赵文忠；赵春生；方美玉；蒋廉华；林立辉；周国林；何海怀；付士红；金奇；梁国栋；侯云德
目的 探讨庚型肝炎病毒(HGV)感染对慢性丙型肝炎(CH-C)的临床与病理学影响。方法 应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法对53例经肝穿活检确诊的CH-C患者血清标本进行了HGV-RNA检测，并将合并与未合并HGV感染者进行了临床与病理学对比。结果 HGV-RNA阳性15例(28.30％)。合并与未合并HGV感染者在临床表现、肝功能等生化指标水平、HCV-RNA阳性率及肝脏病理损害等方面差异均无显著性(p>0.05)。结论 HGV感染对CH-C的肝脏损害及HCV复制无影响。
作者：商庆华；张光曙；于建国；丁明权；周秀梅；甘天福 刊期： 2000年第03期
乙型脑炎病毒(JEV)高顺生株(高株)是我国学者于60年代从病人脑内分离到的乙脑病毒野毒株，其血凝活性的pH值较宽，与其他乙脑毒株不同，国内外对高株分子生物学研究尚未开展。我们对高株这两段基因保守区进行了DNA序列分析，以初步了解高株与其他乙脑野毒株基因序列的不同，为进一步阐明高株基因组结构与功能的关系奠定基础。 1 材料和方法 1.1 病毒的培养将中国预防医学科学院病毒学研究所虫媒病毒研究室冻存的感染高顺生野毒株的鼠脑在无菌状态下仔细研磨，离心取上清，10倍稀释后接种单层BHK细胞，数天后出现典型细胞病变(CPE)。
作者：孙静；陶三菊；陈伯权 刊期： 2000年第03期
目的 建立一种检测血清汉滩病毒抗体IgM的方法 。方法 将汉滩病毒抗原点于硝基纤维膜上，应用φ 15nm的羊抗人IgM金标抗体与血清标本中的汉滩病毒IgM结合，再加银加强试剂，阳性者为棕黑色。结果 整个试验过程需要10 min，用该法与ELISA法对比检测临床标本，结果 有良好的一致性，总符合率为98％。结论 银强化滴金免疫法操作简单，试剂稳定、安全、敏感、快速，适于基层。
作者：张铁汉；贺志安；杨秀珍；刘琳；段振锋 刊期： 2000年第03期
应用抗病毒药物单磷酸阿糖腺苷(ARA-Amp)和免疫调节剂海力特治疗慢性乙型肝炎30例，取得了一定疗效，现报告如下。 1 材料和方法 1.1 病例选择本组60例均为住院患者，诊断符合1995年第五届全国传染病、寄生虫会议修订的诊断分型标准，并HBsAg、HBeAg、HBV DNA均阳性。全部病例过去半年未接受过病毒药物治疗，随机分为治疗组和对照组。治疗组：男21例，女9例，平均年龄34岁。慢肝轻度17例，中度9例，重度4例。对照组：男23例，女7例，平均年龄34岁。
作者：潘兆随；熊玲；仉洪田 刊期： 2000年第03期
我们着重就协同受体与艾滋病发病机理的研究进展作一介绍。 1 协同受体介导病毒感染细胞 HIV-1感染人体后引起进行性的艾滋病病变，通常经历三个典型的时期，第一为急性感染期，表现为病毒血症；接着是无症状期，此时在淋巴器官中大多可检测出病毒的复制；后是免疫系统破坏，伴随病毒血症的再次出现。并产生继发性感染等而导致病人死亡。引起人体艾滋病的HⅣ-1病毒株有以下几种：①嗜巨噬细胞HIV-1株；②嗜T细胞HIV-1病毒株；③部分原代HIV-1分离株是双嗜性的，既感染嗜巨噬细胞，又感染T细胞[1-3]。
作者：王福生；王凝芳 刊期： 2000年第03期
目前，血站对献血者HBsAg的筛查，大多采用ELISA法，虽然该法特异性、敏感性均佳，但因操作繁琐，故不适用于非固定采血点对献血者的快速筛查，而未经筛查直接采集的血液，往往由于该项检验不合格而报废。采用全血金标试纸条法对献血者进行HBsAg初筛，几分钟内即可完成检验，降低了血液报废率。 1 材料与方法 1.1 原理 全血金标试纸采用胶体金免疫技术，在硝酸纤维素膜上预包被金标抗HBsAg单抗(Au-ssAb)，硝酸纤维素膜上检测线和对照线上分别包被抗HBsAg单抗(sAb2)和羊抗鼠kgG。检测时，样本血清中HBsAg可与胶体金-抗体结合形成复合物，由于层析作用，复合物沿纸条向前移动。
作者：雷菊花；张明明；张彦；邓想民；刘友斌；王丹 刊期： 2000年第03期
目的 在CVB3易感的Vero细胞系中观察与 C V％RNA 5'NCR的nt 581-601区域互补的2l聚硫代AODN抗病毒活性。方法 采用MTT法测定细胞活性，直接观察CPE，测定培养上清TCID50，并分别用ELISA和斑点杂交法检测CVB3抗原及其RNA。结果 1.AODN可推迟和减轻CPE，且随AODN浓度增加，对CPE的抑制作用增强，感染细胞存活率也随AODN浓度升高而升高；2.AODN可抑制CVB3抗原表达及RNA的合成，且呈剂量依赖关系；3.培养上清中病毒滴度随AODN浓度升高而降低。AODN抗病毒活性在转染后48 h效果较好；10 μnol／L浓度抑制效果较好。本研究结果 也显示10 μnol／L SODN对CVB3感染细胞CPE有较弱的抑制作用，但RODN未显示抗病毒活性；AODN未显现对HSV-l感染细胞CPE抑制活性，但对其他肠道病毒如CVB5，Polio-1和ECHO-6有较弱的抑制活性。结论 AODN可能通过抑制CVB3RNA复制来抑制病毒合成。
作者：齐秀英；李晓眠；刘民；李海；张国际 刊期： 2000年第03期
选用氧氟沙星(OFLX)和叠氮胸苷(AZT)单独投入及与IFN并用，观察其抗病毒活性结果如下： 1 材料和方法 1.1 病毒和细胞所用黄病毒为乙型脑炎病毒JEV的JaGAr-01株。细胞是人肝癌细胞株HepG2。细胞培养所用培养液为DMEM加10％胎牛血清(FCS)。 1.2 感染病毒病毒感染剂量为l0 m.o.i(multiplicityinfection)，37℃吸附60min，在5％CO2孵箱中培养。将各种浓度的药物添加至含病毒的细胞培养液中，24h后采取培养上清液，测定病毒的含量。 1.3 病毒滴定用空斑形成方法。将含有病毒的培养上清液按比例稀释，在24孔培养板内单层培养的仓鼠肾细胞株BHK上，添加0.6％的甲基纤维素液和含有1％FCS的MEM培养液，3d后用甲醇固定，l％结晶紫染色，计算空斑数。
作者：徐可树；邹丽 刊期： 2000年第03期
目的 检测HPV 16 YY1位点突变株诱导的包皮角原细胞永生化细胞系的生物学特性。方法 提取永生化细胞株蛋白，以Western blot检测细胞内源性这p53蛋白含量；以TRAP法检测细胞中端粒体酶活性；将永生化细胞系接种于含有10％FCS的软琼脂培养基，观测细胞的软琼脂生长能力。结果 Western blot检测结果 显示4株永生化细胞系中p53均为阴性；端粒体酶活性均为阳性，并且随着细胞传代活性增强；在细胞传代初期各细胞系在软琼脂层上不能生长，而后期3株细胞系在软琼脂生长形成集落。结论 HPV 16 YY1位点突变株诱导的永生化细胞具有端粒体酶活性和软琼脂形成集落能力。
作者：刘红；董小平；周伟 刊期： 2000年第03期
目的 从分子水平鉴定海南省分离的两株甲病毒(HBb17和M1病毒)。方法 采用RT-PCR方法 ，分别扩增两株病毒基因组的3＇末端核苷酸序列，扩增产物经亚克隆，筛选重组子并测定核苷酸序列对序列进行分析。结果 HBb17和M1病毒分别扩增出约1.6kb和1.3kb的特异片段。序列分析表明，在3＇末端非翻译区HBb17病毒与罗斯河病毒(国际标准株T48病毒)核苷酸同源性为99％，M1病毒与鹭山病毒(SAG)同源性为98％；两病毒结构基因的E1区序列，HBb17病毒与罗斯河病毒核苷酸(氨基酸)同源性为99％(99％)，M1病毒与鹭山病毒核苷酸(氨基酸)同源性为97％(99％)，M1病毒与盖塔病毒同源性为94％(98％)。结论 序列分析表明，海南岛分离的HBb17病毒属于罗斯河病毒，M1病毒可能是鹭山病毒或盖塔病毒的变异株。
作者：赵文忠；赵春生；方美玉；蒋廉华；林立辉；周国林；何海怀；付士红；金奇；梁国栋；侯云德 刊期： 2000年第03期
我们对80例非甲～非庚型肝炎患者、血清ALT升高以及长期维持性血透患者(部分患者有输血史)进行检测，对二十余例 TTV分离株进行测序研究，结果如下： 提取患者血清DNA，巢式PCR扩增TTV。参照Okamoto等报道的N22分离株 TTV基因序列设计套式引物:n 5＇-ACA GAC AGA GGA GAA GGC AAC- 3＇(1892 ～ 1913),T2 5＇ - GGA TAC CTA TTAGCT C TC AT- 3＇(2187 - 2207), T3 5＇ -GGC AAC ATG TTA TGG ATA GAC- 3＇(1914- 1935) ,T4 5＇ - CCT C GC ATT TTACCA T TT CCA - 3＇(2165 - 2186)。
作者：李体远；藏勇；周伯平；孙彤 刊期： 2000年第03期
目的 构建表达狂犬病毒糖蛋白基因(GP)的重组人腺病毒。方法 克隆狂犬病毒疫苗株GP基因并测序，将其插入E3区缺失的Ad5载体，置于E3区早期启动子的控制下，通过同源重组，蚀斑纯化，筛选表达GP的重组人腺病毒。用ELISA法检测表达的糖蛋白，快速荧光灶抑制试验(RFFTT)法测定此重组病毒免疫小鼠后产生的中和抗体。结果 获得的3aG株基因的开放读码框为1575个核苷酸，编码524个氨基酸；经同源重组和蚀斑纯化获得了E3区表达狂犬病毒GP基因的重组人腺病毒；其表达产物能特异性地被抗狂犬病毒人免疫血清所识别；免疫小鼠后能产生一定水平的中和抗体。结论 成功构建了E3区表达狂犬病毒GP基因的重组人腺病毒，此重组腺病毒能有效诱导产生特异性中和抗体。
作者：张新梅；张云；李文辉；翟文静；王树蕙 刊期： 2000年第03期
我们采用Abbott公司的Imx自动免疫分析仪及其微粒子酶免分析法进行HB-sAg、抗-HBs、HBeAg、抗-Hbe和抗-HBc的检测；采用美国Biatronics公司建立的Am-plisensor法进行PCR定量检测；采用PCR产物直接测序。统计学方法，率采用x检验；均数采用t检验；相关性采用直线回归分析。共调查317例，男254例，女63例，年龄2～77岁，平均(32.9±14.7)岁，共检出HBsAg与抗-HBs同时阳性者29例，总检出率9.15％，其中无症状感染者4.69％(3/64)、急性肝炎0(0／16)、慢性肝炎11.11％(16／144)、重型肝炎18.42％(7／38)和肝硬化5.45％(3／55)。
作者：尹华发；卢建溪；陈青；陈雪娟；高志良；姚集鲁 刊期： 2000年第03期
细胞凋亡是细胞接受某种或受到某些因素刺激后产生的一种主动的，由一些凋亡相关基因相互作用的细胞消亡过程，这与坏死不同。细胞凋亡是一种重要的生命现象，不仅出现在生理状态下，而且更与许多疾病相关联。发育过程中的神经细胞凋亡是保证机体正常发育和维持生理过程所必须的，而分化成熟的神经细胞凋亡过程则会引起病理性损害，如巴金森病和老年性痴呆[1]。病毒的感染和复制常与感染性疾病的细胞凋亡有关。在病毒感染早期，宿主细胞利用细胞凋亡以阻止病毒的复制和扩散。机体的免疫系统通过凋亡途径杀伤被感染细胞。另方面病毒在感染早期抑制细胞凋亡，以利病毒的存活、复制和扩散。
作者：王佳伟；王得新 刊期： 2000年第03期
人巨细胞病毒(human cytomegalovirus，HCMV)与宫颈癌关系十分密切，但与大肠癌关系的报道较少。本文就HCMV感染及大肠癌p53基因与HCMV感染的相关性进行了研究。 1 材料和方法 1.1 标本来源 收集1994年～1996年白求恩医科大学中日联谊医院外科切除大肠癌组织共60例，存放于-80℃。均经病理证实，并结合临床进行了Dukes分期和组织分化程度分型。患者年龄在38～72岁之间，男42例，女18例。 1.2 DNA模板制备取-80C冻存组织约1 g，经组织研磨器研磨，加入1mlDNA裂解缓冲液置55℃ 1 h，95C 15mmin，经13 000 r／m min离心10 min，上清即为DNA模板。再0.8％～1％低电渗琼脂糖凝胶电泳，以排除降解的模板。
作者：侯治富；杨绍娟；王维忠；张文岚；吴晓冬 刊期： 2000年第03期
我们对17例急性、亚急性重症戊型肝炎进行了分析。 1 材料和方法 1.1 病例 17例戊型病毒性急性和亚急性重型肝炎患者均为1992～1996年间302医院的住院病人。男14例，女3例。平均年龄为50.35岁(21～68岁)；60岁以上者6人，占35.29％。急性重型5例，亚急性重型12例。临床诊断和分型按1995年北京全国传染病寄生虫病学术会议修定的标准。 1.2 检测方法和试剂乙型肝炎五项指标及抗-HBC IgM，抗-HCV、抗-HEV、抗-HEV lgM、抗-HAV lgM、抗-CMV lgM、抗-EBV IgM、抗-HD IgM及-RDA g的检测均采用ELISA方法。HBVM、HEVM及抗-HAV lgM诊断试剂盒由302医院制备。抗-HCV诊断药盒北京福盈生物工程有限公司提供。抗-EMVIgM及抗-EBVIgM试剂由德国豪迈公司提供。肝功能指标包括丙氨酸转氨酶、胆红质定量、球蛋白、白蛋白及凝血酶原活动度。
作者：李迎新；赵志海；王立坤；彭崇兵 刊期： 2000年第03期
目的 调查TTV阴性的非甲～庚型肝炎患者中TTV～like mini virus(TLMV)感染情况，对TLMV5＇非编码区(5＇NCR)部分基因进行分子克隆与序列分析。方法 采用巢式PCR技术检测53例T T V阴性的非甲～庚肝炎患者血清TLMV DNA，对PCR产物进行克隆、测序和分析。结果 53例病例中TLMV DNA阳性37例(69.8％)，对其中8株TLMV基因克隆测序，并与Takahashi报道的TLMV序列(GenBank Accession No ab 026930、ab026931)比较，其核苷酸序列同源性在64％～83％之间。结论 在T TV阴性的非甲～庚肝炎患者中存在TLMV感染。TLMV5＇NCR基因变异性较大。TLMV的致病性及其与非甲～庚肝炎的关系尚有待进一步研究。
作者：周伯；陈心春；马为民；徐六妹；王火生；杨桂林；洪龙 刊期： 2000年第03期
为了解成都地区HGV感染情况，我们采用逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)对职业献血员、健康自然人群和急慢性肝炎病人进行了检测。 1 材料和方法 1.1 对象成都职业献血员165名，各项体检均合格。成都键康自然人群406名，A～E肝炎血清标志均阴性，ALT正常。肝炎病人包括急性甲型肝炎32人，急性乙型肝炎87人，慢性乙型肝炎95人，慢性丙型肝炎23人，非A～E肝炎18人，这些病人均用酶联免疫吸附试验(ELSA)(上海科华试剂)测定血清病毒抗原／抗体证实。 1.2 HGV引物据5＇-NCR和NS5α区设计引物和捕获探针[2]，由北京赛百盛(美国)生物工程公司合成。5＇-NCR区扩增位于100-285核苷酸片段，NS 5α区扩增位于6 904-7 059核苷酸片段。
作者：杨朝国；张玲英；丁广祥；陈志远 刊期： 2000年第03期
目的 了解流行于山东境内HIV-1毒株的亚型分布及变异情况，分析其来源并推测其流行趋势。方法 采集了25份HIV-1抗体阳性感染者的全血分离单核细胞(PBMC)，提取前病毒DNA，经nested-PCR扩增HIV-1膜蛋白(env)基因的C2-V3区并进行序列测定和亚型分析。结果 25份HIV-1阳性感染者的PBMC样品中扩增到24份可用于序列测定的HIV-1env基因片段，经序列测定和基因分析鉴别出共有5种HIV-1M亚群基因亚型：A、B、C、E和B＇亚型。13名有偿献血人员均为B＇(泰国B)亚型，10名回国劳工及1名回国劳工的女性配偶中存在A、B、C、E四种亚型。结论 山东省HIV-1各种亚型毒株感染情况复杂，因此应加强对献血者及回国劳工等高危人群的检测和控制，以防HIV-1各亚型毒株在全省的蔓延。
作者：刘传新；苏生利；黄涛；傅继华；赵世立；邢辉；潘品良；范秀娟；冯毅；邵一鸣 刊期： 2000年第03期
目的 探讨人巨细胞病毒(Human Cytomegalovirus,HCMV)感染大鼠的敏感性和稳定性，探讨建立大鼠感染HCMV动物模型的可行性。方法 第一次动物试验：SD大鼠30只，随机均分为3组，分别为接种病毒组、灭活病毒组和正常对照组，病毒接种途径为尾静脉注射；第二次动物试验：Wistar大鼠40只，分别为接种病毒组(20只)、灭活病毒组(20只)，病毒接种途径同第一次动物试验。两次试验动物均于90d后分别以病理学方法 研究动物组织损伤特点，以免疫组化方法 检查病毒抗原，原位杂交方法 检测动物组织细胞中HCMV基因。结果 两次静脉途径接种HCMV AD169株90d的动物，组织发生广泛病理损害，免疫组化方法 和原位杂交方法 在多种组织细胞内查到HCMV抗原和基因表达。结论 HCMV AD169株可感染健康大鼠，可望作为HCMV动物慢性感染模型。
作者：孟红；孙德刚；王健；刘菊华；孙广莲；李焱；张家驹；张维东 刊期： 2000年第03期
中华实验和临床病毒学杂志
主管:实验和临床病毒学杂志
主办：中国科学技术协会
