳性的EVE患儿为病例组,其中14例予活化T细胞亚群检测,24例均予细胞因子流式测定,同期门诊体检的49例健康儿童为对照组.通过流式细胞术检测两组外周血CD25 +/CD3+ CD4+、CD69 +/CD3+CD4+、HLA-DR/CD3+ CD4+、CD25 +/CD3+ CD8+、CD69 +/CD3+ CD8+、HLA-DR/CD3+ CD8+,及IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α、INF-γ水平.结果 病例组外周血CD69/CD3+ CD4+、CD69/CD3+ CD8+的表达含量(1.193％ ±2.849％,0.696％±1.242％)低于对照组(Z=-2.722,P=0.006;Z=-3.321,P=0.001).外周血病例组IL-2的表达水平(3.342±1.089 pg/ml)低于对照组(Z=-2.722,P=0.019);而IL-6,TNF-α的表达水平(123.046±355.349;3.367±1.717 pg/ml),与对照组相比,有所增加,差异有统计学意义(Z=-3.471,P=0.001;Z=-4.803,P＜0.001).结论 EVE患儿存在一定程度的免疫功能紊乱,T细胞活化亚群和细胞因子可能参与了EVE的发病过程.
作者：方春艳；邹小杰；袁哲峰；黄明海；高峰 刊期： 2016年第02期
目的 了解2007-2014年四川省急性弛缓性麻痹(acute flaccid paralysis,AFP)病例中柯萨奇病毒B组5型(Coxsackie virus B5,CVB5)的基因特征.方法 对四川省2007 ～2014年AFP病例中分离到的10株CVB5进行全VP1区逆转录-聚合酶链(RT-PCR)反应扩增和核苷酸序列测定,构建遗传进化树进行基因特征分析.结果 10株分离株均为D基因型,与CVB5原型株(Faulkner株)之间的核苷酸同源性和氨基酸同源性分别为80.4％ ～ 81.9％和95％ ～97.1％.2014年1株资阳分离株和1株成都分离株VP1区氨基酸序列完全一致,1株南充分离株和1株宜宾分离株VP1区核苷酸和氨基酸同源性均为100％.结论 2007-2014年四川地区AFP病例中分离到的CVB5为D基因型,且遗传特性较为稳定.
作者：马小珍；童文彬；刘李；曹冉冉；陈娜 刊期： 2016年第02期
目的 建立一种快速检测肠道病毒71型(EV71) IgM抗体的均相ELISA新技术.方法 首先克隆表达纯化EV71 VP1蛋白,使用生物素标记该蛋白.通过ELISA法摸索出Bio-EV71 VP1的适抗原量为0.0375 μg.优化供体微球、受体微球、血清等实验反应体系,建立EV71 VP1的均相酶联免疫检测方法的IgM检测技术.使用EV71感染的手足口病(HFMD)患者和健康人血清进行均相酶联免疫检测方法检测评价,并与ELISA检测结果相比较.结果 获得EV71 VP1纯化蛋白并生物素化.摸索出均相酶联免疫检测方法的体系:5 μg/ml受体微球、0.037 5μg生物素化的VP1、20μg/ml供体微球、血清2μl,总体系为20μl.采用ELISA和均相酶联免疫检测方法检测方法对样本血清进行IgM检测.两种方法同时检出手足口病患者lgM阳性16份;14份ELISA法检出阴性样本中,均相酶联免疫检测方法法检出阳性6份.20份健康人血清,2种方法检测结果均为阴性.结论 本研究初步建立了EV71 VP1 IgM的均相酶联免疫检测方法.
作者：崔雨；王颖；甘星；宋娟；韩俊 刊期： 2016年第02期
目的 对高载量标本HBV-DNA稀释检测时稀释液进行选择和评价,期望筛选出较为理想适用于临床的稀释液.方法 以阴性质控品作为标准稀释液,阴性血清、生理盐水、蒸馏水作为候选稀释液,分别对定值标准品(浓度为2.00×109 IU/ml)进行10倍、100倍的稀释检测,比较使用候选稀释液与标准稀释液的检测结果,同时进行偏差分析.结果 在10倍稀释时,使用蒸馏水稀释与标准稀释液稀释,其检测结果间差异无统计学意义(=2.04,P＞0.05),偏差小于行业标准规定的总允许误差;使用阴性血清、蒸馏水时检测结果高于标准稀释(P＜0.05),分别有16.67％和20.00％的偏差超过行业标准规定的总允许误差.在100倍稀释时,使用待选稀释液,其检测结果均高于使用标准稀释液时,差异有统计学意义(P＜0.05),且以蒸馏水作为稀释液时的检测结果与以标准稀释液稀释时的检测结果呈良好的线性关系,其公式为Y=0.963X+0.267;使用不同稀释液时偏差均小于行业标准规定的总允许误差,以标准稀释液偏差小,其次为蒸馏水、生理盐水、阴性血清(P＜0.05).结论 在10倍稀释时,适稀释液为阴性质控品与蒸馏水;在100倍稀释时,适稀释液为阴性质控品,其次为蒸馏水、生理盐水、阴性血清,以蒸馏水作为稀释液时,可通过公式y=0.963X+0.267对检测结果进行校正,确保结果更为精确.
作者：汪东剑；余维涛；张晓云；刘冬萍；邱华琴；彭慧琼 刊期： 2016年第02期
目的 了解头颈部鳞状细胞癌患者PrP蛋白的表达与临床进展及病理分级的关系.方法 在92例临床诊断的头颈部鳞状细胞癌患者中,通过免疫组化的方法对PrP蛋白在组织中的表达进行检测,同时对PrP蛋白与患者临床进展及病理分级程度的关系进行统计学分析.结果 在92例临床诊断的头颈部鳞状细胞癌患者中,PrP蛋白在肿瘤发生的不同部位其阳性率不同,随着患者的临床病程的进展其阳性率增高,随着肿瘤的病理分级的严重其阳性率增高.结论 PrP蛋白的高表达与头颈部鳞状细胞癌的发生、发展具有一定的相关性.
作者：魏炜；晋俊涛；张宝云；宋韫韬；张乃嵩；董小平；石琦 刊期： 2016年第02期
广东省是我国病毒性脑炎流行较为严重的地区之一,自开展乙脑疫苗的广泛接种以后,乙脑的发病率明显下降,但广东省内还存在大量其他病毒引起的脑炎和不明原因病毒性脑炎.本文就广东省病毒性脑炎流行现状、媒介蚊虫、疫苗接种和病原学等情况进行综述.
作者：吴延杰；申红卫；石向辉；钟建明；马学军 刊期： 2016年第02期
目的 为了更加直观地观察腺病毒(Adenovirus,Ad)与细胞之间的相互作用,本研究拟构建一株经绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Protein,GFP)标记(pⅨ)蛋白的5型重组腺病毒(Ad5-IXGFP).方法 我们将GFP基因构建至腺病毒穿梭质粒pShuttle中Ⅸ基因3'端,通过与骨架质粒pAdeasy-1在E.coli BJ5183细菌内的同源重组,获得了重组腺病毒质粒pAd5-IXGFP.将pAd5-IXGFP质粒经Pac Ⅰ酶切线性化后转染293细胞,拯救出重组腺病毒Ad5-IXGFP.结果 经扩增和超速离心纯化后可获得浓度为6.9×1011 vp/ml的重组腺病毒.该病毒于4℃与HEp-2细胞孵育后,重组病毒吸附于HEp-2细胞表面,用荧光显微镜观察,可见绿色荧光.结论 利用反向遗传学技术对重组腺病毒外壳蛋白pⅨ进行修饰,成功制备的经GFP标记的重组腺病毒可用于实时动态追踪腺病毒颗粒感染细胞的过程.
作者：邹小辉；郭小娟；王敏；屈建国；鲁茁壮；洪涛 刊期： 2016年第02期
文章总结分析了作者在从事科研院所外事管理岗位工作实践中的阶段性认识,通过对日常基本工作方法和流程的深入思考,分析出目前科研院所外事管理工作在管理主动性、创新性、精细化水平、服务观念和意识等方面的提升空间,并有针对性的提出优化思路和建议,通过充分履行岗位职责、优化工作流程等途径,增强工作主动性,建立科学系统的精细化管理体系,提高工作效率和服务水平,充分发挥管理工作的导向效能,促进科研事业发展.
作者：徐晶 刊期： 2016年第02期
目的 探索实验室高通量检测前临床样本中病毒核酸特异性纯化富集的方法.方法 以负链RNA病毒发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)为模拟样本,针对病毒基因组S、M和L三个片段设计杂交探针,并进行5'端生物素修饰,与链霉亲和素修饰磁珠共价结合,纯化样本中SFTSV核酸,比较研究特异性纯化富集对样本二代测序效果的影响.结果 cDNA文库制备时全转录组扩增前或后进行特异性富集纯化均较不开展富集纯化有显著改善,有效数据比例分别为5.57％、6.39％、2.71％,差别具有显著性(x2=9 799.8,P＜0.001).对全转录组扩增前或后进行特异性富集纯化对测序结果进行比较分析时发现,扩增后进行纯化优于扩增前(P＜0.001).结论 基于核酸杂交的病毒基因组特异性富集纯化方法可有效降低二代测序中背景值,提高测序效率,具有高通量检测前特异性纯化富集样本的作用.
作者：王利静；刘林；李建东；李伟红；张硕；梁米芳；李德新 刊期： 2016年第02期
目的 确定我国O1群El Tor生物型霍乱弧菌“噬菌体-生物分型”方案中“溶原性测定”中检测噬菌体的种类,研究溶原性测定的原理.方法 选择O1群El Tor型霍乱弧菌76株、O1群古典株8株、O139群菌株34株,利用溶原性测定方法检测菌株溶原性,检测菌株自发产生的溶原性噬菌体种类,检测阳性和阴性菌株染色体中该前噬菌体基因组,并检测这些菌株对溶原性噬菌体919TP(弧菌噬菌体K139家族)的敏感性.结果 O1群El Tor型菌株溶原性测定为阳性的19株菌,其释放的噬菌体主要为K139家族,具有溶原化的K139噬菌体,并对溶原性噬菌体919TP的敏感性为阴性;O1群El Tor型菌株22株对溶原性噬菌体919TP的敏感性为阳性,溶原性测定全部为阴性,基因组中不含有K139噬菌体;6株O1群古典型菌株溶原性检测为阳性株,但产生的噬菌体不是K139类;0139群菌株中5株溶原性测定为阳性,能检测到溶原性K139噬菌体基因组,并且34株菌全部不能被919TP感染.结论 O1群El Tor型霍乱弧菌“噬菌体-生物分型”方案中溶原性测定指标主要检测的是菌株释放K139类噬菌体的能力,即是否有K139噬菌体的溶原化并释放子代,“对溶原性噬菌体的敏感性”检测的是菌株能否被K139家族噬菌体(919TP)感染,因此生物分型中“溶原性测定”与“对溶原性噬菌体的敏感性”两个指标是相关联的.
作者：申小娜；张京云；付秀萍；李杰；梁未丽；阚飙 刊期： 2016年第02期
目的 评估两种等温扩增方法在二代测序(Next generation sequencing,NGS)病毒鉴定中的应用,为利用二代测序进行病毒鉴定提供参考.方法 选取了两份病原已知的重症肺炎病人咽拭子,分别采用单引物等温扩增(Single primer isothermal amplification,SPIA)和多重置换等温扩增(Multiple displacement amplification,MDA)的方法进行反转录扩增.扩增产物进行NGS测序和宏基因组学分析.结果 SPIA扩增产物片段较短,扩增效率较低;而MDA扩增的产物片段较长,扩增效率也高.SPIA法在两份样本中均检测到目标病原,且目标病原基因组覆盖度较高.MDA在其中一份样本中未能检测出目标病原.结论 SPIA与MDA扩增方法均可用于NGS病原鉴定.SPIA法扩增效率较低,成本较高,但检测病原的能力高于MDA.
作者：邹晓辉；赵翔；冯兆民；王大燕；舒跃龙 刊期： 2016年第02期
目的 研究人副流感病毒3型(hPIV3) HN受体结合位点中保守氨基酸功能.方法 采用定点突变与同源重组相结合方法将HN受体结合位点中的7个保守氨基酸突变为丙氨酸(A),分别为R192A、D216A、E409A、R424A、R502A、Y530A和E549A,各突变株在BHK-21细胞内表达并测定其免疫沉淀反应、蛋白表达效率、促细胞融合、受体结合和神经氨酸酶活性.结果 各突变株在BHK-21细胞内折叠加工正常并成功转运到细胞膜,其膜表面蛋白表达率与野毒株相比差别无统计学意义;各突变株促细胞融合活性不同程度下降,R502A降低多,为野毒株的14.2％;各突变株受体结合活性也不同程度降低,突变株吸附豚鼠红细胞与吸附人红细胞的能力大体一致;各突变株神经氨酸酶活性变化程度不同,R502A下降多,为18.6％;E549A下降少,为94.9％.结论 hPIV3HN蛋白受体结合位点中的保守氨基酸对HN的促细胞融合活性有重要作用,第502位精氨酸(R)是关键氨基酸.
作者：褚福禄；温红玲；王志玉 刊期： 2016年第02期
目的 从肾综合征出血热(HFRS)患者外周血单个核细胞(peripheral blood leukocytes,PBMC)中分离汉坦病毒,并对分离株全基因组序列测定及进化分析.方法 采集急性期HFRS患者外周血,分离PBMC后与Vero-E6细胞混合培养分离汉坦病毒,通过Real-time PCR和IFA法检测,扩增分离株全基因组片段进行序列测定及分析,并采用SX26分离株样本与HFRS患者恢复期血清和免疫接种者血清各50份进行微量中和试验.结果 成功分离到两株汉滩型毒株并获得全基因组序列,进化分析显示与西安分离株XAAa10091712同源性较高;微量中和试验结果显示50份HFRS患者恢复期血清分别中和分离株SX26与疫苗株Z10,中和抗体滴度差异有统计学意义,另50份免疫接种者血清样本针对SX26和Z10毒株产生的中和抗体阳转率分别为72％及88％,差异有统计学意义.结论 通过PBMC分离汉坦病毒可作为病毒分离的另一种途径;流行株与Z10疫苗株的抗原性存在差别,疫苗株产生的抗体中和流行株效果较弱,提示病毒进化过程中已发生部分变异,为疫苗免疫效果研究和肾综合征出血热的防治工作提供依据.
作者：马颖欣；余鹏博；张全福；李建东；王世文；李德新 刊期： 2016年第02期
中华实验和临床病毒学杂志
主管:实验和临床病毒学杂志
主办：中国科学技术协会
