郝国平；常虹；杨生梅；杜春蔚
目的探索促血小板生成素（Thrombopoietin，TPO）分子间相互作用及其存在位置。方法 构建了含有不同TPO区段的酵母双杂交系统融合表达质粒，转化酵母菌SFY526，分析β- 半 乳糖苷酶活性以推测TPO分子间的相互作用。结果 全长TPO-Pgbt9与全长TPO-Pgad42 4、全长TPO-Pgad424与TPO（N）-Pgbt9、TPO（N）-Pgbt9与TPO（N）-Pgad42 4之间有相互作用，全长TPO-Pgbt9与TPO（C）-Pgad424、TPO（N）-Pgbt9与TPO（ C）-Pgad424、TPO（C）-Pgbt9与TPO（C）-Pgad424之间无相互作用。结论 自然状态下TPO在N端结构区可能存在相互作用，C端结构域不 参与此过程。
作者：汪治清；杨新科；佟玉品；侯云德 刊期： 2001年第02期
戊型肝炎是经消化道途径传播的传染病，对人民健康影响很大，疫苗和诊断抗原的研制和开发是预防和控制其流行和传播的重要手段。戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)结构区蛋白ORF2存在多个抗原性决定簇并可能具有中和抗体的结合位点，因此戊型肝炎病毒基因工程重组蛋白的研制主要集中于ORF2。我们应用巴氏毕赤酵母(pichia pastoris)成功表达了戊型肝炎病毒结构区蛋白ORF2，制备了新型重组HEV ORF2，将其作为抗原建立酶联免疫吸附试验(简称P-ELISA)，检测正常人群及戊型肝炎患者血清中抗HEV-IgG和HEV-IgM抗体，同时以原核细胞表达的重组HEV ORF2建立的ELISA(简称E-ELISA)作为对照，旨在进一步研究酵母表达的重组HEV ORF2蛋白的抗原性，探讨其作为诊断抗原在戊型肝炎实验室诊断中的应用价值。
作者：佟玉品；鲁健；江永珍；毕胜利；詹美云 刊期： 2001年第02期
目的测定我国肾综合征出血热疫苗株Z10的全基因序列，了解其分子结构特征，并分析Z10与其他汉坦病毒株的遗传学差异，为疫苗生产提供依据。方法 从Z10病毒感染的细胞提取总RNA，将逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）扩增的产物纯化后克隆于T载体并进行序列测定，应用DNAS-TAR软件分析比较。结果 序列测定表明，Z10株L，M，S片段的全基因序列分别由6 553，3 615，1 701个核苷酸组成，单一读码框架分别编码2 151，1 135，429个氨基酸。基因比较分析表明，Z10株与HTN型外其他汉坦病毒同源性较低，与HTN型病毒接近，但与HTN型病毒核苷酸序列的同源性亦仅为83.6％～87.4％，而其氨基酸序列的同源性高达94.2％～96％，据此绘出了三个片段的核苷酸和氨基酸的种系发生树。结论 测定了Z10株的全基因组序列，首次发现Z10株为已报道的HTN型中的另一亚型。
作者：姚智慧；俞永新；董关木；刘文雪；杨惠娟；丁晓航 刊期： 2001年第02期
目的研究拉米夫定治疗慢性乙型肝炎的临床疗效和安全性。方法 选取72例慢性乙型肝炎病人，第一阶段为随机、双盲、安慰剂对照的研究共12周，分为拉米夫定组(n=54)和安慰剂组(n=18)；第二阶段为开放研究，所有病人均服用拉米夫定100 mg/d至104周。观察指标包括临床症状、肝功、乙型肝炎病毒(HBV)血清标志物、HBV DNA和病毒YMDD变异等。结果 拉米夫定治疗12周时，HBV DNA阴转率显著高于安慰剂组(61%对6%，P<0.01)，ALT持续复常率也高于安慰剂组(65%对11%，P<0.05)；治疗52周时，两组病人总的HBV DNA阴转率为78%，ALT持续复常率为39%，HBeAg阴转率和血清转换率分别为8.2%和6.1%；治疗104周时，两组病人总的HBV DNA阴转率36%，ALT持续复常率为33%，HBeAg阴转率和血清转换率分别为12.2%和6.1%。两组病人总的YMDD变异率在52周时为13.7%，104周时为39.7%。第一阶段拉米夫定和安慰剂组不良反应的差异不显著(P>0.05)，治疗期间未发生与药物有关的严重不良反应。结论 拉米夫定100 mg/d可以迅速降低血清HBV DNA和ALT水平，安全性良好。但应严密监测以及时发现YMDD病毒变异引起的HBV DNA反跳。
作者：马红；尤红；尹珊珊；贾继东；王宝恩 刊期： 2001年第02期
目的利用二氢叶酸还原酶缺陷的中国仓鼠卵巢细胞（CHO-dhfr-）和携带二氢叶酸还原酶基因的质粒载体，建立高效表达乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）的细胞系，以提高HBsAg在哺乳动物细胞中的表达产量。方法 将HBsAg基因插入pCI质粒，以脂质体方法转染CHO|dhfr-细胞，在氨甲喋呤选择压力下，筛选HBsAg表达阳性细胞克隆。结果 所获28株单克隆化细胞系，18株表达HBsAg，产量高者为4株。结论 通过HBsAg的高效表达证明，二氢叶酸还原酶缺陷细胞株和相应载体是哺乳类动物细胞表达外源基因的有效体系之一。
作者：伊瑶；张明程；刘崇柏；毕胜利 刊期： 2001年第02期
为研究Bcl-2蛋白在急慢性肝病患者全血中存在情况及其临床意义，以及判断是否在血清中存在Bcl-2蛋白，特立此题。1 材料和方法1.1 研究对象及诊断标准 46例患者均为302医院1998年4月至1998年8月住院病人，男37例，女9例，年龄17岁～67岁，平均38.1岁。急性肝炎4例，慢性肝炎轻度8例，中度4例（慢性肝炎均经病理证实），肝炎肝硬变20例，慢性重型肝炎10例。临床及病理诊断均按照1995年5月北京第5次全国传染病与寄生虫病学术会议修订的诊断标准。肝穿活检前后2天空腹抽血。1.2 Bcl-2蛋白含量检测 按照Bcl-2酶联免疫试剂盒提供的方法进行检测，并Labsystems Multiskan MS上，于450nm读吸光度A值，经换算得出Bcl-2蛋白含量。
作者：邹正升；辛绍杰；张战红；赵景民；施红；徐东平；韩凤连 刊期： 2001年第02期
对戊型肝炎在我国的流行特征和流行因素，康来仪等［1］进行了系统的研究，提出我国也是戊型肝炎的高发区，继甲型肝炎和乙型肝炎之后，戊型肝炎已成为我国发病和感染率高的一种肝炎。现对我院1992～1996年收治的散发性戊型肝炎301例的临床分析报告如下。1 临床资料1.1 病例 1992～1996年间的住院患者总计301例，急性黄疸型233例，急性无黄疸型19例，急性淤胆型22例，急性重型5例，亚急性重型12例，慢性重型10例。男261例，女40例。男女比例6.53∶1。各年龄组分布情况：18～39岁组97人(32.23%)，40～59岁组156人(51.82%)，60岁以上组48人(15.95%)。临床诊断和分型按1995年第五次全国传染病和寄生虫病学术会议修订和诊断标准。
作者：李迎新；赵志海；向轶；陈菊梅 刊期： 2001年第02期
一般认为，甲型肝炎病毒(HAV)感染在发展中国家多发生在幼儿和儿童期，多为亚临床型，不易被发现，病死率也较低〔1，2〕。现将我科1990～1999年收治的9例由HAV感染引起的儿童重型肝炎分析如下。1 一般情况 1990～1999年共收治甲型肝炎875例，其中甲、乙型肝炎病毒双重感染78例。诊断为重型肝炎9例，5例死亡，病死率为55.6%，在同期甲型肝炎中病死率为0.57%。其中急性重型肝炎2例(22.2%)，全部死亡，病死率为100%；亚急性重型肝炎7例(77.8%)，3例死亡，病死率为42.9%；9例中1例(11.1%)重叠HBV感染并死亡。患儿年龄1～10岁，平均年龄6岁；5岁以下5例(55.6%)。7例男孩(77.8%)，男：女为3.5∶1。重型肝炎的诊断标准按照1995年5月北京第五次全国传染病寄生虫病学术会议修订的病毒性肝炎防治方案的标准。肝昏迷按Ⅳ度分法。分析各相关因素对病死率的影响结果用t检验。
作者：朱世殊；张鸿飞；杨晓晋 刊期： 2001年第02期
艾滋病(AIDS)是由人类免疫缺陷病毒(HIV)引起的，以其选择性恶性变为临床症状的一种致死性疾病。我国自1985年报告首例艾滋病病人以来，其HIV感染人数呈逐年上升趋势。近几年来，贵州省已发现多例供血者HIV抗体阳性感染者〔1，2〕，对供血者进行严格的HIV检测必不可少。为此，我们对11 913名供血者进行了HIV抗体检测。
作者：万昌发；张新华；刘桂兰；杜吝；牟维娜；罗凤英；冯建平 刊期： 2001年第02期
目的分析62例急性重型肝炎(ASH)和72例亚急性重型肝炎(SSH)的病理、临床和实验室检查特点，以提高对重型肝炎的诊断正确率，指导临床早期、积极治疗，提高存活率。方法 应用EXCEL 2000软件对北京佑安医院24年中收治的有肝组织病理结果的ASH和SSH患者的临床特点进行分析。结果 ASH和SSH比较，发病年龄分别为40±13岁和44±15岁，P<0.005；肝性脑病的发病率分别为100%和为66.7%。肝性脑病Ⅴ度昏迷的发病率分别为69.3%和33.3%，P<0.01；肝脏重量二组均减轻；腹水的发生率分别为35.5%和76.4%；TBiL、PTA、NH3、WBC二者比较差异均有显著性，胆固醇均降低，且降低的数值与TBiL、PTA、Cho变化，与疾病发生、发展密切相关。结论 肝性脑病是ASH必须指标之一；TBiL、PTA、Cho与疾病变化密切相关，是重型肝炎实验室诊断的必须指标，也是临床病情变化及预后监测的必须指标之一。
作者：孟庆华；刘德恭；向海平 刊期： 2001年第02期
目的建立一种定量分析副粘病毒包膜糖蛋白融合细胞功能的方法。方法 将Vtf|7重组痘苗病毒感染BHK21细胞后，分别转染待测基因DNA和Pg1nt7 β-gal DNA，16h后将两个细胞群混合，37 ℃ 15 h后用NP-40裂解细胞，取上清进行显色反应，在SOFTMAX软件支持下用ELISA自动测定仪在570 nm 测吸光度A值。结果 指示基因法与细胞计数法有密切相关关系，r=0.9890(P＜0.01)；与面积判断法的符合率达100%。佳主要反应条件包括：16 mmol/L底物浓度；显色反应20～25 min；1 μgDNA转染量；每种细胞群接种1×105个。结论 指示基因法是一种非常敏感、特异、可重复性好的细胞融合定量分析方法，可用于副粘病毒细胞融合作用功能的研究，并可作为其他病毒细胞融合作用研究的参考，具有较大的推广应用价值
作者：王志玉；于修平 刊期： 2001年第02期
目的研制抗丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白NS3的人源噬菌体单链抗体，并探讨其在临床诊断中的应用价值。方法 以重组的丙型肝炎病毒非结构蛋白NS3为固相抗原，利用亲和筛选的原理，从噬菌体抗体库中经过5轮“吸附-洗脱-扩增”的筛选过程及酶联免疫吸附试验(ELISA)、斑点免疫杂交试验和DNA序列分析，获得HCV NS3的人源单链抗体；用该抗体与不同来源的HCV NS3抗原进行反应；对10例石蜡包埋的丙型肝炎患者肝组织进行免疫组化鉴定。结果 ELISA结果表明，所制备的HCV NS3人源单链抗体能与不同来源的HCV NS3抗原特异性结合(吸光度A值为1.38)；免疫组化结果表明，该抗体能够特异性识别丙型肝炎患者肝组织HCV NS3抗原，与正常肝组织及乙型肝炎病毒(HBV)的表面抗原均无交叉反应。结论 此法制备的单链抗体亲和性好，特异性强，且制备方法简便，周期短，可用于HCV NS3病原的检测。
作者：钟彦伟；王松山；赵景民；成军；张玲霞；李莉 刊期： 2001年第02期
α-干扰素治疗小儿慢性丙型肝炎的疗效已被公认。但对于α干扰素治疗无效及治疗后复发的难治性病例仍是目前临床工作中的难题。为探索小儿难治性丙型肝炎治疗的有效方法，我们采用随机年龄分组的方法，对6例患儿采用α-1胸腺肽(Tα-1)和α-2b干扰素(IFN α-2b)联合治疗，进行临床追踪观察。1 研究对象和方法1.1 研究对象 为1997～1998 302医院小儿肝病科住院及门诊治疗的小儿慢性丙型肝炎。入组者符合以下条件。①血清HCV RNA阳性，抗-HCV阳性，入选2月内血清ALT异常。②经α-干扰素治疗无效或有效后病情复发(ALT波动，HCV RNA阳性)者。③未经α-干扰素治疗，病程＞5年，血清ALT持续异常。④不能接受α-干扰素与利巴韦林联合治疗，或联合治疗无效者。
作者：张鸿飞；杨晓晋；朱世殊；徐志强；陈大为 刊期： 2001年第02期
目的建立检测TTV的酶免疫技术，了解不同型肝炎患者血清中抗-TTV抗体的分布情况，并结合TTV DNA的检测分析两者的关系。方法 以原核表达的TTV ORF1蛋白为抗原建立检测抗-TTV的酶联免疫吸附试验(ELISA)方法，采用该方法检测不同肝炎患者中抗-TTV抗体；以套式聚合酶链反应(PCR)方法检测血清标本中TTV DNA。结果 所建立的检测TTV的ELISA方法具有较好的特异性，不同型别肝炎患者中抗-TTV抗体阳性率分别为：甲型肝炎患者10.5%(4/38)，乙型肝炎患者12.5%(16/128)，丙型肝炎患者8.3%(7/84)，丁型肝炎患者7.7%(1/13)，戊型肝炎患者12%(3/25)，庚型肝炎患者6.5%(4/62)，非甲～庚型肝炎患者32.3%(30/93)，健康人群1.3%(1/78)。统计学分析表明，非甲～庚型肝炎患者抗-TTV阳性率显著高于其他型肝炎患者(P<0.01)，而正常人群则显著低于肝炎患者(P<0.05)。抗-TTV阳性率与TTV DNA阳性率存在相关性(P<0.05)。结论 在不同型肝炎患者中均可检出抗-TTV抗体，但以非甲～庚型肝炎患者阳性率高；TTV抗体可与基因同时存在于患者血清中，抗-TTV抗体可能类似抗-HCV，是一传染性标志。
作者：陈心春；李美忠；王火生；鲁健；徐六妹；周伯平；马为民 刊期： 2001年第02期
登革病毒(Dengue Virus,DV)是一类有包膜的单股、正链RNA病毒，基因组10～11kb，编码3种结构蛋白(C，PrM和E)和7种非结构蛋白(NS1,NS2a，NS2b，NS3，NS4a，NS4b和NS5)。自然界存在的登革病毒有四种血清型，均可引起温和的登革热(DF)和严重的致死率很高的登革出血热(DHF)、登革休克综合征(DSS)，而关于DF至DHF/DSS的发病机理迄今尚未阐明。近年来强毒力病毒理论〔1〕开始获得一些直接证据，越来越受到研究者的重视，该理论认为DHF/DSS的发生是受一种毒力更强的登革病毒株的感染。随着DNA测序技术的发展，登革病毒毒力的研究正进入一个新时期。
作者：赵卫；杨佩英 刊期： 2001年第02期
目的寻找抗肠道病毒(EV)感染的安全有效的药物。方法 采用细胞形态观察、MTT法比色检测利巴韦林、双黄连、大蒜素的细胞毒性，并以观察CPE、MTT法比色及蚀斑抑制实验判断其抗CBV3和ECHO11的活性和进行三者间及后二者病毒吸附前后的药效比较。结果 ①利巴韦林TC50为2 mg/ml，在1 mg/ml～1.5 mg/ml时有抑制CBV3和ECHO11的活性。②双黄连TC50为5 mg/ml，在0.5 mg/ml时即有抑制CBV3和ECHO11的活性，且与药物浓度呈正相关。③大蒜素TC50为12.5 μg/ml，在2.5 μg/ml～7.5μg/ml时有抑制CBV3和ECHO11的活性。④1.5 mg/ml利巴韦林对CBV3及ECHO11的蚀斑抑制率分别为43.2%和37.2%，2.5 mg/ml双黄连为81.1%和88.0%，5 μg/ml大蒜素为66.2%和77.4%。⑤双黄连在病毒吸附前用药蚀斑抑制率高于吸附后用药(P<0.05)；大蒜素的差异则不显著(P>0.05)。结论 三种药物均有体外抗CBV3、ECHO11的作用，但双黄连、大蒜素优于利巴韦林。三种药物中以双黄连毒性小，抑制病毒活性高。双黄连在病毒吸附前用药抗病毒活性优于病毒吸附后，有一定预防作用。
作者：罗荣；董永绥；方峰；李革 刊期： 2001年第02期
肠道病毒(EV)感染常见，所致疾病轻重不一，可表现为无症状感染或严重的脑膜炎、脑炎和心肌炎等。长期以来缺乏有效的病原学诊断方法。组织培养分离病毒费时，阳性率低，且病合1至2周得到结果时已无益于临床诊断和治疗。聚合酶链反应(PCR)方法能快速、特异地检测出脑膜炎病人脑脊液(CSF)中EV RNA，但感染初期及回顾性研究的临床标本中病毒滴度较低，扩增结果多为阴性，病毒培养也常常失败。我们采用二步扩增半套式PCR方法检测无菌性脑膜炎病人脑脊液(CSF)和血清标本中肠道病毒RNA，发现该方法较常规一步PCR敏感性至少增加100倍。10例病毒培养阳性的CSF标本，二次PCR后10例均阳性；同时期的血清标本病毒培养4例阳性，而二次扩增后7例阳性。10例CSF培养阴性者二次扩增后4例CSF阳性，2例血清阳性，对照组全部阴性。表明本方法特异敏感，对临床EV感染的病原学诊断有较高的使用价值。
作者：陈宗波；董永绥 刊期： 2001年第02期
目的在真核细胞表达具有生物活性的可溶性肿瘤坏死因子（TNF）受体蛋白，用于中和TNF的毒性。方法 将TNFR（P55）的胞外区基因和人IgG Fc段基因通过18个碱基的凝血酶切点连接，克隆入真核表达载体pcDNA3.1（＋），在COS7和BHK细胞分别得到目的蛋白的表达。结果 在真核表达系统表达了TNFR（P55）胞外区与人IgG Fc段的融合蛋白，免疫学实验及L929细胞体外实验均表明该蛋白具有TNFR（P55）特异的抗原性、与TNF结合的活性以及抑制TNF的活性。结论 真核表达的融合蛋白产物具有可溶性TNF受体（P55）的生物学活性。
作者：安乃莉；徐春晓；姚立红；陈爱君；曾革非；张立国；张智清 刊期： 2001年第02期
目的了解北京地区散发性急性甲型和戊型肝炎的年龄分布、肝功能损伤和预后。方法 用酶免疫法(EIA)检测1995年1月至2000年6月北京地区散发性急性肝炎患者抗甲型肝炎病毒IgM(HAV-IgM)和抗戊型肝炎病毒IgM(HEV-IgM)。结果 在203例散发性急性肝炎患者中，有112例为甲和戊型肝炎病毒感染，合计阳性率占55.2%，其中甲型肝炎占22.2%，戊型肝炎占33%。甲、戊型肝炎患者均有不同程度肝脏损伤，约75%的患者有中到重度的肝功能损伤(ALT值>500～≥3 500 U/ml)，比较重症甲型和戊型肝炎患者肝功能损伤程度(ALT值≥1000～≥3 500 U/ml)，甲型肝炎患者高于戊型肝炎。追踪患者系列血清及观察临床症状，患者均在2～3个月恢复，ALT转为正常，黄疸消退，未发现甲型和戊型肝炎慢性化病例。结论 散发性急性肝炎患者一半以上是由肠道传染的甲型和戊型肝炎病毒感染引起，甲型肝炎发病年龄主要以青年居多，戊型肝炎发病主要以青壮年为主。大多数甲型和戊型肝炎患者有中到重度的肝功能损伤。在我国病毒性肝炎的防治策略上，对散发性的甲、戊型肝炎的预防应引起同样高度重视。
作者：鲁健；赵洪兰；孟庆玲；廖胜东；汪媛；江永珍 刊期： 2001年第02期
为了掌握驻京直属院校新生麻疹抗体水平，合理制定免疫计划，我们对某院校2000年度入学新生进行了麻疹病毒抗体水平调查。调查人员379名，分两组，一组为从军队招生的学员，共103人，平均年龄21.6岁(20～30)；另一组为从地方招收的学员共276人，平均年龄19.5岁(17～21)。入学一周内整群采样，用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测麻疹病毒IgG，诊断试剂由中国预防医学科学院病毒学研究所诊断一室提供。测1：200、1：800、1：3 200、1：12 800四个滴度，＜1：200视为阴性(统计时按1：100计)，≥1：200视为阳性，＜1：800视为低抗体水平，≥1：800视为高抗体水平。结果，379人中IgG阴性36人(9.49%)，阳性343人(90.51%)；其中1：200阳性69人(18.21%)，1：800阳性94人(24.80%)，1：3 200阳性107人(28.23%)，1：12 800阳性73人(19.26%)；低抗体检出率为27.7%，高抗体检出率为72.3%；几何平均滴度(GMT)为1 285。
作者：胡小华；顾利；张利军；贾瑞忠 刊期： 2001年第02期
中华实验和临床病毒学杂志
主管:实验和临床病毒学杂志
主办：中国科学技术协会
