INHA基因的克隆表达以及多克隆抗体的制备

FSHR部分基因的真核表达质粒构建和生物信息学分析

目的 克隆FSHR基因部分片段(145～330 bp)(FSHRn),构建真核表达重组质粒,预测其编码蛋白作为候选避孕疫苗的可行性.方法 提取小鼠睾丸组织的总RNA,利用RT-PCR技术反转录成cDNA,按照GenBank中小鼠FSHR N-端序列设计引物,扩增基因片段并插入pcDNA3.1/myc-His(-)B载体,重组质粒经PCR、双酶切和测序鉴定后用Vector NT19.0软件作生物信息学分析.结果 扩增片段长度为186 bp,测序结果 与已知序列吻合,重组真核表达质粒经PCR和双酶切鉴定获得正确重组子.生物信息学分析其编码蛋白抗原性肽段主要集中在15～20aa、22～27aa、32～36aa、42～48aa、58～67aa,与人的基因同源性为90%.结论 成功克隆了FSHRn基因片段并构建了pcDNA3.1/FHSRn真核表达重组质粒;FSHRn具有良好的抗原性,FSHRn蛋白可作为良好的动物候选疫苗,为此段蛋白的深入研究和人类男性避孕疫苗的研制打下基础.

作者：朱秀兰；马文丽；德伟；彭翼飞；阴常欣；郑文岭 刊期： 2009年第03期

冠心病与肿瘤坏死因子水平及肿瘤坏死因子βG252A基因多态性的相关性初步研究

目的 研究肿瘤坏死因子水平及肿瘤坏死因子-β G252A(TNF-β)基因多态性与冠心病的关系.方法 用ELISA测定63例冠心病患者及103例健康对照者血清TNF水平.用聚合酶链反应扩增TNF-β第一内含子含有1 069位核苷酸A→G多态位点的基因片段,Neo I内切酶进行限制性酶切反应.结果 63例冠心病患者和103例正常对照TNF-β基因型及等位基因频率差异均无统计学意义,而血浆中TNF水平,冠心病组明显高于对照组,两组之间比较差异有统计学意义(P<0.001).结论 血清TNF水平显著升高提示炎性反应在冠心病病程中起重要作用.TNF-β G252A基因多态性与冠心病无关联.

作者：钟欢妹；黎耀晃；江炳章；李红民；林成绍；柳息洪 刊期： 2009年第03期

气单胞菌感染研究进展

新发现的人兽共患病的病原菌--气单胞菌,归类为气单胞菌科(以前隶属弧菌科),气单胞菌属,确认的已有14个气单胞菌表型种和16个基因种.气单胞菌不仅是某些水生生物的重要病原菌,其属中的一些种也可致人类感染性腹泻、急性胃肠炎……,还可引起广泛的肠道外感染,如伤口感染、蜂窝织炎、胆囊炎等,以及免疫力低下患者的腹膜炎、败血症等医院内严重感染.病理机制与其毒力因子密切相关,主要的毒力因子有:外毒素(具溶血性、肠毒性和细胞毒性)、胞外酶和粘附因子等.可能是几种毒力因子相互协同或共同作用的结果 .气单胞菌耐药性日趋严重,TEM-型β-内酰胺酶是其耐药的主要形式.在感染性疾病中已居显著位置,重视气单胞菌的病原学检测和药敏分析,临床合理应用抗生素,具有重要意义.

作者：廖远泉；钟政荣；沈继龙 刊期： 2009年第03期

白藜芦醇对星形胶质细胞ATP释放的影响

目的 研究白藜芦醇对体外培养的星形胶质细胞牵拉损伤后三磷酸腺苷(ATP)释放的影响,探索其对中枢神经保护作用的可能机制.方法 采用不同剂量的白藜芦醇与星形胶质细胞共同培养12 h后,进行牵拉损伤,检测不同实验组星形胶质细胞内、外ATP含量,并进行乳酸脱氢酶(LDH)漏出量的测定.结果 牵拉损伤使星形胶质细胞分泌ATP明显增加,相反细胞内ATP含量明显下降(P<0.05);1 μmol白藜芦醇能够使星形胶质细胞损伤后ATP分泌进一步增加(P<0.05);而100 μmol白藜芦醇能减少损伤后ATP分泌(P<0.05).对细胞进行LDH漏出量的检测发现,牵拉损伤能够使星形胶质细胞的LDH漏出量增加(P<0.05),1 μmol白藜芦醇进一步加剧了LDH漏出(P<0.05),100 μmol白藜芦醇能够有效减少星形胶质细胞的LDH漏出(P<0.05).结论 星形胶质细胞受到牵拉损伤后,100 μmol白藜芦醇能够减少其ATP释放,且能够减少LDH漏出,进而对星形胶质细胞起到保护作用.

作者：周浩；陈清；孔丹莉；郭江；王茜；俞守义 刊期： 2009年第03期

CYFRA21-1在原发性肝癌诊断中的应用

目的 探讨血清肿瘤标志物CYFRA21-1检测原发性肝癌(primary hepatic cancer,PHC)的诊断价值.方法 2003年7月至2007年12月收治的330例肝病患者,其中组织病理学诊断为原发性肝癌者192例,非原发性肝癌者138例.采用电化学发光免疫分析法对330例肝病患者的血清CYFRA21-1水平进行检测.结果 血清CYFRA21-1水平PHC组为(9.73±1.02)ng/mL,非PHC患者为(1.33±0.26)ng/mL,两组间差异具有统计学意义(P<0.01),不同组织学分型的PHC患者血清CYFRA21-1水平之间的差异也具有统计学意义(P<0.01).结论 检测血清中CYFRA21-1水平对HPC的诊断有一定的指导意义.

作者：王荷玲；魏青；周颖 刊期： 2009年第03期

深圳市4例人感染猪链球菌病例流行病学分析

目的 掌握人感染猪链球菌病疫情的流行病学特点,为制定预防控制措施提供科学依据.方法 开展流行病学调查,采集脑脊液标本,用血平板进行细菌培养、分离,PCR鉴定.结果 病例发病时间集中在夏季,均为男性,手部均有外伤且有生猪肉接触史.脑脊液中分离的细菌经生化和PCR检测结果 为猪链球菌Ⅱ型.病例经治疗均脱离了危险.结论 4例病例均为散发疫情,相互间无流行病学联系.传播途径为接触被猪链球菌污染的生猪肉经破损皮肤而传染.应加强健康知识教育,提高肉食品加工人员的自我保护能力,同时要提高医务人员的诊治水平.

作者：孔东锋；张小岚；梅树江 刊期： 2009年第03期

来源于胚胎干细胞的嵌合体小鼠自发性肿瘤观察

目的 观察胚胎干细胞(ES细胞)囊胚腔注射的方法 构建嵌合体小鼠自发性肿瘤.方法 连续80周每周观察嵌合体小鼠的肿瘤发生情况,选取同龄相关品系小鼠各10只作为对照组.处死发生肿瘤的小鼠并且病理学检查,提取肿瘤组织的基因组DNA.用PCR方法 检测性别决定区(SRY)基因判断肿瘤的品系来源.结果 13只嵌合体小鼠中有3只(全为雌性)发生自发性肿瘤,分别为腺癌、皮下恶性畸胎瘤、淋巴瘤.肿瘤细胞来源于注射的ES细胞而非受体囊胚.对照组野生型小鼠未见肿瘤发生.结论 ES细胞囊胚腔注射的方法 构建嵌合体小鼠具有较高的自发肿瘤发生率,可作为自发性肿瘤动物模型.

作者：马芸；黄冰；邓新燕；陈系古 刊期： 2009年第03期

ICU中MRSA耐药基因检测及其PFGE分型

目的 对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)菌株进行分子分型,探讨ICU中MRSA医院感染的特点和流行规律.方法 采用表型筛选和PCR扩增mecA基因方法 鉴定MRSA菌株,脉冲场凝胶电泳方法 (PFGE)进行分子分型.结果 12株金黄色葡萄球菌表型筛选为MRSA,MRSA产生A型、B型、C型和D型4种耐药表型,优势耐药模式是A型(75.0%),MRSA对苯唑西林、阿莫西林/克拉维酸和氨苄西林/舒巴坦等10种抗生素产生100%耐药性,11株MRSA携带mecA基因,携带率为91.7%,PFGE指纹图谱分两型,分别为R1型和R2型,11株MRSA为R1型(91.7%),R1型各株间相似度为100%.结论 ICU可存在MRSA爆发流行,MRSA产生多重耐药性(MDR),MRSA携带mecA基因可表现为MDR,PFGE分型是理想的分子流行病学溯源手段.

作者：庞杏林；李孝权；张颖；张欣强；胡玉山；邓志爱；陈守义；莫自耀 刊期： 2009年第03期

人源脂肪细胞SH2B1β基因的克隆表达

目的 获取人源脂肪细胞SH2B1β基因序列,构建SH2B1β-pET28a(+)重组表达质粒,在大肠杆菌中对其进行表达.方法 利用RT-PCR方法 从人源分化成熟的脂肪细胞RNA中扩增出SH2B1β的cDNA片段,并插入pET28a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3),通过IPTG诱导表达带6xHis标签的融合蛋白.结果 PCR和酶切电泳鉴定结果 显示SH2B1β基因克隆人载体中,测序结果 证实克隆的基因序列与GenBank中的人源SH2B1β序列相符,SDS-PAGE电泳结果 表明获得相对分子质量约75 000的目的蛋白.结论 成功获取了人源脂肪细胞的SH2B1β基因,并在BL21(DE3)中高效表达目的蛋白,为下一步表达纯化SH2B1β重组蛋白及蛋白的初步功能研究奠定基础.

作者：邱国真；陈白虹；曲戎梅；付琛颖；董文其；魏威；王文敬；王萍 刊期： 2009年第03期

高血压病患者尿蛋白早期肾损害指标联合检测结果分析

作者：池晓霞；陈剑雄；屠洪 刊期： 2009年第03期

人参皂苷Rg1对吗啡依赖海马神经元胞内游离钙离子浓度的影响

目的 探讨人参皂苷Rg1对吗啡依赖海马神经元胞内游离钙离子浓度(intracellular free Ca2+ concentration,[Ca2+]i)的影响.方法 采用荧光钙离子指示剂Fluo-3/AM,利用激光扫描共聚焦显微镜观察低剂量(1 μmol/L)、中剂量(10 μmol/L)、高剂量(100 μmol/L)人参皂苷Rg1处理吗啡依赖原代培养大鼠海马神经元后[Ca2+]i的改变.结果 低、中、高剂量人参皂苷Rg1单独处理海马神经元前后并没有引起胞内[Ca2+];的显著改变(P>0.05),而吗啡依赖海马神经元胞内[Ca2+];较正常海马神经元细胞明显增高(P<0.01).此外,低、中、高剂量人参皂苷Rg1处理吗啡依赖海马神经元细胞后,均能显著抑制胞内[Ca2+];的升高(P<0.01),并呈剂量依赖性,Rg1剂量越大,抑制作用越明显(P<0.01).结论 人参皂苷Rg1可以抑制吗啡依赖海马神经元细胞内[Ca2+];的增高,对吗啡的成瘾性具有明显的拈抗作用,为合理安全有效地应用人参戒毒提供了实验依据.

作者：揭荣荣；文磊；余林中 刊期： 2009年第03期

四种腺病毒核酸提取方法的比较

目的 通过蛋白酶K法、苯酚法、病毒DNA/RNA提取试剂盒、腺病毒荧光PCR检测试剂盒等四种腺病毒核酸提取方法 的比较,为进一步研究腺病毒的分子生物学特性选择合适的方法 提供参考.方法 以腺病毒感染的A549细胞为样品,分别以蛋白酶K法、苯酚法、病毒DNA/RNA提取试剂盒、腺病毒荧光PCR检测试剂盒等四种方法 提取核酸,核酸经紫外分光光度计检测A260/A280的比值后,用荧光定量PCR方法 检测核酸中腺病毒拷贝数浓度,并记录四种腺病毒核酸提取方法 所需的操作时间.结果 蛋白酶K法、苯酚法、病毒DNA/RNA提取试剂盒、腺病毒荧光PCR检测试剂盒等四种方法 提取核酸的A260/A280的比值依次为1.85532、1.7377、1.81474和1.43934,核酸中腺病毒拷贝数浓度依次为4.9×105 copies/mL、3.94×103 copies/mL、2.66×10 copies/mL和6.15×106 copies/mL,提取核酸所需的时间分别为1.5、15、0.5和0.5 h.结论 四种腺病毒核酸提取方法 中,蛋白酶K法简单快捷、成本低廉,适合一般实验室使用;苯酚法适合用于提取细胞培养上清中病毒的核酸;病毒DNA/RNA试剂盒的优点是操作时间短,得到的病毒核酸纯度较高;腺病毒荧光PCR检测试剂盒对病毒的核酸损耗少,操作步骤少,适用于临床标本的腺病毒核酸检测.

作者：关文达；秦笙；王丹芬；杨子峰；莫自耀 刊期： 2009年第03期

化学发光法与酶联免疫吸附分析法联合测定癌胚抗原的应用

目的 通过酶联免疫吸附分析法(ELISA)与磁粒子捕获免疫发光法(ICA)联合测定血癌胚抗原(CEA)进行分析和探讨.方法 预先用ELISA对检测CEA的血清标品进行分组,然后根据浓度级别分组冉检测血清CEA的浓度.结果 ELISA和ICA联合检测血CEA,可大大节约非常昂贵的ICA试剂,又能快速发出检验报告.结论 该方法 无论是医院或者病患者都带来了非常可观的经济效益.

作者：郑定容；周伟；杨文娜 刊期： 2009年第03期

血吸虫病的诊断检测技术及研究进展

血吸虫病的诊断检测技术在血吸虫病的防治中具有极其重要的作用.近年来除了病原学诊断技术的改进,免疫学诊断技术也因为其良好的敏感性、特异性和实用性,成为当前血吸虫病的常用诊断手段,而且随着分子生物学、免疫化学、免疫传感器等新技术的渗入.极大地促进了血吸虫病诊断方法 和检测技术的改进和发展.

作者：周帅锋；余路新；汪世平 刊期： 2009年第03期

1152例恶性血液病回顾性研究

目的 回顾性分析我院10年间初发恶性血液病的情况,以研究其发病情况及流行趋势.方法 取骨髓片及血片作瑞氏染色,细胞化学染色,然后显微镜读片依据FAB标准作出诊断.结果 1998年1月至2007年12月初发恶性血液病1 152例.其中急性淋巴细胞白血病(ALL)269例,占23.35%;急性非淋巴细胞白血病(ANLL)409例,占35.5%;慢性粒细胞白血病(CML)161例,占13.98%;慢性淋巴细胞白血病(CLL)18例,占1.56%;浆细胞白血病(PCL)5例,占0.43%;多发性骨髓瘤(MM)91例,占7.90%;骨髓增生异常综合征(MDS)141例,占12.24%;其它58例,占5.03%.在0～9岁年龄组,ALL为首位占67.63%(94/139),在30～39岁年龄组ANLL的发病比例达到53.29%(89/167),CML发病在20岁以上明显增加,CLL的发病多在50岁以上,MM和MDS的发病在40岁以上有明显增加的趋势,在>60岁年龄组比例高,分别为60.44%(55/91)和57.45%(81/141).1998-2007年构成比依次为8.07%、8.25%、9.38%、8.07%、7.38%、10.68%、10.94%、10.24%、13.54%、13.45%.结论 近年恶性血液病有增加的趋势.

作者：巫远忠；刘瑞玉 刊期： 2009年第03期

1021例体外受精-胚胎移植妊娠结局

目的 探讨辅助生殖技术(assisted reproductive technology,ART)后的妊娠结局.方法 对1 021例通过ART获得的临床妊娠者,通过直接询问或电话随访对其妊娠结局进行回顾性分析.结果 1 021例妊娠者中,分娩838例(82.08%),单胎642例(76.61%),多胎196例(23.39%),流产132例(12.93%),异位妊娠41例(4.02%),分娩情况失随访10例(0.98%),畸形儿10例(1.19%),分娩男婴540个、女婴495个,新鲜胚胎移植后早期流产率为10.76%,明显高于冻融胚胎移植(FET)后的5.08%(P<0.01),多胎的早产率、剖宫产率、低体重儿发生率均明显高于单胎(P<0.01).结论 重视ART技术带来的多胎、早产、流产及异位妊娠等并发症.密切关注ART后代的出生缺陷.

作者：易艳红；黄睿；吴敬之；黄翠玉；王艳芳 刊期： 2009年第03期

湖北省2008年血吸虫病疫情控制考核评估

目的 考核评估湖北省预防控制血吸虫病中长期规划防治目标和效果.方法 分析湖北省2007、2008年血吸虫病疫情控制资料;查阅和审核15个县(市、区)(以下简称县)2004-2008年血吸虫病防治资料;每县随机抽取3个流行村,现场调查人、畜血吸虫病感染情况,资料整理和归档情况,考核和评估血吸虫病疫情现状.结果 防治资料表明全省5 408个流行村人群、家畜感染率均降至5%以下.15个县、45个抽样村2004-2007年资料均为合格;2008年资料整理系统、规范,得分均>70分,建立了以村为单位的反映疫情变化的档案资料.现场考核的15个县3 279个流行村的人畜感染率均降至5%以下,其中人群感染率≥1%的村2 544个(占77.58%),<1%的村578个(占17.63%),为0的157个(占4.79%),人群平均感染率高的是公安县(3.72%),家畜(耕牛)感染率高的是沙市区(3.51%).现场调查45个流行村,人畜感染率均在5%以下,其中人群感染率高的3个村分别为公安县积玉村(2.98%)、嘉鱼县复阳村(2.50%)、潜江市进步村(2.46%).耕牛感染率高的3个村分别为江陵县花彭村(3.51%)、监利县烟灯村(2.97%)、汉川市丁岗村(2.63%).结论 湖北省所有的流行村人群、家畜感染率均降至5%以下,两年没有发生血吸虫病突发疫情,建立了以行政村为单位反映病情、螺情变化的档案资料,符合<血吸虫病控制和消灭标准>(GB15976-2006)中血吸虫病疫情控制标准的有关指标,全省达到了国家血吸虫病疫情控制标准.

作者：涂祖武；戴裕海；黄希宝；刘建兵；刘汉成；朱惠国；朱红；肖瑛；蔡顺祥；龚新国；徐兴建 刊期： 2009年第03期

广州市2004-2007年肾综合征出血热监测

目的 分析广州市2004-2007年肾综合征出血热(HFRS)的流行特点和趋势.为制定防治策略提供依据.方法 收集广州地区疫情资料,描述其流行病学特征.HFRS抗体与抗原检测采用免疫荧光分析.结果 广州市2004-2007年共检出HFRS患者337例,年发病率0.59/10万～0.92/10万(平均0.73/10万),病死率0.89%.病例多为青壮年男性民工及商业服务者,主要分布于海珠和天河等地,发病高峰主要在春秋季.鼠间疫情监测显示鼠密度为10.3%,总带毒率为3.6%(160/4457),优势鼠为褐家鼠,带毒率为4.8%(132/2756).结论 广州HFRS疫情有上升趋势,应加大疫情监测力度,认真做好防鼠灭鼠及重点人群的疫苗接种工作.

作者：刘远；蒋力云；鲁恩洁；董智强；狄飚；吴新伟；杨智聪；王鸣 刊期： 2009年第03期

以社区获得性肺炎为表现的肺结核的临床特点

目的 分析肺结核以社区获得性肺炎为主要表现的特点,提高不典型肺结核诊断水平.方法 对本院2000年1月至2006年6月收治的39例首诊为社区获得性肺炎后诊断为肺结核病例的主要临床参数归纳整理并进行统计分析.结果 高热79.49%(31/39),中度发热7.69%(3/39),低热7.69%(3/39),体温正常5.13%(2/39),发热者以午后和夜间为主者71.79%(28/39),不规则发热23.08%(9/39);痰涂阳性10例,阴性29例;胸片:尖后段12例(30.77%),前段5例(12.82%),中叶或舌叶2例(5.13%),下叶背段15例(38.46%),基底段8例(20.51%).斑片影19例(48.72%),多形态影12例(30.77%),团块影8例(20.51%),其中空洞2例(5.13%).β内酰胺联合阿奇霉素改善4例、无改善2例、加重18例;影像加重83.3%(20/24)、改进8.33%(2/24).氟喹诺酮类改善12例、加重2例;影像无变化57.89%(11/19)、加重42.11%(8/19).抗结核1周体温正常21例,2周体温正常18例.1周复查胸片吸收8例、2周后吸收25例,抗结核1～2个月吸收6例,其中胸膜增厚2例.结论 以肺炎为表现的不典型肺结核诊断困难,午后或夜间发热,结核好发部位,抗感染效果不佳需要警惕肺结核诊断.影像学尤其螺旋CT检查有利于结核的早期诊断.可疑结核慎用氟喹诺酮,可用α内酰胺和大环内酯类诊断性治疗.

作者：吴本权；唐先锋；刘慧；黄静；张文先；周宇麒；张天托 刊期： 2009年第03期

细粒棘球绦虫重组质粒pGEX-Eg95的构建及其在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达

目的 构建细粒棘球绦虫重组质粒pGEX-Eg95,并研究该质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达.方法 超声粉碎细粒棘球蚴组织提取总RNA,通过RT-PCR扩增Eg95抗原编码基因;克隆至原核表达载体pGEX-1λT,构建重组质粒pGEX-Eg95;转化大肠杆菌B121,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达后用SDS-PAGE和Western blotting对表达产物进行分析和鉴定.结果 RT-PCR扩增出471 bp的Eg95抗原编码基因;双酶切证实Eg95抗原编码基因成功插入pGEX-1λT中;SDS-PAGE分析显示表达产物为相对分子质量约42 500的重组蛋白,与预期结果 一致,表达的蛋白约占菌体总蛋白的21%;Western blot鉴定显示重组蛋白能被细粒棘球蚴感染鼠血清识别.结论 成功构建了细粒棘球绦虫重组质粒pGEX-Eg95,该质粒在大肠杆菌B1221中获得了高效融合表达,表达的融合蛋白具有特异的抗原性.

作者：周必英；陈雅棠；李文桂；杨梅 刊期： 2009年第03期