学术投稿

细粒棘球绦虫重组质粒pGEX-Eg95的构建及其在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达

周必英;陈雅棠;李文桂;杨梅

关键词:细粒棘球绦虫, 重组质粒pGEX-Eg95, 大肠杆菌
摘要:目的 构建细粒棘球绦虫重组质粒pGEX-Eg95,并研究该质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达.方法 超声粉碎细粒棘球蚴组织提取总RNA,通过RT-PCR扩增Eg95抗原编码基因;克隆至原核表达载体pGEX-1λT,构建重组质粒pGEX-Eg95;转化大肠杆菌B121,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达后用SDS-PAGE和Western blotting对表达产物进行分析和鉴定.结果 RT-PCR扩增出471 bp的Eg95抗原编码基因;双酶切证实Eg95抗原编码基因成功插入pGEX-1λT中;SDS-PAGE分析显示表达产物为相对分子质量约42 500的重组蛋白,与预期结果 一致,表达的蛋白约占菌体总蛋白的21%;Western blot鉴定显示重组蛋白能被细粒棘球蚴感染鼠血清识别.结论 成功构建了细粒棘球绦虫重组质粒pGEX-Eg95,该质粒在大肠杆菌B1221中获得了高效融合表达,表达的融合蛋白具有特异的抗原性.
热带医学杂志相关文献
  • 心绞痛患者血浆C反应蛋白及巨噬细胞移动抑制因子的变化

    目的 通过检测稳定型及不稳定型心绞痛患者血浆高敏C反应蛋白(hsCRP)及巨噬细胞移动抑制因子(MIF),了解hsCRP及MIF在其中的变化.方法 61例稳定型心绞痛患者、69例不稳定型心绞痛患者和55例健康志愿者,以ELISA法检测分析其血浆中高敏C反应蛋白及巨噬细胞移动抑制因子的变化.结果 不稳定型心绞痛组患者血浆hsCRP水平(12.93±3.67)mg/L及MIF水平(23.60±6.31)μg/L高于稳定型心绞痛患者[hsCRP(4.37±1.28)mg/L,MIF(9.89±1.04)μg/L]及对照组[hsCRP(3.51±1.47)mg/L,MIF(9.58±1.25)μg/L],差异有统计学意义(P均<0.05);而稳定型心绞痛患者及对照组hsCRP及MIF水平比较差异则无统计学意义(P>0.05).结论 不稳定型心绞痛患者其hsCRP及MIF水平较健康对照组及稳定型心绞痛患者均有明显升高,对hsCRP及MIF检测可能有助于鉴别高危冠心病患者.

    作者:徐向明;何坚;贺军 刊期: 2009年第03期

  • 妇幼医院无乳链球菌临床分布情况及药敏结果分析

    目的 了解妇幼医院无乳链球菌(GBS)感染的临床分布和药敏情况,为临床感染的预防及治疗提供依据.方法 收集妇幼医院临床患者各类临床标本作无乳链球菌培养,经法国生物梅里埃VITEK-2全自动细菌鉴定分析仪进行鉴定和药敏分析的菌株171株.结果 171株无乳链球菌株中血培养和泌尿生殖道分泌物标本中分离率高,其次为脐带分泌物,临床分布以新生儿病区高,其次为产科病区.药敏结果 显示171株无乳链球菌对青霉素、氨苄青霉素敏感或中度敏感,对万古霉素、头孢菌素类抗生素均敏感,对四环素、克林霉素和红霉素的耐药率分别为100%、70.8%和55.6%.结论 为防止无乳链球菌感染和新耐药菌株的出现,临床应重视对无乳链球菌的培养检测,并根据药敏结果 选择抗生素进行预防和治疗.

    作者:段纯;李素丽;王宏;胡运月;朱岩;龙峰 刊期: 2009年第03期

  • 副粘病毒Tianjin株RT-PCR检测方法的建立及初步应用

    目的 建立检测副粘病毒Tianjin株的RT-PCR方法 ,为临床标本的检测提供参考依据.方法 根据副粘病毒Tianjin株F蛋白的基因序列,设计出一对特异性引物,以Tianjin株总RNA逆转录的cDNA为模板进行PCR扩增,然后对该方法 的敏感性、特异性进行检测.并将该方法 应用于临床84例下呼吸道感染患儿支气管肺泡灌洗液(BALF)标本的检测.结果 通过此方法 成功扩增出约500 bp的预期条带.将Tianjin株鸡胚尿囊液(血凝效价为1:1280)稀释到320倍时仍可出现阳性条带,对新城疫病毒、甲型流感病毒鼠肺适应株、人副流感病毒Ⅰ型、柯萨奇病毒B3m株、单纯疱疹病毒Ⅰ型及鸡胚尿囊液的PER检测结果 均呈阴性.84例下呼吸道感染患儿BALF标本中,其中2例阳性,阳性率为2.38%,与本实验室建立的双抗体夹心ELISA法检测结果 相接近.结论 建立的副粘病毒Tianjin株RT-PCR检测方法 是一种快速、灵敏、特异的方法 ,为患病儿童中Tianjin株感染情况的调查奠定了重要的基础.

    作者:石立莹;李梅;何健民;李晓眠 刊期: 2009年第03期

  • 化学发光法与酶联免疫吸附分析法联合测定癌胚抗原的应用

    目的 通过酶联免疫吸附分析法(ELISA)与磁粒子捕获免疫发光法(ICA)联合测定血癌胚抗原(CEA)进行分析和探讨.方法 预先用ELISA对检测CEA的血清标品进行分组,然后根据浓度级别分组冉检测血清CEA的浓度.结果 ELISA和ICA联合检测血CEA,可大大节约非常昂贵的ICA试剂,又能快速发出检验报告.结论 该方法 无论是医院或者病患者都带来了非常可观的经济效益.

    作者:郑定容;周伟;杨文娜 刊期: 2009年第03期

  • 登革减毒疫苗研究新进展及面临的问题

    由于近年来登革病毒在全球范围的迅速扩散,登革疫苗的研制成为一个严峻的国际性问题.减毒疫苗是目前有希望研制成功的,其中传统减毒活疫苗已进入二期临床试验,新型减毒疫苗也显示了自己的优势,但仍面临许多挑战.本文就登革减毒疫苗研究的进展及面临的问题作一综述.

    作者:史潇;郑学礼 刊期: 2009年第03期

  • 1021例体外受精-胚胎移植妊娠结局

    目的 探讨辅助生殖技术(assisted reproductive technology,ART)后的妊娠结局.方法 对1 021例通过ART获得的临床妊娠者,通过直接询问或电话随访对其妊娠结局进行回顾性分析.结果 1 021例妊娠者中,分娩838例(82.08%),单胎642例(76.61%),多胎196例(23.39%),流产132例(12.93%),异位妊娠41例(4.02%),分娩情况失随访10例(0.98%),畸形儿10例(1.19%),分娩男婴540个、女婴495个,新鲜胚胎移植后早期流产率为10.76%,明显高于冻融胚胎移植(FET)后的5.08%(P<0.01),多胎的早产率、剖宫产率、低体重儿发生率均明显高于单胎(P<0.01).结论 重视ART技术带来的多胎、早产、流产及异位妊娠等并发症.密切关注ART后代的出生缺陷.

    作者:易艳红;黄睿;吴敬之;黄翠玉;王艳芳 刊期: 2009年第03期

  • 高血压病患者尿蛋白早期肾损害指标联合检测结果分析

    作者:池晓霞;陈剑雄;屠洪 刊期: 2009年第03期

  • 湖北省2008年血吸虫病疫情控制考核评估

    目的 考核评估湖北省预防控制血吸虫病中长期规划防治目标和效果.方法 分析湖北省2007、2008年血吸虫病疫情控制资料;查阅和审核15个县(市、区)(以下简称县)2004-2008年血吸虫病防治资料;每县随机抽取3个流行村,现场调查人、畜血吸虫病感染情况,资料整理和归档情况,考核和评估血吸虫病疫情现状.结果 防治资料表明全省5 408个流行村人群、家畜感染率均降至5%以下.15个县、45个抽样村2004-2007年资料均为合格;2008年资料整理系统、规范,得分均>70分,建立了以村为单位的反映疫情变化的档案资料.现场考核的15个县3 279个流行村的人畜感染率均降至5%以下,其中人群感染率≥1%的村2 544个(占77.58%),<1%的村578个(占17.63%),为0的157个(占4.79%),人群平均感染率高的是公安县(3.72%),家畜(耕牛)感染率高的是沙市区(3.51%).现场调查45个流行村,人畜感染率均在5%以下,其中人群感染率高的3个村分别为公安县积玉村(2.98%)、嘉鱼县复阳村(2.50%)、潜江市进步村(2.46%).耕牛感染率高的3个村分别为江陵县花彭村(3.51%)、监利县烟灯村(2.97%)、汉川市丁岗村(2.63%).结论 湖北省所有的流行村人群、家畜感染率均降至5%以下,两年没有发生血吸虫病突发疫情,建立了以行政村为单位反映病情、螺情变化的档案资料,符合<血吸虫病控制和消灭标准>(GB15976-2006)中血吸虫病疫情控制标准的有关指标,全省达到了国家血吸虫病疫情控制标准.

    作者:涂祖武;戴裕海;黄希宝;刘建兵;刘汉成;朱惠国;朱红;肖瑛;蔡顺祥;龚新国;徐兴建 刊期: 2009年第03期

  • 以社区获得性肺炎为表现的肺结核的临床特点

    目的 分析肺结核以社区获得性肺炎为主要表现的特点,提高不典型肺结核诊断水平.方法 对本院2000年1月至2006年6月收治的39例首诊为社区获得性肺炎后诊断为肺结核病例的主要临床参数归纳整理并进行统计分析.结果 高热79.49%(31/39),中度发热7.69%(3/39),低热7.69%(3/39),体温正常5.13%(2/39),发热者以午后和夜间为主者71.79%(28/39),不规则发热23.08%(9/39);痰涂阳性10例,阴性29例;胸片:尖后段12例(30.77%),前段5例(12.82%),中叶或舌叶2例(5.13%),下叶背段15例(38.46%),基底段8例(20.51%).斑片影19例(48.72%),多形态影12例(30.77%),团块影8例(20.51%),其中空洞2例(5.13%).β内酰胺联合阿奇霉素改善4例、无改善2例、加重18例;影像加重83.3%(20/24)、改进8.33%(2/24).氟喹诺酮类改善12例、加重2例;影像无变化57.89%(11/19)、加重42.11%(8/19).抗结核1周体温正常21例,2周体温正常18例.1周复查胸片吸收8例、2周后吸收25例,抗结核1~2个月吸收6例,其中胸膜增厚2例.结论 以肺炎为表现的不典型肺结核诊断困难,午后或夜间发热,结核好发部位,抗感染效果不佳需要警惕肺结核诊断.影像学尤其螺旋CT检查有利于结核的早期诊断.可疑结核慎用氟喹诺酮,可用α内酰胺和大环内酯类诊断性治疗.

    作者:吴本权;唐先锋;刘慧;黄静;张文先;周宇麒;张天托 刊期: 2009年第03期

  • 冠心病与肿瘤坏死因子水平及肿瘤坏死因子βG252A基因多态性的相关性初步研究

    目的 研究肿瘤坏死因子水平及肿瘤坏死因子-β G252A(TNF-β)基因多态性与冠心病的关系.方法 用ELISA测定63例冠心病患者及103例健康对照者血清TNF水平.用聚合酶链反应扩增TNF-β第一内含子含有1 069位核苷酸A→G多态位点的基因片段,Neo I内切酶进行限制性酶切反应.结果 63例冠心病患者和103例正常对照TNF-β基因型及等位基因频率差异均无统计学意义,而血浆中TNF水平,冠心病组明显高于对照组,两组之间比较差异有统计学意义(P<0.001).结论 血清TNF水平显著升高提示炎性反应在冠心病病程中起重要作用.TNF-β G252A基因多态性与冠心病无关联.

    作者:钟欢妹;黎耀晃;江炳章;李红民;林成绍;柳息洪 刊期: 2009年第03期

  • INHA基因的克隆表达以及多克隆抗体的制备

    目的 INHA的表达、纯化,以及多克隆抗体的制备.方法 利用基因重组技术获得INHA基因以及去信号肽的INHA基因,将其都分别构建到原核表达系统并分离纯化得到相对分子质量为58 000的带有组氨酸标签的重组INHA融合蛋白.用分离纯化后的INHA融合蛋白作为抗原免疫,获得抗INHA的多克隆抗体.结果 成功地获得INHA基因,并且以包涵体的形式表达于大肠杆菌中,用间接酶联免疫吸附(ELISA)方法 ,Western blot检测结果 显示,该抗体能特异性地与INHA的抗原以及胎盘组织产生明显免疫亲和反应.结论 建立原核高效稳定INHA表达系统,获得具有生物学活性的蛋白,为进一步获得高特异性的抗体奠定基础.

    作者:李月;吴英松;杨学习;谢美娟;李明 刊期: 2009年第03期

  • 广州市2004-2007年肾综合征出血热监测

    目的 分析广州市2004-2007年肾综合征出血热(HFRS)的流行特点和趋势.为制定防治策略提供依据.方法 收集广州地区疫情资料,描述其流行病学特征.HFRS抗体与抗原检测采用免疫荧光分析.结果 广州市2004-2007年共检出HFRS患者337例,年发病率0.59/10万~0.92/10万(平均0.73/10万),病死率0.89%.病例多为青壮年男性民工及商业服务者,主要分布于海珠和天河等地,发病高峰主要在春秋季.鼠间疫情监测显示鼠密度为10.3%,总带毒率为3.6%(160/4457),优势鼠为褐家鼠,带毒率为4.8%(132/2756).结论 广州HFRS疫情有上升趋势,应加大疫情监测力度,认真做好防鼠灭鼠及重点人群的疫苗接种工作.

    作者:刘远;蒋力云;鲁恩洁;董智强;狄飚;吴新伟;杨智聪;王鸣 刊期: 2009年第03期

  • CYFRA21-1在原发性肝癌诊断中的应用

    目的 探讨血清肿瘤标志物CYFRA21-1检测原发性肝癌(primary hepatic cancer,PHC)的诊断价值.方法 2003年7月至2007年12月收治的330例肝病患者,其中组织病理学诊断为原发性肝癌者192例,非原发性肝癌者138例.采用电化学发光免疫分析法对330例肝病患者的血清CYFRA21-1水平进行检测.结果 血清CYFRA21-1水平PHC组为(9.73±1.02)ng/mL,非PHC患者为(1.33±0.26)ng/mL,两组间差异具有统计学意义(P<0.01),不同组织学分型的PHC患者血清CYFRA21-1水平之间的差异也具有统计学意义(P<0.01).结论 检测血清中CYFRA21-1水平对HPC的诊断有一定的指导意义.

    作者:王荷玲;魏青;周颖 刊期: 2009年第03期

  • ICU中MRSA耐药基因检测及其PFGE分型

    目的 对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)菌株进行分子分型,探讨ICU中MRSA医院感染的特点和流行规律.方法 采用表型筛选和PCR扩增mecA基因方法 鉴定MRSA菌株,脉冲场凝胶电泳方法 (PFGE)进行分子分型.结果 12株金黄色葡萄球菌表型筛选为MRSA,MRSA产生A型、B型、C型和D型4种耐药表型,优势耐药模式是A型(75.0%),MRSA对苯唑西林、阿莫西林/克拉维酸和氨苄西林/舒巴坦等10种抗生素产生100%耐药性,11株MRSA携带mecA基因,携带率为91.7%,PFGE指纹图谱分两型,分别为R1型和R2型,11株MRSA为R1型(91.7%),R1型各株间相似度为100%.结论 ICU可存在MRSA爆发流行,MRSA产生多重耐药性(MDR),MRSA携带mecA基因可表现为MDR,PFGE分型是理想的分子流行病学溯源手段.

    作者:庞杏林;李孝权;张颖;张欣强;胡玉山;邓志爱;陈守义;莫自耀 刊期: 2009年第03期

  • 气单胞菌感染研究进展

    新发现的人兽共患病的病原菌--气单胞菌,归类为气单胞菌科(以前隶属弧菌科),气单胞菌属,确认的已有14个气单胞菌表型种和16个基因种.气单胞菌不仅是某些水生生物的重要病原菌,其属中的一些种也可致人类感染性腹泻、急性胃肠炎……,还可引起广泛的肠道外感染,如伤口感染、蜂窝织炎、胆囊炎等,以及免疫力低下患者的腹膜炎、败血症等医院内严重感染.病理机制与其毒力因子密切相关,主要的毒力因子有:外毒素(具溶血性、肠毒性和细胞毒性)、胞外酶和粘附因子等.可能是几种毒力因子相互协同或共同作用的结果 .气单胞菌耐药性日趋严重,TEM-型β-内酰胺酶是其耐药的主要形式.在感染性疾病中已居显著位置,重视气单胞菌的病原学检测和药敏分析,临床合理应用抗生素,具有重要意义.

    作者:廖远泉;钟政荣;沈继龙 刊期: 2009年第03期

  • 白藜芦醇对星形胶质细胞ATP释放的影响

    目的 研究白藜芦醇对体外培养的星形胶质细胞牵拉损伤后三磷酸腺苷(ATP)释放的影响,探索其对中枢神经保护作用的可能机制.方法 采用不同剂量的白藜芦醇与星形胶质细胞共同培养12 h后,进行牵拉损伤,检测不同实验组星形胶质细胞内、外ATP含量,并进行乳酸脱氢酶(LDH)漏出量的测定.结果 牵拉损伤使星形胶质细胞分泌ATP明显增加,相反细胞内ATP含量明显下降(P<0.05);1 μmol白藜芦醇能够使星形胶质细胞损伤后ATP分泌进一步增加(P<0.05);而100 μmol白藜芦醇能减少损伤后ATP分泌(P<0.05).对细胞进行LDH漏出量的检测发现,牵拉损伤能够使星形胶质细胞的LDH漏出量增加(P<0.05),1 μmol白藜芦醇进一步加剧了LDH漏出(P<0.05),100 μmol白藜芦醇能够有效减少星形胶质细胞的LDH漏出(P<0.05).结论 星形胶质细胞受到牵拉损伤后,100 μmol白藜芦醇能够减少其ATP释放,且能够减少LDH漏出,进而对星形胶质细胞起到保护作用.

    作者:周浩;陈清;孔丹莉;郭江;王茜;俞守义 刊期: 2009年第03期

  • 餐后高血糖与心血管危险因素的相关性

    目的 探讨餐后高血糖与心血管危险因素如血脂、血压、肥胖之间的相关性.方法 对柳州市713名干部测量身高、体质量、腰围(WC)、血压,计算体质量指数(BMI),同时检测空服血糖(FBG)、餐后2 h血糖(2 h PBG)、血总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆同醇(LDL-C)等指标,根据1999年WHO糖尿病诊断标准,将受检者分为三组:正常糖耐量(NGT)、糖耐量低减(IGT)、糖尿病(DM),并进行统计学分析.结果 ①由NGT→IGT→DM,年龄、BMI、WC、SBP、DBP、TG的水平逐渐升高,且IGT和DM组均较NGT组显著升高(P<0.01),HDL-C水平显著降低(P<0.01).②随着餐后血糖水平的增高,超重/肥胖、中心肥胖、血脂异常及高血压的检出率逐渐增高(P<0.001).③2 h PBG与年龄、BMI、WC、SBP、DBP、TG呈显著正相关(P<0.001),与HDL-C呈显著负相关(P<0.001),经偏相关分析,在控制其它影响因素后,2 h PBG仍与WC、年龄、TG、DBP呈显著正相关(P<0.001).结论 餐后高血糖与中心肥胖、高TG、高血压独立相关,常聚集了较多的心血管危险因素,预示着心血管疾病风险性增加,应尽早采取干预措施,预防心血管疾病的发生.

    作者:周英;贺平;韦汐;余佩玲;苏江 刊期: 2009年第03期

  • 四种腺病毒核酸提取方法的比较

    目的 通过蛋白酶K法、苯酚法、病毒DNA/RNA提取试剂盒、腺病毒荧光PCR检测试剂盒等四种腺病毒核酸提取方法 的比较,为进一步研究腺病毒的分子生物学特性选择合适的方法 提供参考.方法 以腺病毒感染的A549细胞为样品,分别以蛋白酶K法、苯酚法、病毒DNA/RNA提取试剂盒、腺病毒荧光PCR检测试剂盒等四种方法 提取核酸,核酸经紫外分光光度计检测A260/A280的比值后,用荧光定量PCR方法 检测核酸中腺病毒拷贝数浓度,并记录四种腺病毒核酸提取方法 所需的操作时间.结果 蛋白酶K法、苯酚法、病毒DNA/RNA提取试剂盒、腺病毒荧光PCR检测试剂盒等四种方法 提取核酸的A260/A280的比值依次为1.85532、1.7377、1.81474和1.43934,核酸中腺病毒拷贝数浓度依次为4.9×105 copies/mL、3.94×103 copies/mL、2.66×10 copies/mL和6.15×106 copies/mL,提取核酸所需的时间分别为1.5、15、0.5和0.5 h.结论 四种腺病毒核酸提取方法 中,蛋白酶K法简单快捷、成本低廉,适合一般实验室使用;苯酚法适合用于提取细胞培养上清中病毒的核酸;病毒DNA/RNA试剂盒的优点是操作时间短,得到的病毒核酸纯度较高;腺病毒荧光PCR检测试剂盒对病毒的核酸损耗少,操作步骤少,适用于临床标本的腺病毒核酸检测.

    作者:关文达;秦笙;王丹芬;杨子峰;莫自耀 刊期: 2009年第03期

  • 青蒿素抗肿瘤作用的研究进展

    青蒿素是一种高效、低毒的抗疟药物.近年来的研究表明,青蒿素对多种肿瘤细胞均有抑制作用,且对正常组织细胞的毒性很低.进一步的研究揭示了其作用机制,发现青蒿素通过多种途径抑制癌细胞的生长、增殖与转移,终诱导其凋亡.本文就近年来有关青蒿素抗肿瘤机制的研究进展作一综述.

    作者:李燕飞;朱卫平 刊期: 2009年第03期

  • 降钙素原对新生儿败血症早期诊断价值的系统评价

    目的 系统评价降钙素原(PCT)对新生儿败血症早期诊断价值.方法 用计算机检索CNKI、VIP等数据库.按两个纳入标准分别纳入有关PCT诊断新生儿败血症的研究,采用QUADAS工具进行质量评价,利用Metadise1.4计算各个研究的合并DOR.进行异质性分析,并计算敏感度、特异度、阳性似然比和阴性似然比,进行合并受试者诊断特征曲线(SROC)分析,获得SROC曲线下面积(AUC).用Review Manager5软件进行其它诊断试验评价指标的Meta分析.结果 按照标准一,纳入8个研究;按照标准二,纳入7个研究.8个研究间不存在异质性(X2=3.28,P=0.858,I2=0.0%).8个研究合并敏感度为0.914,合并特异度为0.935,AUC为0.9783;7项研究间不存在异质性(X2=3.24,P=0.779,12=0.0%),合并敏感度为0.876,合并特异度为0.943,AUC为0.9578.结论 从目前的研究看,PCT对新生儿败血症早期诊断有很高的价值,是很好的辅助诊断指标.

    作者:王凤平;刘飞;王前;裘宇容;芮勇宇 刊期: 2009年第03期

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主管:广东省科学技术协会

主办:广东省寄生虫学会 中华预防医学会