学术投稿

人IgE重链3-4区蛋白的表达、纯化及功能分析

付琛颖;曲戎梅;邱国真;魏威;林志斌;王萍;王文敬;李珍;董文其

关键词:IgE, Cε3-Cε4, 表达, 鉴定
摘要:目的 通过基因重组的方法表达IgE Cε3-Cε4区,鉴定重组蛋白与天然细胞表面受体FcεR Ⅰ之间的相互作用,并用重组蛋白免疫小鼠制备血清.方法 用RT-PCR方法从过敏性疾病病人外周血淋巴细胞调取IgE Cε3-Cε4 cDNA片段,克隆至pET28a(+)构建原核表达载体IgE Cε3-Cε4-pET28a(+),将重组质粒转化到大肠杆菌B121(DE3),诱导表达IgE Cε3-Cε4区蛋白,通过Ni-NTA亲和层析纯化融合蛋白后,用免疫荧光方法鉴定重组蛋白与天然细胞表面受体FceR Ⅰ之间的结合能力,并用UniCAP 100全自动分析检测仪对重组抗原进行定量检测与鉴定;用表达蛋白免疫BALB/c小鼠,制备抗鼠血清,用Western-blot法对多克隆抗体进行鉴定.结果 成功调取的人IgE Cε3-Cε4区基因与已报道的序列相一致;获得的IgE Cε3-Cε4区蛋白相对分子质量(Mr)同预期的结果相一致;IgE Cε3-Cε4能特异性结合人嗜碱性粒细胞表面的FcaR Ⅰ受体;通过UniCAP 100全自动分析检测仪能够检测到重组抗原并精确到国际单位;免疫鼠血清多抗能特异性结合天然人血清IgE.结论 成功构建了IgE Cε3-Cε4-pET28a(+)表达载体,获得了能被人嗜碱性粒细胞表面的FeaR Ⅰα亚基特异性识别的IgE Cε3-Cε4区蛋白,并用天然人血清IgE鉴定了多克隆抗体,为下一步单克隆抗体的制备打下了基础.
热带医学杂志相关文献
  • 变应性鼻炎特异性免疫治疗患者的依从性及相关因素分析

    目的 研究变应性鼻炎特异性免疫治疗患者的依从性及其影响因素.方法 对过去3年接受特异性免疫治疗的变应性鼻炎患者进行回顾性调查,对未完成基础疗程的患者采取电话方式了解其不依从的原因,率的比较采用X2检验进行分析.结果 特异性免疫治疗患者的完全依从率为70.1%;儿童的完全依从率为84.6%,高于成人(64.16%,58.46%),有统计学意义(X2值分别为8.712,6.441,P<0.05);不依从的原因调查表明,效果不明显或无效占29.49%,工作忙或学业紧张占20.86%,症状消失或好转占12.23%.结论 变应性鼻炎特异性免疫治疗患者的依从性不甚理想,其中儿童的依从性高于成人.调查结果提示治疗中应有针对性地采取相应的干预措施,以提高患者免疫治疗的依从率,从而提高疗效.

    作者:林志斌;李添应;董文其 刊期: 2009年第04期

  • 鼠艾滋病病毒荧光定量PCR标准品RNA的构建

    目的 合成构建鼠艾滋病病毒(FLV)荧光定量检测标准品,明确核糖核酸(RNA)标准品体外合成的基本原则.方法 通过序列对比,找到FLV为保守的区段作为RNA标准品的合成目标,进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增,克隆于T载体,测序,设计带有T7启动子的引物,PCR扩增,将所得的PER产物凝胶回收纯化,用T7RNA聚合酶进行体外合成RNA,后用PER和电泳检测验证.结果 成功合成了FLV荧光定量PCR标准品.结论 FLV荧光定量标准品的成功合成必须遵守以下4条基本原则:①选择保守序列;②设计引物时将潜在的终止密码或起始密码排除在PCR目标产物之外;③将启动子(如r17启动子)挂在适当的引物上,保证所合成的RNA模板与所要定量检测的RNA模板一致,而不是互补;④合成RNA后必须检测,以保证不含其他RNA或者未消化完的DNA.

    作者:葛文华;何金洋 刊期: 2009年第04期

  • HBsAg含量与脂代谢关系的探讨

    目的 探讨乙肝HBsAg携带者HBsAg含量与脂代谢的关系.方法 对70例乙肝HBsAg携带者(其中26例低滴度携带者,44例高滴度携带者)及74例正常人的ALT、TG、CHOL、HDL、LDL、APOA、APOB等指标进行检测.结果 与正常对照组相比,乙肝病毒携带组TG、CHOL、LDL、APOB等结果明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05);与低滴度乙肝HBsAg携带者相比,高滴度组CHOL、HDL、LDL、APOA、APOB有下降的趋势.结论 HBsAg的持续表达可能造成脂类慢性消耗,影响机体的脂质水平.

    作者:吴莫龄;朱逸文;吴晓蔓 刊期: 2009年第04期

  • 南京市儿童医院门诊儿童隐孢子虫病的流行病学调查

    目的 调查南京市儿童医院门诊儿童隐孢子虫病的流行情况.进而了解2008年夏秋季节南京及周边地区儿童人群中隐孢子虫病的流行情况.方法 收集2008年7~8月份和9~10月份两个时间段南京市儿童医院门诊儿童粪样,用改良抗酸染色和金胺酚-改良抗酸复合染色法.检查粪样中的隐孢子虫卵囊.同时,随机收集部分门诊儿童的血样,通过分子生物学技术纯化特异性隐孢子虫重组蛋白SA35,用微粒子免疫检测法检测血清中抗SA35 IgG抗体水平.结果 共收集儿童医院门诊儿童的粪样2268份,血样207份.粪样隐孢子虫检出率为0.97%,血检结果阳性率为29.95%,经卡方检验,粪检和血检的阳性率在性别之间差异无统计学意义(P>0.05);但血检阳性率1岁以上的儿童比1岁以内的儿童明显增高(P<0.05).结论 南京及周边地区门诊儿童在夏秋季仍然存在隐孢子虫感染,需要进一步加强血检以监控隐孢子虫病的传播.

    作者:杜学利;戈建军;秦圆方;孟睿;刘云;储凯;侯敏;杨萍灿;吴海玮 刊期: 2009年第04期

  • 江门市某公司诺如病毒性肠炎暴发的调查

    目的 查明2007年江门市某公司一起诺如病毒引起的肠炎的流行特点,探讨暴发疫情调查处理的经验,为今后控制类似疫情提供科学依据.方法 由疾控中心专业人员用专门的个案调查表对所有病例进行流行病学调查.部分病例采集大便样本进行检测,并结合实验室结果进行流行病学分析.结果 本次疫情由诺如病毒引起.呈腹痛、腹泻等胃肠炎症状,病情较轻,共有71人发病,罹患率为7.68%,病例主要分布在30~39岁年龄段,集中在集装箱厂内的总装部和完工部.结论 本次疫情通过日常生活的密切接触相互感染,经及时落实各项相应防控措施后迅速得到控制.

    作者:周悦亮;钟文龙;陈茂余 刊期: 2009年第04期

  • 山西长治市妇科门诊病人阴道毛滴虫感染流行病学调查

    目的 对长治市妇科门诊病人阴道毛滴虫感染情况进行调查,分析其流行因素,为制定本地区阴道毛滴虫防治措施提供科学依据.方法 随机选择2007年12月至2008年11月在长治市晋城妇幼保健医院妇科门诊就诊的妇女作为调查对象,用阴道分泌物生理盐水涂片法检查阴道毛滴虫,并对受检者年龄、职业、文化水平、性行为等进行问卷调查.结果 共检测516份标本,55份阳性,滴虫阳性率为10.66%.对所收集资料进行统计学分析得出,阴道毛滴虫感染与年龄、职业、文化水平、性病知识知晓水平、性行为等因素具有相关性.结论 阴道毛滴虫感染是该地区妇科门诊患者的主要病原体之一;应根据其流行因素,制定预防保健措施,从保障该地区妇女生殖健康.

    作者:郭步平;李宇飞;张建斌 刊期: 2009年第04期

  • 黄连解毒汤对小鼠肠道菌群的影响

    目的 通过观察黄连解毒汤对小鼠肠道菌群的影响,为临床合理使用清热解毒中药提供参考资料.方法 建立抗生素引起菌群失调的小鼠模型和不同剂量的黄连解毒汤灌胃小鼠模型,与正常小鼠比较,评价黄连解毒汤对小鼠肠道菌群的影响情况.结果 灌胃14 d后黄连解毒汤高剂量组出现菌群失调,其肠道益生菌与正常组差异有统计学意义(P<0.05).黄连解毒汤低剂量组无菌群失调现象,其肠道益生菌乳酸杆菌、双歧杆菌与抗生素组差异有统计学意义(P<0.05),且其条件致病菌肠球菌显著减少.结论 黄连解毒汤在高剂量长期应用时有类似滥用抗生素的破坏作用,在低剂量使用时或许有调节肠道菌群平衡的作用.

    作者:罗海华;董姝;张晟;李达;时权;周红;邝枣园 刊期: 2009年第04期

  • 无创正压通气治疗急性中毒性肺水肿的临床研究

    目的 探讨无创正压通气(noninvasive positive pressure ventilation,NIPPV)对急性中毒性肺水肿的临床效果.方法 选择符合中毒性肺水肿诊断并且氧合指数(oxygenation index,PaO2/FiO2,OI)低于300mmHg的患者48例,随机分成无创正压通气组(NIPPV组)25例及常规治疗组23例;NIPPV组在常规治疗的基础上给予以经面罩接呼吸机辅助通气(通气模式ASB+PEEP).结果 治疗1 h后,NIPPV组的血气分析结果、氧合指数、呼吸频率(respiratory rate,RR)、氧饱和度(blood oxygen saturation,SaO2)均较治疗前显著改善(P<0.01).与常规治疗组比较,OI、SaO2明显占优(P<0.01),总住院费用及住院天数也明显少于常规治疗组(P<0.001);同时,NIPPV组的气管插管机械通气率显著低于常规治疗组(P<0.01).结论 急性中毒性肺水肿早期应用无创压力支持通气能迅速改善患者的氧合能力,提高组织氧供,减少并发症,这对提高抢救成功率,改善患者预后有积极作用.

    作者:李小强;陈运超;刘移民 刊期: 2009年第04期

  • 肝豆状核变性患者心理状况分析

    目的 探讨肝豆状核变性(HLD)患者的心理状况.方法 对58例住院HLD患者采用症状自评量表(Scl-90)进行测查,并与43名正常人进行对照.结果 HLD患者的焦虑、敌对性、躯体化、抑郁、恐怖因子、阳性项目数与健康对照组比较差别有统计学意义(P<0.001,P<0.01);锥体外系症状为主的HLD患者(脑型)躯体化、焦虑、敌对性、恐怖因子均分高于肝损害为主的HLD患者(肝型,P<0.05).结论 HLD患者有许多心理症状.尤其是脑型HLD患者;在药物驱铜治疗的同时,应重视心理治疗,以提高临床疗效.

    作者:张明兴;洪铭范;桀骜 刊期: 2009年第04期

  • 改革人体寄生虫实验教学模式注重学生创新能力培养

    人体寄生虫学实验是基础医学教学的重要组成部分,是理论与实践研究的技术基础.改革人体寄生虫学实验教学,调动学生的积极性和主动性,有利于培养学生的创新意识和创新能力,对保证教学质量、提高教学效果有很重要的作用.

    作者:张健;徐文岳;黄复生 刊期: 2009年第04期

  • 转细粒棘球绦虫Eg95-EgA31融合基因苜蓿的培育及鉴定

    目的 培育并鉴定转细粒棘球绦虫Eg95-EgA31融合基因苜蓿,为进一步研究转基因苜蓿疫苗提供依据.方法 将构建好的Pbi-Eg95-EgA31质粒电穿孔转化根瘤农杆菌(Agrobacterium tumefaciens,At)LBA4404株,利用重组根瘤农杆菌(rAt)侵染苜蓿(alfalfa)叶片,卡那霉素抗性筛选伤愈组织体胚,培育转基因苜蓿,用SDS-PAGE、Western-blot、PCR和RT-PCR鉴定转基闪苜蓿.结果 SDS-PAGE和Western-blot证实Eg95-EgA31融合基因在苜蓿中得到表达,表达产物分子质量约为37500 Mr,表达效率约占苜蓿叶总蛋白的0.05%,且能被感染细粒棘球蚴的鼠血清特异识别.PCR和RT-PCR均扩增出1016 bp Eg95-EgA31融合基因片段.结论 成功培育了转细粒棘球绦虫Eg95-EgA31融合基因苜蓿,为进一步研究细粒棘球绦虫转基因苜蓿疫苗奠定了基础.

    作者:周辉;李文桂;叶艳菊;周必英 刊期: 2009年第04期

  • 急性呼吸道感染相关症状监测及其病原体监测的研究进展

    基于疾病症候群的症状监测系统已经成为对疾病(生物恐怖袭击、新发传染病、原因不明疾病和其他聚集性不良公共卫生事件)暴发进行早期探查、预警和快速反应的重要方法.本文将对急性呼吸道感染的症状监测的发展现状及其病原体的研究进展进行综述.

    作者:秦鹏哲;李铁钢;李泽荣;刘维斯 刊期: 2009年第04期

  • 脑脊液病原菌变迁和耐药性分析

    目的 了解临床脑脊液培养阳性患者病原菌分布及其耐药情况.方法 对2002~2008年临床脑脊液培养病原菌阳性患者标本进行回顾性统计分析;按常规方法进行细菌分离和鉴定;细菌药物敏感试验采用Kirby-Bauer纸片扩散法.结果 分离出细菌97株,其中革兰阳性球菌占54.63%,革兰阴性菌占28.87%;新型隐球菌占13.40%.常见的6种感染菌分别为凝固酶阴性葡萄球菌(40.21%)、不动杆菌属(8.25%)、铜绿假单胞菌(6.19%)、金黄色葡萄球菌(5.15%)、肺炎克雷伯菌(5.15%)、肠球菌属(5.15%);耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRSCN)和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的检出率分别是89.7%和80.0%,细菌对常用抗生素耐药性较高,未见万古霉素耐药的葡萄球菌;美洛培南以及头孢哌酮/舒巴坦对革兰氏阴性杆菌有良好的抗菌活性.结论 近6年来细菌性脑膜炎患者病原菌以革兰阳性球菌为主,主要为医院获得性细菌性脑膜炎感染.检出病原菌对常用抗生素耐药性较高,临床需警惕新型隐球菌的高发病趋势.

    作者:肖柯玲;魏衍超;陈文捷;孙卫民;郭海波 刊期: 2009年第04期

  • 广西血吸虫病十年监测分析

    目的 探索近十年广西新发现的残存钉螺的分布特点及流动人口血吸虫病感染情况,为血吸虫病防治提供科学依据.方法 根据查到残存钉螺年份长短将广西原血吸虫病钉螺孳生地分成三类,针对不同螺区分类,对原螺区及毗邻地区采用不同的监测方案.结合血清学方法及粪便检查方法,抽样检查当地居地、原血吸虫病人及流动人口的监测检查工作,对监测结果进行考核.结果 近十年来,广西发现5处残存螺点,分别位于玉林、靖西、宜州、横县等地,其中隶属南宁市辖区的横县发现残存钉螺2处.广西未发现本地血吸虫病人,流动人13监测过程中发现输入性病例23例,病人分别来自湖北、湖南、江西和安徽4省,除2例为女性外,其余均为男性.职业则以干部、商人、民工(农民)、学生及武警新兵为主.结论 广西虽然保持阻断传播标准的成果,但由于不断新发现残存钉螺及输入性血吸虫病例,广西仍然面临血吸虫病的威胁.

    作者:张陆娟;欧阳颐;张鸿满;林睿;谭裕光;阮延清;黄福明;江河 刊期: 2009年第04期

  • 登革病毒感染对白纹伊蚊生理生态特性的影响

    目的 了解登革病毒感染对白纹伊蚊生理、生态以及对杀虫剂敏感性的影响.方法 观察比较通过胸腔接种方式人工感染登革病毒的白纹伊蚊和胸腔注射生理盐水的对照组蚊虫的死亡率、产卵量、孵化率、子代发育情况,以及对拟除虫菊酯类杀虫剂的敏感性.结果 两组蚊虫在死亡率、存活时间、产卵量等方面的差异有统计学意义,其它方面的差异不显著.结论 登革病毒感染能够增加白纹伊蚊的死亡率并降低蚊虫的产卵能力.

    作者:江毅民;严子锵;胡志刚;李成玲;伍浩荣 刊期: 2009年第04期

  • 颈动脉支架置入术治疗外伤性颈内动脉夹层3例报告

    外伤性颈内动脉夹层(traumatic carotid dissection,TCaD)是一种少见疾病,常发生于交通事故或其他原因导致的头颈部钝性损伤,目前对其发病率尚无确切统计,其治疗尚存在较大争议.近年来,颈动脉支架治疗TCaD备受关注,我院自2007年6月至2008年3月为3例TCaD行支架成形治疗.

    作者:郭兵;焦力群;叶明;凌锋 刊期: 2009年第04期

  • 儿童感染肺炎克雷伯菌产AmpC酶和ESBLs的检测及耐药性分析

    目的 了解广州地区儿童感染肺炎克雷伯菌产质粒介导的AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的情况及其耐药特征,为临床合理用药提供参考依据.方法 采用标准纸片扩散法检测ESBLs,头孢西丁三维试验法检测AmpC酶,K-B纸片法测定肺炎克雷伯菌对抗菌药物的敏感性.结果 共检出248株肺炎克雷伯菌,其中46株产AmpC酶,阳性率为18.5%;157株产ESBLs,阳性率为63.3%;同时产AmpC酶和ESBLs菌株阳性率为18.1%.产AmpC酶肺炎克雷伯菌对第三代头孢菌素高度耐药.耐药率达80%~100%:对头孢吡肟、含酶抑制剂复合药的耐药率也在56.5%~93.5%之间;但对环丙沙星、阿米卡星的耐药率则在30%以下,对亚胺培南全部敏感.产ESBLs菌株对头孢菌素、含酶抑制剂复合药的耐药率也较高,在50%~91.7%之间.但对阿米卡星、环丙沙星、亚胺培南仍高度敏感.ESBLs阴性肺炎克雷伯菌对所测抗生素的敏感率均在81.2%以上.产酶菌株耐药率明显比非产酶菌株高.结论 广州地区儿童感染肺炎克雷伯菌产ESBLs和AmpC酶的状况已十分突出:产酶菌株对常用抗生素的耐药率较高;碳青霉烯类抗生素可作为治疗产AmpC酶和/或ESBLs肺炎克雷伯菌感染的经验用药.

    作者:黄勇;周珍文;邓秋连;万根平;谢永强 刊期: 2009年第04期

  • 老年大鼠血液白细胞基因表达谱的生物信息学分析

    目的 了解老年大鼠血液白细胞基因表达水平的变化.方法 将雄性Wister大鼠分为老年组(18月龄)和年轻组(4月龄),用illumina大鼠全基因组芯片研究其分子水平的变化.结果 生物信息学分析显示.造成老年组和年轻组显著生物学差异的基因功能及所属基因是:28条凋亡基因和22条炎性基因上调,9条涉及氧与活性氧中间物代谢的基因下调.结论 差异基因功能导致老年大鼠和年轻大鼠的生物学差异.

    作者:张燕;罗炳德 刊期: 2009年第04期

  • 缬沙坦对人脐动脉平滑肌细胞妊娠相关蛋白-A、基质金属蛋白酶-9表达的影响

    目的 探讨缬沙坦对人脐动脉平滑肌细胞PAPP-A、MMP-9表达的影响.方法 分别在10-5mol/L的Ox-LDL的基础上,给予Ang Ⅱ以及Ang Ⅱ、缬沙坦混合培养人脐动脉平滑肌细胞,以普通培养基培养为对照,应用RT-PCR法检测PAPP-A、MMP-9的表达量.结果 AngⅡ组PAPP-A与MMP-9的表达量均显著高于对照组、Ox-LDL及缬沙坦组(P<0.01),缬沙坦组PAPP-A的表达量高于对照组(P<0.01),而与Ox-LDL组无明显差异(P>0.05),缬沙坦组MMP-9的表达量与Ox-LDL组及对照组均无明显差异(P>0.05).结论 Ang Ⅱ可促进人脐动脉平滑肌细胞PAPP-A和MMP-9的表达.缬沙坦可以抑制Ang Ⅱ的这种作用.

    作者:查政;张清华;蒋知新;王小冬 刊期: 2009年第04期

  • 中国新型化学灭螺药的研究

    化学药物灭螺是目前主要采用的杀灭钉螺的方法.中国近研究出强螺杀粉剂、25%氯硝柳胺悬浮剂、4%杀螟丹颗粒剂和50%杀螟丹可溶性粉剂、三苯基锡壳聚糖羧酸酯、氯代水杨胺、荣宝与荣芽、O-磷酰化酚基化合物、密达利等新剂型的化学灭螺药.这些药物(除O-磷酰化酚基化合物)均已被证实具有一定的灭螺作用,有望用于现场灭螺,但尚需进一步研究以提高其灭螺效果及改进其不足.本文就这些新研究情况做一综述.

    作者:吴月英;宁安 刊期: 2009年第04期

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