学术投稿

脐血造血细胞的冷冻保存方法的比较

李昕;张勇;陈方平;张国平

关键词:脐血, 造血干/祖细胞, 冷冻, CD34, 磁性细胞分选*
摘要:目的:比较程控降温和-70℃冰箱直接保存脐血造血细胞对细胞活性的影响及免疫磁珠分离法对细胞生物学活性的影响. 方法: 用密度梯度离心法分离出脐血中单个核细胞后,采用联合冷冻保护剂经程控降温后存放于液氮和直接存放于-70℃冰箱两种方法冷冻保存一个月,从细胞活力、细胞回收率、集落形成能力、集落回收率等方面比较这两种冷冻方法的优劣.另外,用免疫磁珠分离法正性分选脐带血中CD34+细胞,流式细胞仪计数分选前后的CD34+细胞的纯度及回收率,并分别进行分选前后的细胞培养.结果:细胞活力、细胞回收率、集落形成能力、集落回收率在冷冻的两组间差异不显著.用免疫磁珠分选后CD34+细胞纯度达88.3%, 回收率为46.2%,分选后的CD34+细胞比分选后CD34-细胞的细胞活力及集落形成能力明显要高.结论:两种方法均可对脐血造血细胞进行保存.免疫磁珠分选法能够提供高纯度的造血干细胞,其分选过程不会影响细胞的活力及集落形成能力, 为CD34+细胞分选和移植的临床应用提供实验依据.
中南大学学报(医学版)杂志相关文献
  • 高效液相色谱-荧光检测法测定血浆总同型半胱氨酸浓度

    目的:建立测定血浆总同型半胱氨酸的高效液相色谱(HPLC)-荧光检测分析方法.方法:用TCEP将血浆中各种形式的同型半胱氨酸(Hcy)还原成总同型半胱氨酸(tHcy), 以光胺作内标,巯基特异性荧光衍生剂SBD-F对Hcy,胱胺等含巯基化合物进行柱前衍生,然后行HPLC-荧光检测.结果:本方法所检测的Hcy浓度在2.5~160 μmol*L-1 范围具有良好的线性关系(r=0.9975),Hcy 低检测限0.625 μmol*L-1,批内变异小于5.5%,批间变异小于9.0%, 平均回收率98.87%. 结论:本法简便、灵敏、精确、稳定.

    作者:戴崇文;张广森;伍贤平;廖二元;朱荣华;赵靖平 刊期: 2002年第06期

  • E-钙粘素和α,β,γ连环素的表达与乳腺癌的转移和预后关系

    目的:研究上皮钙粘附素(E-cad)和连环素(α,β,γ-cat)在乳腺癌中的表达,探讨其与乳腺癌的临床病理和预后的关系.方法:应用免疫组化方法检测40例乳腺癌中E-cad和α,β,γ-cat 的表达水平,然后检验其与临床病理学特征和生存时间的关系.结果: E-cad, α,β-cat 异常表达与淋巴结转移及远处转移显著相关(P<0.01, P<0.05).E-cad,β-cat异常表达的患者生存率低,生存期短.联合分析E-cad, α,β,γ-cat发现任两个和两个以上蛋白异常表达组的淋巴结转移、远处转移率高,预后差,与任一蛋白和无蛋白异常表达组相比,差异均有显著性 (P<0.05).结论:E-cad、β-cat的异常表达有可能作为判断乳腺癌转移、预后的重要指标之一.E-cad,α,β,γ-cat表达的联合检测可望提高预测乳腺癌转移和预后的准确性、灵敏性,为术后辅助治疗提供依据.

    作者:邹文;胡春宏;周建平;杨竹林 刊期: 2002年第06期

  • 高效液相色谱-荧光检测法测定血清色氨酸

    目的:建立快速、直接测定色氨酸的方法.方法:血清标本以高氯酸去蛋白后,取上清液进样,高效液相色谱荧光检测法测定,用20%乙腈水溶液作流动相,激发波长254 nm,发射波长313 nm. 结果:色氨酸的线性范围为 1.22~400 μmol*L-1,低检测限为0.1 μmol*L-1, 批内变异系数(CV)为2.57%, 批间CV为3.66%,平均回收率为97.13%.进样后5 min可完成检测.苯丙氨酸、酪氨酸、5-羟色胺、5-羟吲哚乙酸等物质不干扰实验.结论:本方法灵敏度好、特异性高、方法简便快速,适合临床应用.

    作者:唐爱国;王清平 刊期: 2002年第06期

  • 尿激酶溶栓治疗系统性红斑狼疮合并深静脉血栓形成2例

    系统性红斑狼疮(SLE)是一种多器官损害的自身免疫病,常伴有继发性高凝状态的存在及凝血和纤溶系统的功能紊乱,严重者发生深静脉血栓.

    作者:胡燕青;杨平洲;左晓霞;游云辉;陈方平 刊期: 2002年第06期

  • 自制泪道探针治疗先天性鼻泪管阻塞的临床研究

    目的:观察自制泪道探针治疗先天性鼻泪管阻塞的效果.方法:采用自行设计制造的泪道探针治疗158例(172只眼)先天性鼻泪管阻塞患儿.结果:术后随访12~24月,平均17.8月,经1~3次探通治疗,总成功率为98.2%.术后仅有少许鼻腔出血外,无严重并发症发生.结论:自制小儿泪道探针简便、安全,是治疗先天性鼻泪管阻塞的有效方法.

    作者:肖满意;童晚良;姚娟平;唐国其 刊期: 2002年第06期

  • 中药丹参注射液对兔脊髓损伤的影响

    目的:探讨中药丹参注射液对免脊髓损伤的保护作用.方法:成年新西兰大白兔按Allen's方法略作改进,致T12~T1损伤,打击力为150g*cm-1,造成脊髓全瘫模型,分别给予甘露醇、N-硝基精氨酸甲酯(L-NAME)和丹参注射液治疗,于术前、术后4h,6h取静脉血测定丙二醛(MDA),超氧化物歧化酶(SOD),一氧化氮(NO);脊髓行常规组织切片和iNOS免疫组化染色.结果:①损伤组血中MDA↑,SOD↓,NO↑,而各治疗组上述指标均有改善,各组各指标比较差异有显著性(P<0.01);②组织学检查损伤组有神经细胞变性,坏死,各治疗组程度略轻;iNOS在各组中均有表达,丹参组iNOS表达明显,而L-NAME组则较少表达.结论:早期使用丹参注射液对脊髓损伤有一定保护作用.

    作者:倪江东;丁仁奎;吕国华;王万春 刊期: 2002年第06期

  • 原位全肝移植术中体外静脉转流管理一例

    我院于2001年1月实行原位全肝移植一例.术中采用体外静脉-静脉转流技术,有效地解决了无肝期的下肢及内脏淤血.术中血流动力学稳定,电解质及酸碱内环境正常,温度控制满意.现将术中有关体外静脉转流技术报告讨论如下.

    作者:孙兰英;许寥梅;何争鸣 刊期: 2002年第06期

  • 长沙市部分高校学生预防艾滋病健康教育近期效果评价

    目的:对长沙市高校大学生进行性观念和艾滋病知识问卷调查,并评价开展性卫生和艾滋病相关知识教育的即时效果.方法:参考KABP调查设计问卷,对长沙2所高校235名本科学生开展匿名问卷调查.请专家以讲座的形式就有关的知识进行教育,并进行讨论,教育前后以同样的问卷测试并作对比分析.结果:388份有效答卷显示部分学生认可婚前性行为、多性伴、婚外情、同性爱、同性性行为和商业性性行为,且不因健康教育而有所纠正.多数人对艾滋病的一般知识和预防知识有一定了解,健康教育后大学生们的认识更为提高.关于正确对待艾滋病病毒感染者,教育前后在纠正认识和纠正态度方面存在差距.结论:长沙大学生的性观念中存在着传播艾滋病和性病的高危因素,且在短期内不易被健康教育予以纠正.短期知识讲座和宣传对提高大学生的性卫生知识和艾滋病相关知识有较明显的作用,可以作为健康教育的主要形式之一.

    作者:郑煜煌;易露茜;杨旭;赖力英;周华英 刊期: 2002年第06期

  • 腰椎椎间融合系统的临床应用

    目的:探讨腰椎椎间融合器(Interbody cage)在各种导致腰椎失稳疾病的手术治疗中的应用价值,并进行相关生物力学分析.方法:后路运用Bagby and Kuslich融合器(BAK-cage)、螺纹融合装置(Threaded Fuson Cage, TFC)治疗腰椎间盘突出症18例,腰椎管狭窄症37例,腰椎滑脱23例,创伤性滑脱19例,其中36例与椎弓根装置联合应用;前路运用块状cage、BAK-cage、TFC治疗机械性腰痛13例,其中4例系再次手术;前路运用新型Mesh-cage进行椎体肿瘤减压术后脊柱重建8例,椎体爆裂性骨折2例,骨质疏松症并椎体压缩骨折1例.结果:63例平均随访21个月,后路应用BAK-cage和TFC治疗腰椎退行性疾病的临床优良率为91.2%,滑脱复位率为89%,创伤性错位100%复位;前路应用椎间融合器治疗慢性腰痛的临床优良率为94.6%,半年时X线评价骨融合率达95%.三个月的初步观察显示,钛网椎间融合器在椎体切除后的重建中起重要作用,患者术前的症状缓解,活动能力明显提高.结论:不论在腰椎退行性疾病、创伤性疾病、骨质疏松并发的椎体塌陷,还是在椎体肿瘤根治术后重建等需要行腰椎椎间界面融合的病例中,腰椎椎间融合器的应用由于其具有撑开-压缩功能和载荷均分能力等优良的生物力学特征,不但能使失稳脊柱节段获得有效的即时稳定性和可靠的骨融合效果,还能较好地恢复椎间高度和维持脊柱的生理曲度,从而取得满意的临床疗效.

    作者:王文军;周江南;曹盛俊;胡存根;刘利乐 刊期: 2002年第06期

  • 心力衰竭患者氧自由基的变化及万爽力对其的影响

    为探讨充血性心力衰竭(CHF)患者超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、左室收缩功能及评价万爽力治疗对它们的影响.方法:测定15例健康者,16例心功能Ⅱ级,18例心功能Ⅲ级,16例心功能Ⅳ级患者血清SOD,MDA水平,超声测定左室射血分数(EF)和左室收缩末期容量指数(LVESVI).并将50例CHF患者随机分为两组,一组患者在强心、利尿、硝酸甘油酯扩血管等常规治疗基础上加用万爽力治疗,一组仅用常规治疗,共8周.结果:CHF患者SOD和EF显著降低(P<0.05),MDA和LVESVI显著增高(P<0.05),随心衰程度的加重,而愈显著;万爽力治疗组和常规治疗组治疗后SOD和EF显著增加(P<0.01),MDA和LVESVI显著降低(P<0.01),且万爽力治疗组较常规治疗组更加明显,(P<0.01).结论:氧自由基参与CHF的发生发展,血清SOD和MDA水平可以反映CHF严重程度,万爽力治疗后不仅能明显增高SOD水平,降低MDA水平,而且能显著改善左室收缩功能.

    作者:马琦琳;谢勇;张赛丹;彭道地;曾小林 刊期: 2002年第06期

  • 改良法培养鼠腹膜间皮细胞

    目的: 建立一种从腹腔灌注消化液分离鼠腹膜间皮细胞的培养模型.方法:用0.125%的胰蛋白酶 -0.01%EDTA Na2消化液注入鼠腹腔,抽取腹腔灌注液进行培养,采用相差显微镜、电镜和免疫组化鉴定间皮细胞.结果:分离并培养的细胞融合后在相差显微镜下呈铺路卵石状,纯度达95%以上.电镜下可见丰富的微绒毛.免疫组化鉴定角蛋白和波形蛋白阳性,Ⅷ因子和白细胞CD45抗原阴性.结论:鼠腹膜间皮细胞培养模型建立成功,该模型可为进一步研究腹膜透析并纤维化的防治提供实验基础.

    作者:樊敏;刘伏友;段绍斌;彭佑铭;刘映红;袁芳 刊期: 2002年第06期

  • 242例干预性早产的临床分析

    目的:了解干预性早产对母婴预后的影响.方法:回顾性分析我院242例干预性早产病例的临床资料.结果:早产发生率为5.75%,其中干预性早产占46.81%.妊高征是干预性早产的首位发病因素.干预性早产组的剖宫产率为64.88%,与自然早产组剖宫产率(16.45%)比较差异有显著性(P<0.05);干预性早产组孕母产后出血、新生儿窒息与自然早产组比较差异有显著性(P<0.05).结论:适时选择干预性早产对提高围产儿存活率及降低孕妇死亡率有益处.

    作者:黄健;朱付凡;丁依玲 刊期: 2002年第06期

  • 前路减压与重建治疗胸腰椎爆裂性骨折

    目的:探讨胸腰椎爆裂性骨折前路减压与重建的临床意义.方法:对67例胸腰椎骨折伴椎管内神经受压患者行椎管侧前方减压、植骨,应用椎体钉、zeilke和Kaneda装置内固定,观察术前、术后Frankel评分.结果:67例患者平均随访30.1月,术后脊柱序列恢复正常,无继发性后凸畸形发生,Frankel分级A级3例,C级4例,D级10例,E级48例;95.4%有1级以上功能恢复.结论:前路减压彻底,前路重建可靠,且符合脊柱生物力学特征.

    作者:卢畅;陈飞;吕国华;李启贤;康意军;李晶 刊期: 2002年第06期

  • Jackson骶骨棒内固定技术与腰骶部常用内固定系统的生物力学比较性研究

    目的:评估Jackson技术与几种腰骶部常用内固定系统的生物力学性能,为Jackson技术的临床应用提供生物力学依据.方法:15具小牛新鲜脊柱标本(L4到骶尾部全部脊椎)和5具人体新鲜脊柱标本(L3到骶尾部全部脊椎)分成骨密度相似的5组,分别用Dick, RF, Steffee, CD和Jackson等技术进行腰骶部固定,并测量它们的生物力学特征.结果:Jackson技术固定组比其它组更坚固和具有更好的稳定性,在前屈、后伸、侧弯及抗扭转时的载荷-应变/位移曲线上明显优于其它组(P<0.01).结论:Jackson技术是一种有效的腰骶部内固定技术.

    作者:邓幼文;邱勇;王冰 刊期: 2002年第06期

  • 国产和进口维库溴铵临床药效比较

    维库溴铵(vecuronium)是一理想的非去极化类甾族中效神经肌肉阻滞药,因其无组胺释放等作用而广泛使用于临床.国产维库溴铵由南京药科大学和浙江医药股份有限公司仙居制药厂共同研制,本研究旨在比较国产与进口维库溴铵的神经肌肉阻滞效应.

    作者:李友清;卢健芳;郭曲练 刊期: 2002年第06期

  • 高血压微量蛋白尿形成与血管及肾小球损害的关系

    目的: 探讨高血压病微量蛋白尿的形成机制及其与血管内皮、肾小球损害的联系.方法: 以高血压鼠(SHR)和正常血压鼠(WKY)为对象,测量不同龄(三月和八月)鼠尾动脉压、尿蛋白和肾功能以及在电子显微镜下血管内皮和肾小球超微结构的不同表现,并用卢沙坦(Losartan)治疗5月后观察其改变.结果: 与同龄WKY比较,三月龄SHR电镜下已有血管内皮损伤及内皮增生肥大,肾小球基底膜亦见轻度增厚,但血肌酐未升高,仅有尿蛋白增高,与血压及血管内皮病变呈正相关;八月龄SHR无论血管内皮和肾小球均损害严重除基底膜增厚外还有系膜细胞增生肥大,血肌酐仍无变化,尿蛋白增高与血管内皮和肾小球病变密切相关,与血压无显著相关.经Losartan治疗后尿蛋白明显减少,血管内皮、系膜细胞的过度肥大被有效地抑制.结论: 高血压蛋白尿的出现与靶器官损害密切相关,早期可能是血流动力学负荷增加或/和全身内皮功能障碍的一个局部表现,后期则主要与肾小球硬化及血管重塑有关,Losartan在降压的同时还能保护血管、肾脏,阻止肾小球硬化的进展.

    作者:吴峻;孙明;周宏研 刊期: 2002年第06期

  • 痹肿消汤对实验性关节炎大鼠滑膜VEGF表达水平的影响

    目的:观察痹肿消汤对实验性关节炎大鼠滑膜组织血管内皮生长因子(VEGF)表达水平的影响,探讨痹肿消汤治疗类风湿性关节炎(RA)的作用机制. 方法:75只SD大鼠随机分为4组,皮下注射Ⅱ胶原诱导实验性关节炎模型,用免疫组化法检测各组不同时间点大鼠滑膜组织VEGF的表达,同时采用关节炎指数积分法评价其关节炎症状.结果:免疫大鼠88.57%出现关节炎症状;模型组的关节炎指数积分逐渐增加,而痹肿消汤组和甲氨喋呤组关节炎指数积分则在30 d后逐渐下降.正常组滑膜组织未见明显VEGF表达,模型组VEGF表达明显高于痹肿消汤组和甲氨喋呤组(P<0.01);随着时间的延长,模型组VEGF表达逐渐升高,痹肿消汤组和甲氨喋呤组的VEGF表达明显低于模型组(P<0.01),且痹肿消汤组又低于甲氨喋呤组(P<0.05).结论:VEGF参与了RA 疾病滑膜炎的形成和发展过程;其VEGF表达的高低与关节炎症状的轻重有关.痹肿消汤和甲氨喋呤均具有阻断关节炎滑膜组织VEGF表达,且痹肿消汤阻断作用优于甲氨喋呤;提示痹肿消汤可能通过阻断VEGF的表达来阻抑关节炎滑膜血管翳的形成或骨质侵蚀.

    作者:梁清华;何金华;李霞玲;周建华;张花先;陈疆;谭勇 刊期: 2002年第06期

  • 严重肝外伤的外科处理

    目的:探讨严重肝外伤治疗的有效途径.方法:回顾性分析21年间92例严重肝外伤的资料.结果:84例严重肝外伤者采用手术治疗,8例采用非手术治疗(NOM).77例治愈(83.5%).15例死亡(16.5%),并发症发生30例(31.5%),平均住院天数22.3 d.结论:B超是诊断钝性肝外伤的有效方法,在血液动力学稳定的情况下行CT检查,对伤情复查尤为重要.手术治疗止血是关键环节,术中彻底清除失活组织,是减少术后并发症的有效措施,若出现难以控制的出血,可采用暂时性的填塞压迫止血.若积极抢救仍不能纠正低血压时阻断上段腹主动脉是一有效措施.严重肝外伤有条件的可选择NOM.

    作者:李宜雄;吕新生;劳学军;肖广发;陈志康 刊期: 2002年第06期

  • 运用单细胞聚合酶链式反应进行植入前诊断的性别鉴定

    目的:建立一种高效、快速、可靠的植入前诊断的性别鉴定方法.方法: 取成人外周血单个淋巴细胞和人胚胎单卵裂球,采用多重荧光PCR和多重巢式PCR同时扩增性别识别位点Amelogenin和5号染色体上的基因IL-3.结果: 男性单个淋巴细胞荧光PCR扩增效率为72%,巢式PCR扩增效率为64.7%;女性单个淋巴细胞荧光PCR扩增效率为76%,巢式PCR扩增效率为65%,两者与供体外周血gDNA扩增结果的一致性均达100%.单卵裂球荧光PCR扩增效率为86.9%,巢式PCR扩增效率为85.7%,来源于同一胚胎的不同单卵裂球扩增结果的一致性达100%.巢式PCR与荧光PCR的扩增效率比较无显著性差异(P>0.05).结论: 巢式PCR和荧光PCR各有优劣,但荧光PCR操作简便,耗时短、灵敏度高,为今后的发展方向.

    作者:马燕琳;李崎;潘乾;夏家辉;李艳萍;刘冬娥;戴和平;夏昆 刊期: 2002年第06期

  • 抑郁症常见中医证候类型第一轮专家问卷分析

    目的:调查抑郁症常见中医证候类型.方法:根据文献资料和预试结果,编制抑郁症常见中医证候类型专家问卷,向全国范围内遴选出的102位专家发放问卷调查.结果:在回收的92份问卷中,50%以上的专家认定五类常见证候.结论:肝郁气滞证、肝郁脾虚证、肝郁痰阻证、心脾两虚证、肝郁血瘀证是抑郁症的备选常见中医证候.

    作者:张海男;胡随瑜;陈泽奇;罗建清;张宏耕 刊期: 2002年第06期

中南大学学报(医学版)杂志

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主管:中华人民共和国教育部

主办:中南大学