学术投稿

登革热病毒多重荧光PCR检测及基因分型方法的研究

王佃鹏;朱玉兰;刘胜牙;董瑞玲;甄胜西

关键词:登革热, 多重荧光PCR, 基因分型
摘要:目的 建立一种登革热病毒双靶基因多重荧光PCR检测方法,用于登革热病毒的实验室诊断和基因分型.方法 选取登革热病毒Ⅰ-Ⅳ型病毒保守区设计型特异性引物探针和通用型引物探针,评估多重荧光PCR检测方法的特异性、重复性和检测限;并对20份阳性样本进行检测.结果 20个登革热阳性核酸标本在通用型检测全部为阳性,特异性型别检测发现登革热病毒Ⅰ型10例、登革热病毒Ⅱ型3例、登革热病毒Ⅲ型3例、登革热病毒Ⅳ型4例;20名正常无症状人群标本提取的核酸和HIV、HCV和HEV通用型和特异性型别检测全部为阴性.梯度检测的变异系数均小于5%.对登革热Ⅰ-Ⅳ型病毒检测低检测限达103 copies/ml.结论 本研究建立的登革热病毒双靶基因多重荧光PCR检测及分型方法具有特异性好、重复性好、快速易操作等优点,可用于登革热病毒的快速检测和基因分型鉴定.
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  • 匹多莫德在感染性疾病中的应用及实验研究进展

    匹多莫德是一种新型的具有口服活性的生物反应调节剂,既能促进非特异性免疫反应,也能促进特异性免疫反应.临床上匹多莫德主要用于儿童复发性呼吸道感染的治疗,具有安全、有效、副作用少等优点.本文就匹多莫德的免疫调节机制及其相关临床应用和实验研究进展作一综述.

    作者:赵莹;吕芳丽 刊期: 2012年第08期

  • 胎盘组织匀浆上清对BALB/c小鼠脾脏DC生物学特征的影响

    目的 通过观察胎盘组织匀浆上清(PTHS)对小鼠脾脏树突状细胞(DC)生物学特征的影响,探讨妊娠免疫耐受的机制.方法 分离妊娠及正常BALB/C小鼠脾脏单个核细胞,诱导分化为树突状细胞,经PTHS作用后,流式细胞仪检测树突状细胞的表面标志和抗原摄取能力,MTT法检测其同种异基因淋巴细胞刺激能力,ELISA方法检测其产生的细胞因子水平.结果 妊娠小鼠脾脏树突状细胞的生物学特征与正常对照小鼠比较差异无统计学意义,而经PTHS作用后的妊娠小鼠及正常对照小鼠的脾脏CD11b+树突状细胞明显降低,而CD8α+树突状细胞明显增高(P<0.01);树突状细胞的抗原摄取能力及刺激同种异基因的淋巴细胞反应的能力也明显低于正常小鼠(P<0.01);PTHS作用后的树突状细胞产生较高水平的IL-10和较低水平的IL-12,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论 PTHS可向下调节BALB/c小鼠脾脏树突状细胞的生物学特征,可能与妊娠免疫抑制有关.

    作者:唐小云;李霞;李福娟;姬云丽;王志龙;鞠宝玲 刊期: 2012年第08期

  • 禽流感病毒感染BALB/c小鼠的动态病理观察

    目的 将H5N1亚型禽流感病毒(AIV)鼻腔接种BALB/c小鼠,动态观察小鼠每个时期主要器官组织的病理变化.方法 将100μl H5N1亚型禽流感病毒原液滴入经麻醉后BALB/c小鼠鼻腔,观察14 d,每天取材1次,固定、包埋、切片后HE染色观察各组织病理变化.结果 H5N1亚型禽流感病毒感染BALB/c小鼠后,产生一系列与禽流感病毒感染有关的动态病理改变:第1~2天(前驱期),肺轻微出血、水肿、炎性细胞浸润;第3~7天(发作期),肺损伤逐渐严重,大量出血、炎性细胞浸润、严重水肿、淤血、肺泡实变塌陷或者气肿;第8~14天(恢复期),各种损伤逐渐减轻,出血渗出减少,水肿减轻,肺间质出现纤维化而趋于恢复正常.肝、肾、脑出现病理改变.结论 通过动态观察病理,弄清了禽流感病毒每个时期在BALB/c小鼠体内造成的病理损伤.

    作者:刘忠华;王颖彦;谭文雅 刊期: 2012年第08期

  • 2型糖尿病患者生存质量影响因素HMM模型的二次拟合

    目的 评价隐Markov模型在2型糖尿病不同发展阶段影响因素分析中的拟合稳健性.方法 将697例2型糖尿病患者资料分成两个亚组,对2型糖尿病的资料用隐Markov模型进行重新拟合.结果 两个亚样本模型参数相差基微.除职业因素外,有11项因素对2型糖尿病影响均有统计学意义(P<0.05);两个亚样本与原样本比较,其大误差ME<0.05,两次隐Markov模型拟合结果一致.结论 隐Markov模型拟合2型糖尿病的数据有较好的稳定性,可以用于慢性病生存质量影响因素资料的分析.

    作者:潘海燕;吴笑韬;孔丹莉;胡利人;黄贵心;丁元林 刊期: 2012年第08期

  • 健康体检人群脂肪肝与代谢综合征及其组分的关系

    目的 探讨健康体检人群中脂肪肝与代谢综合征(MS)及其组分的关系.方法 对江门市2 245名体检人群开展问卷调查、体格检查及实验室检查和腹部B超检查,按是否合并脂肪肝分为脂肪肝组和对照组,比较两组代谢指标的水平、异常率及个数,采用Logistic回归分析脂肪肝与各代谢指标的相关性.结果 2 245名健康体检成人中MS和脂肪肝的检出率分别为15.55%和34.74%,脂肪肝组的体质指数、血压、甘油三酯(TG)、血糖、血尿酸水平均显著高于对照组(P<0.01),高密度脂蛋白胆固醇( HDL-C)则低于对照组(P<0.01);脂肪肝组的肥胖、高血压、糖代谢异常、脂代谢和MS异常率则显著高于对照组(P<0.01),脂肪肝组的代谢组分检出数显著高于对照组,肥胖、血糖异常、高TG、低HDL-C、高血尿酸等为脂肪肝的独立危险因素.结论 江门市健康体检人群的MS和脂肪肝同为常见病,脂肪肝与多元代谢紊乱关系密切,应对并存多种危险因素的患者给予更多的关注和干预.

    作者:钟毓瑜;王培燊;田有逢;余新立;冯玉珍;余冰冰 刊期: 2012年第08期

  • 塞来昔布预防根管治疗期间急症的临床评价

    目的 比较一次性和二次性根管治疗后根管治疗期间急症(EIAE)的发生率及急性发作程度(FUI),评价应用塞来昔布的预防效果.方法 按纳入标准选取在湖南旺旺医院口腔科就诊的225例牙髓坏死并有根尖周X线透射阴影需行根管治疗的患牙,采用逐步后退法制备根管,随后将患者随机分为两组:塞来昔布组113例,根管预备后口服塞来昔布,其中55例行一次性根管治疗,58例行二次性根管治疗;安慰剂组112例,根管预备后口服外形和颜色一致的安慰剂,一次性根管治疗和二次性根管治疗各56例.记录两组患者根管治疗后l周内出现的症状.结果 一次性根管治疗组EIAE的发生率及FUI均值均明显高于二次性根管治疗组(P<0.05).塞来昔布组EIAE的发生率及FUI值分别为5.31%、(2.58±0.64),明显低于安慰剂组的13.39%、(4.08±0.79),差异有统计学意义(P<0.05).塞来昔布对一次性根管治疗术后的EIAE发生率及FUI值具有明显的抑制作用(P<0.05).结论 根管制备后预防性服用塞来昔布可显著降低EIAE的发生率、减轻术后疼痛及肿胀程度.

    作者:张颖;黄绮凌;潘倩茹;黄世光 刊期: 2012年第08期

  • 502例宫颈癌发病趋势与临床特征分析

    目的 分析宫颈癌发病趋势与临床特点,为早期发现病例提供依据.方法 收集医院2006-2011年就诊的宫颈癌临床病例资料,采取趋势分析法(F)分析就诊病例变化趋势.结果 共收治宫颈癌患者502例,年病例从2009年的49例增加至2011年的118例,各年的住院病例占医院各种住院病例的0.25%~0.40%,占妇产科住院病例的4.51%~8.95%,均呈上升趋势(P<0.05);年龄由2006年的(54.20±12.16)岁降至2011年的(47.50±13.01)岁(F=127.91,P<0.01),2006年病例以50~岁组居多,占32.65%,2007年起,以40~岁组病例为多,占32.61%~46.60%,并呈逐年上升趋势(F=17.68,P<0.05);鳞状上皮癌占86.06%,腺癌占13.94%,原位癌、Ia-Ib1、I b2-Ⅱa和Ⅱb期以上病例所占比例依次为5.58%、19.72%、27.29%和47.41%.各年均以Ⅱb期以上病例多,占39.83%~61.22%,其次是Ⅰ b2-Ⅱa期,占20.41%~35.59%;临床表现阴道不明原因出血者占94.42%,阴道分泌液增多者占96.61%,腰部与下腹酸痛占34.46%,临床检查宫颈糜烂占85.66%、肥大占49.00%、萎缩占16.14%,有赘生物占61.16%.结论 宫颈癌临床病例逐年上升,且呈年轻化趋势,病例发现较晚,主要临床症状为阴道分泌物增多和不明原因出血.应定期进行妇科检查,加强宫颈癌的早期发现与治疗.

    作者:肖正华;张晓静;林英 刊期: 2012年第08期

  • 深圳市宝安区健康人群百日咳、白喉、破伤风抗体水平监测

    目的 了解宝安区健康人群破伤风、白喉、百日咳三种疫苗血清抗体水平,评价三种疫苗的免疫实施效果.方法 2011年随机抽取宝安区7个街道不同年龄段人群,采用试管凝集试验检测血清抗体水平.结果 破伤风、白喉、百日咳抗体保护率分别为98.33%,98.06%,98.33%,各年龄组人群均达到90%以上;几何平均滴度(GMT)分别为1∶80.63、1∶80.48、1∶1 409.35,均以21~32岁组低;三种抗体保护率和GMT有随年龄增大而明显降低的趋势.结论 宝安区人群破伤风、白喉、百日咳免疫水平都较高,免疫屏障已经形成,短期内暴发流行百日咳、白喉、破伤风的可能性不大.

    作者:张震文;茌静;雷蕾;郑晓晨;肖锦晖 刊期: 2012年第08期

  • PAS联合六胺银染色诊断局限性马尔尼菲青霉菌感染的应用

    目的 探讨建立快速诊断局限性马尔尼菲青霉菌感染的方法,以期早期诊断,降低死亡率.方法 采用高碘酸-无色品红(PAS)染色联合六胺银染色对4例非AIDS马尔尼菲青霉菌感染者活检组织进行马尔尼菲青霉菌的特殊染色,分析感染者的临床表现和病理组织学诊断特点.结果 患者均为广东本地居民,属局限性马尔尼菲青霉菌感染.除1例有发热外,临床上未见以发热、失重、贫血、白细胞增高为主的马尔尼菲青霉菌感染症状以及多器官损害症状.HE染色显示病理组织学类型为肉芽肿型和化脓型.病变组织经PAS染色与六胺银染色后,在油镜下增生的泡沫状巨噬细胞胞浆内,呈现大量红色或黑色的卵圆形及腊肠状酵母样青霉菌孢子,无荚膜,在腊肠状菌体中可见马尔尼菲青霉菌特有的裂殖时出现的横隔膜.结论 PAS联合六胺银染色清晰显示组织中马尔尼菲青霉菌的特征性结构和形态,结合病理组织学特点、中国南方地区生活或旅游史,可以快速诊断局限性马尔尼菲青霉菌感染.

    作者:朱彤 刊期: 2012年第08期

  • 新的HCC血清标志物GP73在HCC中的表达及临床价值研究

    目的 研究新的原发性肝细胞癌(HCC)血清标志物高尔基体蛋白73( GP73)在HCC血清中的表达及临床价值.方法 选取确诊为HCC者40例为HCC组;肝炎患者及肝硬化患者120例为肝病组;健康体检者120例为健康组.用双抗体夹心ELISA法检测三组血清GP73浓度;同时检测甲胎蛋白(AFP)及α-L-岩藻糖苷酶(AFU)作对比研究.结果 HCC组血清中GP73的表达水平为(399.17 ±264.43) ng/ml,显著高于肝病组的(105.12±67.79) ng/ml和健康组的( 66.51 ±46.2) ng/ml,差异均有统计学意义(P<0.05).GP73、AFP、AFU诊断HCC的敏感性分别为89.28%、62.5%和80.7%;特异性分别为87.1%、78.5%和68.7%,GP73敏感性及特异性均高于AFP和AFU.结论 GP73是继AFP、AFU之后另一个新的优秀的诊断HCC血清标志物,具有重要临床价值.

    作者:唐富英;袁明生;刘金秀;李怡新;卢智旺;刘翠玲;陈忠 刊期: 2012年第08期

  • 深圳市某地2011年正常人群手足口病隐性感染调查研究

    目的 了解深圳市某地2011年成人及健康儿童手足口病隐性感染情况,探讨健康人群隐性感染与儿童患手足口病的关系.方法 随机选取该区域幼儿园学生和老师共150人,分为0~、2~、5~岁组各30人,15~、24~、>50岁组各20人.每人采集粪便标本5~8 g,进行肠道病毒通用型、肠道痫毒71型(EV71)、柯萨奇病毒A16型(CA16)核酸检测.结果 共采集150份样本,EV通用型阳性13份(8.67%),其中5岁以下的有11例(84.6%).CA16阳性2份,EV71阳性1份,均属于0~岁组.结论 肠道病毒在人群中隐性感染较为普遍,5岁以内儿童为主要感染人群.健康人群中引起手足口病常见的EV71和CA16阳性肠道病毒隐性感染率低.

    作者:任燕;汪东篱;曾雁玲;李枫;李攀 刊期: 2012年第08期

  • 吲哚-3-甲醇对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖和凋亡的影响

    目的 探讨吲哚-3-甲醇(13C)对人肝癌细胞株SMMC-7721的增殖和凋亡的影响.方法 不同浓度的I3C(100、150、200、250、300、350 μmol/L)处理细胞48 h后,显微镜下观察细胞生长状况;采用WST-1法检测细胞增殖情况,Hoehest33258染色、TUNEL染色检测细胞凋亡情况,Western blot法检测凋亡相关蛋白.结果 I3C能够抑制SMMC-7721细胞增殖,诱导细胞凋亡,处理浓度在250 μmol/L以下时,细胞生长变慢;处理浓度达到300μmol/L时,大量细胞凋亡.I3C浓度高于200 μmol/L时CytC、Cleaved caspase-9和Cleaved caspase-3蛋白表达明显增加,且随着I3C浓度的增加三种蛋白的表达也明显增加.结论 I3C在体外实验条件下可抑制人肝癌细胞株SMMC-7721增殖并诱导其发生凋亡.

    作者:刘远;蒋力云;李文学;朱伟 刊期: 2012年第08期

  • 丹参酮ⅡA预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用研究

    目的 探讨丹参酮ⅡA对大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用.方法 雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、丹参酮ⅡA预处理组,后两组进行冠状动脉左前降支结扎30 min后再灌注120 min.期间全程监测心率和血流动力学指标.实验结束后取心脏做TTC染色及HE染色,观察心肌梗死面积和组织学改变.结果 模型组大鼠心脏功能明显下降并发生心肌梗死提示造模成功.与模型组比较,丹参酮ⅡA组在缺血30 min,再灌注30、60、120 min各时间点,左心室收缩末压、左室内压大上升及下降速率明显增高、心率基本恢复正常.组织学染色显示,与模型组比较,丹参酮ⅡA组心肌梗死区面积降低、心肌细胞变性坏死程度明显减轻.结论 丹参酮ⅡA预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有保护作用.

    作者:吴晓倩;何丽姗 刊期: 2012年第08期

  • 纤溶酶联合治疗进展型脑梗死患者的疗效观察

    目的 观察纤溶酶联合氯吡格雷与拜阿司匹林治疗进展型脑梗死的临床疗效.方法 选取武钢第二职工医院2009年3月至2011年2月确诊的86例进展型脑梗死患者,随机分为治疗组和对照组,治疗组给予氯吡格雷与拜阿司匹林联合纤溶酶治疗,对照组给予氯吡格雷与拜阿司匹林治疗,两组疗程均为14 d,比较两组患者的神经功能缺损程度评分、临床疗效、血液流变学指标以及毒副作用和安全性.结果 两组治疗后神经功能缺损程度评分均改善,但治疗组( 13.98±1.02)明显优于对照组(17.11±0.96),差异有统计学意义(P<0.05);治疗组显效率及总有效率分别为72.50%、92.5%,明显高于对照组的56.52%、81.8%,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后两组患者高切粘度、低切粘度、血浆粘度和纤维蛋白原含量均降低(P<0.05),治疗组明显优于对照组.两组患者间毒副作用和安全性比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 纤溶酶联合氯吡格雷与拜阿司匹林治疗进展型脑梗死近期疗效显著,可以作为临床上治疗进展型脑梗死患者的一种有效方法.

    作者:李子渊;王翔 刊期: 2012年第08期

  • PD方案治疗初治多发性骨髓瘤的疗效分析

    目的 观察硼替佐米联合地塞米松(PD)方案治疗初治多发性骨髓瘤(MM)的疗效和不良反应.方法 2009年9月至2011年12月收集安康市中心医院MM患者16例,均给予PD方案为一线治疗:硼替佐米1.3 mg/m2,静脉注射,第1、4、8、11天;地塞米松20 mg/d,静脉滴注,第1~4,8~11天.每3周为1个周期,所有患者至少接受1个疗程的治疗.采用国际骨髓瘤工作组(IMWG)标准观察疗效和不良反应.结果 患者接受1~6个疗程的治疗后,总有效率为94%,其中完全缓解(CR)9例(56%),非常好的部分缓解(VGPR)1例(6%),部分缓解(PR)3例(19%),轻微反应(MR)2例(13%),疾病稳定(SD)1例(6%).可见初始疗效的中位时间为3(1~5)周.常见的不良反应为胃肠道症状,其中便秘6例(38%),恶心、呕吐3例(19%);其次为血液学改变,血小板减少5例(31%);另外,周围神经病变6例(38%),乏力3例(19%);给予对症处理后均好转.结论 PD方案治疗初治MM患者疗效明确,不良反应较轻且大多可逆,具有较好的耐受性.

    作者:王晓军;朱卫民;田培军 刊期: 2012年第08期

  • 登革热病毒多重荧光PCR检测及基因分型方法的研究

    目的 建立一种登革热病毒双靶基因多重荧光PCR检测方法,用于登革热病毒的实验室诊断和基因分型.方法 选取登革热病毒Ⅰ-Ⅳ型病毒保守区设计型特异性引物探针和通用型引物探针,评估多重荧光PCR检测方法的特异性、重复性和检测限;并对20份阳性样本进行检测.结果 20个登革热阳性核酸标本在通用型检测全部为阳性,特异性型别检测发现登革热病毒Ⅰ型10例、登革热病毒Ⅱ型3例、登革热病毒Ⅲ型3例、登革热病毒Ⅳ型4例;20名正常无症状人群标本提取的核酸和HIV、HCV和HEV通用型和特异性型别检测全部为阴性.梯度检测的变异系数均小于5%.对登革热Ⅰ-Ⅳ型病毒检测低检测限达103 copies/ml.结论 本研究建立的登革热病毒双靶基因多重荧光PCR检测及分型方法具有特异性好、重复性好、快速易操作等优点,可用于登革热病毒的快速检测和基因分型鉴定.

    作者:王佃鹏;朱玉兰;刘胜牙;董瑞玲;甄胜西 刊期: 2012年第08期

  • 肝螺杆菌脂多糖提取及纯化方法的建立

    目的 建立肝螺杆菌脂多糖(LPS)提取与纯化方法.方法 采用脂多糖提取试剂盒提取肝螺杆菌LPS,并用DNase I和RNase酶除去DNA和RNA,纯化LPS.三次测定LPS中糖、蛋白质及核酸的含量,并用SDS-PAGE电泳银染方法分析LPS纯度.结果 肝螺杆菌为形态细小、Giemsa's染色阴性的不规则螺旋型杆菌.纯化的LPS平均产率为0.202%,平均蛋白质含量为0.365 g/L,平均核酸含量为0.413 mg/L,三者结果的稳定性好,批间比较差异无统计学意义(P>0.05).SDS-PAGE电泳结果显示,LPS提取物与标准品比较,主要条带清晰,位置相同.结论 建立了一种有效提取肝螺杆菌LPS的方法,该方法简便可行、提取物纯度高,核酸及蛋白质含量低,值得推广应用.

    作者:林秋雄;张莉滟;单志新;肖定璋;朱杰宁;陈小苹;陈仁 刊期: 2012年第08期

  • 转座子tnpU基因在多重耐药革兰阴性杆菌中的分布情况

    目的 研究转座子tnpU基因和β-内酰胺酶在多重耐药革兰阴性杆菌中的分布情况.方法 用纸片扩散初筛试验、扩散确证试验进行超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)表型检查,头孢西丁三维试验进行AmpC β-内酰胺酶的表型检查,纸片协同试验筛选产金属β-内酰胺酶(MBL)菌株;用多重聚合酶链反应(PCR)技术扩增转座子tnpU基因,并进行DNA测序;用MIC药敏法分析多重耐药革兰阴性杆菌的药物敏感性.结果 转座子tnpU的总检出率为25.5%,在各菌种的检出率分别为大肠埃希菌占6.3%(3株)、肺炎克雷伯菌占8.3%(1株)、鲍曼不动杆菌占33.3%(20株)、铜绿假单胞菌占43.2%(16株);β-内酰胺酶表型检测中,ESBLs的检出率高,转座子tnpU基因阳性的菌株大多数β-内酰胺酶表型为阳性;转座子tnpU基因阳性菌株对抗生素的耐药率显著高于转座子阴性菌株(P<0.05).结论 转座子tnpU基因在非发酵菌中的分布较广泛,可能在多重耐药机制中起重要作用.

    作者:卢慧敏;余琳;徐韫健;李宁;张丽梅 刊期: 2012年第08期

  • 高通量筛选肿瘤转移相关基因的研究

    目的 利用高通量双萤光素酶报告基因系统筛选与肿瘤转移相关的人类功能基因.方法 利用与肿瘤转移相关的重要因子——血管内皮生长因子(VEGF),将含有VEGF反应序列的萤光素酶报告基因(VEGF-LUC)质粒与409个待筛人类功能基因真核表达质粒共转染Hela细胞以筛选影响VEGF-LUC表达的人类功能基因,进一步通过Western blot在蛋白质水平验证初筛阳性的基因对细胞内VEGF蛋白表达量的影响.结果 染色质重塑蛋白4A (CHMP4A)明显增强VEGF-LUC相对萤光素酶值(P<0.05),Western blot结果表明CHMP4A明显增强Hela细胞内VEGF的表达.结论 初步筛选到一个可能通过影响VEGF活性增强肿瘤侵袭性的基因CHMP4A.

    作者:董云巧;陈创奇;史哲;黄翠玉 刊期: 2012年第08期

  • 孕妇应用硫酸镁对早产儿生长及预后的合理性评价

    目的 调查在孕妇应用硫酸镁和早产儿发生大脑性瘫痪及死亡等的关联,评价产前应用硫酸镁对早产儿的安全性及可行性.方法 检索有关产前使用硫酸镁与早产儿发生大脑性瘫痪及死亡的病例对照研究文献进行Meta分析.结果 符合研究纳入标准的文献9篇,共3 800个研究例数,其中有5项研究是对孕妇应用硫酸镁有无导致早产儿发生死亡进行病例对照分析,4项研究对孕妇应用硫酸镁有无导致早产儿发生大脑性瘫痪进行病例对照分析.通过Meta分析,发现产前使用硫酸镁可以降低早产儿发生死亡的概率(OR:0.75; 95%Cl:0.59-0.95),而与早产儿发生大脑性瘫痪则无相关(OR:0.79; 95%CI:0.60-1.04).结论 研究提示产前应用硫酸镁对早产儿发生死亡的几率有降低作用.

    作者:张蕴芳;汪丽萍;陈光福;王波;王雪飞;王艳 刊期: 2012年第08期

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主管:广东省科学技术协会

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