学术投稿

四种腺病毒核酸提取方法的比较

关文达;秦笙;王丹芬;杨子峰;莫自耀

关键词:腺病毒, 核酸, 提取方法
摘要:目的 通过蛋白酶K法、苯酚法、病毒DNA/RNA提取试剂盒、腺病毒荧光PCR检测试剂盒等四种腺病毒核酸提取方法 的比较,为进一步研究腺病毒的分子生物学特性选择合适的方法 提供参考.方法 以腺病毒感染的A549细胞为样品,分别以蛋白酶K法、苯酚法、病毒DNA/RNA提取试剂盒、腺病毒荧光PCR检测试剂盒等四种方法 提取核酸,核酸经紫外分光光度计检测A260/A280的比值后,用荧光定量PCR方法 检测核酸中腺病毒拷贝数浓度,并记录四种腺病毒核酸提取方法 所需的操作时间.结果 蛋白酶K法、苯酚法、病毒DNA/RNA提取试剂盒、腺病毒荧光PCR检测试剂盒等四种方法 提取核酸的A260/A280的比值依次为1.85532、1.7377、1.81474和1.43934,核酸中腺病毒拷贝数浓度依次为4.9×105 copies/mL、3.94×103 copies/mL、2.66×10 copies/mL和6.15×106 copies/mL,提取核酸所需的时间分别为1.5、15、0.5和0.5 h.结论 四种腺病毒核酸提取方法 中,蛋白酶K法简单快捷、成本低廉,适合一般实验室使用;苯酚法适合用于提取细胞培养上清中病毒的核酸;病毒DNA/RNA试剂盒的优点是操作时间短,得到的病毒核酸纯度较高;腺病毒荧光PCR检测试剂盒对病毒的核酸损耗少,操作步骤少,适用于临床标本的腺病毒核酸检测.
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  • 湖北省2008年血吸虫病疫情控制考核评估

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    作者:涂祖武;戴裕海;黄希宝;刘建兵;刘汉成;朱惠国;朱红;肖瑛;蔡顺祥;龚新国;徐兴建 刊期: 2009年第03期

  • 细粒棘球绦虫重组质粒pGEX-Eg95的构建及其在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达

    目的 构建细粒棘球绦虫重组质粒pGEX-Eg95,并研究该质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达.方法 超声粉碎细粒棘球蚴组织提取总RNA,通过RT-PCR扩增Eg95抗原编码基因;克隆至原核表达载体pGEX-1λT,构建重组质粒pGEX-Eg95;转化大肠杆菌B121,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达后用SDS-PAGE和Western blotting对表达产物进行分析和鉴定.结果 RT-PCR扩增出471 bp的Eg95抗原编码基因;双酶切证实Eg95抗原编码基因成功插入pGEX-1λT中;SDS-PAGE分析显示表达产物为相对分子质量约42 500的重组蛋白,与预期结果 一致,表达的蛋白约占菌体总蛋白的21%;Western blot鉴定显示重组蛋白能被细粒棘球蚴感染鼠血清识别.结论 成功构建了细粒棘球绦虫重组质粒pGEX-Eg95,该质粒在大肠杆菌B1221中获得了高效融合表达,表达的融合蛋白具有特异的抗原性.

    作者:周必英;陈雅棠;李文桂;杨梅 刊期: 2009年第03期

  • 辣椒素受体拮抗剂治疗避水应激引起内脏痛觉过敏作用

    目的 研究避水应激引起内脏痛觉敏感性的变化及特异性辣椒素受体(VR1)拮抗剂辣椒平与非特异性VR1拮抗剂钌红对避水应激引起内脏痛觉过敏的治疗作用.方法 将6周龄雄性Wistar大鼠54只分为无应激对照组(Neg组,n=18)、生理盐水对照组(NS组,n=12)、辣椒平治疗组(CZP组,n=12)、钌红治疗组(RR组,n=12),Neg组又分为三个小组,分别为直肠内注入生理盐水组、直肠内注入辣椒素组、直肠扩张组,NS组、CZP组和RR组只分为直肠内注入辣椒素组和直肠扩张组两小组,每小组均为6只动物.给予避水应激.每天1 h连续10 d.第11天Neg组与NS组腹腔注射溶媒,CZP组腹腔注射辣椒平,RR组腹腔注射钌红,30 min后每小组6只动物直肠内注入生理盐水或辣椒素,进行疼痛评分,或给予结直肠扩张(CRD)刺激,进行腹直肌肌电记录.结果 避水应激引起动物对直肠注射辣椒素敏感性增加,腹腔注射辣椒平与钌红均能抑制注射辣椒索引起的疼痛反应;避水应激也引起动物CRD刺激后腹直肌肌电活动增加,腹腔注射辣椒乎与钉红均能降低肌电活动的增加幅度,而钌红则完全抑制肌电活动的增加.结论 辣椒素受体拮抗剂可抑制避水应激引起的内脏痛觉过敏,辣椒素受体参与内脏痛觉过敏的发生过程.

    作者:季文进;梁杰贤;赵国栋;洪迅;李真;李红英 刊期: 2009年第03期

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    作者:孔东锋;张小岚;梅树江 刊期: 2009年第03期

  • 登革减毒疫苗研究新进展及面临的问题

    由于近年来登革病毒在全球范围的迅速扩散,登革疫苗的研制成为一个严峻的国际性问题.减毒疫苗是目前有希望研制成功的,其中传统减毒活疫苗已进入二期临床试验,新型减毒疫苗也显示了自己的优势,但仍面临许多挑战.本文就登革减毒疫苗研究的进展及面临的问题作一综述.

    作者:史潇;郑学礼 刊期: 2009年第03期

  • pLXSN-EGFP逆转录病毒载体的构建及体内外表达的研究

    目的 构建携带有绿色荧光蛋白(GFP)基因的逆转录病毒载体,观察该报告基因在动物体内外表达情况以及对靶细胞生物特性的影响.方法 以质粒pEGFP-C1为模板进行PCR反应,获得增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因片段,定向插入逆转录病毒载体pLXSN获得重组逆转录病毒载体pLXSN-EGFP,转染PA317包装细胞后收集具有感染能力的病毒颗粒,转染人多型性脑胶质瘤细胞SW038-C2,通过荧光显微镜和流式细胞仪观察EGFP作为报告基因在体内外的表达情况以及对靶细胞生物特性的影响.结果 成功克隆携带有EGFP基因的逆转录病毒载体,该载体经包装细胞包装后可有效转染人多型性脑胶质瘤细胞SW038-C2并在体内外稳定表达,对靶细胞及其所成肿瘤的生长无抑制.高表达GFP的靶细胞形态变得细长,FACS检测约有98%的细胞表达GFP,体外培养6个月荧光强度没有明显的衰减,而低表达GFP的靶细胞形态无变化,FACS检测有30.7%细胞表达GFP.结论 该载体可在体内外成功表达,对靶细胞的生长无明显抑制,高表达GFP的靶细胞有一定形态上的变化;使用GFP作为报告基因,检测到的病毒载体转染率比实际偏低.

    作者:赵宁;郭中敏;陈系古 刊期: 2009年第03期

  • 白藜芦醇对星形胶质细胞ATP释放的影响

    目的 研究白藜芦醇对体外培养的星形胶质细胞牵拉损伤后三磷酸腺苷(ATP)释放的影响,探索其对中枢神经保护作用的可能机制.方法 采用不同剂量的白藜芦醇与星形胶质细胞共同培养12 h后,进行牵拉损伤,检测不同实验组星形胶质细胞内、外ATP含量,并进行乳酸脱氢酶(LDH)漏出量的测定.结果 牵拉损伤使星形胶质细胞分泌ATP明显增加,相反细胞内ATP含量明显下降(P<0.05);1 μmol白藜芦醇能够使星形胶质细胞损伤后ATP分泌进一步增加(P<0.05);而100 μmol白藜芦醇能减少损伤后ATP分泌(P<0.05).对细胞进行LDH漏出量的检测发现,牵拉损伤能够使星形胶质细胞的LDH漏出量增加(P<0.05),1 μmol白藜芦醇进一步加剧了LDH漏出(P<0.05),100 μmol白藜芦醇能够有效减少星形胶质细胞的LDH漏出(P<0.05).结论 星形胶质细胞受到牵拉损伤后,100 μmol白藜芦醇能够减少其ATP释放,且能够减少LDH漏出,进而对星形胶质细胞起到保护作用.

    作者:周浩;陈清;孔丹莉;郭江;王茜;俞守义 刊期: 2009年第03期

  • 妇幼医院无乳链球菌临床分布情况及药敏结果分析

    目的 了解妇幼医院无乳链球菌(GBS)感染的临床分布和药敏情况,为临床感染的预防及治疗提供依据.方法 收集妇幼医院临床患者各类临床标本作无乳链球菌培养,经法国生物梅里埃VITEK-2全自动细菌鉴定分析仪进行鉴定和药敏分析的菌株171株.结果 171株无乳链球菌株中血培养和泌尿生殖道分泌物标本中分离率高,其次为脐带分泌物,临床分布以新生儿病区高,其次为产科病区.药敏结果 显示171株无乳链球菌对青霉素、氨苄青霉素敏感或中度敏感,对万古霉素、头孢菌素类抗生素均敏感,对四环素、克林霉素和红霉素的耐药率分别为100%、70.8%和55.6%.结论 为防止无乳链球菌感染和新耐药菌株的出现,临床应重视对无乳链球菌的培养检测,并根据药敏结果 选择抗生素进行预防和治疗.

    作者:段纯;李素丽;王宏;胡运月;朱岩;龙峰 刊期: 2009年第03期

  • CYFRA21-1在原发性肝癌诊断中的应用

    目的 探讨血清肿瘤标志物CYFRA21-1检测原发性肝癌(primary hepatic cancer,PHC)的诊断价值.方法 2003年7月至2007年12月收治的330例肝病患者,其中组织病理学诊断为原发性肝癌者192例,非原发性肝癌者138例.采用电化学发光免疫分析法对330例肝病患者的血清CYFRA21-1水平进行检测.结果 血清CYFRA21-1水平PHC组为(9.73±1.02)ng/mL,非PHC患者为(1.33±0.26)ng/mL,两组间差异具有统计学意义(P<0.01),不同组织学分型的PHC患者血清CYFRA21-1水平之间的差异也具有统计学意义(P<0.01).结论 检测血清中CYFRA21-1水平对HPC的诊断有一定的指导意义.

    作者:王荷玲;魏青;周颖 刊期: 2009年第03期

  • 广州市社区美沙酮维持治疗效果评估

    目的 评估广州市社区美沙酮维持治疗工作效果.方法 对接受美沙酮维持治疗满6个月的患者进行问卷调查,分析并比较其在接受治疗前后的吸毒、性行为、违法活动及社会家庭功能等变化情况.结果 接受6个月的治疗后,近1个月使用毒品率从100%下降至13.8%(X2=98.378,P<0.01);注射吸毒率由95.4%下降至12.3%(X2=90.257,P<0.01);过去3个月被公安机关逮捕的比例从12.3%下降到3.1%(X2=3.973,P<0.05);获得工作情况方面有所改善(X2=7.900,P<0.01).结论 社区美沙酮维持治疗可以减少受治者毒品的使用、减少与吸毒有关的高危行为、减少与吸毒有关的违法犯罪、有效恢复受治者家庭及社会功能.

    作者:赵宇腾;徐慧芳;樊莉蕊 刊期: 2009年第03期

  • ICU中MRSA耐药基因检测及其PFGE分型

    目的 对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)菌株进行分子分型,探讨ICU中MRSA医院感染的特点和流行规律.方法 采用表型筛选和PCR扩增mecA基因方法 鉴定MRSA菌株,脉冲场凝胶电泳方法 (PFGE)进行分子分型.结果 12株金黄色葡萄球菌表型筛选为MRSA,MRSA产生A型、B型、C型和D型4种耐药表型,优势耐药模式是A型(75.0%),MRSA对苯唑西林、阿莫西林/克拉维酸和氨苄西林/舒巴坦等10种抗生素产生100%耐药性,11株MRSA携带mecA基因,携带率为91.7%,PFGE指纹图谱分两型,分别为R1型和R2型,11株MRSA为R1型(91.7%),R1型各株间相似度为100%.结论 ICU可存在MRSA爆发流行,MRSA产生多重耐药性(MDR),MRSA携带mecA基因可表现为MDR,PFGE分型是理想的分子流行病学溯源手段.

    作者:庞杏林;李孝权;张颖;张欣强;胡玉山;邓志爱;陈守义;莫自耀 刊期: 2009年第03期

  • 气单胞菌感染研究进展

    新发现的人兽共患病的病原菌--气单胞菌,归类为气单胞菌科(以前隶属弧菌科),气单胞菌属,确认的已有14个气单胞菌表型种和16个基因种.气单胞菌不仅是某些水生生物的重要病原菌,其属中的一些种也可致人类感染性腹泻、急性胃肠炎……,还可引起广泛的肠道外感染,如伤口感染、蜂窝织炎、胆囊炎等,以及免疫力低下患者的腹膜炎、败血症等医院内严重感染.病理机制与其毒力因子密切相关,主要的毒力因子有:外毒素(具溶血性、肠毒性和细胞毒性)、胞外酶和粘附因子等.可能是几种毒力因子相互协同或共同作用的结果 .气单胞菌耐药性日趋严重,TEM-型β-内酰胺酶是其耐药的主要形式.在感染性疾病中已居显著位置,重视气单胞菌的病原学检测和药敏分析,临床合理应用抗生素,具有重要意义.

    作者:廖远泉;钟政荣;沈继龙 刊期: 2009年第03期

  • 治疗方式对哮喘儿童治疗依从性的影响

    目的 调查影响儿童哮喘治疗依从性的相关因素,为更好地防治儿童哮喘提供依据.方法 对本院2006年4月至2007年10月共收治的118例哮喘儿童.根据是否按全球哮喘防治创议方案系统规范用药情况分为依从性良好(41例)、依从性中等(46例)以及依从性差(31例)三组,采取问卷的方法 ,对118例哮喘儿童的缓解期治疗方案及主要监护人进行调查和咨询.结果 患儿居住环境、主要监护人对哮喘知识的了解、治疗信心、药物安全性认识、学历、制定哮喘治疗书面计划、专人监督用药、定期复诊咨询等与哮喘患儿治疗的依从性具有关联性;在校正了上述影响哮喘患儿治疗依从性的因素后,发现口服顺尔宁治疗患儿的依从性明显好于普米克气雾剂治疗的哮喘患儿的依从性,后者放弃治疗的发生风险是前者的1.39倍.结论 影响哮喘儿童治疗依从性的因素是多种的,在其中药物的治疗方式上,口服白三烯受体拮抗剂较吸入糖皮质激素的依从性更好.

    作者:方文;郭小芳;叶鑫 刊期: 2009年第03期

  • 青蒿素抗肿瘤作用的研究进展

    青蒿素是一种高效、低毒的抗疟药物.近年来的研究表明,青蒿素对多种肿瘤细胞均有抑制作用,且对正常组织细胞的毒性很低.进一步的研究揭示了其作用机制,发现青蒿素通过多种途径抑制癌细胞的生长、增殖与转移,终诱导其凋亡.本文就近年来有关青蒿素抗肿瘤机制的研究进展作一综述.

    作者:李燕飞;朱卫平 刊期: 2009年第03期

  • 心绞痛患者血浆C反应蛋白及巨噬细胞移动抑制因子的变化

    目的 通过检测稳定型及不稳定型心绞痛患者血浆高敏C反应蛋白(hsCRP)及巨噬细胞移动抑制因子(MIF),了解hsCRP及MIF在其中的变化.方法 61例稳定型心绞痛患者、69例不稳定型心绞痛患者和55例健康志愿者,以ELISA法检测分析其血浆中高敏C反应蛋白及巨噬细胞移动抑制因子的变化.结果 不稳定型心绞痛组患者血浆hsCRP水平(12.93±3.67)mg/L及MIF水平(23.60±6.31)μg/L高于稳定型心绞痛患者[hsCRP(4.37±1.28)mg/L,MIF(9.89±1.04)μg/L]及对照组[hsCRP(3.51±1.47)mg/L,MIF(9.58±1.25)μg/L],差异有统计学意义(P均<0.05);而稳定型心绞痛患者及对照组hsCRP及MIF水平比较差异则无统计学意义(P>0.05).结论 不稳定型心绞痛患者其hsCRP及MIF水平较健康对照组及稳定型心绞痛患者均有明显升高,对hsCRP及MIF检测可能有助于鉴别高危冠心病患者.

    作者:徐向明;何坚;贺军 刊期: 2009年第03期

  • PTHLH在鼻咽癌细胞系及组织中表达上调

    目的 检测PTHLH在鼻咽癌细胞系及组织中的表达水平,从理论上初步探讨其在鼻咽癌发生发展过程中所起的作用.方法 实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测PTHLH在7个鼻咽癌细胞系的表达情况,RT-PCR检测PTHLH在鼻咽癌及非癌鼻咽组织中的表达,免疫组化鉴定其在鼻咽癌及鼻咽上皮组织中蛋白水平的表达.结果 PTHLH在鼻咽癌细胞系中的表达上调,以HONE1细胞中表达高.RT-PCR分析显示PTHLHmRNA在鼻咽癌组织中表达明显上调(61.1%),免疫组化检测鼻咽癌石蜡标本(49例)发现,PTHLH蛋白在鼻咽癌组织中表达明显高于鼻咽上皮组织(12例)(P<0.001).结论 PTHLH基因在鼻咽癌细胞及组织中表达增高,提示其可能参与了鼻咽癌的发生发展,有望成为分子生物学诊断的靶点.

    作者:赵瑾;黄仲曦;刘允;姚开泰 刊期: 2009年第03期

  • 广州市2004-2007年肾综合征出血热监测

    目的 分析广州市2004-2007年肾综合征出血热(HFRS)的流行特点和趋势.为制定防治策略提供依据.方法 收集广州地区疫情资料,描述其流行病学特征.HFRS抗体与抗原检测采用免疫荧光分析.结果 广州市2004-2007年共检出HFRS患者337例,年发病率0.59/10万~0.92/10万(平均0.73/10万),病死率0.89%.病例多为青壮年男性民工及商业服务者,主要分布于海珠和天河等地,发病高峰主要在春秋季.鼠间疫情监测显示鼠密度为10.3%,总带毒率为3.6%(160/4457),优势鼠为褐家鼠,带毒率为4.8%(132/2756).结论 广州HFRS疫情有上升趋势,应加大疫情监测力度,认真做好防鼠灭鼠及重点人群的疫苗接种工作.

    作者:刘远;蒋力云;鲁恩洁;董智强;狄飚;吴新伟;杨智聪;王鸣 刊期: 2009年第03期

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