何雅青；杨洪
目的 构建表达狂犬病毒糖蛋白基因(GP)的重组人腺病毒。方法 克隆狂犬病毒疫苗株GP基因并测序，将其插入E3区缺失的Ad5载体，置于E3区早期启动子的控制下，通过同源重组，蚀斑纯化，筛选表达GP的重组人腺病毒。用ELISA法检测表达的糖蛋白，快速荧光灶抑制试验(RFFTT)法测定此重组病毒免疫小鼠后产生的中和抗体。结果 获得的3aG株基因的开放读码框为1575个核苷酸，编码524个氨基酸；经同源重组和蚀斑纯化获得了E3区表达狂犬病毒GP基因的重组人腺病毒；其表达产物能特异性地被抗狂犬病毒人免疫血清所识别；免疫小鼠后能产生一定水平的中和抗体。结论 成功构建了E3区表达狂犬病毒GP基因的重组人腺病毒，此重组腺病毒能有效诱导产生特异性中和抗体。
作者：张新梅；张云；李文辉；翟文静；王树蕙 刊期： 2000年第03期
目前临床上尚缺乏有效的针对乙型脑炎(下称乙脑)的药物治疗，近我们初步观察到一种核苷衍生物类化合物〔(RS)型二羟丙腺苷(RS)-9-(2，3-二羟丙烷基)腺嘌呤〕(下称(RS)-DHPA)与高压氧联合在小鼠体内对人工感染乙脑病毒的抑制作用，现报告如下。 乙脑病毒为P3～53株，以其不同浓度腹腔内接种于昆明纯种小鼠，测得其LD50为10-6.55/0.1 ml。实验中所用小鼠全为8 5～9.5 g/只，(RS)-DHPA纯品为比利时王国E De Clercq教授惠赠，用小鼠试选出无明显毒性作用的大剂量，作为实验之用。
作者：鲁猛原；熊宏恩；谭德明；谢玉桃桃；程瑞雪；夏忠弟 刊期： 2000年第03期
我们在进行序列分析过程中发现一株不同于以往国内外报道的新型HIV1的变异毒株。现报道如下：1 材料和方法1.1 前病毒DNA的提取某HIV1感染者300μLEDTA抗凝血，使用Promega公司的DNA提取试剂盒(Wizard GenomicDNA Purification Kit)提取HIV1前病毒DNA。1.2 HIV env基因c2-v3区的套式PCR扩增 以所提的HW1前病毒DNA为模板，利用一对外侧引物EP1，EP2(序列为，EP1：5＇-GGCAGTCTAGCA-GAAGAAGAGG-3＇：EP2：5＇-CCTACTTC-C TGCCACATG-3＇)和一对内侧引物EP3，EP4(序列为，EP3：5＇-GATCTGA-CAATTTCACGAACAAT TGC-3＇；EP4：5＇-C TGGGTCCCCTCCTGAAGGATG-3＇)进行nested-PCR反应。反应条件为94qC30s,55℃30s，72℃30s，35个循环；72℃C5min结束扩增。1.3 PCR扩增片段的克隆P CR扩增的特异性片段经Promega公司的PCR产物纯化试剂盒(WizardPCRprepsDNA pu-rification system)纯化后，与PGEM-T载体连接克隆于JM109宿主菌中
作者：吴虹；傅继华；王斌；刘传新；方荣；苏生利 刊期： 2000年第03期
目的 探讨人巨细胞病毒(Human Cytomegalovirus,HCMV)感染大鼠的敏感性和稳定性，探讨建立大鼠感染HCMV动物模型的可行性。方法 第一次动物试验：SD大鼠30只，随机均分为3组，分别为接种病毒组、灭活病毒组和正常对照组，病毒接种途径为尾静脉注射；第二次动物试验：Wistar大鼠40只，分别为接种病毒组(20只)、灭活病毒组(20只)，病毒接种途径同第一次动物试验。两次试验动物均于90d后分别以病理学方法 研究动物组织损伤特点，以免疫组化方法 检查病毒抗原，原位杂交方法 检测动物组织细胞中HCMV基因。结果 两次静脉途径接种HCMV AD169株90d的动物，组织发生广泛病理损害，免疫组化方法 和原位杂交方法 在多种组织细胞内查到HCMV抗原和基因表达。结论 HCMV AD169株可感染健康大鼠，可望作为HCMV动物慢性感染模型。
作者：孟红；孙德刚；王健；刘菊华；孙广莲；李焱；张家驹；张维东 刊期： 2000年第03期
目的 了解深圳市婴幼儿腹泻患者的不同型别腺病毒的感染情况.方法 应用聚合酶链反应技术(PCR)对114份婴幼儿腹泻标本进行腺病毒DNA检测，并使用Taq I和RsaI内切酶对扩增产物进行限制性内切酶图谱分析结果 婴幼儿腹泻标本腺病毒DNA检测的阳性率为14％(16／114)，利用TaqI鉴别腺病毒型别，其中有11份样品水解为191b[p和110bp的两个片段，表明肠道腺病毒DNA检测的阳性率为9.65％(11／114)；经RsaI切后，有2份水解为256bp和45bp(腺病毒40型)，阳性率为1.75％(2／114)，9份水解为2211和90(腺病毒41型)，阳性率为7.89％(9／114)。结论 所检要幼儿腹泻患者的样品中肠道腺病毒40和41的感染率约为9.65％(11／114)，其他型别腺病毒的感染率为4.35％(5／114)。
作者：何雅青；杨洪 刊期： 2000年第03期
原发性肝癌(PH C)与乙型肝炎病毒(HBV)感染的相关性已较明确，为探讨肝癌病人HBV感染状态，我们对230例甲胎蛋白(AFP)阳性确诊为PH C病人的HBV血清标志物进行了检测与分析。 1 材料和方法 230例PHC患者中，男200例，女30例，年龄28～77岁，平均52.84岁，为解放军302医院1995年至1998收治的病例，根据肝癌诊断标准，经临床、B超及CT证实且AFP阳性的PHC病人。AFP的检测采用放射免疫测定法，以AFP>400ng／ml判定为阳性；HBsAg、HBeAg、HBsAb的检测用双抗体夹心法。HBeAb及HBcAb的检测用竞争法。试剂盒由解放军302医院生产。
作者：何卫平；韩白己拉；朱传琳；王慧芬 刊期： 2000年第03期
我们对17例急性、亚急性重症戊型肝炎进行了分析。 1 材料和方法 1.1 病例 17例戊型病毒性急性和亚急性重型肝炎患者均为1992～1996年间302医院的住院病人。男14例，女3例。平均年龄为50.35岁(21～68岁)；60岁以上者6人，占35.29％。急性重型5例，亚急性重型12例。临床诊断和分型按1995年北京全国传染病寄生虫病学术会议修定的标准。 1.2 检测方法和试剂乙型肝炎五项指标及抗-HBC IgM，抗-HCV、抗-HEV、抗-HEV lgM、抗-HAV lgM、抗-CMV lgM、抗-EBV IgM、抗-HD IgM及-RDA g的检测均采用ELISA方法。HBVM、HEVM及抗-HAV lgM诊断试剂盒由302医院制备。抗-HCV诊断药盒北京福盈生物工程有限公司提供。抗-EMVIgM及抗-EBVIgM试剂由德国豪迈公司提供。肝功能指标包括丙氨酸转氨酶、胆红质定量、球蛋白、白蛋白及凝血酶原活动度。
作者：李迎新；赵志海；王立坤；彭崇兵 刊期： 2000年第03期
目前，国内外对戊型肝炎(HE)患者病毒血症已有研究，各家报道有明显不同，我们采用逆转录-聚合酶链反应方法检测32例HE患者系列血清，探明HE患者病毒血症持续时间和消长规律。 检测对象为中国医大二院传染科1995年1月至1996年10月期间住院患者32例，临床诊断为戊型肝炎。分别收集患者病后0～7 d、8～14 d、15～12 d、22～28d系列血清共125份，用异硫氰酸胍一步法抽提HEV RNA。引入一对外引物序列为：外正向引物(4459-4478)5＇- GCATTATGGA GGAGTGT GG-3＇，外反向引物 (4877-4858)5＇- CCAGG GCCC-CAATTCTTG-3＇，一对内引物序列为：内正向引物(4522--4539)5＇-GCGTG-GATCTTGCAGGCC-3＇，内反向引物(4741-4760)5＇-TTCAACTTCAA GCCACA GCC-3＇，进行2次PCR扩增。
作者：鲁学恒；王占英；崔丽华；孔庆章；乔光彦；庄辉 刊期： 2000年第03期
巨细胞病毒(HCMV)在人群中感染非常普遍，但大多数呈亚临床不显性感染或潜伏感染，在宿主特殊的状态下，这种潜伏感染可被激活为其重要的生物学特征[1，2]。为研究小儿急性呼吸道HCMV感染，根据1994年全国小儿巨细胞病毒感染学术会议上拟定的诊断标准[3,4]，选用HCMV-IgM为HCMV活动感染指标，对250例冬春季急性呼吸道感染(ARI)患儿和50名同期健康儿童进行了HCMV-lgM、呼吸道合胞病毒IgM(RSV-IgM)，腺病毒IgM(AdV-IgM)特异抗体同步检测和部分临床资料分析。 1 材料和方法 1.1 病例选择 1996年11月～1997年3月、1997年11月～1998年3月两个冬春季节期间在开封市儿童医院门诊及呼吸病房住院，临床诊断为病毒性呼吸道感染的患儿250例。男158例，女92例，年龄40～12岁。对照组系同期在市儿童医院健康体检的健康儿童50例，男40例，女10例，年龄7个月～12岁。
作者：任丽君；沈澎；阮秀花；田葱；张效本；贺美兰；王文珍；马景淑 刊期： 2000年第03期
目的 建立一种检测血清汉滩病毒抗体IgM的方法 。方法 将汉滩病毒抗原点于硝基纤维膜上，应用φ 15nm的羊抗人IgM金标抗体与血清标本中的汉滩病毒IgM结合，再加银加强试剂，阳性者为棕黑色。结果 整个试验过程需要10 min，用该法与ELISA法对比检测临床标本，结果 有良好的一致性，总符合率为98％。结论 银强化滴金免疫法操作简单，试剂稳定、安全、敏感、快速，适于基层。
作者：张铁汉；贺志安；杨秀珍；刘琳；段振锋 刊期： 2000年第03期
我们着重就协同受体与艾滋病发病机理的研究进展作一介绍。 1 协同受体介导病毒感染细胞 HIV-1感染人体后引起进行性的艾滋病病变，通常经历三个典型的时期，第一为急性感染期，表现为病毒血症；接着是无症状期，此时在淋巴器官中大多可检测出病毒的复制；后是免疫系统破坏，伴随病毒血症的再次出现。并产生继发性感染等而导致病人死亡。引起人体艾滋病的HⅣ-1病毒株有以下几种：①嗜巨噬细胞HIV-1株；②嗜T细胞HIV-1病毒株；③部分原代HIV-1分离株是双嗜性的，既感染嗜巨噬细胞，又感染T细胞[1-3]。
作者：王福生；王凝芳 刊期： 2000年第03期
目的 从分子水平鉴定海南省分离的两株甲病毒(HBb17和M1病毒)。方法 采用RT-PCR方法 ，分别扩增两株病毒基因组的3＇末端核苷酸序列，扩增产物经亚克隆，筛选重组子并测定核苷酸序列对序列进行分析。结果 HBb17和M1病毒分别扩增出约1.6kb和1.3kb的特异片段。序列分析表明，在3＇末端非翻译区HBb17病毒与罗斯河病毒(国际标准株T48病毒)核苷酸同源性为99％，M1病毒与鹭山病毒(SAG)同源性为98％；两病毒结构基因的E1区序列，HBb17病毒与罗斯河病毒核苷酸(氨基酸)同源性为99％(99％)，M1病毒与鹭山病毒核苷酸(氨基酸)同源性为97％(99％)，M1病毒与盖塔病毒同源性为94％(98％)。结论 序列分析表明，海南岛分离的HBb17病毒属于罗斯河病毒，M1病毒可能是鹭山病毒或盖塔病毒的变异株。
作者：赵文忠；赵春生；方美玉；蒋廉华；林立辉；周国林；何海怀；付士红；金奇；梁国栋；侯云德 刊期： 2000年第03期
目的 探讨庚型肝炎病毒(HGV)感染对慢性丙型肝炎(CH-C)的临床与病理学影响。方法 应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法对53例经肝穿活检确诊的CH-C患者血清标本进行了HGV-RNA检测，并将合并与未合并HGV感染者进行了临床与病理学对比。结果 HGV-RNA阳性15例(28.30％)。合并与未合并HGV感染者在临床表现、肝功能等生化指标水平、HCV-RNA阳性率及肝脏病理损害等方面差异均无显著性(p>0.05)。结论 HGV感染对CH-C的肝脏损害及HCV复制无影响。
作者：商庆华；张光曙；于建国；丁明权；周秀梅；甘天福 刊期： 2000年第03期
我们采用Abbott公司的Imx自动免疫分析仪及其微粒子酶免分析法进行HB-sAg、抗-HBs、HBeAg、抗-Hbe和抗-HBc的检测；采用美国Biatronics公司建立的Am-plisensor法进行PCR定量检测；采用PCR产物直接测序。统计学方法，率采用x检验；均数采用t检验；相关性采用直线回归分析。共调查317例，男254例，女63例，年龄2～77岁，平均(32.9±14.7)岁，共检出HBsAg与抗-HBs同时阳性者29例，总检出率9.15％，其中无症状感染者4.69％(3/64)、急性肝炎0(0／16)、慢性肝炎11.11％(16／144)、重型肝炎18.42％(7／38)和肝硬化5.45％(3／55)。
作者：尹华发；卢建溪；陈青；陈雪娟；高志良；姚集鲁 刊期： 2000年第03期
为促进医学的经验交流与应用，发展综合医学，探讨优良的医学教学方法，以及中国加入WTO之后，中医药的发展战略，经与世界多国卫生部、医学机构商定于2000年10月22日-23日在香港举办“世界综合医学大会”。届时将有澳洲、英国、泰国、老挝、越南、印尼、柬埔寨等国家卫生部(局)的高层官员参加，并邀请欧美等地医药学术团体赴会，盛况空前，除进行学术交流外，还举行香港紫荆花医学成就奖颁奖典礼。会后还组织杰出代表赴新加坡、马来西亚、文莱／印度／英国学术访问。 大会特邀请嘉宾：老挝卫生部部长、越南卫生部副部长、泰国卫生部医疗司司长、中国中医药学会秘书长、澳大利亚维省卫生部官员、南京中医药大学校长 主办机构：香港国际传统医学研究会、泰国卫生部泰中医学交流中心、澳洲全国中医 药针灸学会联合会、中华医学会深圳分会 协办机构：英国世界传统医学会、加拿大世界传统医学会、香港理工大学、深圳市中西 医结合临床研究所等国内外15个医学团体或学术机构 邀请对象：医药卫生部门负责人、医院院长、知名医学专家和业务骨干、药厂及医疗器 械厂厂长、医药科技人员、医药卫生专业媒体负责人等 交流科目：医院管理、普通内科、外科、神经科、口腔医学、影像医学、老年医学及美容 医学等。交流形式分主题报告、分组研讨、招商洽谈(共六场) 参会要求：需提交2500字以内论文一篇及300字以内个人简介。2寸近照4张。 国内报名地址：深圳市振华路1号红会医院第一门诊部后座四楼深圳市中西医结 合临床研究所。 资料请寄：深圳市华侨城沙河邮局38号信箱邮编：518053 电 话：0755-6606533 6607533 6607066/6606874 6609401(宅) 传 真：0755-6600900 联系人：彭索福小姐/商鉴小姐E-mail：szjtn@public. Szptt. Net. Cn
作者： 刊期： 2000年第03期
乙型脑炎病毒(JEV)高顺生株(高株)是我国学者于60年代从病人脑内分离到的乙脑病毒野毒株，其血凝活性的pH值较宽，与其他乙脑毒株不同，国内外对高株分子生物学研究尚未开展。我们对高株这两段基因保守区进行了DNA序列分析，以初步了解高株与其他乙脑野毒株基因序列的不同，为进一步阐明高株基因组结构与功能的关系奠定基础。 1 材料和方法 1.1 病毒的培养将中国预防医学科学院病毒学研究所虫媒病毒研究室冻存的感染高顺生野毒株的鼠脑在无菌状态下仔细研磨，离心取上清，10倍稀释后接种单层BHK细胞，数天后出现典型细胞病变(CPE)。
作者：孙静；陶三菊；陈伯权 刊期： 2000年第03期
目的 检测HPV 16 YY1位点突变株诱导的包皮角原细胞永生化细胞系的生物学特性。方法 提取永生化细胞株蛋白，以Western blot检测细胞内源性这p53蛋白含量；以TRAP法检测细胞中端粒体酶活性；将永生化细胞系接种于含有10％FCS的软琼脂培养基，观测细胞的软琼脂生长能力。结果 Western blot检测结果 显示4株永生化细胞系中p53均为阴性；端粒体酶活性均为阳性，并且随着细胞传代活性增强；在细胞传代初期各细胞系在软琼脂层上不能生长，而后期3株细胞系在软琼脂生长形成集落。结论 HPV 16 YY1位点突变株诱导的永生化细胞具有端粒体酶活性和软琼脂形成集落能力。
作者：刘红；董小平；周伟 刊期： 2000年第03期
目的 研究抗病毒抗生素17997对单纯疱疹病毒1型(HSV-1)DNA及蛋白质合成的影响。方法 应用氯化铯密度梯度离心，PAGE电泳及Western Blot方法 分别研究HSV-1 DNA及蛋白质合成。结果 17997 0.5 μmol／L，1.0 μmol／L，2.0 μmol／L及4.0 μnol／L分别抑制HSV-l DNA合成63.1％，74.1％，93.9％及100％。17997 4.0μnol／L对细胞DNA合成无影响。同上4种浓度17997对VERO细胞蛋白质合成无影响，但可选择性地抑制病毒蛋白质合成。结论 17997对细胞无毒浓度可选择性地抑制HSV-1 DNA及蛋白质合成。
作者：陈文；杨茂；陶佩珍 刊期： 2000年第03期
目前，血站对献血者HBsAg的筛查，大多采用ELISA法，虽然该法特异性、敏感性均佳，但因操作繁琐，故不适用于非固定采血点对献血者的快速筛查，而未经筛查直接采集的血液，往往由于该项检验不合格而报废。采用全血金标试纸条法对献血者进行HBsAg初筛，几分钟内即可完成检验，降低了血液报废率。 1 材料与方法 1.1 原理 全血金标试纸采用胶体金免疫技术，在硝酸纤维素膜上预包被金标抗HBsAg单抗(Au-ssAb)，硝酸纤维素膜上检测线和对照线上分别包被抗HBsAg单抗(sAb2)和羊抗鼠kgG。检测时，样本血清中HBsAg可与胶体金-抗体结合形成复合物，由于层析作用，复合物沿纸条向前移动。
作者：雷菊花；张明明；张彦；邓想民；刘友斌；王丹 刊期： 2000年第03期
现将302医院近10年收治的495例慢性重型肝炎患者的治疗效果分析如下。 1 材料和方法 1.1 一般资料495例患者系302医院住院病人，其中男性428例，女性67例，平均年龄43岁(8～73岁)。 1.2 诊断标准 符合1995年北京第五次全国传染病寄生虫病学术会议修订的慢性重型肝炎诊断标准。 1.3 治疗方法 治疗分3组。综合组189例，用6 912(复方茵陈)注射液、六合氨基酸、人血白蛋白、血浆(或鲜血)、支链氨基酸、强力宁、丹参及门冬氨酸、钾、镁等，并按病情使用脱氨、利尿、补钾、脱水、止血和抗感染等药物。促肝细胞生长素组178例，在同时使用综合组的基础上加用促肝细胞生长素80～200 mg加入5％葡萄糖或10％葡萄糖200ml中滴注，每日1次。G-I组128例，在同时使用综合组的基础上加G-I，10单位加入5％葡萄糖或10％葡萄糖400ml中滴注，每日1次。
作者：柴西进；邹正升；陈德永；朱安今；郑辉 刊期： 2000年第03期
中华实验和临床病毒学杂志
主管:实验和临床病毒学杂志
主办：中国科学技术协会
