学术投稿

慢病毒载体法制备荧光素酶转基因小鼠

张余琴;林晓琳;贾俊双;高飞;李静;王胜纯;姚开泰;肖东

关键词:荧光素酶, 慢病毒载体法, 转基因小鼠
摘要:目的 基于慢病毒介导的转基因方法制备荧光素酶(Luc)转基因小鼠.方法 制备携带Luc基因的慢病毒,将其注入小鼠单细胞受精卵卵周隙以感染受精卵,然后将胚胎移植进假孕母鼠体内以获得仔鼠,应用小动物活体成像仪及PCR等在蛋白和DNA水平上筛选和鉴定Luc转基因小鼠.结果 移植慢病毒隙感染后的成活胚胎63枚.将其移植至3只假孕母鼠,其中2只怀孕,共生仔鼠11只;利用小动物活体成像仪检测Luc表达,在蛋白水平证实11只F0代中,3只(命名为S1、S2、S3)表达Luc;DNA水平检测证实,3只Luc阳性小鼠的基因组中整合有外源转基因Luc.此外,Luc转基因首建鼠基因组中整合的Luc转基因可稳定遗传至下一代,并能正常表达.Luc转基因小鼠主要脏器如睾丸、肾脏、胃、肠、肺、脑、胸腺、肝脏和心脏等均可见Luc信号,但不同脏器间Luc强度有差异.结论 成功制备Luc报告基因转基因小鼠.
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  • 产气荚膜梭菌实验室诊断方法综述

    气性坏疽不仅是战伤的严重并发症,也是其他创伤的严重并发症,其主要致病菌为产气荚膜梭菌.由于产气荚膜梭菌繁殖迅速,引起的临床症状严重,因此日益受到临床及实验室的广泛关注.近年来,国内外学者在对此菌的快速诊断方面作了大量的工作,本文就近年的研究成果进行综述.

    作者:唐玲玲;石玉玲 刊期: 2012年第03期

  • 人血清胎盘生长因子浓度与冠心病的相关性研究

    目的 比较冠心病患者和健康人血清中胎盘生长因子(PIGF)水平,探讨其与冠心病、冠脉病变程度、心肌损伤的相关性.方法 采用ELISA法测定87例冠心病患者(冠心病组)及61例健康人(对照组)血清的PIGF水平,分析血清PIGF水平与冠心病的相关性;将冠状动脉造影结果与血清PIGF水平进行比较,分析血清PIGF水平与冠心病患者冠脉病变支数及Gensini冠脉病变积分之间的相关性;以cTnI 0.03 ng/ml和0.1 ng/ml为分界值,将冠心病组分成冠心病Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组,比较各组之间血清PIGF水平.结果 冠心病组血清PIGF水平为(11.55±3.10)ng/ml,高于对照组的(5.81±2.21)ng/ml,差异有统计学意义(P<0.05).血清PIGF水平与冠脉病变支数和Gensini冠脉病变积分均无相关性(P>0.05).冠心病Ⅱ组和冠心病Ⅲ组血清PIGF水平分别为(13.12±2.45)、(14.62±3.25)ng/ml,与冠心病Ⅰ组的(9.10±2.31) ng/ml比较,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 血清PIGF水平与冠心病、心肌受损之间存在相关性,PIGF水平与冠脉梗塞的严重程度的相关性需进一步研究.

    作者:林勇平;曾翠云;孟艳辉;刘忠民 刊期: 2012年第03期

  • 类风湿关节炎合并钩虫感染病例1例

    抗寄生虫和抗风湿联合治疗可有效治疗钩虫性消化道出血,并缓解类风湿关节炎症状.本文从临床症状与体征、实验室诊断、临床治疗及治疗效果等方面,分析经纤维胃镜检查与粪便病原学检查诊断的类风湿关节炎患者合并钩虫感染病例1例,现报告如下.

    作者:张鑫;李静;李娟;李华 刊期: 2012年第03期

  • 镇眩汤对大鼠梅尼埃模型水通道蛋白1表达的影响

    目的 探讨中药复方镇眩汤治疗梅尼埃病的机制.方法 采用阻塞前庭导水管的传统方法造模,分为镇眩汤高、中、低剂量组,西药组、模型组和假手术组,观察大鼠用药前后听觉诱发电位听觉阈值的变化及大鼠内耳水通道蛋白1表达的影响.结果 模型组与假手术组用药前听阈值分别为(54.21±7.91)和(40.03 ±6.75) dBL,差异有统计学意义(P<0.05);用药后镇眩汤高剂量组听阈值为(41.27±6.58) dBL,模型组为(56.31±7.64)dBL,两组比较差异有统计学意义(P<0.05).与模型组比较,西药组、镇眩汤高剂量组、中剂量组、假手术组水通道蛋白1表达差异均有统计学意义(P<0.05);与假手术组比较,低、中剂量组水通道蛋白1差异有统计学意义(P<0.05),而高剂量组与西药组差异无统计学意义(P>0.05).结论 镇眩汤对大鼠内耳水通道蛋白1的调节作用可能是治疗梅尼埃病的机制之一.

    作者:陈晓明;陈宝田;葛鑫宇 刊期: 2012年第03期

  • 加巴喷丁复合吗啡预防慢性压迫坐骨神经致痛觉敏化的疗效分析

    目的 观察加巴喷丁复合吗啡预防性镇痛对大鼠慢性压迫坐骨神经(CCI)后导致的机械缩足阈变化以及脊髓背角肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响.方法 随机选择重量(180±20)g的成年雄性SD大鼠24只,分为假手术组(S组)、模型组(M组)、预防性镇痛组(P组)和常规镇痛组(N组).观察不同方式给药的模型组和对照组大鼠的行为学变化.术后10 d分离脊髓通过免疫组化检测TNF-α水平的变化.结果 术前各组大鼠机械痛阈差异无统计学意义,与M组相比,手术后各时段S、P、N组都存在不同程度的改变,差异均有统计学意义(P<0.05);P、N组TNF-α的积分光密度均值(IOD)水平分别为(0.2185±0.01980)、(0.2301±0.01386),与M组的(0.2902±0.01325)比较明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 加巴喷丁复合吗啡对大鼠采用预防性镇痛有较好的效果,可显著降低CCI后导致的机械痛阈,降低TNF-α在脊髓背角的表达.

    作者:张晓晨;刘红;万朝权;朱燕燕;杨幸怡;阳桂香;成建定;李朝晖 刊期: 2012年第03期

  • 荧光原位杂交技术在检测胎儿染色体亚显微结构异常中的应用

    目的 探讨荧光原位杂交(FISH)技术在诊断培养后的羊水细胞染色体亚显微结构异常中的应用价值.方法 对1例18孕周,经典细胞遗传学羊水染色体核型分析结果与B超检查结果有不符合的胎儿,应用FISH的18号、X、Y染色体着丝粒探针和13、21号染色体位点特异性探针,对培养后的羊水中期细胞标本进行检测.结果 共分析了22个独立细胞克隆的分裂象,发现胎儿染色体存在两种核型嵌合,结果记为:mos 45,X[20]/46,XY[2];FISH检测发现此胎儿核型存在Y染色体亚显微小片段易位.结论 FISH技术结合传统细胞遗传学核型分析,对于诊断染色体亚显微结构异常非常重要.

    作者:尹爱华;刘舒;潘小英;傅文婷;王继成;卢建;杨洁霞 刊期: 2012年第03期

  • 2006-2010年清新县血吸虫病疫情分析

    目的 了解分析清新县2006-2010年血吸虫病疫情,为制定防控方案提供科学依据.方法 根据《广东省血吸虫病巩固监测方案》,在原疫区对钉螺和传染源进行同步监测,对清新县2006-2010年的监测情况进行统计分析.结果 2006-2010年共查螺13 hm2,未查获活钉螺.复查历史病人12人,未发现慢性或晚期病例.低年龄组(中、小学生)监测1 122人,血清抗体阳性者10人,未查到血吸虫病人.检查流动人口2 456人,抗体阳性者80人,查获血吸虫病慢性病人13例,其中虫卵阳性者2例.检查耕牛1 900头,未发现血吸虫感染牛只.结论 目前清新县血吸虫病防治成果巩固,今后要重点加强输入性传染源和钉螺的监测.

    作者:李初升;周志珊;黄德厚;邝西金;黄少玉 刊期: 2012年第03期

  • 食用田螺引起O1群小川型霍乱1例报告

    霍乱是由霍乱弧菌引起的急性肠道传染病,系国际检疫传染病,也是我国法定管理的甲类传染病[1].霍乱疫情主要发生在沿海地区,多因生食或食用加工不彻底的海产品引起[2],现报告因食用田螺感染霍乱的病例1例.1病例摘要孙某,女,53岁,天津市蓟县杨津庄镇大保安镇村农民.2010年7月30日凌晨1时,孙某出现剧烈腹泻症状,米泔样粪便,至凌晨5时30分腹泻10余次,伴有呕吐.

    作者:司福德;郝俊伟;张磊 刊期: 2012年第03期

  • 贫困山区肺结核患者实施交通补助后的治疗依从性效果评价

    目的 通过对贫困山区肺结核患者实施交通补助后的患者治疗依从性的研究,探讨提高贫困山区肺结核患者治愈率的有效途径.方法 选取重庆市国家级贫困县WX县作为实施区县,连续选择200例新确诊初治涂阳肺结核患者,对患者实施适当的交通补助,以评价实施交通补助的效果.结果 在课题干预前后,患者治疗2月末随访查痰率由63.1%提高到96.0%,痰菌阴转率由59.0%提高到88.5%,治疗5月末随访查痰率由95.9%提高到98.5%,患者随访按时取药率由65.4%提高到99.5%,差异均有统计学意义(P<0.05).患者治疗5月末痰菌阴转率由95.9%提高到96.0%,治疗6月末随访查痰率由97.7%提高到99.0%,6月末痰菌阴转率由96.8%降低到96.0%,患者治愈率由96.8%降低到96.0%,以上数据比较差异均无统计学意义(P>0.05).结论 为肺结核患者提供交通补助有助于提高患者按时取药和查痰的比例,但要真正确保患者规则服药,达到治愈目的,需要结合其他措施综合实施.

    作者:汪清雅;熊鸿燕;刘英 刊期: 2012年第03期

  • 2008-2010年广州市自然界白纹伊蚊携带登革病毒监测

    目的 通过对广州地区登革热媒介蚊虫白纹伊蚊携带登革病毒情况的监测,探讨传播媒介对该地区登革热流行特征的影响.方法 采集广州市各区新旧疫点附近的白纹伊蚊幼虫及成蚊,提取蚊虫总RNA,用登革病毒特异引物经实时荧光逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)进行病毒核酸检测.结果 2008年以来共检测白纹伊蚊标本658批,合计12 348只,平均每批检测18.8只蚊虫,未检测出登革病毒核酸.结论 广州地区白纹伊蚊自然种群携带登革病毒水平较低.

    作者:江毅民;王玉林;严子锵;胡志刚;李成玲;杨智聪 刊期: 2012年第03期

  • 三维重建技术在寄生虫研究中的应用

    计算机三维重建技术配合光学显微镜、共聚焦扫描显微镜,在寄生虫细微结构的研究中发挥着重要的作用,为研究寄生虫的生理生化及致病机理提供了基础.本文分别从原虫、蠕虫和节肢动物三个方面介绍了三维重建技术在寄生虫研究中的应用,同时对其今后的发展前景作了一定的阐述.

    作者:赵安东;连国云;刘志刚 刊期: 2012年第03期

  • 深圳市宝安区学校、幼儿园传染病防制工作现状分析

    目的 了解深圳市宝安区学校、幼儿园传染病防制工作及卫生保健人员的基本情况,为规范学校传染病防制工作提供依据.方法 采用分层抽样的方法,选取宝安区各类中小学、托幼机构共计80所进行问卷调查.结果 所调查的学校均设有医务室及专职的卫生保健人员,传染病防制的各项制度方面比较健全,各项防控工作均有开展.卫生保健人员中位年龄33.7岁;男女性别比为1∶7.33;学历构成以大专(44%)和中专/高中(44%)为主;职称多为无职称(42.7%)和初级职称(40%);从事卫生防病工作平均年限为2.36年;50.7%的人员认为目前的工作超负荷;仅24%的人员对目前的收入水平满意.结论 深圳市宝安区学校传染病防治工作管理水平有待提高,卫生保健人员性另 、职称、学历等结构不合理,政府部门应加强人员的技能培训,切实提高人员的收入,以优化和稳定卫生保健队伍.

    作者:陈兵;赵萍;吴泰顺;马智超;陈亿雄;周小涛;任海燕 刊期: 2012年第03期

  • 安溪县2010年手足口病流行病学特征分析

    目的 了解安溪县2010年手足口病的疫情流行特征,为制定有效防控策略和应对措施提供依据.方法 利用《疾病监测信息报告管理系统》监测报告卡信息,用SPSS18.0软件包进行统计分析.结果 2010年全县报告手足口病283例,报告发病率为25.87/10万,无重症病例和死亡病例,聚集性病例1起.病例报告多的是市级医疗机构,占48.1%.从发病到诊断间隔时间中位数为2.46 d.疫情呈散发趋势,构成比以龙涓(13.78%)和官桥(7.77%)较高,发病率以福田(110.10/10万)和桃舟(58.08/10万)较高,兰田构成比(0.4%)和发病率(3.83/10万)均低.发病率男女性别比例为2.41∶1,0~3岁高发(84.45%),以散居儿童(89.00%)为主.每个月均有病例报告,11和12月发病少,9月多,全年以4-5月和8-9月为发病高峰,呈双峰分布.结论 应提高基层医疗单位对手足口病的诊治能力和群众防病及就医意识,加强重点地区和重点人群的防控.

    作者:吴炳疆 刊期: 2012年第03期

  • 敏感型心肌钙蛋白T对早期诊断急性心肌梗死的价值

    目的 探讨敏感型心肌钙蛋白T( hs-cTnT)对早期诊断急性心肌梗死(AMI)的临床应用价值.方法 应用发光免疫法分别测定67例AMI患者和58例非AMI患者,同一份血清标本作标准型心肌钙蛋白I(cTnI)和hs-cTnT检测.结果 标准型cTnI检测AMI患者的敏感度和特异性分别为68.7%和53.4%,hs-cTnT为74.6%和51.7%.hs-cTnT检测的接受者操作特征(ROC)曲线下面积(AUC)和诊断灵敏度分别为0.659和70.2%,均高于标准型cTnI检测的0.639和59.7%;标准型cTnI检测的佳cutoff值为0.035μg/L,hs-cTnT检测为0.0125 μg/L.结论 应用hs-cTnT早期诊断AMI的准确性和灵敏度优于标准型cTnI的检测.

    作者:黄小媛;廖军;汤勇才 刊期: 2012年第03期

  • 过表达P2x7受体引发小胶质细胞的炎症反应

    目的 研究嘌呤受体P2x7在小胶质细胞炎症反应中的作用.方法 通过分子克隆的方法构建pCDNA3.1-P2x7重组质粒,构建成功后经测序确认质粒序列无误,通过Lipo2000转染小胶质细胞株BV-2细胞,采用PCR方法测定BV-2细胞内P2x7的表达,Western blot法测定P2x7和Cox-2的蛋白表达.结果 细胞经重组质粒转染成功后,pCDNA3.1-P2x7组P2x7和Cox-2蛋白表达水平分别为(4.21±0.13)%和(2.60±0.05)%,高于pCDNA3.1组的(2.61±0.05)%和(1.62±0.04)%,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 通过过表达P2x7受体,能引起小胶质细胞的激活,提示可进一步引发炎症反应.

    作者:王珏;唐亚梅;周俊宜 刊期: 2012年第03期

  • 接种纯化人用狂犬病疫苗对妊娠期Th1/Th2类细胞因子谱的影响

    目的 研究人用狂犬病纯化疫苗(RV)对妊娠期Th 1/Th2类细胞因子谱的影响.方法 对所有可疑狂犬病毒暴露者进行RV的全程接种,在接种RV的第0、14、45天时采血并分离外周血单个核细胞与RV进行培养,采用ELISA法检测抗狂犬病病毒抗体,体外培养检测淋巴细胞增殖能力,CBA法检测细胞培养上清液中Th1类细胞因子:干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素-2(IL-2)以及Th2类细胞因子:IL-4、IL-5、IL-10的水平.结果 17例暴露者于RV全程注射后17 d(第45天)抗体检测阳性;RV刺激后,暴露者第45天淋巴细胞增殖能力明显高于第0天(P<0.05);当RV刺激后,暴露组第14天、第45天产生IL-2、IL-4、IL-5的含量显著高于未刺激组及暴露组第0天水平(P<0.05).结论 妊娠期注射RV在刺激机体产生体液免疫的同时,可以有效地诱导Th1/Th2类细胞因子的产生.

    作者:孟瑞琳;谭小华;黄琼;刘芳兰;王凤岩 刊期: 2012年第03期

  • 偏头痛分型论治多中心临床观察及疗效分析

    目的 评价中医药分型论治偏头痛的效果.方法 采用多中心、随机对照方法进行临床研究.选取偏头痛患者194例,随机分为三组:肝阳证组91例,口服颅痛饮为基础方加减治疗,后服养血清脑颗粒;痰浊证组36例,口服半夏白术天麻汤为基础方加减治疗,后使用二陈丸或正天丸;血瘀证组67例,口服桃红四物汤为基础方加减治疗,后使用中成药正天丸.疗程均为16周,停药后12和24周各随访1次,观察治疗前后头痛各项指标.结果 三组头痛发作天数治疗后4周、治疗后16周的组间差异有统计学意义(P=0.038和P=0.012);三组发作次数只有治疗后16周的组间差异有统计学意义(P=0.044);总持续时间治疗后4周、治疗后16周的组间差异有统计学意义(P=0.034和P=0.005);三组在中医证候疗效方面的有效率分别为84.62%、80.00%和88.33%,差异无统计学意义(P>0.05).结论 肝阳证以颅痛饮为基础方、痰浊证以半夏白术天麻汤为基础方、血瘀证以桃红四物汤为基础方加减治疗均能明显改善偏头痛患者的临床症状,并起到一定的预防治疗作用.

    作者:谢炜;洪雨;范穗强;孟春想;梁一超;张宝玲 刊期: 2012年第03期

  • 能量限制对化疗大鼠卵巢的形态结构与功能的保护作用

    目的 探讨能量限制对环磷酰胺处理大鼠卵巢的保护作用.方法 将48只10周龄大鼠随机分为对照组、能量限制组、环磷酰胺组、能量限制加环磷酰胺组.观察各组动物的动情周期,实验结束时称取卵巢重量,并进行卵巢组织形态学观察及卵泡计数,测定血清雌二醇、促黄体生成素、促卵泡生成激素评估卵巢储备功能.结果 经环磷酰胺处理的大鼠出现精神萎靡、体重下降、动情周期逐渐消失,卵巢体积缩小,颗粒细胞变性、坏死,各期卵泡数均明显减少,闭锁卵泡数增加(P<0.01).能量限制组大鼠卵巢的原始卵泡数比对照组明显增多(P<0.01),窦状卵泡数减少(P<0.01).能量限制加环磷酰胺组的原始卵泡和初级卵泡数比环磷酰胺组明显增多(P<0.01),且卵巢组织受损程度较单用环磷酰胺轻.环磷酰胺处理组大鼠血清雌二醇显著低于对照组和能量限制组,促黄体生成素和促卵泡生成素水平则显著高于对照组和能量限制组(P<0.01).结论 能量限制模型可以抑制原始卵泡的的转化使其数量明显增多,并可以适度减轻化疗造成的结构与功能损伤,使卵巢保留有一定储备功能.

    作者:向延芳;傅玉才;许锦阶;栗丽;林旋豪;陈晓纯;罗丽莉 刊期: 2012年第03期

  • 孤儿核受体Nur77激动剂CsnB对人HepG2肝癌细胞胆固醇代谢调控基因的影响

    目的 探讨孤儿核受体Nur77激动剂CsnB对人HepG2肝癌细胞胆固醇代谢调控基因的影响.方法 利用CsnB诱导Nur77在人HepG2肝癌细胞中的高表达.通过与CsnB相同剂量的DMSO对照组的比较,观察CsnB作用不同时间后肝细胞胆固醇代谢相关重要基因的变化,如低密度脂蛋白受体(LDLR)、HMGCoA还原酶(HMGCR)和肝X受体α(LXRα).结果 10 μg/ml终浓度CsnB刺激HepG2细胞可以达到Nur77的高表达,并在作用1.5 h后表达量达到高峰.相同浓度CsnB刺激HepG2细胞后,LDLR与HMGCR随时间的延长逐渐下降,并且两种基因在CsnB处理24 h后的表达量与0h比较,差异有统计学意义(P<0.05);而LXRα的表达量变化不大.结论 CsnB可以有效诱导Nur77在HepG2细胞中的高表达,其对于肝癌细胞胆固醇代谢调控基因的影响主要表现为LDLR与HMGCR的下调.

    作者:张鹏;裘宇容;王前 刊期: 2012年第03期

  • 双重实时荧光PCR检测肠出血型大肠埃希菌stx1和stx2基因方法的建立

    目的 建立一种检测肠出血型大肠埃希菌(EHEC)产毒基因stx1和stx2的TaqMan双重实时荧光PCR法.方法 根据GenBank公布的EHEC stx1和stx2基因序列进行比对后设计相应的PCR引物和TaqMan探针,探针报告基团分别使用FAM和HEX标记,淬灭基团使用BHQ1标记.建立双重实时荧光PCR反应体系并对反应条件进行优化,对方法的灵敏度、特异性及其重复性进行分析.结果 建立了EHEC双重实时荧光PCR检测方法.菌液浓度为102~108 cuf/ml时,均可观察到扩增曲线,且扩增曲线平滑;检测30份模拟临床样品,均检测到stx1和stx2基因,且均培养出EHEC,该方法灵敏度为100%;3次重复测定108、105、102 cfu/ml 3个高、中、低浓度的菌液DNA模板,得到其扩增曲线,计算各浓度的Ct值标准差及变异系数,均小于5%,在误差允许范围内.结论 建立的双重实时荧光PCR法可快速、灵敏、特异、有效地检出EHEC.

    作者:陈应坚;刘渠;甘莉萍;金玉娟;杨慧 刊期: 2012年第03期

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