学术投稿

FSHR部分基因的真核表达质粒构建和生物信息学分析

朱秀兰;马文丽;德伟;彭翼飞;阴常欣;郑文岭

关键词:FSHR, 疫苗, 真核表达, 生物信息学
摘要:目的 克隆FSHR基因部分片段(145~330 bp)(FSHRn),构建真核表达重组质粒,预测其编码蛋白作为候选避孕疫苗的可行性.方法 提取小鼠睾丸组织的总RNA,利用RT-PCR技术反转录成cDNA,按照GenBank中小鼠FSHR N-端序列设计引物,扩增基因片段并插入pcDNA3.1/myc-His(-)B载体,重组质粒经PCR、双酶切和测序鉴定后用Vector NT19.0软件作生物信息学分析.结果 扩增片段长度为186 bp,测序结果 与已知序列吻合,重组真核表达质粒经PCR和双酶切鉴定获得正确重组子.生物信息学分析其编码蛋白抗原性肽段主要集中在15~20aa、22~27aa、32~36aa、42~48aa、58~67aa,与人的基因同源性为90%.结论 成功克隆了FSHRn基因片段并构建了pcDNA3.1/FHSRn真核表达重组质粒;FSHRn具有良好的抗原性,FSHRn蛋白可作为良好的动物候选疫苗,为此段蛋白的深入研究和人类男性避孕疫苗的研制打下基础.
热带医学杂志相关文献
  • ICU中MRSA耐药基因检测及其PFGE分型

    目的 对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)菌株进行分子分型,探讨ICU中MRSA医院感染的特点和流行规律.方法 采用表型筛选和PCR扩增mecA基因方法 鉴定MRSA菌株,脉冲场凝胶电泳方法 (PFGE)进行分子分型.结果 12株金黄色葡萄球菌表型筛选为MRSA,MRSA产生A型、B型、C型和D型4种耐药表型,优势耐药模式是A型(75.0%),MRSA对苯唑西林、阿莫西林/克拉维酸和氨苄西林/舒巴坦等10种抗生素产生100%耐药性,11株MRSA携带mecA基因,携带率为91.7%,PFGE指纹图谱分两型,分别为R1型和R2型,11株MRSA为R1型(91.7%),R1型各株间相似度为100%.结论 ICU可存在MRSA爆发流行,MRSA产生多重耐药性(MDR),MRSA携带mecA基因可表现为MDR,PFGE分型是理想的分子流行病学溯源手段.

    作者:庞杏林;李孝权;张颖;张欣强;胡玉山;邓志爱;陈守义;莫自耀 刊期: 2009年第03期

  • 高职高专医学检验专业分子生物学检验技术的教学探讨

    为了高职高专医学检验专业学生在将来的临床检验诊断中与时俱进,本文从优化教学内容、改革课堂教学方法 、更新教学手段、加强实验教学等方面,对高职高专分子生物学检验技术的教学提出了若干思考.

    作者:蒋传命;黄泽智;杨秦;陈江 刊期: 2009年第03期

  • 人源脂肪细胞SH2B1β基因的克隆表达

    目的 获取人源脂肪细胞SH2B1β基因序列,构建SH2B1β-pET28a(+)重组表达质粒,在大肠杆菌中对其进行表达.方法 利用RT-PCR方法 从人源分化成熟的脂肪细胞RNA中扩增出SH2B1β的cDNA片段,并插入pET28a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3),通过IPTG诱导表达带6xHis标签的融合蛋白.结果 PCR和酶切电泳鉴定结果 显示SH2B1β基因克隆人载体中,测序结果 证实克隆的基因序列与GenBank中的人源SH2B1β序列相符,SDS-PAGE电泳结果 表明获得相对分子质量约75 000的目的蛋白.结论 成功获取了人源脂肪细胞的SH2B1β基因,并在BL21(DE3)中高效表达目的蛋白,为下一步表达纯化SH2B1β重组蛋白及蛋白的初步功能研究奠定基础.

    作者:邱国真;陈白虹;曲戎梅;付琛颖;董文其;魏威;王文敬;王萍 刊期: 2009年第03期

  • 来源于胚胎干细胞的嵌合体小鼠自发性肿瘤观察

    目的 观察胚胎干细胞(ES细胞)囊胚腔注射的方法 构建嵌合体小鼠自发性肿瘤.方法 连续80周每周观察嵌合体小鼠的肿瘤发生情况,选取同龄相关品系小鼠各10只作为对照组.处死发生肿瘤的小鼠并且病理学检查,提取肿瘤组织的基因组DNA.用PCR方法 检测性别决定区(SRY)基因判断肿瘤的品系来源.结果 13只嵌合体小鼠中有3只(全为雌性)发生自发性肿瘤,分别为腺癌、皮下恶性畸胎瘤、淋巴瘤.肿瘤细胞来源于注射的ES细胞而非受体囊胚.对照组野生型小鼠未见肿瘤发生.结论 ES细胞囊胚腔注射的方法 构建嵌合体小鼠具有较高的自发肿瘤发生率,可作为自发性肿瘤动物模型.

    作者:马芸;黄冰;邓新燕;陈系古 刊期: 2009年第03期

  • 降钙素原对新生儿败血症早期诊断价值的系统评价

    目的 系统评价降钙素原(PCT)对新生儿败血症早期诊断价值.方法 用计算机检索CNKI、VIP等数据库.按两个纳入标准分别纳入有关PCT诊断新生儿败血症的研究,采用QUADAS工具进行质量评价,利用Metadise1.4计算各个研究的合并DOR.进行异质性分析,并计算敏感度、特异度、阳性似然比和阴性似然比,进行合并受试者诊断特征曲线(SROC)分析,获得SROC曲线下面积(AUC).用Review Manager5软件进行其它诊断试验评价指标的Meta分析.结果 按照标准一,纳入8个研究;按照标准二,纳入7个研究.8个研究间不存在异质性(X2=3.28,P=0.858,I2=0.0%).8个研究合并敏感度为0.914,合并特异度为0.935,AUC为0.9783;7项研究间不存在异质性(X2=3.24,P=0.779,12=0.0%),合并敏感度为0.876,合并特异度为0.943,AUC为0.9578.结论 从目前的研究看,PCT对新生儿败血症早期诊断有很高的价值,是很好的辅助诊断指标.

    作者:王凤平;刘飞;王前;裘宇容;芮勇宇 刊期: 2009年第03期

  • 广州市2004-2007年肾综合征出血热监测

    目的 分析广州市2004-2007年肾综合征出血热(HFRS)的流行特点和趋势.为制定防治策略提供依据.方法 收集广州地区疫情资料,描述其流行病学特征.HFRS抗体与抗原检测采用免疫荧光分析.结果 广州市2004-2007年共检出HFRS患者337例,年发病率0.59/10万~0.92/10万(平均0.73/10万),病死率0.89%.病例多为青壮年男性民工及商业服务者,主要分布于海珠和天河等地,发病高峰主要在春秋季.鼠间疫情监测显示鼠密度为10.3%,总带毒率为3.6%(160/4457),优势鼠为褐家鼠,带毒率为4.8%(132/2756).结论 广州HFRS疫情有上升趋势,应加大疫情监测力度,认真做好防鼠灭鼠及重点人群的疫苗接种工作.

    作者:刘远;蒋力云;鲁恩洁;董智强;狄飚;吴新伟;杨智聪;王鸣 刊期: 2009年第03期

  • 副粘病毒Tianjin株RT-PCR检测方法的建立及初步应用

    目的 建立检测副粘病毒Tianjin株的RT-PCR方法 ,为临床标本的检测提供参考依据.方法 根据副粘病毒Tianjin株F蛋白的基因序列,设计出一对特异性引物,以Tianjin株总RNA逆转录的cDNA为模板进行PCR扩增,然后对该方法 的敏感性、特异性进行检测.并将该方法 应用于临床84例下呼吸道感染患儿支气管肺泡灌洗液(BALF)标本的检测.结果 通过此方法 成功扩增出约500 bp的预期条带.将Tianjin株鸡胚尿囊液(血凝效价为1:1280)稀释到320倍时仍可出现阳性条带,对新城疫病毒、甲型流感病毒鼠肺适应株、人副流感病毒Ⅰ型、柯萨奇病毒B3m株、单纯疱疹病毒Ⅰ型及鸡胚尿囊液的PER检测结果 均呈阴性.84例下呼吸道感染患儿BALF标本中,其中2例阳性,阳性率为2.38%,与本实验室建立的双抗体夹心ELISA法检测结果 相接近.结论 建立的副粘病毒Tianjin株RT-PCR检测方法 是一种快速、灵敏、特异的方法 ,为患病儿童中Tianjin株感染情况的调查奠定了重要的基础.

    作者:石立莹;李梅;何健民;李晓眠 刊期: 2009年第03期

  • 细粒棘球绦虫重组质粒pGEX-Eg95的构建及其在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达

    目的 构建细粒棘球绦虫重组质粒pGEX-Eg95,并研究该质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达.方法 超声粉碎细粒棘球蚴组织提取总RNA,通过RT-PCR扩增Eg95抗原编码基因;克隆至原核表达载体pGEX-1λT,构建重组质粒pGEX-Eg95;转化大肠杆菌B121,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达后用SDS-PAGE和Western blotting对表达产物进行分析和鉴定.结果 RT-PCR扩增出471 bp的Eg95抗原编码基因;双酶切证实Eg95抗原编码基因成功插入pGEX-1λT中;SDS-PAGE分析显示表达产物为相对分子质量约42 500的重组蛋白,与预期结果 一致,表达的蛋白约占菌体总蛋白的21%;Western blot鉴定显示重组蛋白能被细粒棘球蚴感染鼠血清识别.结论 成功构建了细粒棘球绦虫重组质粒pGEX-Eg95,该质粒在大肠杆菌B1221中获得了高效融合表达,表达的融合蛋白具有特异的抗原性.

    作者:周必英;陈雅棠;李文桂;杨梅 刊期: 2009年第03期

  • 广州市社区美沙酮维持治疗效果评估

    目的 评估广州市社区美沙酮维持治疗工作效果.方法 对接受美沙酮维持治疗满6个月的患者进行问卷调查,分析并比较其在接受治疗前后的吸毒、性行为、违法活动及社会家庭功能等变化情况.结果 接受6个月的治疗后,近1个月使用毒品率从100%下降至13.8%(X2=98.378,P<0.01);注射吸毒率由95.4%下降至12.3%(X2=90.257,P<0.01);过去3个月被公安机关逮捕的比例从12.3%下降到3.1%(X2=3.973,P<0.05);获得工作情况方面有所改善(X2=7.900,P<0.01).结论 社区美沙酮维持治疗可以减少受治者毒品的使用、减少与吸毒有关的高危行为、减少与吸毒有关的违法犯罪、有效恢复受治者家庭及社会功能.

    作者:赵宇腾;徐慧芳;樊莉蕊 刊期: 2009年第03期

  • 治疗方式对哮喘儿童治疗依从性的影响

    目的 调查影响儿童哮喘治疗依从性的相关因素,为更好地防治儿童哮喘提供依据.方法 对本院2006年4月至2007年10月共收治的118例哮喘儿童.根据是否按全球哮喘防治创议方案系统规范用药情况分为依从性良好(41例)、依从性中等(46例)以及依从性差(31例)三组,采取问卷的方法 ,对118例哮喘儿童的缓解期治疗方案及主要监护人进行调查和咨询.结果 患儿居住环境、主要监护人对哮喘知识的了解、治疗信心、药物安全性认识、学历、制定哮喘治疗书面计划、专人监督用药、定期复诊咨询等与哮喘患儿治疗的依从性具有关联性;在校正了上述影响哮喘患儿治疗依从性的因素后,发现口服顺尔宁治疗患儿的依从性明显好于普米克气雾剂治疗的哮喘患儿的依从性,后者放弃治疗的发生风险是前者的1.39倍.结论 影响哮喘儿童治疗依从性的因素是多种的,在其中药物的治疗方式上,口服白三烯受体拮抗剂较吸入糖皮质激素的依从性更好.

    作者:方文;郭小芳;叶鑫 刊期: 2009年第03期

  • 青蒿素抗肿瘤作用的研究进展

    青蒿素是一种高效、低毒的抗疟药物.近年来的研究表明,青蒿素对多种肿瘤细胞均有抑制作用,且对正常组织细胞的毒性很低.进一步的研究揭示了其作用机制,发现青蒿素通过多种途径抑制癌细胞的生长、增殖与转移,终诱导其凋亡.本文就近年来有关青蒿素抗肿瘤机制的研究进展作一综述.

    作者:李燕飞;朱卫平 刊期: 2009年第03期

  • 辣椒素受体拮抗剂治疗避水应激引起内脏痛觉过敏作用

    目的 研究避水应激引起内脏痛觉敏感性的变化及特异性辣椒素受体(VR1)拮抗剂辣椒平与非特异性VR1拮抗剂钌红对避水应激引起内脏痛觉过敏的治疗作用.方法 将6周龄雄性Wistar大鼠54只分为无应激对照组(Neg组,n=18)、生理盐水对照组(NS组,n=12)、辣椒平治疗组(CZP组,n=12)、钌红治疗组(RR组,n=12),Neg组又分为三个小组,分别为直肠内注入生理盐水组、直肠内注入辣椒素组、直肠扩张组,NS组、CZP组和RR组只分为直肠内注入辣椒素组和直肠扩张组两小组,每小组均为6只动物.给予避水应激.每天1 h连续10 d.第11天Neg组与NS组腹腔注射溶媒,CZP组腹腔注射辣椒平,RR组腹腔注射钌红,30 min后每小组6只动物直肠内注入生理盐水或辣椒素,进行疼痛评分,或给予结直肠扩张(CRD)刺激,进行腹直肌肌电记录.结果 避水应激引起动物对直肠注射辣椒素敏感性增加,腹腔注射辣椒平与钌红均能抑制注射辣椒索引起的疼痛反应;避水应激也引起动物CRD刺激后腹直肌肌电活动增加,腹腔注射辣椒乎与钉红均能降低肌电活动的增加幅度,而钌红则完全抑制肌电活动的增加.结论 辣椒素受体拮抗剂可抑制避水应激引起的内脏痛觉过敏,辣椒素受体参与内脏痛觉过敏的发生过程.

    作者:季文进;梁杰贤;赵国栋;洪迅;李真;李红英 刊期: 2009年第03期

  • CYFRA21-1在原发性肝癌诊断中的应用

    目的 探讨血清肿瘤标志物CYFRA21-1检测原发性肝癌(primary hepatic cancer,PHC)的诊断价值.方法 2003年7月至2007年12月收治的330例肝病患者,其中组织病理学诊断为原发性肝癌者192例,非原发性肝癌者138例.采用电化学发光免疫分析法对330例肝病患者的血清CYFRA21-1水平进行检测.结果 血清CYFRA21-1水平PHC组为(9.73±1.02)ng/mL,非PHC患者为(1.33±0.26)ng/mL,两组间差异具有统计学意义(P<0.01),不同组织学分型的PHC患者血清CYFRA21-1水平之间的差异也具有统计学意义(P<0.01).结论 检测血清中CYFRA21-1水平对HPC的诊断有一定的指导意义.

    作者:王荷玲;魏青;周颖 刊期: 2009年第03期

  • 以社区获得性肺炎为表现的肺结核的临床特点

    目的 分析肺结核以社区获得性肺炎为主要表现的特点,提高不典型肺结核诊断水平.方法 对本院2000年1月至2006年6月收治的39例首诊为社区获得性肺炎后诊断为肺结核病例的主要临床参数归纳整理并进行统计分析.结果 高热79.49%(31/39),中度发热7.69%(3/39),低热7.69%(3/39),体温正常5.13%(2/39),发热者以午后和夜间为主者71.79%(28/39),不规则发热23.08%(9/39);痰涂阳性10例,阴性29例;胸片:尖后段12例(30.77%),前段5例(12.82%),中叶或舌叶2例(5.13%),下叶背段15例(38.46%),基底段8例(20.51%).斑片影19例(48.72%),多形态影12例(30.77%),团块影8例(20.51%),其中空洞2例(5.13%).β内酰胺联合阿奇霉素改善4例、无改善2例、加重18例;影像加重83.3%(20/24)、改进8.33%(2/24).氟喹诺酮类改善12例、加重2例;影像无变化57.89%(11/19)、加重42.11%(8/19).抗结核1周体温正常21例,2周体温正常18例.1周复查胸片吸收8例、2周后吸收25例,抗结核1~2个月吸收6例,其中胸膜增厚2例.结论 以肺炎为表现的不典型肺结核诊断困难,午后或夜间发热,结核好发部位,抗感染效果不佳需要警惕肺结核诊断.影像学尤其螺旋CT检查有利于结核的早期诊断.可疑结核慎用氟喹诺酮,可用α内酰胺和大环内酯类诊断性治疗.

    作者:吴本权;唐先锋;刘慧;黄静;张文先;周宇麒;张天托 刊期: 2009年第03期

  • 人参皂苷Rg1对吗啡依赖海马神经元胞内游离钙离子浓度的影响

    目的 探讨人参皂苷Rg1对吗啡依赖海马神经元胞内游离钙离子浓度(intracellular free Ca2+ concentration,[Ca2+]i)的影响.方法 采用荧光钙离子指示剂Fluo-3/AM,利用激光扫描共聚焦显微镜观察低剂量(1 μmol/L)、中剂量(10 μmol/L)、高剂量(100 μmol/L)人参皂苷Rg1处理吗啡依赖原代培养大鼠海马神经元后[Ca2+]i的改变.结果 低、中、高剂量人参皂苷Rg1单独处理海马神经元前后并没有引起胞内[Ca2+];的显著改变(P>0.05),而吗啡依赖海马神经元胞内[Ca2+];较正常海马神经元细胞明显增高(P<0.01).此外,低、中、高剂量人参皂苷Rg1处理吗啡依赖海马神经元细胞后,均能显著抑制胞内[Ca2+];的升高(P<0.01),并呈剂量依赖性,Rg1剂量越大,抑制作用越明显(P<0.01).结论 人参皂苷Rg1可以抑制吗啡依赖海马神经元细胞内[Ca2+];的增高,对吗啡的成瘾性具有明显的拈抗作用,为合理安全有效地应用人参戒毒提供了实验依据.

    作者:揭荣荣;文磊;余林中 刊期: 2009年第03期

  • 高血压病患者尿蛋白早期肾损害指标联合检测结果分析

    作者:池晓霞;陈剑雄;屠洪 刊期: 2009年第03期

  • 深圳市4例人感染猪链球菌病例流行病学分析

    目的 掌握人感染猪链球菌病疫情的流行病学特点,为制定预防控制措施提供科学依据.方法 开展流行病学调查,采集脑脊液标本,用血平板进行细菌培养、分离,PCR鉴定.结果 病例发病时间集中在夏季,均为男性,手部均有外伤且有生猪肉接触史.脑脊液中分离的细菌经生化和PCR检测结果 为猪链球菌Ⅱ型.病例经治疗均脱离了危险.结论 4例病例均为散发疫情,相互间无流行病学联系.传播途径为接触被猪链球菌污染的生猪肉经破损皮肤而传染.应加强健康知识教育,提高肉食品加工人员的自我保护能力,同时要提高医务人员的诊治水平.

    作者:孔东锋;张小岚;梅树江 刊期: 2009年第03期

  • 餐后高血糖与心血管危险因素的相关性

    目的 探讨餐后高血糖与心血管危险因素如血脂、血压、肥胖之间的相关性.方法 对柳州市713名干部测量身高、体质量、腰围(WC)、血压,计算体质量指数(BMI),同时检测空服血糖(FBG)、餐后2 h血糖(2 h PBG)、血总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆同醇(LDL-C)等指标,根据1999年WHO糖尿病诊断标准,将受检者分为三组:正常糖耐量(NGT)、糖耐量低减(IGT)、糖尿病(DM),并进行统计学分析.结果 ①由NGT→IGT→DM,年龄、BMI、WC、SBP、DBP、TG的水平逐渐升高,且IGT和DM组均较NGT组显著升高(P<0.01),HDL-C水平显著降低(P<0.01).②随着餐后血糖水平的增高,超重/肥胖、中心肥胖、血脂异常及高血压的检出率逐渐增高(P<0.001).③2 h PBG与年龄、BMI、WC、SBP、DBP、TG呈显著正相关(P<0.001),与HDL-C呈显著负相关(P<0.001),经偏相关分析,在控制其它影响因素后,2 h PBG仍与WC、年龄、TG、DBP呈显著正相关(P<0.001).结论 餐后高血糖与中心肥胖、高TG、高血压独立相关,常聚集了较多的心血管危险因素,预示着心血管疾病风险性增加,应尽早采取干预措施,预防心血管疾病的发生.

    作者:周英;贺平;韦汐;余佩玲;苏江 刊期: 2009年第03期

  • 白藜芦醇对星形胶质细胞ATP释放的影响

    目的 研究白藜芦醇对体外培养的星形胶质细胞牵拉损伤后三磷酸腺苷(ATP)释放的影响,探索其对中枢神经保护作用的可能机制.方法 采用不同剂量的白藜芦醇与星形胶质细胞共同培养12 h后,进行牵拉损伤,检测不同实验组星形胶质细胞内、外ATP含量,并进行乳酸脱氢酶(LDH)漏出量的测定.结果 牵拉损伤使星形胶质细胞分泌ATP明显增加,相反细胞内ATP含量明显下降(P<0.05);1 μmol白藜芦醇能够使星形胶质细胞损伤后ATP分泌进一步增加(P<0.05);而100 μmol白藜芦醇能减少损伤后ATP分泌(P<0.05).对细胞进行LDH漏出量的检测发现,牵拉损伤能够使星形胶质细胞的LDH漏出量增加(P<0.05),1 μmol白藜芦醇进一步加剧了LDH漏出(P<0.05),100 μmol白藜芦醇能够有效减少星形胶质细胞的LDH漏出(P<0.05).结论 星形胶质细胞受到牵拉损伤后,100 μmol白藜芦醇能够减少其ATP释放,且能够减少LDH漏出,进而对星形胶质细胞起到保护作用.

    作者:周浩;陈清;孔丹莉;郭江;王茜;俞守义 刊期: 2009年第03期

  • 化学发光法与酶联免疫吸附分析法联合测定癌胚抗原的应用

    目的 通过酶联免疫吸附分析法(ELISA)与磁粒子捕获免疫发光法(ICA)联合测定血癌胚抗原(CEA)进行分析和探讨.方法 预先用ELISA对检测CEA的血清标品进行分组,然后根据浓度级别分组冉检测血清CEA的浓度.结果 ELISA和ICA联合检测血CEA,可大大节约非常昂贵的ICA试剂,又能快速发出检验报告.结论 该方法 无论是医院或者病患者都带来了非常可观的经济效益.

    作者:郑定容;周伟;杨文娜 刊期: 2009年第03期

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主管:广东省科学技术协会

主办:广东省寄生虫学会 中华预防医学会