齐秀英；李晓眠；刘民；李海；张国际
人巨细胞病毒(human cytomegalovirus，HCMV)与宫颈癌关系十分密切，但与大肠癌关系的报道较少。本文就HCMV感染及大肠癌p53基因与HCMV感染的相关性进行了研究。 1 材料和方法 1.1 标本来源 收集1994年～1996年白求恩医科大学中日联谊医院外科切除大肠癌组织共60例，存放于-80℃。均经病理证实，并结合临床进行了Dukes分期和组织分化程度分型。患者年龄在38～72岁之间，男42例，女18例。 1.2 DNA模板制备取-80C冻存组织约1 g，经组织研磨器研磨，加入1mlDNA裂解缓冲液置55℃ 1 h，95C 15mmin，经13 000 r／m min离心10 min，上清即为DNA模板。再0.8％～1％低电渗琼脂糖凝胶电泳，以排除降解的模板。
作者：侯治富；杨绍娟；王维忠；张文岚；吴晓冬 刊期： 2000年第03期
应用抗病毒药物单磷酸阿糖腺苷(ARA-Amp)和免疫调节剂海力特治疗慢性乙型肝炎30例，取得了一定疗效，现报告如下。 1 材料和方法 1.1 病例选择本组60例均为住院患者，诊断符合1995年第五届全国传染病、寄生虫会议修订的诊断分型标准，并HBsAg、HBeAg、HBV DNA均阳性。全部病例过去半年未接受过病毒药物治疗，随机分为治疗组和对照组。治疗组：男21例，女9例，平均年龄34岁。慢肝轻度17例，中度9例，重度4例。对照组：男23例，女7例，平均年龄34岁。
作者：潘兆随；熊玲；仉洪田 刊期： 2000年第03期
目的 检测HPV 16 YY1位点突变株诱导的包皮角原细胞永生化细胞系的生物学特性。方法 提取永生化细胞株蛋白，以Western blot检测细胞内源性这p53蛋白含量；以TRAP法检测细胞中端粒体酶活性；将永生化细胞系接种于含有10％FCS的软琼脂培养基，观测细胞的软琼脂生长能力。结果 Western blot检测结果 显示4株永生化细胞系中p53均为阴性；端粒体酶活性均为阳性，并且随着细胞传代活性增强；在细胞传代初期各细胞系在软琼脂层上不能生长，而后期3株细胞系在软琼脂生长形成集落。结论 HPV 16 YY1位点突变株诱导的永生化细胞具有端粒体酶活性和软琼脂形成集落能力。
作者：刘红；董小平；周伟 刊期： 2000年第03期
我们着重就协同受体与艾滋病发病机理的研究进展作一介绍。 1 协同受体介导病毒感染细胞 HIV-1感染人体后引起进行性的艾滋病病变，通常经历三个典型的时期，第一为急性感染期，表现为病毒血症；接着是无症状期，此时在淋巴器官中大多可检测出病毒的复制；后是免疫系统破坏，伴随病毒血症的再次出现。并产生继发性感染等而导致病人死亡。引起人体艾滋病的HⅣ-1病毒株有以下几种：①嗜巨噬细胞HIV-1株；②嗜T细胞HIV-1病毒株；③部分原代HIV-1分离株是双嗜性的，既感染嗜巨噬细胞，又感染T细胞[1-3]。
作者：王福生；王凝芳 刊期： 2000年第03期
目的 构建含输血传播病毒(TT V)部分基因序列的原核表达载体并进行表达及产物活性的鉴定。方法 在计算机模拟基础上，采用PCR的方法 ，从一名非甲～庚肝炎患者血清中，扩增编码蛋白具有抗原活性的TTV ORF2部分基因片段。将该片段插入表达载体pQE-30，在大肠埃希菌中进行表达并利用酶联免疫吸附试验(ELISA)鉴定表达产物活性。结果 SDS-PAGE电泳后经电脑分析显示，表达产物相对分子质量与预计相同，表达量占菌体总蛋白量的22.33％。经ELISA检测表明表达产物有结合抗体活性。结论 成功构建了含TTV部分基因的原核表达载体，表达产物具有抗原活性。
作者：李伯安；程云；郑宇；苏琴；高蓉；李靖；侯俊 刊期： 2000年第03期
我们在进行序列分析过程中发现一株不同于以往国内外报道的新型HIV1的变异毒株。现报道如下：1 材料和方法1.1 前病毒DNA的提取某HIV1感染者300μLEDTA抗凝血，使用Promega公司的DNA提取试剂盒(Wizard GenomicDNA Purification Kit)提取HIV1前病毒DNA。1.2 HIV env基因c2-v3区的套式PCR扩增 以所提的HW1前病毒DNA为模板，利用一对外侧引物EP1，EP2(序列为，EP1：5＇-GGCAGTCTAGCA-GAAGAAGAGG-3＇：EP2：5＇-CCTACTTC-C TGCCACATG-3＇)和一对内侧引物EP3，EP4(序列为，EP3：5＇-GATCTGA-CAATTTCACGAACAAT TGC-3＇；EP4：5＇-C TGGGTCCCCTCCTGAAGGATG-3＇)进行nested-PCR反应。反应条件为94qC30s,55℃30s，72℃30s，35个循环；72℃C5min结束扩增。1.3 PCR扩增片段的克隆P CR扩增的特异性片段经Promega公司的PCR产物纯化试剂盒(WizardPCRprepsDNA pu-rification system)纯化后，与PGEM-T载体连接克隆于JM109宿主菌中
作者：吴虹；傅继华；王斌；刘传新；方荣；苏生利 刊期： 2000年第03期
目的 建立一种检测血清汉滩病毒抗体IgM的方法 。方法 将汉滩病毒抗原点于硝基纤维膜上，应用φ 15nm的羊抗人IgM金标抗体与血清标本中的汉滩病毒IgM结合，再加银加强试剂，阳性者为棕黑色。结果 整个试验过程需要10 min，用该法与ELISA法对比检测临床标本，结果 有良好的一致性，总符合率为98％。结论 银强化滴金免疫法操作简单，试剂稳定、安全、敏感、快速，适于基层。
作者：张铁汉；贺志安；杨秀珍；刘琳；段振锋 刊期： 2000年第03期
我们对80例非甲～非庚型肝炎患者、血清ALT升高以及长期维持性血透患者(部分患者有输血史)进行检测，对二十余例 TTV分离株进行测序研究，结果如下： 提取患者血清DNA，巢式PCR扩增TTV。参照Okamoto等报道的N22分离株 TTV基因序列设计套式引物:n 5＇-ACA GAC AGA GGA GAA GGC AAC- 3＇(1892 ～ 1913),T2 5＇ - GGA TAC CTA TTAGCT C TC AT- 3＇(2187 - 2207), T3 5＇ -GGC AAC ATG TTA TGG ATA GAC- 3＇(1914- 1935) ,T4 5＇ - CCT C GC ATT TTACCA T TT CCA - 3＇(2165 - 2186)。
作者：李体远；藏勇；周伯平；孙彤 刊期： 2000年第03期
目的 了解流行于山东境内HIV-1毒株的亚型分布及变异情况，分析其来源并推测其流行趋势。方法 采集了25份HIV-1抗体阳性感染者的全血分离单核细胞(PBMC)，提取前病毒DNA，经nested-PCR扩增HIV-1膜蛋白(env)基因的C2-V3区并进行序列测定和亚型分析。结果 25份HIV-1阳性感染者的PBMC样品中扩增到24份可用于序列测定的HIV-1env基因片段，经序列测定和基因分析鉴别出共有5种HIV-1M亚群基因亚型：A、B、C、E和B＇亚型。13名有偿献血人员均为B＇(泰国B)亚型，10名回国劳工及1名回国劳工的女性配偶中存在A、B、C、E四种亚型。结论 山东省HIV-1各种亚型毒株感染情况复杂，因此应加强对献血者及回国劳工等高危人群的检测和控制，以防HIV-1各亚型毒株在全省的蔓延。
作者：刘传新；苏生利；黄涛；傅继华；赵世立；邢辉；潘品良；范秀娟；冯毅；邵一鸣 刊期： 2000年第03期
常规聚合酶链反应(PCR)方法对患者HBV和HCV需要分别检测，因而操作繁琐，费时费力，且增加了污染的机会，为此，我们建立了双重PCR技术，实现一步法同时进行HBV和HCV的检测。 选取肝病患者血清标本115例，20例正常对照标本采自HBsAg阴性、肝功能正常的献血员。核酸提取采用蛋白酶K消化，酚／氯仿抽提，乙醇沉淀，将提取的DNA和RNA复悬于焦碳二乙酯处理过的蒸馏水中，并加入2U RNA酶抑制剂Rnasin。PCR反应在核酸提取管中进行，总体积50μl，反应条件为10 mmol／L Tris·Cl(pH8.3)，50mmol／LKCl，2mmol／LMgCl2，0.5μmol／L HBV和HCV引物，0.2 mmol／LdNITP,AMVRT逆转录酶2U，Tag DNA聚合酶2U，RNA酶抑制剂Rnasin 10 U，混匀。
作者：张舒林；张汴娜；徐兴芳 刊期： 2000年第03期
目的 在CVB3易感的Vero细胞系中观察与 C V％RNA 5'NCR的nt 581-601区域互补的2l聚硫代AODN抗病毒活性。方法 采用MTT法测定细胞活性，直接观察CPE，测定培养上清TCID50，并分别用ELISA和斑点杂交法检测CVB3抗原及其RNA。结果 1.AODN可推迟和减轻CPE，且随AODN浓度增加，对CPE的抑制作用增强，感染细胞存活率也随AODN浓度升高而升高；2.AODN可抑制CVB3抗原表达及RNA的合成，且呈剂量依赖关系；3.培养上清中病毒滴度随AODN浓度升高而降低。AODN抗病毒活性在转染后48 h效果较好；10 μnol／L浓度抑制效果较好。本研究结果 也显示10 μnol／L SODN对CVB3感染细胞CPE有较弱的抑制作用，但RODN未显示抗病毒活性；AODN未显现对HSV-l感染细胞CPE抑制活性，但对其他肠道病毒如CVB5，Polio-1和ECHO-6有较弱的抑制活性。结论 AODN可能通过抑制CVB3RNA复制来抑制病毒合成。
作者：齐秀英；李晓眠；刘民；李海；张国际 刊期： 2000年第03期
对104例病毒性肝炎患者同时进行了血清Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)及透明质酸(HA)等纤维化指标及肝组织病理学检查，以评价国产试剂在病毒性肝炎肝纤维化诊断中的意义。 1 材料和方法 1.1 研究对象 104例病人均为解放军302医院住院病人。男性93例，女性11例，年龄15～67岁。 1.2 诊断标准 按照1995年北京第五次全国传染病与寄生虫病学术会议修订的诊断标准。急性肝炎10例，慢性肝炎81例，晚期肝硬化14例(均为死亡患者)。 1.3 标本采集 肝穿活检前后2 d空腹抽血，分离血清，-20℃冻存备用。死亡患者死后立即肝穿，同时留取静脉血或心血分离血清。 1.4 试剂及方法 PCⅢ、HA采用放射免疫法，Ⅳ-C采用一步夹心EIA法。试剂分别购自重庆市肿瘤研究所和上海海医研究所。 1.5 统计分析 采用F检验。
作者：李保森；辛绍杰；邹正升；毛远丽；张双福 刊期： 2000年第03期
目前，国内外对戊型肝炎(HE)患者病毒血症已有研究，各家报道有明显不同，我们采用逆转录-聚合酶链反应方法检测32例HE患者系列血清，探明HE患者病毒血症持续时间和消长规律。 检测对象为中国医大二院传染科1995年1月至1996年10月期间住院患者32例，临床诊断为戊型肝炎。分别收集患者病后0～7 d、8～14 d、15～12 d、22～28d系列血清共125份，用异硫氰酸胍一步法抽提HEV RNA。引入一对外引物序列为：外正向引物(4459-4478)5＇- GCATTATGGA GGAGTGT GG-3＇，外反向引物 (4877-4858)5＇- CCAGG GCCC-CAATTCTTG-3＇，一对内引物序列为：内正向引物(4522--4539)5＇-GCGTG-GATCTTGCAGGCC-3＇，内反向引物(4741-4760)5＇-TTCAACTTCAA GCCACA GCC-3＇，进行2次PCR扩增。
作者：鲁学恒；王占英；崔丽华；孔庆章；乔光彦；庄辉 刊期： 2000年第03期
乙型脑炎病毒(JEV)高顺生株(高株)是我国学者于60年代从病人脑内分离到的乙脑病毒野毒株，其血凝活性的pH值较宽，与其他乙脑毒株不同，国内外对高株分子生物学研究尚未开展。我们对高株这两段基因保守区进行了DNA序列分析，以初步了解高株与其他乙脑野毒株基因序列的不同，为进一步阐明高株基因组结构与功能的关系奠定基础。 1 材料和方法 1.1 病毒的培养将中国预防医学科学院病毒学研究所虫媒病毒研究室冻存的感染高顺生野毒株的鼠脑在无菌状态下仔细研磨，离心取上清，10倍稀释后接种单层BHK细胞，数天后出现典型细胞病变(CPE)。
作者：孙静；陶三菊；陈伯权 刊期： 2000年第03期
目的 了解北京地区1990～1991年和1997～1998年两个非连续的流行年中呼吸道合胞病毒(RSV)A、B亚型和基因型的流行情况。方法 用间接免疫荧光法(ⅡF)检测RSV阳性鼻咽分泌物(NPS)标本或RSV分离株，划分A、B亚型。根据N基因片段的限制性酶切图型将RSV分离株分成至少6个基因型NP1-6NP1，3和6属于B亚型，NP24和5属于A亚型。根据SH基因片段的核苷酸序列将A亚型分离株进一步划分为SH基因型SHL1-6。SHL之间关系密切，并与NP有关。SHL1，3和4紧密相关，属于NP2；SHL2和6属于NP4；SHL5属于NP5。结果 1997冬季～1998年春季145份RSV NPS标本中，83份(57.2％)为B亚型，62份(42.8％)为A亚型，A：B为1：1.3。1997～1998流行年所获的10株RSV分离株中，2株为A亚型，8株为B亚型，A：B为1:4。1990～1991流行年所获的10株毒株中，8株为A亚型，2株为B亚型，A：B为4：1。1997～1998流行年分离到的10株RSV分离株中，2株A亚型均属NP4，SHL2；而2株B亚型均为NP3。根据NP推导出的A、B亚型划分与单克隆抗体定义的亚型一致。结论 北京地区RSV A、B亚型或多个基因型可同时流行，但每个流行年的优势基因型可不同。相距5年仍可分离到相同的毒株，表明尽管A亚型毒株之间存在明显的差异性，一些基因型仍然相当稳定。
作者：孔晓慧；刘春艳；江载芳；寿好长 刊期： 2000年第03期
原发性肝癌(PH C)与乙型肝炎病毒(HBV)感染的相关性已较明确，为探讨肝癌病人HBV感染状态，我们对230例甲胎蛋白(AFP)阳性确诊为PH C病人的HBV血清标志物进行了检测与分析。 1 材料和方法 230例PHC患者中，男200例，女30例，年龄28～77岁，平均52.84岁，为解放军302医院1995年至1998收治的病例，根据肝癌诊断标准，经临床、B超及CT证实且AFP阳性的PHC病人。AFP的检测采用放射免疫测定法，以AFP>400ng／ml判定为阳性；HBsAg、HBeAg、HBsAb的检测用双抗体夹心法。HBeAb及HBcAb的检测用竞争法。试剂盒由解放军302医院生产。
作者：何卫平；韩白己拉；朱传琳；王慧芬 刊期： 2000年第03期
目的 调查TTV阴性的非甲～庚型肝炎患者中TTV～like mini virus(TLMV)感染情况，对TLMV5＇非编码区(5＇NCR)部分基因进行分子克隆与序列分析。方法 采用巢式PCR技术检测53例T T V阴性的非甲～庚肝炎患者血清TLMV DNA，对PCR产物进行克隆、测序和分析。结果 53例病例中TLMV DNA阳性37例(69.8％)，对其中8株TLMV基因克隆测序，并与Takahashi报道的TLMV序列(GenBank Accession No ab 026930、ab026931)比较，其核苷酸序列同源性在64％～83％之间。结论 在T TV阴性的非甲～庚肝炎患者中存在TLMV感染。TLMV5＇NCR基因变异性较大。TLMV的致病性及其与非甲～庚肝炎的关系尚有待进一步研究。
作者：周伯；陈心春；马为民；徐六妹；王火生；杨桂林；洪龙 刊期： 2000年第03期
为了解成都地区HGV感染情况，我们采用逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)对职业献血员、健康自然人群和急慢性肝炎病人进行了检测。 1 材料和方法 1.1 对象成都职业献血员165名，各项体检均合格。成都键康自然人群406名，A～E肝炎血清标志均阴性，ALT正常。肝炎病人包括急性甲型肝炎32人，急性乙型肝炎87人，慢性乙型肝炎95人，慢性丙型肝炎23人，非A～E肝炎18人，这些病人均用酶联免疫吸附试验(ELSA)(上海科华试剂)测定血清病毒抗原／抗体证实。 1.2 HGV引物据5＇-NCR和NS5α区设计引物和捕获探针[2]，由北京赛百盛(美国)生物工程公司合成。5＇-NCR区扩增位于100-285核苷酸片段，NS 5α区扩增位于6 904-7 059核苷酸片段。
作者：杨朝国；张玲英；丁广祥；陈志远 刊期： 2000年第03期
现将302医院近10年收治的495例慢性重型肝炎患者的治疗效果分析如下。 1 材料和方法 1.1 一般资料495例患者系302医院住院病人，其中男性428例，女性67例，平均年龄43岁(8～73岁)。 1.2 诊断标准 符合1995年北京第五次全国传染病寄生虫病学术会议修订的慢性重型肝炎诊断标准。 1.3 治疗方法 治疗分3组。综合组189例，用6 912(复方茵陈)注射液、六合氨基酸、人血白蛋白、血浆(或鲜血)、支链氨基酸、强力宁、丹参及门冬氨酸、钾、镁等，并按病情使用脱氨、利尿、补钾、脱水、止血和抗感染等药物。促肝细胞生长素组178例，在同时使用综合组的基础上加用促肝细胞生长素80～200 mg加入5％葡萄糖或10％葡萄糖200ml中滴注，每日1次。G-I组128例，在同时使用综合组的基础上加G-I，10单位加入5％葡萄糖或10％葡萄糖400ml中滴注，每日1次。
作者：柴西进；邹正升；陈德永；朱安今；郑辉 刊期： 2000年第03期
为促进医学的经验交流与应用，发展综合医学，探讨优良的医学教学方法，以及中国加入WTO之后，中医药的发展战略，经与世界多国卫生部、医学机构商定于2000年10月22日-23日在香港举办“世界综合医学大会”。届时将有澳洲、英国、泰国、老挝、越南、印尼、柬埔寨等国家卫生部(局)的高层官员参加，并邀请欧美等地医药学术团体赴会，盛况空前，除进行学术交流外，还举行香港紫荆花医学成就奖颁奖典礼。会后还组织杰出代表赴新加坡、马来西亚、文莱／印度／英国学术访问。 大会特邀请嘉宾：老挝卫生部部长、越南卫生部副部长、泰国卫生部医疗司司长、中国中医药学会秘书长、澳大利亚维省卫生部官员、南京中医药大学校长 主办机构：香港国际传统医学研究会、泰国卫生部泰中医学交流中心、澳洲全国中医 药针灸学会联合会、中华医学会深圳分会 协办机构：英国世界传统医学会、加拿大世界传统医学会、香港理工大学、深圳市中西 医结合临床研究所等国内外15个医学团体或学术机构 邀请对象：医药卫生部门负责人、医院院长、知名医学专家和业务骨干、药厂及医疗器 械厂厂长、医药科技人员、医药卫生专业媒体负责人等 交流科目：医院管理、普通内科、外科、神经科、口腔医学、影像医学、老年医学及美容 医学等。交流形式分主题报告、分组研讨、招商洽谈(共六场) 参会要求：需提交2500字以内论文一篇及300字以内个人简介。2寸近照4张。 国内报名地址：深圳市振华路1号红会医院第一门诊部后座四楼深圳市中西医结 合临床研究所。 资料请寄：深圳市华侨城沙河邮局38号信箱邮编：518053 电 话：0755-6606533 6607533 6607066/6606874 6609401(宅) 传 真：0755-6600900 联系人：彭索福小姐/商鉴小姐E-mail：szjtn@public. Szptt. Net. Cn
作者： 刊期： 2000年第03期
中华实验和临床病毒学杂志
主管:实验和临床病毒学杂志
主办：中国科学技术协会
