学术投稿

HBx基因缺失型突变体HBx-d382与HBx-d431原核表达载体的构建和鉴定

朱平安;祝玲玲;黄巧梅;侯周华;谭萍;赖秀花

关键词:乙型肝炎病毒X基因, 缺失型突变体, 原核表达载体
摘要:目的 为探讨HBx基因缺失型突变体HBx-d382和HBx-d431在临床上应用的价值,构建HBx基因缺失型突变体HBx-d382和HBx-d431原核表达载体.方法 以pGM-T/HBx-d382和pGM-T/HBx-d431质粒为模板,PCR扩增含EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ酶切位点的HBx基因片段.HBx基因PCR扩增产物与载体pET-28a(+)经双酶切、连接,形成重组DNA后转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经卡那霉素筛选、酶切鉴定和DNA序列测定,筛选出重组HBx基因缺失型突变体原核表达载体.结果 成功构建了重组pET-28a(+)/Hax-d382和pET-28a(+)HBx-d431原核表达载体,重组前后HBx基因片段序列一致.结论 pET-28a(+)/HBx-d382和pET-28a(+)/HBx-d431原核表达载体构建成功,为HBx基因缺失型突变体HBx-d382和HBx-d431蛋白的免疫原性和临床应用的研究奠定了基础.
热带医学杂志相关文献
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    目的 了解佛山地区2007年分离的淋球菌流行株对青霉素、四环素、大观霉素、头孢曲松和环丙沙星的耐药性及产β-内酰胺酶淋球菌(PPNG)和四环素高度耐药淋球菌(TRNG)的流行状况.方法 采用琼脂稀释法测定小抑菌浓度(MIC),纸片酸度法检测β-内酰胺酶.结果 98株淋球菌检出PPNG 34株(34.7%),TRNG 63株(64.3%).青霉素、环丙沙星和四环素的耐药率分别为96.9%、96.9%和94.9%,未发现大观霉素及头孢曲松耐药株.青霉素、四环素和环丙沙星的MIC50及MIC90均已超过耐药标准,尤以青霉素为甚,其MIC50及MIC90均超过耐药标准的8倍和32倍.结论 大观霉素及头孢曲松是治疗淋病的首选药物.

    作者:李燕娃;潘洪亮;吴兴中 刊期: 2009年第07期

  • 卡培他滨联合紫杉醇治疗晚期转移性宫颈癌的临床研究

    目的 探讨观察紫杉醇联合希罗达对比紫杉醇联合顺铂治疗晚期转移性宫颈癌的疗效及不良反应.方法 对2003年7月至2006年12月本院确诊晚期转移性宫颈鳞癌患者52人双盲随机分为两组,试验组(n=26)口服希罗达每日1 650 mg/m2,连服1~14 d,紫杉醇80 mg/m2静脉滴注,第1天应用,每3周为1周期,连用2~4周期;对照组(n=26)顺铂20 mg/m2静脉注射,第1~5天,紫杉醇80 mg/m2静脉滴注,第1天应用,每3周为1周期,连用2~4周期,治疗结束2周后评价疗效.结果 试验组可评价26例,有效率46.15%(12/26),中位生存时间11.6月,1年生存率43.33%(13/26);安全性方面Ⅲ反应占38.4%(9/26),Ⅳ反应占15.4%(4/26),主要为手足综合征、骨髓抑制和消化道毒性.对照组疗效可评价26例,有效率42.31%(11/26),中位生存时间11.9月,1年生存率43.33%(13/26);安全性方面Ⅲ反应占34.4%(10/26),Ⅳ反应占17.2%(5/26),主要为脱发、消化道毒性、骨髓抑制.结论 希罗达联合紫杉醇对晚期转移性宫颈癌的疗效与紫杉醇联合顺铂疗效相当,但是不良反应较轻.

    作者:詹雪梅;李明毅;梁颖 刊期: 2009年第07期

  • 儿童真菌感染的病原学研究

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    作者:谢永强;周珍文;虢艳;邓秋连;黄勇 刊期: 2009年第07期

  • 犬空肠动脉栓塞安全性的实验研究

    目的 通过超选择性插管入犬空肠动脉分支后用聚乙烯醇(polybvinyi alcohol particles,PVA)颗粒栓塞,观察肠壁缺血坏死程度和范围,探讨其安全性.方法 44只犬随机分为A、B两组.A组(22只):空肠动脉二级分支水平远端栓塞;B组(22只):空肠末级动脉弓前一级分支水平栓塞.分别注入大小为150~250 μm(A1组6只,B1组6只)、355~500 μm(A2组8只,B2组8只)和710~1 000 μm(A3组8只,B3组8只)PVA颗粒.少量、缓慢、间断推注PVA,血流停滞时即停止.术后3、7、14 d,处死犬取出空肠行大体及病理学观察.结果 栓塞技术成功率为95.5%.PVA颗粒量为5~10 mg.注入150~250 μm、355~500 μm、710~1 000 μm PVA颗粒肠坏死的发生率分别为:81.8%(9/11)、40.0%(6/15)、25.0%(4/16),组间差异具有统计学意义(P<0.05).A、B两组发生肠坏死的发生率分别为61.9%(13/21)、28.6%(6/21),组间差异有统计学意义(P<0.001).结论 在同一栓塞水平下,PVA颗粒越小则越易发生肠坏死.佳的栓塞水平在末级动脉弓前一级分支水平,PVA颗粒大小应选择710~1 000 μm.

    作者:唐郁宽;史瑞雪;陈勇;曾庆乐;陈广源;黄小英;李晶;邓炜;胡佩玲;曹筱莹;刘海英;陈汉威 刊期: 2009年第07期

  • 经阴道注水腹腔镜在输卵管妊娠诊治中的应用

    目的 探讨经阴道注水腹腔镜(transvaginal hydrolaparoscopy,THL)在输卵管妊娠诊治中的临床效果和安全性.方法 选择输卵管妊娠患者22例(研究组)进行THL检查和治疗,选择同期输卵管妊娠30例(对照组)行单纯药物保守治疗.记录研究组手术时间、后穹隆穿刺成功率、手术成功率、诊断符合情况、手术并发症、对侧输卵管的通畅程度等:记录两组治愈率、治愈时间、化疗药物毒副作用发生率、住院时间、住院费用等.结果 THL平均手术时间(25.4±3.5)min;后穹隆穿刺成功率95.6%,20例与术前诊断符合,18例手术成功,无手术并发症发生;术中发现对侧输卵管阻塞3例;两组治愈率比较差异无统计学意义(P>0.05),但研究组治愈率有增加趋势.治愈时间、药物毒副作用发生率、住院时间对照组均大于研究组,差异有统计学意义(P<0.05),住院费用两组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 THL在应用于输卵管妊娠的早期诊断和治疗中既具备了单纯药物保守治疗的优势,又达到了经腹腹腔镜保守手术的效果,术中可以同时检查对侧输卵管的通畅度,为输卵管妊娠早期诊断和输卵管保守治疗开辟了新途径,有较好的应用前景.

    作者:邹敏;吕晓亮;胡小良;叶萍;张秀果;潘红平 刊期: 2009年第07期

  • 135株嗜麦芽寡养单胞菌的临床分布及耐药性分析

    目的 了解嗜麦芽寡养单胞菌的临床分布及耐药特征,为临床合理用药提供依据.方法 用常规方法对2005-2008年本院临床标本进行细菌的培养、分离,用MieWalK 40进行细菌的鉴定,以美国临床实验室标准化研究所推荐的纸片扩散法(K-B法)进行药物敏感性试验,Whonet 5.0进行数据统计.结果 135株嗜麦芽寡养单胞菌主要来自痰占76.3%(103/135),分布以重症监护室(ICU)为主占80.0%(108/135);对6种抗菌药物的敏感率分别为替卡西林/棒酸36.3%、氯霉素57.8%、头孢他啶64.4%、左氧氟沙星75.6%、复方新诺明77.0%及米诺环素100.0%.结论 临床分离的嗜麦芽寡养单胞菌主要来自痰标本,分布以ICU为主,米诺环素、复方新诺明、左氧氟沙星、头孢他啶对嗜麦芽寡养单胞菌具有较好的体外抗菌活性.

    作者:李玉珍 刊期: 2009年第07期

  • 嗜肺军团菌分子生物学检测及流行病学分型方法

    军团菌病主要由嗜肺军团菌引起.与传统的军团菌检测方法相比,分子生物学检测技术灵敏度高、特异性强、快速有效.分子分型对军团菌流行病学调查及监控具有非常重要的意义.本文对嗜肺军团菌分子生物学检测及流行病学分型方法作一综述.

    作者:林云万;陈守义 刊期: 2009年第07期

  • 2007年广州市沙眼衣原体实验室检测室间质量评价

    目的 通过对沙眼衣原体室间质量评价,了解广州市性病实验室检测沙眼衣原体总体水平.方法 发放沙眼衣原体细胞培养物,要求做沙眼衣原体检测.结果 61家参与单位中,优秀39家(63.9%),合格10家(16.4%),一般10家(16.4%),不及格2家(3.3%).结论 性病实验室水平参差不齐,只有加强实验室室内质量管理,才能保证实验结果的可靠性,提高性病实验室整体水平.

    作者:曹文苓;梁艳华;叶兴东;李平;黎小东;吴德标;黄雪梅;汤少开;张莉;毕超 刊期: 2009年第07期

  • 恶性疟疾所致脓毒症的临床特征分析

    目的 分析恶性疟疾并发脓毒症的临床特征.方法 对我院近8年来收治的32例确诊为恶性疟疾的患者进行病例资料分析.结果 出现脓毒症者26例(81.25%),其中严重脓毒症19例(59.38%),脓毒症休克2例(6.25%).26例脓毒症常见表现为发热26例(100%)、心率大于90次/min 25例(96.15%)以及白细胞数改变23例(88.46%),其他依次为气促、高血糖、C反应蛋白增高.严重脓毒症合并器官功能障碍依次为血液系统损害、肾功能损害、高胆红素血症、意识状态改变、低氧血症、腹胀以及低血压.31例(96.88%)患者治愈或好转出院,1例死亡(3.13%),死亡病例为脓毒症休克患者.结论 恶性疟疾原虫感染较易发生脓毒症,并极易发展为严重脓毒症,疟疾所致的严重脓毒症以血液系统损害、肾脏损害、高胆红素血症以及意识状态改变多见,如果发展为脓毒症休克则预后差.该病对青蒿琥酯的治疗效果好,及时使用青蒿琥酯清除疟原虫是预防脓毒症发生的关键.

    作者:刘远煌;李剑萍;洪文昕 刊期: 2009年第07期

  • 结核分枝杆菌潜伏感染早期两种检测方法的比较分析

    目的 比较结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)特异性IFN-γ酶联免疫斑点法(Elispot)和结核菌素皮试(TB-PPD皮试)在MTB潜伏感染早期诊断的优异.方法 采用自主研制的Elispot试剂盒(简称Elispot)对100例健康志愿者进行检测,并和TB-PPD皮试进行平行比较.结果 100例健康志愿者中有50例TB-PPD皮试阳性(占50%),Elispot检测阳性20例(占20%).两种方法检测结果差异有统计学意义(χ2=20.45,P<0.005).结论 MTB特异性IFN-γ Elispot试剂盒在健康人群中检测阳性率比传统的TB-PPD皮试要低,Elispot检测体外IFN-γ应答反应在诊断MTB潜伏感染的价值优于TB-PPD皮试,在MTB潜伏感染早期诊断有较好的发展前景.

    作者:陈献雄;杨倩婷;陈心春 刊期: 2009年第07期

  • HBx基因缺失型突变体HBx-d382与HBx-d431原核表达载体的构建和鉴定

    目的 为探讨HBx基因缺失型突变体HBx-d382和HBx-d431在临床上应用的价值,构建HBx基因缺失型突变体HBx-d382和HBx-d431原核表达载体.方法 以pGM-T/HBx-d382和pGM-T/HBx-d431质粒为模板,PCR扩增含EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ酶切位点的HBx基因片段.HBx基因PCR扩增产物与载体pET-28a(+)经双酶切、连接,形成重组DNA后转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经卡那霉素筛选、酶切鉴定和DNA序列测定,筛选出重组HBx基因缺失型突变体原核表达载体.结果 成功构建了重组pET-28a(+)/Hax-d382和pET-28a(+)HBx-d431原核表达载体,重组前后HBx基因片段序列一致.结论 pET-28a(+)/HBx-d382和pET-28a(+)/HBx-d431原核表达载体构建成功,为HBx基因缺失型突变体HBx-d382和HBx-d431蛋白的免疫原性和临床应用的研究奠定了基础.

    作者:朱平安;祝玲玲;黄巧梅;侯周华;谭萍;赖秀花 刊期: 2009年第07期

  • 某企业退休职工生活方式对自评健康状况影响的相关分析

    目的 调查某钢铁企业退休职工不同生活方式与自评健康状态,探讨其相关性.方法 结合厂企退休职工的预防性健康体检进行横断面调查.结果 本次共调查421名退休职工,平均年龄(61.2±6.5)岁,自评健康为差者105人,占24.9%;随着每天体力活动时间的增加,自评健康为好或较好的比率随之增加(P<0.05);不常吃水果/蔬菜者自评健康为差的可能性是常吃水果/蔬菜者的2.58倍:是否常饮茶、饮牛奶/豆奶和是否吸烟或饮酒等对自评健康状况的影响差异无统计学意义(均P>0.05).结论 常吃水果/蔬菜和经常进行体力活动对提高老年人健康水平有帮助.

    作者:李鹏宾;林锡谦 刊期: 2009年第07期

  • 2008年三峡库区流动人口血吸虫感染分析

    目的 探讨三峡库区流动人口血吸虫感染特征,为制定三峡库区血吸虫病防治对策和措施提供科学依据.方法 采用流行病学调查和酶联免疫吸附试验(ELISA)在三峡库区调查流动人口的血吸虫感染情况.结果 调查流动人口1 416人,其中返乡人员792人,疫区来渝人员624人.返乡人员流动原因以外出务工为主,疫区来渝人员以经商为主;流动人口血清学阳性率为3.04%,其中返乡人员、疫区来渝人员分别为4.04%、1.76%;来自流行省、传播阻断省分别为3.60%、1.33%,来自非流行省未发现阳性.流动人员主要来自湖北、湖南、四川,分别占33.40%、17.44%、10.52%;血清阳性率以江西、江苏、湖北高,均超过4%.多因素Logistic回归分析显示,流动人口来源、可疑感染地区与血清学感染差异有统计学意义(P<0.01);返乡人员血清学阳性率显著高于疫区来渝人员(χ2=9.00,P<0.01),来自血吸虫病流行区的阳性率高于其它地区(χ2=6.99,P<0.01).结论 三峡库区流动人口存在血吸虫感染情况,主要来自血吸虫病流行省份,重点监测来自库区周边省份的流动人员.特别是返乡人员.

    作者:吴成果;罗兴建;肖邦忠;罗飞 刊期: 2009年第07期

  • 彩色多普勒超声在子宫颈癌诊断中的价值

    目的 探讨彩色多普勒超声对子宫颈癌的临床诊疗价值.方法 回顾性分析60例宫颈癌的超声检查结果及血流动力学改变.结果 早期宫颈癌超声多无阳性发现,随着癌肿的进展,宫颈癌的超声表现有:宫颈体积增大、回声不均匀,宫颈肿块、宫腔积液;宫体、阴道受侵,宫旁浸润,盆腔脏器侵犯,彩色多普勒血流显示宫颈癌病灶可见丰富血流信号.结论 彩色多普勒超声诊断宫颈癌的主要价值是观察肿瘤的浸润和转移情况.协助临床分期,指导治疗和观察疗效.

    作者:陈茹;李活霞;林剑英;李涛 刊期: 2009年第07期

  • 粤桂琼三省区疟疾联防16年广东区效果评价

    目的 分析和评价粤桂琼三省区疟疾联防机制对控制广东流动人口疟疾疫情的作用.方法 主动侦查与被动侦查相结合,通过发热病人血检和疟疾病人个案调查,使用回归流行病学方法对资料进行分类和分析.结果 广东参加疟疾联防的6个地级市16年共发现流动人121疟疾病例32 233例,其中归属广东籍流动人口疟疾病人有2 401例;归属海南省籍流动人13疟疾病人有11 224例:归属广西籍流动人口疟疾病人有4 253例;归属其它省籍流动人口疟疾病人有14 355例.32 233例流动人口疟疾病人中,输入性恶性疟有47例,其余32 186例为间日疟.流动人口中的回归人员共有病例7 183例,血检阳性率为2.75%;流动人口中的外来人员共有病例25 050例,血检阳性率为2.19%;两者血检阳性率差异无统计学意义.各种职业的流动人口血检阳性率野外作业与室内作业人员相比,差异有统计学意义.1992-2007年广东省疟疾疫情呈逐年下降趋势.结论 通过连续16年的疟疾联防,广东流动人口疟疾疫情得到控制,输入病例和输入继发病例明显减少,广东省疟疾疫情稳定,年发病率逐年下降.

    作者:林荣幸;张贤昌;王金龙;阮彩文 刊期: 2009年第07期

  • 凝胶直接抗球蛋白试验在自身免疫性溶血性贫血实验诊断中的应用

    目的 探讨凝胶直接抗球蛋白试验的特点及其在自身免疫性溶血性贫血(AIHA)实验诊断中的应用价值.提高致敏红细胞检出率.方法 检测临床诊断疑似AIHA标本135例.用Coomb's凝胶试剂卡对受检标本进行直接抗球蛋白试验.以试管法直接抗球蛋白试验作对照.凝胶法阳性者用单特异性IgG和C3d凝胶试剂卡进行分型.结果 试管法直接抗球蛋白试验阳性19例,Coomb's凝胶直接抗球蛋白试验(GDAT)阳性24例,两种检测方法间差异有统计学意义(P<0.05).对24份凝胶直接抗球蛋白试验阳性标本进行IgG和C3d分型,其中IgG+C3d型7例(29%),IgG型13例(54%),C3d型4例(17%).结论 凝胶直接抗球蛋白试验不需洗涤红细胞,操作简便,重复性好;检测致敏红细胞灵敏度优于试管法,在AIHA实验诊断中值得临床推广应用.

    作者:罗广平;骆宏;汪传喜;叶欣;夏文杰;戎霞;陈扬凯;邓晶;赵阳;丁浩强 刊期: 2009年第07期

  • 惠州市青年学生艾滋病知识知晓状况及相关行为调查分析

    目的 了解惠州市预防艾滋病宣传教育工作的成效及存在问题,为今后对青年学生开展宣教活动.完善宣教策略提供依据.方法 使用统一的调查表采用调查对象不记名自填问卷方式.调查的内容包括:人口学基本情况、艾滋病知识、性行为经历、是否有吸毒及注射吸毒行为、接受有关预防艾滋病服务情况等.结果 对外表健康的人可以是感染者的知晓率为89.8%,每次性行为都正确使用安全套可降低艾滋病的传播危险的知晓率为75.4%,输入带有艾滋病病毒的血液或血制品可感染艾滋病的知晓率为97.0%,共用注射器可传播艾滋病的知晓率为93.9%,蚊虫叮咬是否会传播艾滋病病毒的知晓率为40.3%,感染的母亲可传给胎儿的知晓率为91.1%.有性行为经历的占6.8%.获得艾滋病知识信息途径较单一,主要来源于电视广播及报刊杂志.结论 惠州市青年学生对感染艾滋病的各种危险因素的知晓不全面,部分非传播途径知晓率也较低.开展艾滋病相关知识宣传教育仍十分必要,学校应加强艾滋病健康教育的力度以提高青年学生对艾滋病的认识水平.

    作者:刘雪梅;梁立环;李钰;肖和龙;徐志华;丘文清;薛妙钦 刊期: 2009年第07期

  • 不同佐剂的复合黏膜疫苗鼻内免疫小鼠抗弓形虫感染的保护作用

    目的 比较IFN-γ和蜂胶作为佐剂鼻内免疫小鼠抗弓形虫攻击的能力,探索两种佐剂联合应用的效果.方法 将5~6周龄雌性BALB/c小鼠60只随机分为4个组,每组15只,分别用20 μg可溶性速殖子抗原(STAg)、20 μg STAg+40 μg蜂胶、20 μg STAg+1 000 U IFN-γ或20 μg STAg+40 μg蜂胶+1 000 U IFN-γ鼻内免疫小鼠2次,间隔14 d.末次免疫后第10天,用RH株弓形虫速殖子4×104个/只灌胃攻击,逐日观察小鼠存活情况.攻击后第43天处死全部存活小鼠,计算胸腺、脾指数,计数脑、肝组织速殖子.结果 STAg+IFN-γ组、STAg+蜂胶+IFN-γ组胸腺、脾指数显著高于STAg组(P<0.05);组织内速殖子虫荷显著降低(P<0.01),STAg+IFN-γ组小鼠脑、肝组织减虫率分别为57.00%和79.06%;STAg+蜂胶+IFN-γ组小鼠脑、肝减虫率分别为68.30%和79.06%.STAg+蜂胶组小鼠胸腺、脾指数有升高趋势,组织内速殖子虫荷降低,但与STAg组比较差异无统计学意义.结论 在抗弓形虫感染中,IFN-γ、蜂胶+IFN-γ的佐剂效果优于蜂胶,IFN-γ、蜂胶+IFN-γ辅助STAg显著提高小鼠胸腺、脾比重,增强机体免疫能力,有效抵抗弓形虫的感染攻击,脑、肝组织速殖子虫荷显著减少.

    作者:刘成芳;殷国荣;赵云鹤;张卫国;刘红丽 刊期: 2009年第07期

  • 喷他佐辛与芬太尼在妇科腹腔镜术后自控镇痛的效果评价

    目的 观察喷他佐辛与芬太尼在妇科腹腔镜术后病人自控静脉镇痛(PCIA)时的镇痛效果及不良反应.方法 选择40例择期妇科腹腔镜手术患者,随机分为两组,每组20例.喷他佐辛组(A组):喷他佐辛300 mg+昂丹司琼8 mg,加生理盐水稀释至100 ml;芬太尼组(B组):芬太尼1.0 mg+昂丹司琼8 mg,加生理盐水稀释至100 ml.PCIA设置如下:负荷剂量5 ml,持续剂量2 ml/h,单次给药剂量0.5 ml.锁定时间15 min.观察术后4、8、12、24及48 h各时段镇痛评分(VAS)、镇静评分(Ramsay)和不良反应.结果 两组镇痛评分及镇静评分均良好,差异无统计学意义(P>0.05);A组恶心、呕吐、皮肤瘙痒等发生率明显低于B组(P<0.05).结论 喷他佐辛和芬太尼均可安全有效地用于手术后镇痛,但喷他佐辛PCIA不良反应发生率明显低于芬太尼.

    作者:张秀燕;李明睿;詹鸿;黄丽芳 刊期: 2009年第07期

  • 2005-2008年广东省CDC艾滋病自愿咨询检测人群特征分析

    目的 分析广东省疾病预防控制中心(CDC)艾滋病自愿咨询检测(VCT)人群特征,为预防HIV传播提供科学依据.方法 对2005年1月至2008年12月来广东省CDC门诊寻求VCT服务的人群进行检测前咨询并填写个案登记表,用描述性方法分析其特征及艾滋病病毒

    作者:刘芳兰;曾常红;孟瑞琳;谢雪妹;沈少君;曾利君 刊期: 2009年第07期

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主管:广东省科学技术协会

主办:广东省寄生虫学会 中华预防医学会