霍富元；李粲；韩莉娜；谭盛
目的 采用TaqMan探针建立检测沙眼衣原体的实时荧光定量PCR(real-time PCR)方法.方法 根据沙眼衣原体外膜蛋白A的基因(ompA)序列设计引物和探针,以克隆的ompA部分基因片段作DNA模板,建立实时荧光定量检测方法.结果 建立的荧光定量PCR检测方法的低检出限为5 copies/反应,检测线性范围100107线性关系良好(r2=0.997),比巢式PCR敏感100倍；且与鹦鹉热衣原体、淋球菌、解脲脲原体、大肠杆菌等病原菌DNA以及人基因组DNA均无交叉反应,表明该方法具有良好的特异性.以巢式PCR作参比,建立的荧光定量PCR法检测沙眼衣原体的阳性符合率为100.00％,阴性符合率为95.09％,总符合率为96.81％.结论 建立的检测沙眼衣原体实时荧光定量PCR具有特异性强和敏感性高的特点,可快速检测样本中微量沙眼衣原体DNA,适用于对沙眼衣原体进行大规模筛选.
作者：陆中奎 刊期： 2013年第06期
目的 探讨不同肠内营养(EN)在儿童伴有意识障碍的重症病毒性脑炎(SVE)中的应用效果.方法 将42例SVE患儿分为观察组(n=20)和对照组(n=22),两组入院后均给予常规的综合治疗,对照组EN给予儿童配方奶粉,分4～6次鼻饲注入,观察组EN早期予以短肽型、再过渡到整蛋白型肠内营养液喂养泵输注,两组分别于治疗前及治疗后14 d采集静脉血测定视黄醇结合蛋白(RBP)、前白蛋白(PA)、转铁蛋白(TRF)和血清白蛋白(ALB),测量其体重,并观察胃肠道、相关肺炎并发症及住院天数.结果 治疗后两组间RBP、PA、TRF、体重增长值、住院天数以及胃肠道、相关肺炎并发症的比较差异均有统计学意义(P＜0.05),而两组间ALB比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 SVE意识障碍期间早期应用短肽型+整蛋白型肠内营养液喂养泵输注,可减少患儿体重的消耗,减少胃肠道及相关肺炎并发症,改善营养状态,缩短住院时间.
作者：李猛；朱刚；梁桂珍 刊期： 2013年第06期
目的 分析慢性乙型肝炎患者HBV逆转录酶区耐药变异情况及rtA181变异准种的分布.方法 提取患者血清中HBV DNA,PCR扩增逆转录酶区域,产物测序后经软件比对分析耐药变异情况和基因型；对部分rtA181变异标本进行克隆后测序分析准种分布.结果 489例标本中,检出明确耐药变异265例,在B、C基因型中分布比例存在差异(56.6％ vs 43.0％,P=0.022).拉米夫定相关耐药138例(52.1％),以M204I、M204I/V+L180M±L80I/V变异为主；阿德福韦相关耐药35例(13.2％),以N236T+ A181T/V较为多见；拉米夫定+阿德福韦相关耐药70例(26.4％),几乎都和A181有关.rtA181准种分析发现1例位于同一病毒株的多耐药组合,且未发现单一A181T变异的病毒准种.结论 HBV耐药变异主要表现为M204和A181相关变异,耐药模式复杂；检测HBV逆转录酶区的变异有助于临床及时发现和确认耐药情况,指导临床合理进行抗病毒用药.
作者：李平；骆抗先；汪茂荣；杨志国 刊期： 2013年第06期
目的 探讨肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)在新型毒品中毒患者诊治中的意义.方法 将232例新型毒品中毒危重患者按照cTnI的水平分为升高组(97例)和正常组(135例),分别对两组患者一般临床资料、生化指标及APACHEⅡ评分、多器官功能障碍综合征(MODS)发生率、机械通气使用率、总住院时间、死亡率等临床指标进行系统回顾性分析.结果 两组患者一般临床资料、生化指标比较差异均无统计学意义(P＞0.05).cTnI升高组APACHEⅡ评分、MODS发生率、机械通气使用率、死亡率、总住院时间均高于cTnI正常组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 伴有cTnI升高的新型毒品中毒危重患者有较高的APACHEⅡ评分、MODS发生率、机械通气使用率和死亡率,且总住院时间较长.监测cTnI水平在新型毒品中毒危重患者病情评估和治疗中可发挥重要作用.
作者：管健；蓝光明；吴彪；郭旭昌；张文；朱永 刊期： 2013年第06期
目的 对近年广州市无偿献血血液报废情况进行分析,探讨降低血液报废率的措施,以减少血液浪费.方法 收集广州血液中心2010-2012年所有血液采集制备信息和血液报废的信息,使用统计软件进行整理分析.结果 共采集制备血液2 827 955 U,报废179 794 U,报废率为6.35％；感染性不合格血液导致的报废占总报废量的64.79％,是血液报废的主要原因.感染性不合格血液报废率由高到低依次为ALT (2.12％) ＞HBV (0.85％)＞梅毒(0.53％)＞HCV(0.49％)＞HⅣ(0.12％)；非感染性不合格原因的报废占总报废量的35.20％,报废率由高到低依次为乳糜血(1.63％)＞过期血(0.27％)＞血袋破裂和渗漏(0.16％)＞其他(0.08％)＞溶血(0.06％)＞血凝块(0.01％)＞纤维蛋白析出(0.005％).结论 血液报废的主要原因是感染性标志物阳性导致的血液不合格.做好献血前的征询和宣传,进行ALT初筛,加强献血知识普及和献血前注意事项的告知,对降低血液报废率,加强血液安全有重要意义.
作者：徐国胜；黄可君；游冉冉 刊期： 2013年第06期
目的 研究应用不同方案行索拉非尼联合经皮肝动脉化疗栓塞(TACE)及射频消融(RFA)(局部介入术前开始应用索拉非尼以及局部介入术后开始应用索拉非尼)治疗中晚期＞5cm肝癌的适用性及安全性,初步观察其疗效.方法 2008年11月始筛选纳入＞5 cm的中晚期肝癌患者.随机分为2组,A组为先行TACE联合RFA,术后开始口服索拉非尼；B组为先口服索拉非尼1～2周,再行TACE及RFA.规律随访,观察毒副反应的发生情况及患者生存情况.结果 截至2013年2月21日,A组与B组分别纳入患者15例.肝癌直径(8.9±3.1)cm,患者随访时间(27±11.8)月.两组均未发生与治疗相关的死亡,索拉非尼主要相关不良反应有手足皮肤反应(53.3％ vs 66.7％,P=0.710)、食欲下降(53.3％ vs 46.7％,P=0.999)、乏力(53.3％ vs 40.0％,P=0.715)以及腹泻(33.3％ vs 46.7％,P=0.710)等,只有1例患者出现4级的上消化道出血,两组比较差异均无统计学意义.两组患者的远期生存疗效差异无统计学意义(中位生存时间:A组31月vs B组32月,x2=0.050,P=0.822).结论 两种联合方案在治疗中晚期大肝癌均是安全适用的,且治疗风险相当.生存分析并未显示出应用哪一种联合方案更具有优势.
作者：梁恒毅；陆骊工；李勇；胡宝山 刊期： 2013年第06期
目的 观察促红细胞生成素(EPO)对同型半胱氨酸(Hcy)导致的血管内皮细胞损伤是否具有保护作用.方法 采用不同浓度(1.25、2.5、5、10、20 mmol/L)的Hcy处理人脐静脉内皮细胞(HUVEC),观察细胞的损伤情况,建立Hcv诱导的内皮细胞损伤模型,然后采用不同浓度(0.1、1、10、100 U/ml)的EPO进行预处理,观察细胞的损伤情况.通过MTT法测定细胞存活率,ELISA法检测细胞上清IL-6含量,Hoechst33258染色检测细胞凋亡来评价细胞损伤情况.结果 Hcy对HUVEC有损伤作用,并且随浓度增加损伤作用更明显.EPO可增加细胞存活率,抑制Hcy诱导HUVEC IL-6的产生,抑制细胞凋亡.结论 EPO对Hcy导致的内皮细胞损伤具有一定的保护作用.
作者：李敏子；杨卫红；刘振华 刊期： 2013年第06期
目的 对云南宾川地区爆发人体片形吸虫病的村落进行牛羊的片形吸虫感染调查和检测,为当地片形吸虫病的研究提供数据.方法 采用尼龙袋集卵法收集牛羊粪便中的虫卵,进行镜检.对检出的样本进行PCR扩增和测序；用MP法、NJ法及ML法进行种系发育分析.结果 从134 (28.63％)头牛和27(25.23％)头羊中查到了片形吸虫的虫卵,对所检到的虫卵进行线粒体pcox1基因的扩增和测序,比对后发现所检样本主要为肝片吸虫和大片吸虫两个种.采用MP法、NJ法及ML法进行种系发育分析表明,宾川地区牛羊感染的片形吸虫虫种主要为肝片吸虫和大片吸虫两种.结论 宾川地区牛羊片形吸虫感染严重,云南宾川为肝片形吸虫及大片形吸虫混合感染地区,当地政府应重视该病的防治.
作者：艾琳；陈木新；吕山；臧伟；诸廷俊；许学年；蔡玉春；陈韶红；罗家军 刊期： 2013年第06期
目的 了解深圳市福田区医疗机构消毒效果.方法 对2006-2012年146家医疗机构消毒效果监测数据进行分析.结果 共采样12 287份,合格11 857份,合格率96.5％.2006-2012年合格率分别为96.7％、97.2％、95.2％、95.9％、95.2％、97.9％、97.2％,差异有统计学意义(x2=39.465,P＜0.05).室内空气、物体表面、医护人员手、使用中消毒液、污水合格率依次为97.3％、97.2％、90.9％、99.7％、98.9％、96.5％,差异有统计学意义(x2=374.858,P＜0.05).市级医院、区级医院、私营医院和个体诊所的消毒合格率分别为97.8％、97.9％、97.3％和94.1％,差异有统计学意义(x2=104.470,P＜0.05).结论 采取措施加强对医疗机构消毒工作的管理,重点是个体诊所和手卫生方面.
作者：钟剑明；周志峰；石向辉；刘小敏；黄慧萍；陈建忠 刊期： 2013年第06期
目的 构建可溶性DC-SIGN(sDC-SIGN)原核表达载体,获得不含标签蛋白的sDC-SIGN蛋白.方法 采用PCR方法,从含人DC-SIGN cDNA的重组质粒pGM-DC-SIGN扩增DC-SIGN胞外区基因片段,插入原核表达载体pET17b,构建重组表达载体pET17b-sDC-SIGN,经酶切图谱和测序鉴定,转入E.coli BL21 (DE3)诱导表达蛋白,用抗人DC-SIGN抗体-Sepharose 4B亲和层系纯化表达产物,以SDS-PAGE和Western blot鉴定.结果 从重组质粒pGM-DC-SIGN扩增获得1 300 bp目的基因片段,构建重组表达质粒pET17b-sDC-SIGN,其酶切图谱和序列与预期相符.纯化表达产物sDC-SIGN,鉴定其分子质量为38 000,Western bolt证明其可与抗人DC-SIGN抗体特异性结合.结论 获得了能高效表达重组人sDC-SIGN的大肠杆菌菌株和不带任何标签蛋白的sDC-SIGN蛋白,为深入研究sDC-SIGN的功能奠定了基础.
作者：张婧；张丽芸；卢晓；陈政良 刊期： 2013年第06期
目的 研究Bridging integrator 1 (BIN1)在胃腺癌中的表达及其预后价值.方法 通过免疫组化研究BIN1在234个胃腺癌组织样本中的表达,之后运用荧光定量PCR (RT-qPCR)和蛋白质印迹(Western blotting)技术对免疫组化结果进行进一步验证.结果 通过免疫组化数据表明,在234个胃腺癌病例中,有128例的BIN1表达水平下降(54.7％).此外,BIN1的表达水平与组织学分级、肿瘤侵袭、淋巴结转移及TNM分期显著相关(P＜0.05).通过RT-qPCR和Western blotting分析,发现与非胃腺癌组织相比较,大多数肿瘤组织中的BIN1的转录和转录后水平下调(P=0.001 5和P=0.012).Kaplan-Meier存活曲线证实BIN1表达水平的下降与胃腺癌患者的预后不良有关.进一步的多因素分析结果提示BIN1是胃腺癌患者的总存活率的独立预后因子(HR=0.552,95％CI:0.354～0.862,P=0.009).结论 在胃腺癌中BIN1表达的下降可导致疾病预后不良,BIN1作为潜在的肿瘤抑制基因可能在防止肿瘤进展方面起重要作用.
作者：刘传新；罗荣城 刊期： 2013年第06期
目的 了解广州市海珠区18岁以上社区居民脑卒中患病率及高血压、糖尿病等常见危险因素在人群中的分布.方法 2012年12月采用Kish Grid表法分层抽样后问卷调查的方法,在海珠区瑞宝社区抽取1 000人为调查对象,采用x2检验和t检验对结果进行统计分析.结果 海珠区居民脑卒中、冠心病的患病率均较2008年有明显上升(3.4％ vs 1.6％,18.5％vs 4.5％),而高血压病、糖尿病、血脂异常、肥胖率和吸烟率均较2008年下降(16.2％ vs 22.9％,7.0％vs 9.2％,37.9％ vs 59.7％,6.2％vs 7.1％,18.2％vs 24.6％),差异有统计学意义(P＜0.05).男性高血压患病率、吸烟率和饮酒率分别为20.0％、29.0％和11.2％,与女性11.9％、5.8％和5.1％相比较高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 海珠区脑卒中患病率上升呈年轻化趋势,冠心病患病率较前增高,应提倡早期对心脑血管疾病相同危险因素进行筛查并控制预防.
作者：李粲；韩莉娜；霍富元；陈健；金俊；吴培华；李武英；郭阳；谭盛 刊期： 2013年第06期
目的 观察藤黄酸对人结肠癌SW480细胞增殖和APC蛋白表达的影响,探讨其可能抗肿瘤的作用机制.方法 以不同浓度(0、0.5、1、4μg/ml)的藤黄酸干预体外培养的人结肠癌细胞株SW480,分别于24、36、48 h后,应用MTT法检测细胞的增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期分布和细胞凋亡率,Western-blot分析APC蛋白的变化.结果 1 μg/ml以上浓度的藤黄酸可以显著抑制人结肠癌细胞株SW480细胞增殖,且随浓度增加效果增强,随着时间增加抑制率显著增加(P＜0.01).藤黄酸浓度达到4 μg/ml时,C2/M期细胞达到54.74％；藤黄酸浓度为0、0.5、1、4μg/ml时SW480细胞的凋亡率分别为(0.17±0.08)％、(0.85±0.19)％、(7.12±1.21)％、(15.87±1.59)％.用不同浓度的藤黄酸处理SW480细胞株24 h,APC蛋白的表达随药物浓度的升高而增加(P＜0.01).结论 藤黄酸能够抑制人结肠癌细胞株SW480增殖并诱导其凋亡,干扰SW480细胞周期使其阻断于G2/M期,高表达APC蛋白有可能是藤黄酸抗癌作用的重要机制.
作者：杨平；曹杰；张通；王强；孙政；张伟健；曾山崎 刊期： 2013年第06期
目的 探讨比伐卢定(直接凝血酶抑制剂)在大鼠胰岛分离过程中保护胰岛细胞的作用.方法 将SD大鼠分为比伐卢定处理组和对照组,处理组在胰岛分离全过程中加用比伐卢定进行干预,对照组则不加比伐卢定处理,采用Ficoll非连续密度离心纯化后对两组胰岛细胞的凋亡(采用原位末端核苷酸标记法及流式细胞仪检测)、胰岛产量及活力方面进行比较性研究.结果 比伐卢定5000U处理组的胰岛细胞凋亡计数(5±4)个/HPF、凋亡率(16.5±3.6)％、Fas-1基因表达水平(4.6±1.9)％均显著低于对照组(P＜0.01),胰岛产量(315.3±6.1)IEQ、胰岛素释放水平(179.11±2.18)mIU/L和Bcl-2基因表达水平(10.5±1.2)％均显著高于对照组(P＜0.01),差异有统计学意义.结论 胰岛分离过程中加用比伐卢定对胰岛具有抑制凋亡、提高胰岛产量和保护胰岛活力的作用.
作者：邱立；柳玉红；温寿青；汪春福 刊期： 2013年第06期
目的 评价绒毛细胞染色体核型分析在孕早期产前诊断中的应用价值.方法 对有产前诊断指征的孕妇在B超引导下经腹绒毛穿刺取绒毛组织行细胞培养、染色体制备及核型分析.结果 成功培养绒毛细胞451例,培养成功率为97.41％,共发现胎儿染色体核型异常136例,异常检出率为30.16％.136例异常核型中染色体数目异常79例(58.09％),其中包括常染色体三体型55例,性染色体数目异常23例,三倍体1例.检出染色体结构异常11例,嵌合体16例,染色体多态性30例.超声筛查胎儿异常及夫妇染色体结构异常携带这两个指征检出胎儿染色体异常率高.结论 孕早期绒毛细胞染色体检查结合孕早期超声筛查及血清学筛查能及早发现胎儿染色体异常并早期干预,对于减少染色体畸形儿的出生具有重要的意义.
作者：钟惠珠；易翠兴；潘敏；杨昕；刘晗；袁思敏；李东至 刊期： 2013年第06期
目的 观察实验小鼠脑内包囊的时空分布特点,为探讨弓形虫感染引起的情志和行为改变提供病理基础.方法 弓形虫PRU株经口感染小鼠,经HE染色和免疫组化检测,在显微镜下计算前额、海马、丘脑、小脑和杏仁核部位的包囊个数,然后随机选取上述部位的5个视野拍照,计算包囊的平均密度,并用方差分析比较不同脑组织包囊密度有无统计学差异.结果 弓形虫感染30和90 d时,HE染色和免疫组化后显微镜观察发现,小鼠不同位置弓形虫包囊密度差异有统计学意义,其中,丘脑的包囊密度大,其次是前额皮质、海马、杏仁核,小脑的包囊密度小.丘脑的包囊密度显著高于其他4个脑区(P＜0.01),小脑的包囊密度显著低于其它4个部位(P＜0.01),而前额皮质、海马和杏仁核所含的包囊密度差异无统计学意义(P＞0.05)；弓形虫感染1个月时,杏仁核包囊密度明显低于感染3个月(F=18.314,P＜0.001),但是小脑的包囊密度高于感染3个月(F=18.314,P＜0.001).结论 弓形虫包囊在慢性感染小鼠不同脑组织内的分布具有时空特异性,这可能是其临床表现的病理学基础.
作者：申善良；刘敏；姚云英；吴焜；陈晓光 刊期： 2013年第06期
目的 研究外源性肿瘤坏死因子α(TNF-α)对原代人脐静脉内皮细胞(HUVECs)活性及程序性死亡因子配体PD-L1蛋白表达的影响,探讨动脉粥样硬化的免疫机制.方法 体外培养HUVECs,加入不同浓度TNF-α持续刺激48 h,CCK-8法检测450 nm波长处吸光度值(OD值),计算细胞生长存活率.选同代细胞重复培养并干预,Western blot方法检测细胞PD-L1蛋白表达.使用SB203580阻断p38MAPK通路后再用TNF-α干预HUVECs,比较各组细胞PD-L1蛋白表达.结果 实验组HUVECs在450 nm波长处的吸光度值较空白对照组明显降低(P＜0.05),细胞存活率依次下降.实验组细胞PD-L1蛋白表达随TNF-α浓度增高逐渐降低(P＜0.05).TNF-α单独刺激组PD-L1蛋白表达较TNF-α与SB203580共刺激组明显降低(P＜0.05),SB203580阻断效应明显.结论 TNF-α可明显抑制HUVECs细胞活性,并降低PD-L1蛋白表达,p38MAPK通路可能参与了这一过程.
作者：吕自明；刘映峰；缪绯；龙日；刘芃；刘磊 刊期： 2013年第06期
目的 探讨和评价ALT血液筛查项目在临床用血血液安全中的意义.方法 采用回顾性调查法对2010年10月至2012年12月期间,ALT单项阳性并再次献血的献血者血液筛查结果进行追踪调查和分析.结果 3 910例再次献血者中,HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP以及ALT血液筛查结果均合格3 053例,占再次献血的78.1％,ALT单项仍为阳性845例,占不合格的98.6％ (845/857),ALT阴性而ELISA筛查项目阳性9例,核酸筛查阳性3例,其中ALT合并NAT阳性1例.结论 ALT血液筛查在肝炎病毒感染“窗口期”或隐匿性感染中有提示的作用,在一定程度上能减少漏检的发生,在保障血液安全中具有一定的意义.
作者：黎世杰；汪传喜；梁华钦；廖峭；戎霞；陈锦艳；林昌周；梁浩坚 刊期： 2013年第06期
目的 研究重组广州管圆线虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂(AcCystatin)的理化性质及其生物学功能.方法 原核表达质粒pGEX-4T-1-AcCystatin经诱导表达、纯化酶切后获得纯化AcCystatin,采用Edman降解法N-端氨基酸测序进行重组蛋白鉴定.分别检测其紫外光谱、荧光光谱、圆二色谱和对人源Cathepsin B、Cathepsin G、Cathepsin L和Cathepsin S酶的抑制活性,分析AcCystatin理化性质.结果 重组AcCystatin蛋白经纯化、酶切后相对分子质量约为13 600,纯化效果良好,氨基酸测序结果与理论氨基酸序列完全相同.光谱学检测结果显示重组AcCystatin可形成二硫键,二级结构中α-螺旋、β-折叠和无规卷曲分别占39.57％、35.28％和25.25％.酶抑制实验结果显示AcCystatin可显著抑制Cathepsin B、Cathepsin L和Cathepsin S酶的活性,但对Cathepsin G酶活性无明显作用.结论 获得的可溶性AcCystatin重组蛋白产量大、纯度高、蛋白结构折叠正常,具有良好的生物学活性,为AcCystatin免疫调节机制的深入研究奠定了实验基础.
作者：祝程诚；李宝钏；李舒婷；朱钥；姬鹏宇；赵子然；吴忠道；吕志跃 刊期： 2013年第06期
目的 了解MDR1-C3435T的基因多态性在汉族、维吾尔族和哈萨克族健康人群中的分布差异,为临床用药提供参考.方法 用PCR-RFLP的方法检测汉族、维吾尔族和哈萨克族MDR1-C3435T等位基因突变位点的分布情况.计算各民族基因型频率,并与已报道的其他民族的基因型频率和等位基因频率进行比较.结果 MDR1-C3435T基因在汉族、维吾尔族和哈萨克族三个民族中常见的等位基因是MDR1-3435T,频率依次为汉族43.3％、维吾尔族58.0％和哈萨克族56.9％.等位基因MDR1-3435T在汉族中的发生频率显著低于维吾尔族和哈萨克族,而突变频率在维吾尔族和哈萨克族之间则无明显差异.汉族的基因突变发生频率与其他亚洲人相似,与高加索人差异显著；而维吾尔族和哈萨克族的发生频率介于亚洲人和高加索人之间.结论 汉族、维吾尔族和哈萨克族的MDR1-C3435T基因型分布有明显的差异,对临床用药将产生显著影响.
作者：王一西；谢志红；叶丽卡；李嘉丽；张羽 刊期： 2013年第06期
热带医学杂志
主管:广东省科学技术协会
主办：广东省寄生虫学会 中华预防医学会
