尹爱华；刘舒；潘小英；傅文婷；王继成；卢建；杨洁霞
目的 建立一种检测肠出血型大肠埃希菌(EHEC)产毒基因stx1和stx2的TaqMan双重实时荧光PCR法.方法 根据GenBank公布的EHEC stx1和stx2基因序列进行比对后设计相应的PCR引物和TaqMan探针,探针报告基团分别使用FAM和HEX标记,淬灭基团使用BHQ1标记.建立双重实时荧光PCR反应体系并对反应条件进行优化,对方法的灵敏度、特异性及其重复性进行分析.结果 建立了EHEC双重实时荧光PCR检测方法.菌液浓度为102～108 cuf/ml时,均可观察到扩增曲线,且扩增曲线平滑;检测30份模拟临床样品,均检测到stx1和stx2基因,且均培养出EHEC,该方法灵敏度为100％;3次重复测定108、105、102 cfu/ml 3个高、中、低浓度的菌液DNA模板,得到其扩增曲线,计算各浓度的Ct值标准差及变异系数,均小于5％,在误差允许范围内.结论 建立的双重实时荧光PCR法可快速、灵敏、特异、有效地检出EHEC.
作者：陈应坚；刘渠；甘莉萍；金玉娟；杨慧 刊期： 2012年第03期
目的 研究轻度认知功能障碍(MCI)与阿尔茨海默病(AD)患者血清超敏C-反应蛋白(hs-CRP)、同型半胱氨酸( Hcy)的变化,探讨炎症及血管因素在AD临床诊断和治疗中所起的作用.方法 依据美国DSM-IV诊断标准,将研究对象分为健康对照组、MCI组和AD组；hs-CRP检测采用免疫透射比浊法,Hcy检测采用酶循环法.结果 AD组hs-CRP水平为(0.92±0.88) mg/L,与健康对照组的(2.24±1.34)mg/L及MCI组的(11.25±3.73) mg/L相比明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05),MCI组与健康对照组相比则明显升高(P＜0.05)；AD组Hcy水平为(18.53±7.06)μmol/L,与健康对照组的(14.36±4.86) μmol/L及MCI组的(15.22±5.90) μmol/L相比明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05),MCI组与健康对照组相比无明显变化(P＞0.05).结论 炎症以及血管因素在AD的临床诊断和治疗中具有重要意义.
作者：刘云云；刘中霖；王丽敏；何蒙娜；杨幸怡；温小军；彭英 刊期： 2012年第03期
目的 探讨中药复方镇眩汤治疗梅尼埃病的机制.方法 采用阻塞前庭导水管的传统方法造模,分为镇眩汤高、中、低剂量组,西药组、模型组和假手术组,观察大鼠用药前后听觉诱发电位听觉阈值的变化及大鼠内耳水通道蛋白1表达的影响.结果 模型组与假手术组用药前听阈值分别为(54.21±7.91)和(40.03 ±6.75) dBL,差异有统计学意义(P＜0.05)；用药后镇眩汤高剂量组听阈值为(41.27±6.58) dBL,模型组为(56.31±7.64)dBL,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).与模型组比较,西药组、镇眩汤高剂量组、中剂量组、假手术组水通道蛋白1表达差异均有统计学意义(P＜0.05)；与假手术组比较,低、中剂量组水通道蛋白1差异有统计学意义(P＜0.05),而高剂量组与西药组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 镇眩汤对大鼠内耳水通道蛋白1的调节作用可能是治疗梅尼埃病的机制之一.
作者：陈晓明；陈宝田；葛鑫宇 刊期： 2012年第03期
目的 观察加巴喷丁复合吗啡预防性镇痛对大鼠慢性压迫坐骨神经(CCI)后导致的机械缩足阈变化以及脊髓背角肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响.方法 随机选择重量(180±20)g的成年雄性SD大鼠24只,分为假手术组(S组)、模型组(M组)、预防性镇痛组(P组)和常规镇痛组(N组).观察不同方式给药的模型组和对照组大鼠的行为学变化.术后10 d分离脊髓通过免疫组化检测TNF-α水平的变化.结果 术前各组大鼠机械痛阈差异无统计学意义,与M组相比,手术后各时段S、P、N组都存在不同程度的改变,差异均有统计学意义(P＜0.05)；P、N组TNF-α的积分光密度均值(IOD)水平分别为(0.2185±0.01980)、(0.2301±0.01386),与M组的(0.2902±0.01325)比较明显降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 加巴喷丁复合吗啡对大鼠采用预防性镇痛有较好的效果,可显著降低CCI后导致的机械痛阈,降低TNF-α在脊髓背角的表达.
作者：张晓晨；刘红；万朝权；朱燕燕；杨幸怡；阳桂香；成建定；李朝晖 刊期： 2012年第03期
目的 探讨鼻嗜酸性细胞乳头状瘤的临床及病理组织学特点.方法 回顾性分析9例鼻嗜酸性细胞乳头状瘤的临床和病理学特征,并对手术标本进行免疫组织化学染色.结果 患者年龄48 ～66岁,6例发生于上颌窦、2例发生于筛窦、1例发生于鼻腔.镜下见乳头状排列的多层柱状上皮细胞,胞浆内含有嗜酸性颗粒,上皮内含有充满粘液的微囊,有的微囊内聚集多少不等的中性粒细胞形成微脓肿.手术后3例复发,1例恶变.结论 鼻嗜酸性细胞乳头状瘤是一种罕见的良性肿瘤,易误诊,术后易复发及恶变,需积极治疗和精心的术后监测.
作者：邹兰英；李军川；陈廷煊；夏波；谢克 刊期： 2012年第03期
目的 评价中医药分型论治偏头痛的效果.方法 采用多中心、随机对照方法进行临床研究.选取偏头痛患者194例,随机分为三组:肝阳证组91例,口服颅痛饮为基础方加减治疗,后服养血清脑颗粒；痰浊证组36例,口服半夏白术天麻汤为基础方加减治疗,后使用二陈丸或正天丸；血瘀证组67例,口服桃红四物汤为基础方加减治疗,后使用中成药正天丸.疗程均为16周,停药后12和24周各随访1次,观察治疗前后头痛各项指标.结果 三组头痛发作天数治疗后4周、治疗后16周的组间差异有统计学意义(P=0.038和P=0.012)；三组发作次数只有治疗后16周的组间差异有统计学意义(P=0.044)；总持续时间治疗后4周、治疗后16周的组间差异有统计学意义(P=0.034和P=0.005);三组在中医证候疗效方面的有效率分别为84.62％、80.00％和88.33％,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 肝阳证以颅痛饮为基础方、痰浊证以半夏白术天麻汤为基础方、血瘀证以桃红四物汤为基础方加减治疗均能明显改善偏头痛患者的临床症状,并起到一定的预防治疗作用.
作者：谢炜；洪雨；范穗强；孟春想；梁一超；张宝玲 刊期： 2012年第03期
目的 制备肠出血型大肠埃希菌(EHEC) O157:H7 EspF蛋白多克隆抗体并初步纯化.方法 生物信息学方法分析EHEC O157:H7 EspF蛋白的柔韧性、亲水性、表面可能性及抗原表位,选取1条由15个氨基酸残基组成的多肽为半抗原,在其C端偶联钥孔血蓝蛋白(KLH),免疫新西兰大白兔制备抗血清.ELISA测定抗血清效价,免疫印迹法鉴定其特异性,辛酸-硫酸铵法初步纯化抗血清,SDS-PAGE检测抗体纯度.结果 选择EspF蛋白抗原指数高的肽段72-TPSRPAPPPPTSGQA- 86 (0.506)为半抗原,合成抗原多肽经高效液相色谱鉴定,纯度为95.78％,经质谱分析其分子量为1 563.76 Mr,与目的多肽分子量一致；加强免疫3次后,EHEC O157:H7 EspF蛋白的抗血清效价达1∶2048 000;该血清对EHEC O157:H7野生株和espF突变株(△espF)的EspF蛋白均有特异性,并经辛酸-硫酸铵法获得一定纯度的抗体.结论 成功地制备了效价高、特异性强的EHEC O157:H7 EspF蛋白多克隆抗体.
作者：周莹；赵素慧；韦耀；王春晖；张其威；万成松 刊期： 2012年第03期
目的 构建携带人甲状旁腺相关激素(PTHLH)基因的慢病毒表达载体pGC-FU/PTHLH.方法 酶切载体pGC -FU,根据人PTHLH基因合成特定引物,扩增目的基因片段,将其克隆到pGC-FU质粒(含EGFP基因)上,菌落PCR鉴定及测序分析重组载体,使用Lipofectamine 2000诱导转染pGC-FU、pHelper 1.0和pHelper 2.0载体三质粒进入293T细胞包装慢病毒,并用带PTHLH的慢病毒感染293T细胞和鼻咽癌CEN1细胞确认慢病毒包装是否成功.结果 菌液PCR产物琼脂糖凝胶电泳鉴定显示,与理论预计值阳性转化子735 bp,阴性转化子198 bp基本相吻合；PCR鉴定阳性的克隆进行测序和比对分析,结果完全匹配,进一步鉴定载体构建成功.分别将质粒包装系统共转染293T细胞,包装产生空白对照慢病毒( pGC- FU)和过表达PTHLH的慢病毒(pGC-FU /PTHLH);或用携带PTHLH和EGFP基因的病毒上清感染CNE1细胞,48 h后,倒置荧光显微镜下观察293T和CNE1细胞,均可见绿色荧光,转染成功.结论 成功构建携人PTHLH基因慢病毒表达载体,为进一步研究PTHLH基因在鼻咽癌转移中的作用及鼻咽癌发病分子机制奠定了基础.
作者：樊英；李佳；陈靖；黄仲曦；姚开泰 刊期： 2012年第03期
目的 分析广州市2006-2010年流行性腮腺炎流行特征,为制定腮腺炎预防控制策略提供科学依据.方法 采用流行病学的回顾性调查方法,对广州市2006-2010年流行性腮腺炎发病及暴发情况进行分析.结果 2006-2010年广州市发生流行性腮腺炎23 940例,年平均发病率为57.38/10万,其中2006年报告发病率高,2007年发病率低,分别为85.41/10万和45.04/10万.全年均有发病,发病高峰在5-7月,人群主要分布为学生(45％)、幼托儿童(23％)和散居儿童(18％),以5～9岁年龄组的发病数高(9 888例).男性发病率比女性高,差异有统计学意义(P=0.000).腮腺炎暴发疫情共20起,均发生在学校.结论 广州市腮腺炎发病率较高,托幼儿童和学生是防控的重点人群.
作者：陈健；蔡衍珊；许建雄；李志群；梁建华；冯小娥；谭慧峰 刊期： 2012年第03期
目的 建立中医证侯血浆蛋白质双向凝胶电泳(2-DE)方法并对其进行优化.方法 以正常人血浆样品为研究对象,对白蛋白/IgG球蛋白去除后血浆样品、全血浆和热SDS法全血浆样品进行pH梯度2-DE分离,凝胶经硝酸银染色后,利用PDQuest软件对2-DE图谱进行重复性分析,并对不同处理方法的全血浆2-DE图像的结果进行比较.结果 与全血浆直接上样2-DE凝胶图谱比较,白蛋白/IgG球蛋白去除后血浆上样双向电泳蛋白有所增多,但由于白蛋白/IgG球蛋白去除过程中的非特异性吸附,造成了同一样品在蛋白质图谱上的明显差异；与全血浆直接上样和白蛋白/IgG球蛋白去除后血浆样品上样2-DE凝胶图谱比较,热SDS法处理血浆样品可以得到更多的蛋白质,且重复性好(P＜0.05),凝胶硝酸银染色显示蛋白质点染色深、分散清楚.结论 热SDS法全血浆上样2-DE分析法具有蛋白丢失少、操作简便、重复性好的特性,是证侯血浆蛋白质组学研究的有效手段.
作者：孙晓敏；李玉萍；赵晓山 刊期： 2012年第03期
目的 按国家食源性致病菌监测项目要求,对广州市市售食品的沙门菌污染状况以及对抗生素的药物敏感性进行调查.方法 采集广州肉菜市场、大型超市、饭店提供的肉、水产品、凉拌菜及沙拉冷饮食品,按国标方法进行沙门菌检测,并用纸片法进行抗生素敏感性测定.结果 413份食品中有41份检出沙门菌,检出率为9.9％,其中生肉类食品的污染状况为严重,检出率达18.8％,其次是生吃水产品为14.0％,熟肉和凉拌菜较低分别为4.5％和3.9％.在检出的17种血清型中德尔卑沙门菌比例高为29.3％.对16株抗生素的药敏试验结果显示,对四环素耐药率高,达61.0％;并且发现有6株多重耐药菌株以及对头孢类耐药的菌株.结论 广州市市售食品中存在沙门菌污染,并存在有多重耐药和对头孢类抗生素耐药的现象.
作者：侯水平；胡玉山；周勇；张晶；邓志爱；吴新伟 刊期： 2012年第03期
目的 总结部、省室间质量评价结果,提高实验室微生物鉴定水平.方法 2001-2009年参加卫生部和湖北省临检中心的微生物学室间质评活动,菌株鉴定采用法国梅里埃VITEK32细菌鉴定系统进行鉴定,药敏试验采用K-B法,药敏试验结果判定以CLSI/NCCLs标准进行.结果 部、省质评菌株共239株,其中革兰阳性球菌50株,肠杆科菌细菌67株,非发酵菌46株,奈瑟菌属细菌8株；肠杆科菌和肠球菌属细菌鉴定正确率较高为100.0％,菌株鉴定总正确率为92.1％;药敏试验共测试63株菌,总正确率为90.5％.结论 参加微生物室间质评活动对提高细菌鉴定水平、促进抗生素的合理使用有积极的推动作用.
作者：邹义春；柯俊 刊期： 2012年第03期
目的 基于慢病毒介导的转基因方法制备荧光素酶(Luc)转基因小鼠.方法 制备携带Luc基因的慢病毒,将其注入小鼠单细胞受精卵卵周隙以感染受精卵,然后将胚胎移植进假孕母鼠体内以获得仔鼠,应用小动物活体成像仪及PCR等在蛋白和DNA水平上筛选和鉴定Luc转基因小鼠.结果 移植慢病毒隙感染后的成活胚胎63枚.将其移植至3只假孕母鼠,其中2只怀孕,共生仔鼠11只；利用小动物活体成像仪检测Luc表达,在蛋白水平证实11只F0代中,3只(命名为S1、S2、S3)表达Luc；DNA水平检测证实,3只Luc阳性小鼠的基因组中整合有外源转基因Luc.此外,Luc转基因首建鼠基因组中整合的Luc转基因可稳定遗传至下一代,并能正常表达.Luc转基因小鼠主要脏器如睾丸、肾脏、胃、肠、肺、脑、胸腺、肝脏和心脏等均可见Luc信号,但不同脏器间Luc强度有差异.结论 成功制备Luc报告基因转基因小鼠.
作者：张余琴；林晓琳；贾俊双；高飞；李静；王胜纯；姚开泰；肖东 刊期： 2012年第03期
目的 探讨能量限制对环磷酰胺处理大鼠卵巢的保护作用.方法 将48只10周龄大鼠随机分为对照组、能量限制组、环磷酰胺组、能量限制加环磷酰胺组.观察各组动物的动情周期,实验结束时称取卵巢重量,并进行卵巢组织形态学观察及卵泡计数,测定血清雌二醇、促黄体生成素、促卵泡生成激素评估卵巢储备功能.结果 经环磷酰胺处理的大鼠出现精神萎靡、体重下降、动情周期逐渐消失,卵巢体积缩小,颗粒细胞变性、坏死,各期卵泡数均明显减少,闭锁卵泡数增加(P＜0.01).能量限制组大鼠卵巢的原始卵泡数比对照组明显增多(P＜0.01),窦状卵泡数减少(P＜0.01).能量限制加环磷酰胺组的原始卵泡和初级卵泡数比环磷酰胺组明显增多(P＜0.01),且卵巢组织受损程度较单用环磷酰胺轻.环磷酰胺处理组大鼠血清雌二醇显著低于对照组和能量限制组,促黄体生成素和促卵泡生成素水平则显著高于对照组和能量限制组(P＜0.01).结论 能量限制模型可以抑制原始卵泡的的转化使其数量明显增多,并可以适度减轻化疗造成的结构与功能损伤,使卵巢保留有一定储备功能.
作者：向延芳；傅玉才；许锦阶；栗丽；林旋豪；陈晓纯；罗丽莉 刊期： 2012年第03期
霍乱是由霍乱弧菌引起的急性肠道传染病,系国际检疫传染病,也是我国法定管理的甲类传染病[1].霍乱疫情主要发生在沿海地区,多因生食或食用加工不彻底的海产品引起[2],现报告因食用田螺感染霍乱的病例1例.1病例摘要孙某,女,53岁,天津市蓟县杨津庄镇大保安镇村农民.2010年7月30日凌晨1时,孙某出现剧烈腹泻症状,米泔样粪便,至凌晨5时30分腹泻10余次,伴有呕吐.
作者：司福德；郝俊伟；张磊 刊期： 2012年第03期
目的 了解重庆市碘营养状况,科学制定碘缺乏病防治对策.方法 调查重庆市40个区县,每县随机抽取1所中心小学100名学生,采集尿液,采用砷铈催化分光光度法测定尿碘,计算中位数.结果 检查8～10岁儿童尿碘4 050人,尿碘中位数为246.00μg/L,碘含量≥100 μg/L的尿样占88.07％.40个区县儿童尿碘中位数均大于100μg/L,中位数在100～300 μg/L间33个,占82.5％；300 μg/L以上7个,占17.5％.男女性别间及年龄间尿碘差异无统计学意义(P＞0.05).渝西、渝东、渝东南3类地区儿童尿碘中位数分别为223.9、270.0和256.6μg/L,差异有统计学意义(P＜0.05).经济欠发达和经济较好的2类地区以及榨菜生产和非榨菜生产2类地区儿童尿碘差异亦有统计学意义(P＜0.05).结论 重庆市儿童碘营养状况良好,但部分地区和儿童可能存在碘营养过剩.
作者：陈亚林；罗兴建；吴成果；李珊珊；肖邦忠 刊期： 2012年第03期
目的 探讨荧光原位杂交(FISH)技术在诊断培养后的羊水细胞染色体亚显微结构异常中的应用价值.方法 对1例18孕周,经典细胞遗传学羊水染色体核型分析结果与B超检查结果有不符合的胎儿,应用FISH的18号、X、Y染色体着丝粒探针和13、21号染色体位点特异性探针,对培养后的羊水中期细胞标本进行检测.结果 共分析了22个独立细胞克隆的分裂象,发现胎儿染色体存在两种核型嵌合,结果记为:mos 45,X[20]/46,XY[2]；FISH检测发现此胎儿核型存在Y染色体亚显微小片段易位.结论 FISH技术结合传统细胞遗传学核型分析,对于诊断染色体亚显微结构异常非常重要.
作者：尹爱华；刘舒；潘小英；傅文婷；王继成；卢建；杨洁霞 刊期： 2012年第03期
目的 构建大树突状细胞(hDCs)信号传导通路抑制因子1(SOCS1)基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体.方法 根据人树突状细胞SOCS1基因(NM-0037),筛选出一个靶序列,设计并合成包含正反义靶序列的互补单链寡核苷酸,与经BamH和Xho酶切后的慢病毒载体质粒pRNA-Lenti-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)(含U6启动子和EGFP)连接产生pRNA-Lenti-SOCS1-EGFP慢病毒重组质粒,与慢病毒包装混合物共转染293T细胞,包装产生慢病毒,收集病毒上清,采取系列稀释法测定慢病毒滴度.然后转染hDCs,通过荧光显微镜观察细胞转染情况,利用荧光实时定量PCR和Western blot检测干扰组、阴性对照组、空白对照组SOCS1的表达情况.结果 将目的序列成功连接到载体上,并经测序分析证实载体构建成功.荧光实时定量PCR及Western blot检测显示慢病毒重组质粒感染hDCs后,与空白对照组及阴性对照组比较,siRNA组mRNA和SOCS1蛋白的表达量显著降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 构建的pRNA-Lenti-SOCS1-EGFP慢病毒载体可有效地抑制hDCs的SOCS1的表达,为进一步研究DCs增强抗肿瘤免疫应答效应奠定基础.
作者：涂微；阮健；罗荣城；吕成伟 刊期： 2012年第03期
目的 比较不同鼻咽癌细胞株在鸡胚尿囊膜模型上促进血管生成能力的差异.方法 选用6日龄鸡胚,开窗后分别种植5-8F、6-10B及CNE-2三种鼻咽癌细胞株,三种细胞株细胞数为2×106/鸡胚者各一组,细胞数为5×105/鸡胚者各一组,另一组为对照组(PBS),每组10个鸡胚.孵育6日后,统计分析新生血管数及血管面积/鸡胚面积比.结果 种植细胞数为5×105/鸡胚时,5-8F、6-10B细胞部分鸡胚有移植瘤形成,CNE-2细胞鸡胚均未见成瘤.种植细胞数为2× 106/鸡胚时,三种鼻咽癌细胞株均可100％成瘤,其新生血管数依次递减,分别为(38.7±2.50)、(33.5±4.43)、(29.7±2.71),差异有统计学意义(P＜0.05)；血管面积/鸡胚面积比分别为(22.2±2.18)％、(18.7±2.45)％、(16.9±2.62)％,均高于对照组的(9.5±1.86)％,差异有统计学意义(P＜0.05),且5-8F面积比高于其他两种细胞株(P＜0.05).结论 鼻咽癌5-8F、6-10B及CNE-2三种细胞株在鸡胚尿囊膜模型上血管生成能力依次减弱,实验研究可根据实际情况选用.
作者：林少雄；李湘平；鲁娟；梁碧君；刘雄 刊期： 2012年第03期
目的 探讨稽留流产刮宫术后宫腔粘连的防治方法.方法 选择稽留流产患者共300例,随机分为两组:研究组160例,刮宫术前使用米非司酮配伍米索前列醇,术后服用妈富隆片1片；对照组140例,手术前后无服药.观察两组手术时间、出血量以及术后月经变化.结果 研究组患者手术时间和出血量为(4.1±1.8)min、( 16.1±9.4)ml,分别较对照组的(7.9±2.3) min、(37.3±13.6)ml短或少,差异有统计学意义(P＜0.05)；术后阴道流血时间和流血量为(4.68±1.21)d、(43.5±12.6)ml,分别较对照组的(7.65±1.23)d、(57.3±13.4)ml短或少,差异有统计学意义(P＜0.05)；月经复潮时间较对照组早,轻、中度宫腔粘连发生较对照组少,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 稽留流产患者刮宫术前使用米非司酮配伍米索前列醇,术后服用妈富隆,可有效预防宫腔粘连的发生.
作者：刘珮瑜；何肖莲；贺纯 刊期： 2012年第03期
热带医学杂志
主管:广东省科学技术协会
主办：广东省寄生虫学会 中华预防医学会
